新药物制剂的制作方法
【专利说明】新药物制剂 发明领域
[0001] 本发明涉及已知抗菌剂的新的药物纳米混悬液。本发明还涉及用于制备这类纳米 混悬液的方法及其在治疗微生物感染中的用途。
[0002] 发明背景
[0003] 抗生素抗性病原体的出现已经成为严重的全世界的健康护理问题，因为一些感染 目前由多重耐药微生物导致，它们不再对目前可得到的治疗有响应。
[0004] 细菌脂肪酸生物合成(FASII系统）已经产生了用于研发新的抗菌剂和抗寄生虫药 的重大意义（Rock 等人 J.Biol .Chem. 2006,281，17541 ;Wright 和 Reynolds Curr.Opin.Microbiol. 2007,10,447)。基于一些细菌和寄生虫中分散酶的细菌脂肪酸生物 合成途经中的成分的有机化基本上不同于哺乳动物中的多功能FASI系统，因此，能够具有 选择性抑制的良好前途。在细菌FASII系统中的许多酶的完全高保守程度也应当能够研发 广谱抗菌剂和抗寄生虫药。
[0005] 在细菌FASII系统中的所有单功能酶中，FabI代表负责脂肪酸生物合成延伸循环 的最终步骤的烯酰-ACP还原酶。使用辅因子NAD(P)H作为氢化物源，FabI将反式-2-烯酰-ACP中间体中的双键还原成相应的酰基-ACP产物。已经证实该酶构成主要病原体例如大肠 杆菌（E.coli)(Heath 等人 J.Biol .Chem. 1995,270,26538;Bergler 等人 Eu;r·J·Biochem·1996,242,689)和金黄色葡萄球菌（S·aureus)(Heath等人 J· Biol · Chem. 2000，275，4654,Escaich等人AAC 2011，55( 10)，4692，Gerusz等人JMC 2012， 55，9914)的主要革E标，然而，例如，已经从肺炎链球菌（S · pneumoniae) (Heath等人Nature 2000，406,145)和枯草芽孢杆菌（B.subtilis) (Heath 等人 J. Biol. Chem. 2000,275，40128) 中分离的其它的同种型例如FabK和FabL。尽管FabK在结构上和机械方面与FabI无关 (Marrakchi等人BiochemJ. 2003，370，1055)，但是FabI与FabL(枯草芽抱杆菌）、InhA(结核 分枝杆菌(M. tuberculosis))和PfENR(恶性疱原虫(P. falciparum))的相似性仍然提供了 有意义的活性谱的机会(Heath等人Prog. Lipid Res. 2001，40，467)。
[0006] 文献中还报道了几种FabI抑制剂(Tonge等人Acc · Chem. Res · 2008，41，11)。它们中 的一些，例如活化形式的（Tonge等人Proc .Natl .Acad · Sci ·U· S.A· 2003，100，13881)重氮烃 基硼(Baldock等人Science 1996,274,2107)和异烟肼通过共价修饰辅因子NAD+起作用。然 而，一些缺陷与这些产物相关。重氮烃基硼因其内在毒性而仅在实验方面使用(Baldock等 人Biochem.Pharmacol. 1998,55,1541)，而异烟肼是限于治疗敏感性肺结核的前药。异烟肼 需要通过氧化氢诱导型酶活化这一事实(Schultz等人J.Am.Chem. Soc. 1995，117，5009)因 缺乏活化或增加的解毒而促进抗性的可能性（R 〇 s n e r等人A n t i m i c r 〇 b . A g e n t s Chemother .1993，37,2251和 1994,38，1829(文献同上））。
[0007]其它抑制剂通过与酶-辅因子复合物的非共价相互作用起作用。例如，已经发现广 泛使用的具有广谱抗微生物活性的消费品防腐剂三氯生为可逆的大肠杆菌FabI的紧密结 核抑制剂(Ward等人Biochemistry 1999,38,12514)。有关该化合物的静脉内毒理学研究表 明对大鼠的LD50为29mg/kg，显然排除了静脉内注射（Lyman等人Ind · Med · Surg · 1969，38， 42)。