些情况下，这种微晶形式甚至可被视为优选的药物组合物。
[0064] 例如采用常规的浓缩技术如超滤，通过浓缩sFc超出其溶解度来获得包含微晶或 晶体形式的Fe受体的本发明的药物组合物。将药物保持为包含一定量的晶体或微晶的液体 形式是可能的。代替采用机械浓缩法来获得晶体或微晶，本发明的一个优选实施方案还可 以通过将PH调节至所述受体具有显著较低的溶解度的值来使受体结晶。析出的晶体或微晶 可自溶液中分离并用于贮藏和随后的重构或直接给药。固体形式的受体制剂贮藏特别稳 定，并且保持至少超过24个月的有效性。
[0065] 在这种情况下，可以以药物试剂盒的形式方便地提供所述药物组合物，所述试剂 盒中除了固体或高度浓缩的SFcR外，还包括用于可注射溶液的重构的适宜液体。因此，本发 明的另一个主题是一种药物试剂盒，该药物试剂盒包含结晶的或冻干的可溶性Fe受体和在 适宜的单独的贮藏单元中用于重构注射溶液的适宜的药学上可接受的液体，如缓冲溶液或 简单的水。
[0066] 若在用于简单混合并很好防止污染的合适装置中提供所述用于重构注射溶液的 缓冲溶液和SFcR受体，本发明的药物试剂盒是特别优选的。优选地，该试剂盒包含基于磷酸 缓冲剂、组氨酸缓冲剂或柠檬酸缓冲剂的缓冲溶液。对于所述缓冲溶液进一步优选的是调 节PH从而为Fe受体提供最佳溶解度。在本发明的一个特别优选的实施方案中，所述缓冲溶 液是pH在6以上、特别是pH为6.1至7.5的柠檬酸缓冲溶液;或者是pH在6.0以下、特别是pH为 5.2至5.9的组氨酸缓冲溶液。根据本发明的药物试剂盒中最优选地包含柠檬酸缓冲溶液。
[0067] 包含在药物试剂盒中的缓冲溶液的量根据试剂盒中固体的或浓缩的SFcR的量进 行调整。根据sFc受体是需要完全溶解还是需要保留一定量的微晶来选择合适量的液体的 相应缓冲剂，并且还需根据本文所提供的关于SFcR溶解度的教导来调整溶液的pH。
[0068] 本发明的又一主题是本发明的制剂、药物组合物和药物试剂盒在预防或治疗自身 免疫性疾病中的用途。更具体而言，本发明旨在用于多发性硬化症、系统性红斑狼疮、类风 湿性关节炎、原发性免疫性血小板减少症和自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的预防或治疗的 框架中。此外，所述制剂、药物试剂和药物试剂盒可用于炎性障碍的治疗。本发明的主题使 得Fe受体在本文已经描述的或在将来认为合适的那些的所有适应症中的应用成为可能。本 发明的制剂和药物组合物及试剂盒特别允许皮下施用，这对患者给药或由患者操作而言是 高效且容易实施的。本发明的一个特别优点是实现了特别大量且高浓度的Fe受体给药。
【具体实施方式】
[0069] 以下的实施例将进一步阐明本发明及其有益的效果和实施方案。
[0070] 实施例:适于皮下递送的高浓缩的液体husFcyRIIb制剂的制备
[0071] 1.材料
[0072] 下述husFcy RIIB(具有SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的可溶性人Fcy RIIB受 体)溶液作为所有实验的初始材料(parent material):
[0073] a)用于输注溶液的husFcyRIIB 5mg/ml浓缩物
[0074] pH为6 · 5的5 · 3mM的NaH2P〇4、1 · 94mM的KH2PO4、150mM的NaCl、2% (w/v)的甘露醇、 0 · 005% 的聚山梨酯20中含5mg/ml的husFc γ RIIB。
[0075] b)用于输注溶液的husFcyRIIB 20mg/ml浓缩物
[0076] pH为6.5的20mM的组氨酸、150mM的NaCl、2%(w/v)的蔗糖、l%(w/v)的甘露醇、 0 · 005% 的聚山梨酯20中含20mg/ml的husFc γ RIIB。
[0077]至少使用了以下指明品牌的化学试剂：
[0079] 2.方法
[0080] a)通过紫外/可见光谱测定husFc γ RIIB的含量
[0081 ] 将样品转移至一个紫外微量比色皿（紫外微量比色皿，Plastibrand，Brand)中并 采用相应缓冲剂作为空白用分光光度计(Cary 100，Varian)测定吸光度。采用如下公式计 算husFc γ RIIB的浓度：
