0 · 600μπι的体积中位直径(Dv(0 · 5))。
[0121] 在一个实施方案中，提供用于制备药物水性纳米混悬液的方法，包含下列步骤：
[0122] (i)将4-(4-乙基-5-氟-2-羟基苯氧基)-3_氟苯甲酰胺溶于乙酸乙酯；
[0123] (ii)将步骤(i)的溶液加入到PVP溶于水的溶液中，同时维持均匀溶液；
[0124] (i i i)在约30 °C -约50 °C的温度下搅拌步骤(i i)的溶液;和
[0125] (iv)在约(TC-约5°C的温度下将步骤(iii)的溶液缓慢地加入到水中，形成纳米颗 粒形式的4- (4-乙基_5_氣_2_羟基苯氧基)_3_氣苯甲酰胺，
[0126] 其中所述稳定剂是PVP，且其中得到的纳米颗粒形式的4-(4-乙基-5-氟-2-羟基苯 氧基)-3-氟苯甲酰胺具有约0 · 050μπι-约0 · 600μπι的体积中位直径(Dv(0 · 5))。
[0127] 在一个实施方案中，提供本发明的药物水性纳米混悬液，其在25 °C和60 % RH下可 稳定地储存至多6周。所谓"稳定地储存"是指该纳米混悬液的Dv(0.90)在密封小瓶中在25 °C和60 % RH下储存至多6周后不超过Ιμπι，优选不超过0 · 9μηι或更优选0 · 8μηι，例如不超过0 · 6 μπι(参见实施例7Α和7Β的方法）。
[0128] 例如，可以适当地用至多40kGy的γ射线照射本发明的药物水性纳米混悬液，以确 保在储存前无菌。
[0129] 在一个实施方案中，提供本发明的药物水性纳米混悬液，其可用至多40kGy的γ射 线稳定地照射。所谓"可用至多40kGy的γ射线稳定地照射"是指该纳米混悬液的Dv(0.50) 且进一步优选Dv(0.90)在用至多40kGy的γ射线照射后不超过Ιμπι，优选不超过0·9μπι或以 上，优选0 · 8μπι，例如不超过0 · 6μπι(参见实施例12、13、14和14Α的方法）。优选地，该纳米混悬 液的Dv(0.50)且进一步优选Dv(0.90)在用至多40kGy的γ射线照射后且随后储存在密封小 瓶中在25°C和60%RH至多6周时不超过Ιμπι，优选不超过0.9μπι或以上，优选0.8μπι，例如不超 过0.6μπι(参见实施例14和14Α的方法）。
[0130] 缩写
[0131] CFU 菌落形成单位
[0132] hr 小时
[0133] HPBCD 羟丙基-β_环糊精
[0134] IV 静脉内
[0135] min 分钟
[0136] MSSA 甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌
[0137] MRSA 抗甲氧西林金黄色葡萄球菌
[0138] PK 药物代谢动力学
[0139] PVP 聚乙烯吡咯烷酮
[0140] RH 相对湿度
[0141] TFA 三氟乙酸 实施例
[0142] 通用方法
[0143] 所有原料和溶剂均得自商业来源或根据本文所述的方法和文献中所述的方法制 备。除非另有说明，否则搅拌全部反应体系。通常用无水硫酸镁干燥有机溶液。
[0144] 分析方法
[0145] X-射线粉末衍射(XRPD)
[0146] 使用BrUker-AXS D8Advance衍射计、应用铜双阴级、单晶娃样品保持器和位置灵 敏探测器进行XRPD分析。将粉末样品以避免优选方向（非随机定向的晶体)和确保样本表面 平坦的方式分散于硅样品保持器上。用于X-射线图案获取的仪器操作条件如下：温度:环 境；大气压：环境；X-射线发生器：在40mA 40kV; X-射线源：Cu靶标；发射辐射Κλ? (nm)= 0 · 15406; Κλ2 (nm) = 0 · 15444; Κλ2/Κλ1 比值=〇 · 5; Κβ 过滤辐射=镍;狭缝(反向发散）=0 · 6; 测角仪：（分析的角度扇区）=3.5-40或3.5-70(°对于2Θ);步长=0.069(°，2Θ);样品保持器 的转速 :30rpm;检测：角度开口 =8°;用于测定衍射强度的步骤时间=6s。
[0147] HPLC分析(纳米混悬液中化合物(I)的量)
[0148] 下列HPLC方法用于测定本发明的纳米混悬液中化合物（I)的量。
