具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及功能化纳米硒的快速制备，更具体地说，涉及一种具有抗肿瘤活性的 虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 硒是人体必需的十五种微量元素之一，在体内发挥抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、提高 机体免疫力、保护修复细胞、拮抗降低有害重金属等重要的生物活性。硒与多达40多疾病的 发生、发展有着密切的关联，其中包括:艾滋病(AIDS)、肝癌、克山病、大骨节病、心脑血管等 疾病。低硒或缺硒人群通过适量补硒能够提高机体免疫能力，维护心、肝、肺、胃等重要器官 的正常功能，预防肿瘤、肝病、心脑血管疾病的发生。全球约有40多个国家处于缺硒地区，我 国多个省份处于缺硒或低硒地带，这些地区是肿瘤、肝病、心血管疾病等发病率高的地区， 需要进行补硒。然而作为营养补充剂或癌症预防剂，硒的有益剂量和毒性剂量范围却是极 其狭窄，容易造成硒中毒，严重限制了硒在疾病防治，尤其是癌症防治方面的潜力。硒的毒 性依赖于其化学形式，目前研究结果发现无机硒化合物的毒性强于有机硒化合物，硒代半 胱氨酸的毒性与亚硒酸钠相似，亚硒酸钠的毒性强于纳米硒。纳米硒具有生物利用度高、生 物活性强和毒性低的优点。
[0003] 纳米单质硒的制备方法通常采用还原法，利用硒的含氧酸盐或氧化物通过各种还 原剂获得单质硒，同时使用修饰剂或者调控剂对形貌进行修饰调控，获得理想粒径和形貌 的产物。
[0004] 然而，现有的各种纳米单质硒制备方法目的均是通过各种不同的调控剂或修饰剂 对形貌进行调控或者修饰，得到理想粒径和形貌的产物，而这些修饰剂不是具有强生物活 性的生物分子，不能通过修饰剂或者调控剂有效的提高纳米单质硒的生物活性，尤其是抗 肿瘤活性，即所得产物并不是功能化纳米单质硒。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题在于，针对现有纳米单质硒的制备方法不能通过修饰剂 或者调控剂有效的提高纳米单质硒的生物活性的缺陷，提供一种具有抗肿瘤活性的虎奶菇 多糖功能化纳米硒水溶胶及其制备方法。
[0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:构造一种具有抗肿瘤活性的虎奶菇 多糖功能化纳米硒水溶胶，含有以下浓度范围的物质：
[0007] 虎奶菇多糖，浓度范围为IOmg · L-1~1000 mg · L-S
[0008] 维生素 C，浓度范围为0.02mmol · L-1 ~20mmol · L-1;
[0009] 纳米硒，浓度范围为0.005mmol · L-1 ~5mmol · L_1〇
[0010] 本发明还提供了一种如上所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水 溶胶的制备方法，包括以下步骤：
[0011] SI)常温常压下，往虎奶菇多糖水溶液中加入维生素 C溶液，混合均匀；
[0012] S2)在步骤SI)得到的溶液中滴加二氧化硒溶液或亚硒酸盐溶液，在滴加时混匀；
[0013] S3)对步骤S2)得到的溶液加水定容，待产物中所出现的红色不再加深，即得到由 虎奶燕多糖功能化的纳米硒水溶胶。
[0014] 在本发明优选实施例所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶 的制备方法中，使用的所述虎奶菇多糖水溶液浓度为30mg · I/1~3000mg · I/1，维生素 C溶 液的浓度为〇.2mmol · L-1~200mmol · L-S二氧化硒或亚硒酸钠溶液的浓度为0.05mmol · L -1~50mmol · L-、
[0015] 在本发明优选实施例所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶 的制备方法中，所述维生素 C为还原型维生素 C。
[0016] 在本发明优选实施例所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶 的制备方法中，所述亚硒酸盐为亚硒酸钠。
[0017] 在本发明优选实施例所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶 的制备方法中，所述虎奶菇多糖为水溶性虎奶多糖、化学修饰的热碱溶性虎奶多糖或其组 合。
[0018] 本发明还提供了一种如上所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水 溶胶的应用，所述虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶中的虎奶菇多糖功能化纳米硒用于制备 抗肿瘤药物。