报道了基于三氯生的2-羟基二苯基醚核的衍生物（Tonge等人J.Med.Chem.2004,47， 509，ACS Chem Biol · 2006，1，43和Bioorg · Med · Chem · Lett · 2008，18，3029; Surol ia等人 Bioorg .Med .Chem .2006,14,8086和ibid 2008,16,5536(文献同上）；Freundlich等人 J. Biol. Chem. 2007,282,25436)和其它基于不同种类高流通量衍生的模板的抑制剂 (Seefeld等人Bioorg.Med. Chem.Lett. 2001，11，2241和J.MecLChem.2003,46,1627; Heerding等人Bioorg .Med · Chem. Lett · 2001，11，2061;MiIler等人J .Med · Chem. 2002，45， 3246 ; Payne 等人Antim icrob · Agents Chemother .2002,46,3118; Sacchettini 等人 J.Biol ·Chem. 2003，278，20851;Moir等人Antimicrob.Agents Chemother · 2004，48，1541; Monte I Iano等人 J · Med · Chem · 2006，49，6308; Kwak等人 Int · J · Ant imicro · Ag · 2007，30，446; Lee等人Antimicrob.Agents Chemother·2007，51，2591;Kitagawa等人J.Med·Chem.2007， 50,4710,Bioorg.Med.Chem.2007,15,1106和Bioorg.Med.Chem.Lett.2007,17,4982; Takahata等人J .Antibiot · 2007，60，123;Kozikowski等人Bioorg .Med · Chem. Lett · 2008， 18,3565)，但是，这些抑制剂中无一成功地作为药物。有意义地，这些抑制剂的一些种类对 FabI和FabK展示出活性:对于基于4-吡啶酮的苯基咪唑衍生物的双向化合物主要是FabK (Kitagawa等人J .Med · Chem. 2007，50，4710)，对于吲噪衍生物主要是FabI (Payne等人 Antimicrob.Agents Chemother · 2002，46，3118; Seefeld等人J.Med.Chem. 2003，46，1627) 〇 然而，对于第二种酶的中度活性可以证实这类化合物的缺陷，因为它可能因附加的选择压 力而导致抗性机制的增加(Tonge等人Acc · Chem · Res · 2008，41，11) 〇 [0008]尽管FabI作为抗菌剂/抗寄生虫药具有吸引力，但是目前仍然没有得到显著利用。 [0009] 国际申请WO 2007/135562(Mutabilis SA)描述了一系列羟基苯基衍生物，其与三 氯生相反，展示出对包含FabI和相关靶标的种类的选择性活性谱。国际申请WO 2011/ 026529(FAB Pharma SAS)中描述了式(I)的具体的羟基苯基化合物：
[0010]
[0011] 如WO 2011/026529中所述，已知式（I)的化合物(本文称作"化合物（I)"）在化学上 称作4-(4-乙基-5-氟-2-羟基苯氧基)-3-氟苯甲酰胺，且已经发现其在体外对致病性甲氧 西林敏感的金黄色葡萄球菌（methicillin-susceptible Staphylococcus aureus) (MSSA)、抗甲氧西林金黄色葡萄球菌（methici 11 in-resistant Staphylococcus aureus) (MRSA)、万古霉素-中间体金黄色葡萄球菌（vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus) (VISA)和万古霉素耐药性金黄色葡萄球菌（vancomycin-resistant Staphylococcus aureus)(VRSA)菌株具有高度活性。该化合物还展示出对其它致病菌包括 大肠杆菌（Escherichia col i)和鲍氏不动杆菌（Acinetobacter baumanni i )的活性 化8。3丨吐等人44〇2011，55(10)，4692,66^182等人厕0 2012,55,9914)。此外，化合物（1)还 在鼠模型中对MSSA和MRSA体内感染具有活性。在I期研究中在健康人体志愿者中评价了化 合物（I)并且报道其显示对金黄色葡萄球菌(S · aureus)的离体杀菌活性。