[0149] 仪器：带有UV检测器的HPLC系统；柱：Waters X-Bridge Shield RP18 3·5μπι， 150mm χ3. Omm;流动相:A:超纯水(mi 11 iQ或等效物)+0.05 % TFA; B:乙腈+0.05 % TFA;运行 时间：28min;波长:282nm;流速:0.70mL/min;柱温:50 °C ;自动采样器温度:20 ± 5 °C ;注射体 积：25μ1。
[0150] 產1:色谱条件：
微元衍射分析（納术泯悬淞杈度分析_买施例4)
[0153] 使用激光衍射型 Mas ter sizer 2000 (Malvern ,Worcester shire，UK)测定悬浮颗粒 的粒度分布。使用Hydro 2000S样品分散模块。给样品保持器充满纯水，将等分的纳米混悬 液以1500rpm分散于样品保持器。一式两份进行每次分析。通过容积直径(Dv)、应用Malvern 软件表示粒度。
[0154] 将Dv(0.50)中位值定义为其中一半容积分布低于该值的直径。类似地，90%的容 积分布低于Dv(0.90)，且10%的分布低于Dv(0.10)。
[0155] 动态光散射(纳米混悬液粒度分析-实施例9)
[0156] 使用基于动态光散射原理测量粒度的光子变换光谱仪Beckman Coulter N4Plus 分析悬浮颗粒的大小。该方法提供非容积％的强度％值。然而，可以操作该数据以得到近似 的 0￥(0.10)，0￥(0.50)和0￥(0.90)值。
[0157] 重量摩尔渗透压浓度测定
[0158] 使用Advanced Micro Osmometer(Model 3320Advanced Instruments Inc， Norwood，MA，US)、通过冰点法测定重量摩尔渗透压浓度。Clinitrol?290用作参比溶液 (Advanced Instruments) 〇将结果表不为m0sm/kg〇
[0159] 根据Eur.Ph.，推荐270-330m0sm/kg用于胃肠外等渗溶液/混悬液。
[0160] ζ电位(静电稳定性)
[0161] 使用PALS Zeta Potential Analyzer 3.40版（Brookhaven Instruments Corp.)、应用下列参数测定ζ电位。
[0162] @:ζ电位参数
[0165] 实施例1 -4-( 4-乙基-5-氟-2-羟基苯氧基)-3-氟苯甲酰胺(化合物(I))的制备
[0166] 使用WO 2011/026529的"实施例1(可选方法)"（第18页第4行-第19页第6行）制备 化合物（I)。发现使用该方法分离的材料是晶体。得自基本上根据该方法制备的化合物（I) 样品的XRro图如图1中所示。
[0167] 实施例2-化合物（I)的结晶
[0168] 还可以使用如下结晶方法制备具有基本上如图1中所示XRH)图的晶型形式的化合 物（I)。在90°C (回流）、在磁搅拌下将化合物（I)(600mg)溶于24mL甲苯/EtOH(95/5v/v)。将 该反应混合物在90 °C搅拌Ih，然后通过每隔IOmin降低5 °C (30 °C/小时)冷却。在70 °C观察到 结晶，将该反应混合物冷却至25°C (每IOmin 5°C )。将得到的固体在25°C过滤，在80°C减压 干燥Ih，得到具有基本上如图1中所示的XRH)图的化合物（I)(80%收率）。
[0169] 实施例3-通过湿磨法制备本发明的纳米混悬液
[0170] 通过如下湿磨法制备化合物（I)的纳米混悬液。通过将聚合物聚维酮1 (PVP; 50.0 mg/mL)溶于纯水(50mL)制备研磨介质。将该溶液加入到250mL澄清玻璃小瓶（I I 型）中，然后添加 lOOmg/mL的化合物（1)(使用实施例1的方法得到）。为了避免聚集，在混合 后即刻（即将化合物（I)添加到溶液中），通过使用磁搅拌器搅拌30分钟制成预混悬液。最 终，加入研磨珠。加入具有0.5mm直径的Ytr ium稳定的氧化锆。封闭小瓶，置于滚筒式粉碎机 上进行湿磨过程。将小瓶速度设定在ieOrpmd^r湿磨后，取样品使用激光衍射分析粒度分 布，以证实至少90%的悬浮颗粒的直径低于500nm，终止研磨过程。然后使用带有23G针头的 注射器从研磨珠中采集白色均匀纳米混悬液。制备后，将该纳米混悬液储存在2-8°C。
[0171 ]实施例3A-通过湿磨法制备本发明的纳米混悬液