[0019] 本发明还提供了一种如上所述的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水 溶胶的保存方法，其特征在于，所述虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶在2~10°C下以溶胶形 态保存。
[0020] 实施本发明的具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒水溶胶及其制备方法、 应用和保存方法，具有以下有益效果：
[0021] (1)本发明以具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、提高免疫力等生物活性的食药 用虎奶菇多糖作为纳米硒功能化分子，虎奶菇多糖分子的抗肿瘤活性与纳米硒的生理功效 相互促进，发挥协同抗肿瘤活性，为临床上癌症的联合化疗提供一种很好的优选方案；
[0022] (2)本发明使用的虎奶菇多糖在结构上具有特殊性，是由多个单糖分子通过糖苷 键连接而成的高分子聚合体，具有多羟基结构，具有良好的亲水性，同时具有疏水链段，对 纳米硒表面进行修饰，起到很好的调控纳米硒粒径和稳定纳米硒的效果，同时也提高纳米 硒的水溶性，增强了硒与癌细胞的亲和力，提高肿瘤细胞对纳米硒的摄取量，达到减少用药 剂量、提高疗效、减少毒副作用治疗效果；
[0023] (3)本发明制备纳米硒反应体系中只以维生素 C为还原剂，虎奶菇多糖为纳米硒功 能化调控分子，不添加其他任何模板剂，避免了在实际应用中可能产生的不良效果；
[0024] (4)本发明所得产物具有抗肿瘤活性的虎奶菇多糖功能化纳米硒溶胶中纳米硒的 浓度可以根据应用上的需要进行调整，也可以应适当改变虎奶菇多糖和还原剂维生素 C的 浓度，操作简单，简便快捷。
【附图说明】
[0025]下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：
[0026]图1是水溶性虎奶菇多糖浓度为100.Omg · I/1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · IZ1水溶胶中虎奶菇多糖功能化纳米硒的激光散射图；
[0027]图2是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · Γ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · IZ1水溶胶中虎奶菇多糖功能化纳米硒的激光散射图；
[0028]图3是水溶性虎奶菇多糖浓度为100.Omg · Γ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · IZ1水溶胶中虎奶菇多糖功能化纳米硒的TEM图；
[0029]图4是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · IZ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · IZ1水溶胶中虎奶菇多糖功能化纳米硒的SEM图；
[0030] 图5是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · Γ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · I/1水溶胶中虎奶燕多糖功能化纳米硒的EDX元素分析图；
[0031] 图6是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · IZ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4. Ommo 1 · I/1水溶胶中纳米硒的XRD图；
[0032]图7是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · Γ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · IZ1水溶胶中虎奶菇多糖功能化纳米硒的FT-IR图；
[0033]图8是水溶性虎奶菇多糖浓度为300.Omg · IZ1，硒浓度为I.Ommol · I/1，维生素 C为 4.Ommol · I/1水溶胶中虎奶燕多糖功能化纳米硒的Zeta电位图；
[0034] 图9是水溶性虎奶菇多糖浓度为0、25、50、10011^.1/1，硒浓度为1.0111111〇1.1/ 1，维 生素 C为4.Ommol · IZ1水溶胶中虎奶菇多糖功能化纳米硒稳定性跟踪图；
[0035] 图10是水溶性虎奶菇多糖浓度为100、200、300、400、500、60011^.1/1，硒浓度为 I.Ommol ·厂1，维生素 C为4.Ommol ·厂1水溶胶中虎奶燕多糖功能化纳米硒稳定性跟踪图；
[0036]图11是MTT法检测虎奶菇多糖功能化纳米硒抑制人乳腺癌细胞MCF-7株系细胞生 长的细胞存活率图；
[003