[0167] 共焦显微镜观察结果如图3所示。
[0168] 结论：
[0169] 当本发明的北美金缕梅提取物以0.1 % (v/v)存在时，与不存在提取物（图3A)相 比，胶原蛋白I型以较大的量合成（图3B)。这些结果说明0.1%的本发明的提取物能够增加 胶原纤维网状结构的数量和质量。
[0170]实施例4:本发明提取物抑制弹力素的可视化分析：
[0171] 方案
[0172] 测试相对于培养基总体积0.1% (体积比）的实施例la)中获得的北美金缕梅提取 物对本领域技术人员已知的Mimeskin?类型的重建皮肤模型的作用。
[0173] 简言之，该皮肤模型通过培养正常人类成纤维细胞而获得，随后自培养的第28天 (D28)开始，加入正常的人类角质细胞，将培养物增殖至达35天(D35)，然后诱导其分化，将 所有细胞培养至达56天(D56)。培养56天后，将细胞采用含有钙、镁和抗生素的磷酸盐缓冲 的生理盐水(PBS)缓冲液洗涤，随后在甲醛中固化10分钟。
[0174] 对三种情况进行评价：
[0175] -未经辐照和未处理的皮肤称为阴性对照，
[0176] -自培养的第14天至28天(D14-D28)照射皮肤，自第42天(D42-D56)采用UVA辐射 (波长λ = 365nm) (I J/cm2)照射皮肤，称为辐射对照，
[0177] -采用实施例la)获得的北美金缕梅提取物以在培养基中0.1%的浓度在培养的第 3天处理皮肤(D3 - D56)，自培养的第14天至28天(D14 - D28)照射皮肤，自第42天(D42 - D56)采用UVA辐射(波长λ = 365ηπι) (I J/cm2)照射皮肤，称为经处理的皮肤。
[0178] 将模型采用石蜡包埋，切成5微米的切片。
[0179]将如此制备的切片去石蜡，置于载玻片上并水化。于37°C采用0.1 % (v/v)的胰岛 素将酶解除遮蔽10分钟，然后将载玻片采用PBS_3%BSA(牛血清白蛋白）缓冲液饱和小时。 将兔多克隆抗弹力素一级抗体(Abcan?ab-46774)以在PBS-1%BSA培养基中的每毫升5微克 的浓度于4°C施用16h。将载玻片在PBS缓冲液中洗涤5分钟，将该洗涤过程重复二次。内源性 的过氧化物酶采用特异性溶液(DAKO tmDAB真实阻断过氧化物酶溶液)在潮湿的隔室内于室 温下阻断30分钟。将载玻片在PBS缓冲液中洗涤5分钟，将该洗涤过程重复二次。
[0180]根据供应商说明书加入过氧化物酶偶合的（抗兔)二级抗体，将载玻片在PBS缓冲 液中洗涤5分钟，将该洗涤过程重复二次。采用特异性溶液(DAKOtmDAB在DAK0?溶液中的显 色溶液)进行可视化分析。
[0181]最后，采用共焦显微镜观察载玻片，定量测定标记的表面积。结果如下面表4所示， 阴性对照见图4a)，辐射对照见4b)，经处理的皮肤见4c)。
[0182] 结果：
[0183] 表4:采用图像处理软件(ImageJ)在真皮水平的预定区域上测定像素平均值
[0185] 结论：
[0186] UVA放射诱导了弹力素的表达（图4b)。当辐射在本发明的北美金缕梅提取物存在 下进行，弹力素的表达减少（图4c)。这说明本发明的提取物能够抑制UVA诱导的弹力素表 达。
[0187] 实施例5 :意在成为化妆组合物一部分的包含本发明提取物的组合物（化妆品成 分）
[0188] 北美金缕梅提取物获自实施例la)，将其与下列配方的其它成分混合：
[0190]实施例6:含有本发明的北美金缕梅提取物的组合物
[0191] 根据本领域技术人员已知的方法，将A、B、C、D、E或F的所有各个部分混合，以便于 制备本发明的组合物。
[0192] "本发明的产物"表示根据实施例la)优选获得的北美金缕梅的提取物。
[0193] 本发明的产物也可以是脂质体形式，其含有5 %大豆卵磷脂并结合了季铵化 (quaternized)大豆溶液(最终量600g)，根据下列实施方案获得：