[0082] husFc γ RIIB浓度[mg/mL] = (Α280-Α32。）XDF X 0 · 64
[0083] DF三稀释因子
[0084] b)通过阳离子交换色谱的husFc γ RIIB缓冲剂交换
[0085]用？!16.5的10111]\1柠檬酸/^0!1准确稀释1000-180011^的11118?。丫1?118(用于输注溶 液的husFc γ RIIB 5mg/ml浓缩物)至电导率达到5.0±0. lmS/cm。将稀释的蛋白质过滤(0.2 4111的〇11抑口〇代亲水？￥0卩膜，471]1111，]\1;[111口0代）后以5.51111^/111；[11装载至以卩!16.5的10111]\1朽 1檬 酸/Na0H、20mM NaCl平衡的57mL SP琼脂糖凝胶HP阳离子交换（CEX)树脂（26X107mm，GE Healthcare;相当于17 · 5-31 · 6mg的husFc γ RIIB/mL树脂）。结合的蛋白质用200mL pH6 · 5的 10禮柠檬酸/恥0!1、20111]\1恥(：1以5.51111711^11洗涤，并用30011^?!16.5的101111柠檬酸/恥0!1中 20mM至600mM的NaCl线性梯度洗脱。当OD 28q超过250mAU(AU:吸光度单位)时开始收集洗脱液 并在OD28 Q降低到20 OmAU以下时停止收集（光程为I cm，Akta Explorer 100 ,GE Heal thcare)。将色谱柱用IOOmL的IM NaCl再生并用150mL的Mi 11 iQ H2O洗涤（超纯水， MiIlipore公司），然后在20%乙醇中保存直至再次使用。通过紫外/可见光谱测定husFc γ RIIB的含量后，将洗脱液过滤(Mi I lex 33mm，0 · 2μΜ的Durapore亲水PVDF(聚偏二氟乙烯）， 都来自MiIIipore公司），分装，在液氮中快速冷冻并贮藏在< -70°C下直至使用。
[0086] 通过洗脱液的平均电导率与IOmM柠檬酸/Na0H、20mM NaCl中和在IOmM柠檬酸/ NaOH、600mM NaCl中测得的电导率之间的相关性计算NaCl含量。
[0087]类似地，采用IOmM组氨酸/HCl作为缓冲物制备组氨酸缓冲的husFc γ RIIB。
[0088] c) pH稳定性筛选
[0089] 采用适宜的储备液（stock solution)将pH 6.5的20mM组氨酸、324mM NaCl中的浓 缩的husFc γ RIIB溶液调节至0.5mg/mL husFc γ RIIB、20mM组氨酸、150mM NaCl、2.5X宝石 橙(01^0中5000父，]\1〇16。111&1?1(^68頂，1鮮1钍(^611)。根据使用0.21!1(：1或0.21恥0!1的实 验滴定曲线将所述溶液的pH调节到pH 4至pH 12。将40yL的所述溶液在密封的96孔半区域 孔板(yclear，黑色，中度结合;Greiner BioOne)中于25°C下培养3h，然后用于宝石橙焚光 (激发波长485nm，发射波长590nm，增益60,滞后时间Oys，积分时间40ys;TECAN spectrofluor plus)分析。
[0090] d)高浓缩制剂的制备
[0091] 通过用合适的缓冲剂(pH 6.5的IOmM柠檬酸或IOmM组氨酸）的稀释来调节组氨酸 或柠檬酸缓冲的husFc γ RIIB中所需的NaCl含量(初始浓度约为200-300mM NaCl)，随后超 滤(Vivaspin 20,5kDa MWCO ,Sartorius)。为了保证经处理的体积小，所述过程总共重复3 次。经最后稀释后，测定pH(pH-计HI8314,pH-电极HI1217,Hanna instruments)，用合适的 缓冲剂中的0.2M NaOH或0.2M HCl调节pH，从而浓缩蛋白质溶液。一式三份，采用紫外/可见 光谱测定husFc γ RIIB的含量，用合适的缓冲剂调节husFc γ RIIB的浓度并过滤溶液 (Ultrafree MC,0·2μηι Durapore亲水PVDF，Millipore)〇
[0092] e)384孔板中husFc γ RIIB溶解度筛选
