一种冻干保护剂及乳胶偶联抗体的冻干方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种冻干保护剂及乳胶偶联抗体的冻干方 法。
【背景技术】
[0002]抗体(antibody, Ab)是介导体液免疫的重要效应分子，是B细胞接受抗原刺激后增 殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白。除已广泛应用于体外诊断外，抗体越来越多地应用于各 种疾病的体内诊断和治疗。目前，利用抗体对疾病进行诊断主要是通过对标志物的检测来 完成。标志物的检测方法主要有免疫荧光法、免疫比浊法、酶联免疫吸附法和免疫渗滤法 等。将抗体与乳胶微球或乳胶颗粒进行偶联后，微量的抗原便可以使抗体包被的微球产生 明显的聚集，故而，乳胶标记的抗体在免疫诊断学方面，特别是在疾病标志物的免疫比浊检 查中，有着非常广泛的应用。
[0003] 为了保证抗体在长期的保存或者运输过程中活性的稳定，通常将其进行冻干处 理。但是，由于检测所需的抗体为具有活性的物质，其自身的结构非常复杂，与抗原反应的 机制也十分复杂，环境的微小变化、温湿度的变化等均可能引起抗体活性改变，进而影响检 测结果。并且，在将抗体与乳胶颗粒或乳胶微球进行偶联后，冻干过程更是需要额外额外考 虑乳胶的结构和性质，确保产品复溶后乳胶微球能够分散均匀而非聚集在一起，避免试剂 检测空白值偏高。
[0004] 目前，由于存在复溶后聚集状态不佳等问题，冷冻干燥技术极少应用于修饰乳胶 的抗体。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种冻干保护剂及乳胶偶联抗体的 冻干方法。本发明提供的冻干保护剂能够保护乳胶偶联的抗体在复溶后不会发生非特异聚 集、且抗体效价维持稳定。
[0006] 本发明提供的冻干保护剂包括BSA、PEG和PVP;其中，BSA、PEG和PVP的质量比为（2 ~4):(0.05~0.07):(2.6~5)。
[0007] 在一些实施例中，BSA、PEG和PVP的质量比为2:0.07:3.4。
[0008] 在一些实施例中，BSA、PEG和PVP的质量比为3.2:0.06:2.6。
[0009] 在一些实施例中，BSA、PEG和PVP的质量比为4:0.05:5。
[0010] 在一些实施例中，其中还包括糖类;糖类、BSA、PEG和PVP的质量比为（2.6~2.7): (2~4):(0.05~0.07):(2.6~5)。
[0011] 在一些实施例中，糖类、BSA、PEG和PVP的质量比为2.7:2:0.07:3.4。
[0012] 在一些实施例中，糖类、BSA、PEG和PVP的质量比为2.7:3.2:0.06:2.6。
[0013] 在一些实施例中，糖类、BSA、PEG和PVP的质量比为2.6:3.2:0.06:2.6。
[0014] 在本发明的实施例中，糖类为蔗糖或海藻糖。
[0015] 冻干保护剂能够防止生物制品在冷冻干燥和贮藏的过程中活性组分发生变性。本 发明提供的冻干保护剂中包括BSA、PEG和PVP。其中，BSA为牛血清白蛋白（bovine serum albumin)，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430kDa，等电点为4.7 ASA能够减轻不利的 环境因素或化学因素导致的活性组分的变性。PEG为聚乙二醇(polyethylene glycol)，对 生物活性物质的活性具有保护作用。在本发明中，PEG的数均分子量为5500~?δΟΟ?νΡ为聚 乙稀吡略烧酮(Polyvinyl pyrrolidone)，在医药工业中有着广泛的应用，能够作为药物的 低温保存剂使用。本发明中，PVP为PVP40,其平均分子量为40000。
[0016] 本发明提供的冻干保护剂中还可以包括一些糖类。糖类物质是生物制品冷冻干燥 过程中使用最频繁的冻干保护剂，本发明的冻干保护剂中添加蔗糖或海藻糖能够维持生物 活性物质的生物活性。
[0017] 本发明提供的冻干保护剂针对乳胶偶联抗体设计，能够保护乳胶偶联抗体在冷冻 干燥的过程中，抗体的活性不被破坏。且冻干后复溶的过程中不会发生非特异性聚集，抗体 的效价在复溶后也保持稳定。重复多次实验，偏差皆不显著(相对偏差小于±10%)，说明本 发明提供的冻干保护剂具有良好的冻干保护效果。
[0018] 本发明提供的冻干保护剂在制备乳胶偶联抗体冻干制剂中的应用。
[0019] 在本发明中，乳胶偶联抗体中，乳胶为聚苯乙烯乳胶;抗体为C反应蛋白抗体、类风 湿因子抗体、抗链球菌溶血素〇抗体、胱抑素 C抗体、D-二聚体抗体、糖化血红蛋白抗体或β2 微球蛋白抗体。
