过肝素分子末端残基的共价连接)将多 糖连接到吸附介质表面上。与非共价附着或多点附着相比较，在要附着的分子的末端基团 处的单一共价连接在使其表面密度最大化的同时有利地提供固定化分子取向的更好的控 制。特别地，这些长链碳水化合物的端点附着提供刷子型分子表面结构，其导致可用于分析 物/病原体结合的碳水化合物寡聚物的可接近位置的浓度更高。在一些情形中，PRBC与全长 肝素(例如，平均分子量大于IOkDa的肝素)涂覆的表面的附着比现有技术通常使用的涂有 肝素片段的常规表面有效率得多。
[0074] 与非共价附着相比较，碳水化合物(例如多糖)与固体基质的共价附着提供了对例 如固定化分子的表面密度和取向的参数的控制。已经显示，这些参数提供吸附物与固定化 的碳水化合物分子的结合。在某些实施方式中，固体基质上碳水化合物的表面浓度在0.01 至大约0.5yg/cm 2的范围中，例如0·01、0·02、0·03、0·04、0·05、0·06、0·07、0·08、0·09、0·1、 0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19或0.24 8/〇112。在其他实施方式中，固体 基质上(一种或多种)吸附剂的表面浓度在0.001-2.Oyg/cm 2的范围中。在另一实施方式中， 固体基质上(一种或多种)吸附剂的表面浓度在0.005-0.5yg/cm2的范围中。
[0075]在一些实施方式中，固体基质上吸附剂的表面浓度在lyg/cm2至20yg/cm2的范围 中，例如，lyg/cm2、2yg/cm2、3yg/cm2、4yg/cm 2、5yg/cm2、6yg/cm2、7yg/cm2、8yg/cm 2、9yg/cm2、 IOyg/cm2、Ilyg/cm2、12yg/cm2、13yg/cm 2、14yg/cm2、15yg/cm2、16yg/cm2、17yg/cm 2、18yg/ cm2、19yg/cm2和20yg/cm2。在其他实施方式中，固体基质上吸附剂的表面浓度在5yg/cm 2至 15yg/cm2的范围中，例如，5yg/cm2、6yg/cm 2、7yg/cm2、8yg/cm2、9yg/cm2、IOyg/cm 2、I lyg/cm2、 12yg/cm2、13yg/cm2、14yg/cm 2和15yg/cm2。
[0076] 在一些实施方式中，通过还原胺化，将甘露糖、甘露糖衍生物和甘露糖的寡聚物还 原性偶联至胺化基质例如胺化珠上的伯胺。还原性甘露糖的开放醛形式与珠的偶联导致稳 定的仲胺。具有反应性胺的非还原性甘露糖可以用具有醛官能性的中间体与珠偶联。例如， 通过以下方法将甘露糖附着至含胺的基质：（a)使胺化的基质与含有甘露糖的水溶液接触， 形成席夫碱中间体;和(b)使席夫碱与还原剂接触，以附着甘露糖。在一些实施方式中，如果 甘露糖是非还原性甘露糖，先于非还原性甘露糖将中间体醛(例如戊二醛)附着至胺基质。
[0077] 甘露糖可以溶解在水溶液例如酸性水溶液中。使甘露糖水溶液与胺化基质例如胺 化珠接触。产生席夫碱。之后将席夫碱用还原剂还原。还原剂可以是，例如，氰基硼氢化钠或 硼氢化钠。在某些实施方式中，固体基质还可以与具有反应性醛官能性的肝素反应。
[0078] 对于肝素附着，通过部分亚硝酸降解，可以实现还原性末端残基中反应性更高的 醛官能。这缩短反应时间，但固定化的肝素分子量较低。通过还原性胺化(氰基硼氢化物)在 水溶液中进行偶联。
[0079] 通过肝素分子的醛基与吸附介质表面上存在的伯胺基团的反应，可以实现全长肝 素分子与表面的共价附着。所有碳水化合物固有的特性在于它们在其还原性末端具有半缩 醛。该缩醛与醛形式平衡并可以与伯胺形成席夫碱。然后可以将这些席夫碱还原成稳定的 仲胺。在一些实施方式中，通过共价缀合将全长肝素表面固定化到固体基质上。在其他实施 方式中，经由稳定的仲胺基将全长肝素共价附着于所述吸附介质。
[0080] 在一些实施方式中，固定化的全长肝素分子的平均分子量大于10kDa。在其他实施 方式中，固定化的肝素分子的平均分子量大于15kDa。在另一实施方式中，固定化的肝素分 子的平均分子量大于21kDa。在再另一实施方式中，固定化的肝素分子的平均分子量大于 30kDa。优选地，固定化的肝素分子的平均分子量在15_25kDa的范围内。平均分子量也可以 更高，例如在25-35kDa的范围中。
[0081] 在某些情形中，多种制造吸附剂的方法和吸附剂本身公开于美国专利第8,663， 148号和第8,758,286号；和美国专利公开第2009/0136586号、第2012/0305482号和US 2014/231357中，在此出于所有目的将其全文并入作为参考。
[0082] D.与吸附介质上结合的吸附剂结合的分析物/病原体
[0083] 附着至吸附介质的吸附剂可以用于与样品中目标分析物/病原体结合。在一些实 施方式中，样品选自全血、血清、血浆、尿、排泄物、痰、泪液、唾液、支气管灌洗液、其他体液 及其组合。在一些情形中，样品是来自对象例如人对象的全血。
[0084] 分析物/病原体可以包括，但不限于，恶性疱原虫(Plasmodium falciparum)、间日 症原虫（Plasmodium vivax)、卵形症原虫（Plasmodium ovale)、三日症原虫（Plasmodium malariae)、埃博拉病毒（EBOV)、金黄色葡萄球菌（Streptococcus aureus)、酿脓链球菌 (Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌（Streptococcus pneumonia)、脑膜炎奈瑟氏菌 (Neisseria meningitides)、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌 (Escherichia coli)、碳青霉稀抗性肠杆菌科(enterobacteriaceae) (CRE)细菌(例如，碳 青霉烯抗性大肠杆菌和碳青霉烯抗性肺炎克雷伯菌）、产生ESBL的病原体(例如，产生ESBL 的大肠杆菌、产生ESBL的肺炎克雷伯菌和产生ESBL的产酸克雷伯菌）、万古霉素抗性肠球菌 (enterococci) (VRE)细菌(例如，万古霉素抗性粪肠球菌和万古霉素抗性屎肠球菌）、鲍氏 不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae)、产酸克 雷伯菌（Klebsiella oxytoca)、奠肠球菌（Enterococcus faecalis)、屎肠球菌 (Enterococcus faecium)、白色念珠菌(Candida albicans)、巨细胞病毒(CMV)、单纯性疱 疹病毒I (HSVl)、单纯性疱疹病毒2(HSV2)及其任意组合。