[0012] 化合物（I)的水溶性相对较差。WO 2011/026529实施例3中所述的包含化合物（I) 的可注射药物组合物(本文称作"现有技术的历史制剂"）由化合物（I)、水、作为张度调节剂 的一水合葡萄糖和作为增溶剂的羟丙基-β-环糊精(HPBCD)组成。使用该制剂，可以将化合 物（I)配制成至多11.3mg/mL的浓度。然而，在制剂中应用环糊精因潜在的毒性风险而必须 谨慎地考量，如下所述。
[0013] 环糊精是由6-8个通过1-4个键连接的葡萄糖单元构成的环状寡糖类(分别为α-、 β-和γ-"母体"环糊精）。环糊精已经用于食品和药物产品多年，特别地因其与药物分子形 成包合配合物的能力而用于药物组合物。这类包合配合物的形成可以增强药物分子的物化 特性，例如增加溶解度。
[0014] 在口服施用时，因为体积大和亲水性，仅微量的完整环糊精从胃肠道吸收，且所有 母体环糊精被接受为食品添加剂且"一般被公认为安全的"（GRAS)。相反，IV-施用的环糊精 从体循环中快速消失。在吸收后，环糊精分布于不同组织，不过，肾具有最高水平，且已经发 现环糊精的消除强烈地依赖于肾清除率(SteIla等人ToxicoI .Pathol .2008,36,30)。正如 在肾中的一系列改变所表现出的，观察到胃肠外施用环糊精、β_环糊精或甲基化-β_环糊 精导致肾毒性（Frank 等人 Am. J · Pathol .1976,83,367; Irie 等人J · Pharm. Sci · 1997，86， 147)。对商品静脉内制剂HPBCD所报道的最大安全每日剂量为16g/天（Brewster等人 Advanced Drug Delivery Review 2007,59,645)。当选择赋形剂用于药物制剂作为主要的 关注的安全性时，如果可能，展示出任何不良反应的赋形剂的应用应当避免。
[0015] 本发明的一个目的在于提供不含HPBCD的化合物（I)的药学上可接受的新制剂。适 合地，该新制剂潜在地能够包含高于现有技术历史制剂的浓度的化合物（I)，同时抵抗聚 集，由此具有可接受的长期储存稳定性。适合地，该新制剂与化合物（I)的现有技术的历史 制剂相比具有类似或改善的体内效能。
[0016] 发明概述
[0017] 本发明的发明人已经制备了化合物（I)的新的药物水性纳米混悬液，其具有不含 HPBCD及其潜在的肾毒性的优点和能够将化合物（I)配制成远高于现有技术历史制剂的浓 度的实际优点。正如实施例中所示的，这类纳米混悬液可以抵抗聚集、对照射稳定、具有良 好的长期储存稳定性、有利的施用特征和在用于治疗细菌感染时适合的效能。
[0018] 因此，在一个方面，本发明提供包含4-(4-乙基-5-氟-2-羟基苯氧基)-3-氟苯甲酰 胺纳米颗粒形式的和稳定剂的药物水性纳米混悬液(下文称作"本发明的药物纳米混悬液" 或"本发明的纳米混悬液"）。
[0019] 附图简述
[0020] 里1显示使用实施例1的方法制备的化合物(I)的样品的XRro图。
[0021] _显示通过受控沉淀制备的本发明纳米混悬液的样品（实施例8和9)的粒度分布 (PSD) 0
[0022] _显示通过受控沉淀制备的本发明纳米混悬液的样品（实施例10)的热重量分析 (TGA)0
[0023] 发明详述
[0024] 4_( 4-乙基-5-氟-2-羟基苯氧基)-3-氟苯甲酰胺(化合物（I))
[0025]用于合成化合物（I)的通用方法公开在W02007/135562中，将该文献的内容完整地 并入本文作为参考。用于合成化合物（I)的具体方法描述在WO 2011/026529的"实施例1 (可 选方法)"中，也将该文献的内容完整地并入作为参考(另外参见本申请的实施例1)。
[0026]本发明的药物水性纳米混悬液包含治疗有效量的化合物（I)作为活性成分。将化 合物（I)的治疗有效量定义为对于指定剂量或多个分次剂量足以在治疗方案中施用于所述 受试者时实现治疗上有意义的效果的用量。
[0027]在一个实施方案中，本发明的药物水性纳米混悬液包含约lmg/mL-约1000mg/mL的 化合物（I)，例如约lmg/mL-约500mg/mL或约I Omg/mL-约100mg/mL，例如约90mg/mL。在另一 个实施方案中，本发明的药物水性纳米混悬液包含至少20mg/mL的化合物（I)，例如至少 30mg/mL、至少40mg/mL、至少50mg/mL、至少60mg/mL、至少70mg/mL 或至少80mg/mL的化合物 (I)