[0020] 乳胶偶联抗体是将抗体与乳胶微球或乳胶颗粒进行偶联后的产物，本发明中，乳 胶偶联抗体中的抗体可为单克隆抗体，也可为多克隆抗体。其获得方式可为自制也可于市 场购得。抗体与乳胶偶联的步骤可为自行制备，也可通过商业途径获得，本发明对此不作限 定，本发明提供的冻干保护剂皆可对其产生良好的保护作用。在一些实施例中，乳胶偶联抗 体为C-反应蛋白乳胶偶联抗体。C-反应蛋白抗体为兔抗人C-反应蛋白抗体。
[0021] 本发明还提供了一种乳胶偶联抗体的冻干方法，将乳胶偶联抗体与本发明提供的 冻干保护剂混合后冻干;冻干的程序为： 预冻段 -38°C~-42°C 2h40mm~3hl0min; 预冻段 -18'C~-22°C 3M.5h; 预冻段 -3 8 ''C ~-42 °C 3.5h ~4h:
[0022] 第一干燥阶段 -38°C~-42°C 13h~I3.5h; 第二干燥阶段 -21：~2 uC 1.5h~2h; 第二干燥阶段 23°C~27°C 2.5h~3h。
[0023]在一些实施例中，冻干的程序为： 预冻段 -3 8 °C 3hlOmin; 预冻段 ~22V 3h; 预冻段 .-38°C 4h;
[0024] 第一千燥阶段 -42 € I3h; 第二千燥阶段 -2°C 2h; 第二千燥阶段 27 V 2.5h〇
[0025] 在一些实施例中，冻干的程序为： 预冻段 -42 °C 2M0min; 预冻段 -18'C 3.5h; 预冻段 -42°C 3.5h;
[0026] 第一干燥阶段 -3 8 °C 13.511； 第二干燥阶段 21： 2h, 第二干燥阶段 23 Γ 3h。
[0027] 在一些实施例中，冻干的程序为：
[0028] 预冻段 -40C 2h40miii； 预冻段 -20°C _ 预冻段 -40°C 3.5h;
[0029] 第一千燥阶段 -40 °C 13h; 第二千燥阶段 （TC 1.5h; 第二千燥阶段 25 °C 2.5h。
[0030] 在本发明的实施例中，乳胶偶联抗体与冻干保护剂混合的质量比为I: (45~65)。
[0031] 在一些实施例中，乳胶偶联抗体与冻干保护剂混合的质量比为1:61.3。
[0032] 在一些实施例中，乳胶偶联抗体与冻干保护剂混合的质量比为1:64.2。
[0033] 在一些实施例中，乳胶偶联抗体与冻干保护剂混合的质量比为1:63.5。
[0034]在一些实施例中，乳胶偶联抗体与冻干保护剂混合的质量比为1:45.3。
[0035] 本发明中，将乳胶偶联抗体的溶液与冻干保护剂溶液混合后，形成待冻干溶液，再 进行冷冻干燥。其中，乳胶偶联抗体的溶液中乳胶偶联抗体的质量分数为0.2% ;冻干保护 剂溶液中冻干保护剂的质量分数为8.17 %~9.05%。乳胶偶联抗体溶液与冻干保护剂溶液 混合的体积比为I: (1~1.5)。在本发明的实施例中，待冻干溶液的体积为120yL。
[0036] 在本发明的实施例中，乳胶偶联抗体与冻干保护剂溶解于水中；其中，乳胶偶联抗 体的质量分数为〇. 1 %~〇. 08%，冻干保护剂的质量分数为3.2%~4.6%。
[0037] 在本发明的实施例中，乳胶偶联抗体中，乳胶为聚苯乙烯乳胶;抗体为C反应蛋白 抗体、类风湿因子抗体、抗链球菌溶血素〇抗体、胱抑素 C抗体、D-二聚体抗体、糖化血红蛋白 抗体或K微球蛋白抗体。
[0038] 在一些实施例中，乳胶偶联抗体为C-反应蛋白乳胶偶联抗体。C-反应蛋白抗体为 兔抗人C-反应蛋白抗体。
[0039] 在本发明的实施例中，冻干为真空冷冻干燥。
[0040] 在本发明的实施例中，真空冷冻干燥的干燥仓真空值为1~5Pa。物料最高温度为8 ~10°C。起始板温为18~25°C。
[0041] 以本发明提供冻干保护剂和方法，冷冻干燥得到的冻干制剂能够用于样品中目标 物质的检测。所述样品为全血、血清、血浆或尿液。所述目标物质为C反应蛋白、类风湿因子、 抗链球菌溶血素〇、胱抑素 C、D_二聚体、糖化血红蛋白含量或β2微球蛋白。所述检测的方法 为免疫比池法。
[0042]本发明提供的冻干保护剂中包括BSA、PEG和PVP。本发明提供的冻干保护剂针对乳 胶偶联抗体设计，结合本发明提供的冻干方法，能够保护乳胶偶联抗体在冷冻干燥的过程 中，抗体的活性不被破坏。且冻干后复溶的过程中不会发生非特异性聚集，抗体的效价在复 溶后也保持稳定。重复多次实验，偏差皆不显著(相对偏差小于±10%)，说明本发明提供的 冻干保护剂具有良好的冻干保护效果。
【具体实施方式】
[0043] 本发明提供了一种冻干保护剂及乳胶偶联抗体的冻干方法，本领域技术人员可以 借鉴本文内容，适当改进工艺