一种人源性的cd13可溶性蛋白的免疫组化试剂盒及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种人源性的⑶13可溶性蛋白的免疫组 化试剂盒及其应用。
【背景技术】
[0002] 肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC)是全世界常见的恶性肿瘤之一，不仅手术 切除率低于50%，而且癌肿切除后易于复发和转移。
[0003] 近年研宄发现，肝癌与白血病、乳腺癌和结直肠癌一样，肿瘤组织和癌细胞株中均 含有的肝癌干细胞（cancer stem cells，CSCs)处于休眠或慢增殖的细胞周期，具有自我更 新、多向分化，对放化疗抵抗特性，可能是肝癌复发和转移的根源。因此肝癌病人的发现与 愈后和肝癌干细胞的关系密不可分。目前肝癌干细胞的标记物已经报道的有⑶133、cd44、 cd90、EpCAM和SP，但是对于识别肝癌干细胞的准确率与最新发现的⑶13相比稍有不足。
[0004] CD13是一种将氨基酸从寡肽N末端切除的膜结合糖蛋白（氨基肽酶N)，具有锌离 子结合依赖性金属蛋白酶活性，可酶解基底膜蛋白，促进血管生成，从而调控肿瘤细胞的侵 袭和转移。研宄发现，CD13的抑制剂可以抑制肝癌细胞的侵袭和血管生成，在临床治疗中 CD 13抑制剂结合放化疗对肝癌的治疗效果好于单纯放化疗。因此有必要针对于临床开发出 检测CD13的方法，从而有望将CD13作为一种新的肿瘤标记物，为肝癌的诊断、愈后观察、个 性化用药提供一种辅助判定指标。
[0005] 中国专利文献CN102869992A公开了一种用于癌症诊断的方法和试剂盒，涉及用 于对怀疑患有前列腺癌的对象进行诊断或提供预后的方法，包括体外检测前列腺小体和对 至少一种选自⑶13、⑶59、⑶10、⑶26、⑶142、⑶143和MHC I的抗原的前列腺小体表达进 行定量，以及将所定量的表达值与来源于健康对象的相应抗原的参考值进行比较，还提供 用于对怀疑患有前列腺癌的对象进行诊断或提供预后的试剂盒。但是关于一种人源性的 CD13可溶性蛋白的免疫组化试剂盒及其应用目前还未见报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种能够检测人源性的肝癌CD13 表达量的免疫组化试剂盒，抗原作为肝癌诊断试剂或根据CD13的表达量作为肝癌患者愈 后复发检测指标，以减少患者由于盲目用药造成的损失及病情延误。
[0007] 本发明的再一的目的是，提供一种能够检测人源性的肝癌CD13表达量的免疫组 化试剂盒的应用。
[0008] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种能够检测肝癌CD13表达量的免 疫组化试剂盒，所述的试剂盒包括：检测人源性可溶性CD13抗原的抗体，HRP标记的羊抗鼠 IgG，DAB显色液和苏木素复染液。
[0009] 所述的抗体能够特异性结合CD13抗原分子。
[0010] 所述的试剂盒的检测样本为肿瘤组织。
[0011] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的试剂盒在制备肝癌诊 断试剂中的应用。
[0012] 所述的试剂盒在制备肝癌患者愈后复发检测试剂中的应用。
[0013] 本发明优点在于：
[0014] 1、本发明的试剂盒敏感性级高，⑶13抗体与市面上其它的肝癌标志物相比，阳性 强度可以达到++++，符合临床监测标准；
[0015] 2、本发明的试剂盒准确性级高，⑶13抗体与市面上其它的肝癌标志物相比，准确 率较高，符合临床监测标准；
[0016] 3、本发明的能够检测人源性的肝癌CD13表达量的免疫组化试剂盒，可以应用于 人的肝癌细胞CD13抗原的检测，根据CD13的表达量作为肝癌患者愈后复发检测指标；本发 明以病人肿瘤组织为检测样本具有快捷，敏感性好，特异性高，易于推广应用等特点。可用 于指导肝癌术后点辅助治疗，降低高危患者术后复发率。
【附图说明】
[0017] 图1.本发明用于肝癌患者免疫组化实验的图片（20x):图示结果显示⑶13在肝 癌患者中表达呈阳性。
[0018] 图2.本发明用于肝癌患者癌旁免疫组化实验的图片（20x):图示结果显示⑶13 在肝癌患者中表达呈阴性。
[0019] 图3. Western blot验证⑶13在上述肝癌患者癌组织及癌旁组织中的表达。结果 显示与图1和图2的结果相符合。
[0020] 图4.肝癌患者⑶13阳性与愈后，复发的关系：根据实施例1和2筛选出的肝癌患 者⑶13阳性患者，通过与治疗愈后数据比对后发现，⑶13阳性患者愈后差，复发率高，因此 可以作为肿瘤愈后查，复发率高的评判标准，具有显著性差异。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0022] 本发明使用的能够检测人源性的肝癌CD13表达量的免疫组化试剂盒，由人源性 可溶性CD13抗原的抗体，HRP (辣根过氧化物酶）标记的羊抗鼠 IgG，DAB显色液和苏木素 复染液组成。
[0023] 实施例1
[0024] 试剂盒组成：
[0025] 肝癌个体化诊断检测试剂盒（10人份）
[0026]
【主权项】
1. 一种能够检测肝癌CD13表达量的免疫组化试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包 括：检测人源性可溶性CD13抗原的抗体，HRP标记的羊抗鼠IgG，DAB显色液和苏木素复染 液。
2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗体能够特异性结合CD13抗原 分子。
3. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的检测样本为肿瘤组织。
4. 根据权利要求1所述的试剂盒在制备肝癌诊断试剂中的应用。
5. 根据权利要求1所述的试剂盒在制备肝癌患者愈后复发检测试剂中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种人源性的CD13可溶性蛋白的免疫组化试剂盒及其应用，该免疫组化试剂盒可以应用于人的肝癌细胞CD13抗原的检测，根据CD13的表达量作为肝癌患者愈后复发检测指标。本发明优点在于：本发明以病人肿瘤组织为检测样本，具有快捷，敏感性好，特异性高，易于推广应用等特点；可用于指导肝癌术后点辅助治疗，降低高危患者术后复发率。
【IPC分类】G01N33-68, G01N33-574
【公开号】CN104678109
【申请号】CN201510098791
【发明人】徐泱, 胡博, 杨欣荣, 孙云帆, 樊嘉, 周俭
【申请人】复旦大学附属中山医院
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月6日