[0093] 采用30yL每孔，在384孔板(yclear，白色，无结合，Greiner BioOne)中评估高浓缩 的husFc γ RIIB溶液的溶解度与缓冲物、pH、盐浓度和糖/多元醇浓度之间的关系。通过向每 个孔中直接添加过滤的储备溶液来制备最终制剂。可采用以下储备溶液:在pH 7.0的IOmM 的柠檬酸或口^15.5的10111]\1组氨酸中含100-19511^/11^的11118?〇丫1?118、1.51恥(：1和30%(￥/ V)鹿糖+15% (w/v)甘露醇。向每一溶液提供0.01 % (w/w)聚山梨酯20和根据上述筛选提供 10-50mM的NaCl。
[0094]用0 · 5M-0 · 75M HCl或NaOH调节每一孔的pH。假定husFc γ RIIB(pKa = 6·00)的所有 九个组氨酸残基都提供额外的缓冲能力，根据理论滴定曲线计算所需的酸或碱的量。将板 离心(500 · g, Imin)，然后用胶带密封(微量胶带，permacel，ne〇-lab)并IC藏在5±3°C下的 黑暗中。
[0095] 采用光学显微镜(Axiovert 25f,Carl Zeiss)对每一制剂的外观进行评估，并根 据议定标度(arb i trary scaI e)排名（0 =无晶体；1 =有一些晶体，但很难看见；2 =可清晰 看见一些晶体;3 =每个孔中可清晰看见超过30个晶体;4 =许多晶体的不完整层(孔未被完 全覆盖）；5 =许多晶体的完整层(孔被完全覆盖)）。
[0096]考虑到溶解的盐、糖和蛋白质，根据如下公式计算每一制剂的渗透压：
[0098] 其中，V1是第i个溶质的一个分子解离所形成的颗粒数，Hi1是第i个溶质的摩尔浓 度。为了简化，每一溶质的摩尔渗透系数F m,i设定为等于1。
[0099] f)husFc γ RIIB的小规模结晶
[0100]在1.511^的聚丙烯反应管中，将1(^1^-45(^1^?!15.5的1〇111]\1组氨酸、1〇111]\1他(：1、 0.01%聚山梨酯20中含50-140mg/mL husFc yRIIB用合适的稀释剂稀释至IOmM组氨酸、 IOmM NaCl、0 · 01 %聚山梨酯20中含40mg/mL husFc γ RIIB。通过添加4· 38-6 · 23Vo 1 % (添加 稀释剂后的最终体积）的〇. 3M NaOH调节pH至6.5-7.2。假定husFc γ RIIB(pKa = 6.00)的所 有九个组氨酸残基都提供额外的缓冲能力，根据理论滴定曲线计算所需的酸或碱的量。 [0101] g)差示扫描荧光法
[0102] 类似于上文2.e)中所述的程序，在1.5mL的试管中制备包含0.5mg/mL husFc γ RIIB的各制剂120yL。采用合适缓冲液中的200Χ储备溶液，添加宝石橙（DMS0中5000Χ， Molecular Probes?, Invitrogen)至终浓度为2 · 5X。各制剂的30yL-式三份被转移至孔板 (MicroAmp 96孔光反应板，Applied Biosystems)中，然后将板用胶带密封(MicroAmp光学 胶膜，Appl ied Biosystems)。将板以l°C/min的斜率进行自19°C至90°C的升温，并记录在 610nm处的荧光发射(7300实时PCR系统，Applied Biosystems)。荧光随时间而被差异化，计 算样条曲线（spline)，并且第一次测得的最大温度记为husFc γ RIIB的恪解温度(melting temperature)(Origin 8·0,OriginLab)〇 [0103] h)384孔板中的浊度筛选
[0104] 类似于上文2.3)中所述的程序，在1.5mL的试管中制备husFc γ RIIB制剂。30yL的 各制剂一式两份被转移至384孔板(yclear，白色，无结合，Greiner)中，然后将该板用胶带 (微量胶带，permacel，neo-lab)密封后置于恒温箱中。作为对照，制备相应的安慰剂溶液。 在360nm处测定池度（Spectraf Iuor，带通滤片360/35nm，3次闪光，Tecan)。为了避免由于水 凝结而损坏测量，将读板器预加热至检测温度。
[0105] i)通过压降测定的动态粘度
[0106] 通过测定随着液体流经流道的压降来确定包含husFc γ RIIB的制剂的动态粘度 (m-Vroc，Rheosense)。对于每次测定，用200yL的移液管将IOOy