[0172] 按照与实施例3中相同的方法，通过湿磨法制备化合物（I)的纳米混悬液，同时将 聚维酮12PF?的浓度增加至75mg/g，将化合物（I)的浓度增加至150mg/g。使湿磨时间降至 28h，取样品用于使用激光衍射分析粒度分布，以证实至少90%的悬浮颗粒的直径低于 500nm。发现粒度分布 Dv(0 · 10/0 · 50/0 · 90/0 · 99)如下：0 · 062/0 · 120/0 · 233/0 · 41。
[0173] 实施例3B-通过湿磨法制备本发明的纳米混悬液
[0174] 按照与实施例3中相同的方法，通过湿磨法制备化合物（I)的纳米混悬液，同时将 聚维酮的浓度增加至lOOmg/g，将化合物（I)的浓度增加至 20〇mg/g。使Ytrium稳定 的氧化错珠的直径尺寸增加至Imm，将小瓶速度设定在120rpm，使湿磨时间降至40h。取样品 用于使用激光衍射分析粒度分布，以证实至少90%的悬浮颗粒的直径低于500nm。发现粒度 分布 Dv(0 · 10/0 · 50/0 · 90/0 · 99)如下：0 · 068/0 · 140/0 · 310/0 · 72。
[0175] 实施例3C-通过湿磨法制备本发明的纳米混悬液
[0176] 按照与实施例3中相同的方法，通过湿磨法制备化合物（I)的纳米混悬液，同时将 聚维酮12PF?的浓度增加至l5〇mg/g，将化合物（ 1)的浓度增加至30〇mg/g。使Ytrium稳定 的氧化错珠的直径尺寸增加至Imm，将小瓶速度设定在120rpm，使湿磨时间降至46h。取样品 用于使用激光衍射分析粒度分布，以证实至少90%的悬浮颗粒的直径低于500nm。发现粒度 分布 Dv(0 · 10/0 · 50/0 · 90/0 · 99)如下：0 · 078/0 · 181/0 · 492/1 · 01。
[0177] 实施例4-纳米混悬液(湿磨法)粒度分布分析
[0178] 通过激光衍射分析来分析根据实施例3的方法制备的3个不同批号的纳米混悬液， 以便根据通用方法中列出的方法测定粒度分布。还通过HPLC分析样品，以便也使用通用方 法中列出的方法测定纳米混悬液中化合物（I)的量。将结果概括在表3中，并且示例了在每 种情况中观察到极为类似的粒度分布时所述方法的再现性。
[0179 ] ^3 :通过湿磨法形成的纳米混悬液在T = 0的粒度分布
[0181] *化合物（I)的理论浓度(基于作为原料的化合物（I)的量)为I OOmg/mL。
[0182] 实施例5-纳米混悬液(湿磨法)稳定性分析
[0183] 将根据实施例3制备的纳米混悬液样品储存在不同温度和相对湿度下不同的时间 期限，以便评价纳米混悬液的储存稳定性。在粒度分布改变、重量摩尔渗透压浓度和pH方面 评价储存稳定性。将结果概括在表4中且显示所述纳米混悬液在典型储存条件下（5°C和25 °C)显示出良好的稳定性。
[0184] ^4 :通过湿磨法形成的纳米混悬液的储存稳定性
[0187] 实施例5A-纳米混悬液(湿磨法)稳定性分析
[0188] 将根据实施例3B制备的纳米混悬液样品储存在不同温度和相对湿度下不同的时 间期限，以便评价纳米混悬液的储存稳定性。在粒度分布改变、重量摩尔渗透压浓度和pH方 面评价储存稳定性。将结果概括在表5中且显示所述纳米混悬液在典型储存条件下（5°C和 25 °C)显示出良好的稳定性。
[0189] 表5:通过湿磨法形成的纳米混悬液的储存稳定性
[0191 ]实施例5B-纳米混悬液(湿磨法)稳定性分析
[0192] 将根据实施例3C制备的纳米混悬液样品储存在不同温度和相对湿度下不同的时 间期限，以便评价纳米混悬液的储存稳定性。在粒度分布改变、重量摩尔渗透压浓度和pH方 面评价储存稳定性。将结果概括在表6中且显示所述纳米混悬液在典型储存条件下（5°C和 25 °C)显示出良好的稳定性。
[0193] 表6:通过湿磨法形成的纳米混悬液的储存稳定性
[0195] 实施例6-用于IV施用的等渗纳米混悬液(湿磨)制剂的制备
[0196] 可以将本发明的浓纳米混悬液进一步配制以便即时用于药物组合物。下列方法提 供了适合于静脉内（IV)施用的等渗制剂的实例。
[0197] 在支持用于体内测试的IV施用的即时稀释液中，评价了通过在水溶液中与渗透剂 一起湿磨(实施例3)生产的纳米混悬液稀释液。
[0198] 使用葡萄糖、甘露醇或氯化钠的水溶液按照1/3、1/1或3/1之比稀释具有