[0085]在某些其他情形中，目标分析物/病原体包括，但不限于，甲肝病毒(HAV)、乙肝病 毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、庚型肝炎病毒/GB-C病毒(HGV/GBV-C)、1型 和2型人免疫缺陷病毒(HIV-1/2)、I型和II型人嗜T-细胞病毒(HTLV-I/II)、巨细胞病毒 (CMV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、TT病毒(TTV)、6型人疱疹病毒(HHV-6)、SEN病毒(SEN-V)和 人细小病毒(HPV-B19)。
[0086] 其他的目标病毒包括，但不限于，人7型疱疹病毒(HHV-7)、人8型疱疹病毒(HHV- 8)、甲型流感病毒，包括HlNl和H5N1亚型，严重急性呼吸综合征（SARS)冠状病毒，和导致出 血热的RNA病毒，例如沙粒病毒科(Arenavir idae)(例如，沙拉热病毒(LFV))、丝状病毒科 (Filoviridae)(例如，埃博拉病毒（EBOV)和马尔堡病毒（MBGV));布尼亚病毒科 (Bunyaviridae)(例如，裂谷热病毒(RVFV)和克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV));和黄病 毒科(Flaviviridae)(西尼罗河病毒(WNV)、登革热病毒(DENY)、黄热病病毒(YFV)和之前称 作庚型肝炎病毒(HGV)的GB病毒C(GBV-C))。
[0087] 在某些情形中，细菌包括，但不限于，苍白密螺旋体(Treponema Pallidum) (TP，梅 毒媒介）、小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia Enterocolitica)和葡萄球菌属 (Staphy lococcus)和链球菌属(Streptococcus)物种(常见的细菌污染媒介），和寄生虫，例 如疱原虫属物种(疱疾媒介）、克氏锥虫(Trypanosoma Cruzi)(查加斯病媒介），和微小巴贝 虫（Babesia Microti )(巴贝斯虫病媒介）。其他的细菌包括，但不限于，表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermidis)、錯样芽胞杆菌（Bacillus cereus)、卩齿蚀艾肯菌 (Eikenella corroders)、单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、无乳链球 菌（Streptococcus agalactiae)、流感嗜血杆菌（HaemophiIus inf Iuenzae)、脑膜炎奈瑟 氏菌、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis)、炭 疽杆菌(Bacil Ius anthracis)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pest is)、小肠结肠炎耶尔森氏 菌、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)、粘质 沙雷氏菌（Serratia marcescens)、Serratia IiqueIaciens、焚光假单胞菌（Pseudomonas f Iuorescens)和耐福射奇球菌(Deinococcus radiodurans) 〇
[0088]此外，可以检测新兴的血源性病原体，例如，念珠菌属物种(Candida sp.)，包括白 色念珠菌，曲霉属物种(AspergiIlus sp·)，包括烟曲霉菌(AspergiIlus fumigatus)，戊型 肝炎病毒(HEV)，8型人疱疹病毒(HHV-8)，博氏疏螺旋体(Boaelia Burgdorferi)(莱姆症 媒介)和克雅氏症(CJD)的未知媒介。
[0089] 本文所述的方法中可以使用已知与肝素/硫酸乙酰肝素结合的病原体。这些病原 体的非限定性例子包括细菌，例如，炭疽杆菌、蜡样芽胞杆菌、博氏疏螺旋体、百日咳博氏杆 菌（Bordetella pertussis)、肺炎衣原体（Chlamydia pneumoniae)、沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis)、非典型流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae nontypable)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、单核细胞增多性李斯特菌、结核杆菌 (Mycobacterium tuberculosis)、奈瑟淋球菌（Neisseria gonorrhoaea)、脑膜炎奈瑟氏 菌、恙虫病东方体（Orientia t sut sugamu shi )、