[0194] 将30g大豆卵磷脂、12g季铵化大豆溶液和1.5g根据实施例la)制备的北美金缕梅 提取物置于样品试管中，采用447g纯实验用水稀释。
[0195]于室温下磁力搅拌10分钟后，将混合物剧烈均化10分钟，从而获得脂质体溶液，其 中脂质体的平均直径的范围可以在100 - 800纳米之间，这取决于均化的准确条件。
[0196] 随后将悬浮液温和搅拌1小时。然后加入90g 丁二醇、6g苯氧基乙醇和6g轻乙基纤 维素(胶凝剂）。
[0197] 化妆组合物6a:
[0198] A水 适量至100 丁二醇 2 甘油 3 二羟鲸蜡醇磷酸納，异丙基幾鲸靖基醚 2 B硬脂酸乙二醇酯SE 14 三异壬精 5 椰子油酸辛基酯 6 C 丁二醇，对羟基苯甲酸甲酯，对樂基苯甲酸乙酯，2 对羟基苯甲酸丙酯， pH调节至5.5 D本发明的产物 0.01-10%
[0199] 化妆组合物6b:
[0200] A水 适量至100 丁二醇 2 甘油 3 聚丙烯酿胺，异石場:经，laureth-7 2.8 B 丁二醇，对痒基苯甲酸甲酯，对幾基苯甲酸乙酯，2 对羟基苯甲酸丙酯； 苯氧基乙醇，对羟基苯甲酸曱酯，对羟基苯甲酸2 丙酯，对幾基苯甲酸丁酯，对羟基苯曱酸乙酯， _ 0.5 丁二醇 D本发明的产物 OJl- 10%
[0201] 化妆组合物6c: A卡波姆 0,50 丙二醇 3 甘油 5 水 适量至100 B椰子油酸辛基酯 5 没药醇 0.30
[0202] 二曱硅油 0.30 C氢氧化钠 IM D苯氧基乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯0.5〇 甲酸丙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯曱 酸乙酯， E 雜 030 F本发明的产物 0.01-10%
[0203]软膏形式的皮肤病学组合物6d
[0204] A赋形剂
[0205] 低密度聚乙烯 5.5
[0206] 液体石蜡 适量至100
[0207] B本发明的产物* 0.001-0.1
[0208] *北美金缕梅提取物是实施例la)中所述的一种，随后通过灭菌和干燥步骤。
【主权项】
1. 北美金缕梅的提取物的非治疗性化妆用途，用于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮中细 胞外基质纤维的形成。2. 权利要求1所要求保护的用途，其中所述细胞外基质纤维为弹性纤维和/或胶原纤 维。3. 权利要求1和2中任一项所要求保护的用途，用于减少弹性蛋白聚合物的形成。4. 权利要求1 一 3中任一项所要求保护的用途，用于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚 固性和/或弹性。5. 权利要求1 一 4中任一项所要求保护的用途，用于增加 LOXL表达、胶原蛋白表达和/或 活性、腓骨蛋白5表达和/或活性，和/或用于抑制弹力素表达和/或活性。6. 权利要求1 一 5中任一项所要求保护的用途，其中北美金缕梅提取物通过水提法获 得。7. 权利要求1 一 6中任一项所要求保护的用途，其中北美金缕梅提取物通过于0°C-3(TC 提取获得。8. 权利要求1 一7中任一项所要求保护的用途，其中北美金缕梅提取物自叶子中获取。9. 权利要求1 一 8中任一项所要求保护的用途，其中北美金缕梅提取物溶于选自水、醇、 多元醇、二醇或其混合物的极性溶剂。10. 权利要求1 一9中任一项所要求保护的用途，其中北美金缕梅提取物包含在含有局 部应用可接受的化妆品赋形剂的化妆组合物中。11. 权利要求1 一 10中任一项所要求保护的用途，其中北美金缕梅提取物局部施用于皮 肤和/或粘膜和/或头皮。12. 权利要求10和11中任一项所要求保护的用途，其中包含的北美金缕梅提取物的浓 度为相对于化妆组合物总重量的1 X 1〇-4至10% (重量比），优选为1X 1〇-4至5%，更特别为1 父10」至3%(重量比）。13. 权利要求10 -12中任一项所要求保护的用途，其中所述化妆组合物含有不超过两 种选自下列的化合物:环糊精、喷替酸五钠、植酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、葡糖酸钾和葡糖酸 钠;优选其不含选自下列的化合物:环糊精、喷替酸五钠、植酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、葡糖酸 钾和葡糖酸钠。14. 化妆护理方法，特征在于其包括将北美金缕梅的提取物局部应用于皮肤和/或粘膜 和/或头皮的至少一个区域以便于增加皮肤和/或粘膜和/或头皮中细胞外基质纤维的形 成，优选弹性纤维和/或胶原纤维的形成。15. 权利要求14所要求保护的化妆护理方法，用于减少弹性蛋白聚合物的形成。16. 权利要求14和15中任一项所要求保护的化妆护理方法，用于增加皮肤和/或粘膜 和/或头皮的坚固性和/或弹性。17. 权利要求14 一 16中任一项所要求保护的化妆护理方法，用于增加 LOXL表达、胶原蛋 白表达和/或活性、腓骨蛋白5表达和/或活性，和/或用于抑制弹力素表达和/或活性。18. 权利要求14 一 17中任一项所要求保护的化妆护理方法，其中北美金缕梅提取物如 权利要求6 -13中任一项所定义。19. 权利要求14 一 18中任一项所要求保护的化妆护理方法，其中皮肤和/或粘膜和/或 头皮的区域选自下列至少一个区域:头皮、颈部、颈线、腹部、手臂、大腿、髋部、臀部、腰部 和/或脸部，优选眼睛、唇的周围区域。20. 北美金缕梅的提取物，局部用于与皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或弹性损 失有关的病理状态的护理和/或皮肤病治疗，例如酒糟鼻、毛细血管扩张、日光性弹力组织 变性、病态皮肤松弛症和/或妊娠纹。21. 权利要求20所要求保护的提取物，特征在于其如权利要求6 - 9中任一项所定义。22. 权利要求20和21中任一项所要求保护的提取物，特征在于其存在于含有局部应用 可接受的皮肤病学赋形剂的皮肤病学组合物中，其存在的终浓度为相对于皮肤病学组合物 总重量的1 X 1〇-4至10% (重量比），优选为1 X 1〇-4至5%，更特别为1X 10-3和3% (重量比）。23. 权利要求22所要求保护的提取物，特征在于所述皮肤病学组合物含有不超过两种 选自下列的化合物:环糊精、喷替酸五钠、植酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、葡糖酸钾和葡糖酸钠； 优选其不含选自下列的化合物:环糊精、喷替酸五钠、植酸、柠檬酸钾、柠檬酸钠、葡糖酸钾 和葡糖酸钠。
【专利摘要】本发明涉及新的化妆品和/或皮肤病学成分及其化妆品或药理学用途，特别是皮肤病学用途，增加细胞外基质纤维的形成，增加皮肤和/或粘膜和/或头皮的坚固性和/或弹性。本发明还涉及所述化妆品和/或皮肤病学成分在化妆组合物中的用途。最后，本发明还涉及化妆护理方法，该方法包括将含有北美金缕梅(Hamamelis virginiana)的提取物的化妆组合物局部施用。
【IPC分类】A61K36/185, A61K8/97
【公开号】CN105705154
【申请号】CN201480056494
【发明人】V·西尼佐, V·安德烈, C·盖拉德
【申请人】巴斯夫美容护理法国公司
【公开日】2016年6月22日
【申请日】2014年10月2日
【公告号】WO2015052082A1