参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领 域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通 过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文的 方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0044] 本发明采用的材料、试剂、仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0045] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0046] 实施例1~6
[0047] C-反应蛋白胶乳抗体偶联溶液，本次采用质量分数为0.2%兔抗人C反应蛋白乳胶 抗体溶液。按照表1方案添加冻干保护剂并实施冻干方案：
[0048] 表1实施例1~6
[0050] 其中，冻干程序1为： 行为 段号目标温度控溢时间 预冻段 1 -40 5h
[0051] 第一干燥阶段4 -40 13? 第二干燥阶段5 0 1.5h 第二干燥阶段& 25 2.5h
[0052] 冻干程序2为： 行为 段号目标温度控温时闾 预冻段 I -38°C 3h IOmiru 预冻段 2 -22 0C 3h:
[0053] 预冻段 3 -3 8 0C 4h: 第一干燥阶段4 -420C 13h; 第二干燥阶段5 扰 2h; 第二千燥阶段6 ZTC 2.5h。
[0054] 冻干程序3为： 行为 段号目标温度控温时间 预冻段 1 -42 "C 2h40min: 预冻段 2 -18 °C 3.5h;
[0055] 预冻段 3 -42 0C 3.5h; 第一千燥阶段4 -MV UJh; 第二千燥阶段5 m 2h; 第二千燥阶段6 2：rc 3h,
[0056] 冻干程序4为： 行为 段号目标温度控温时间 预冻段 1 -40'C 2h40min； 预冻段 2 -20 'C 3h；
[0057] 预冻段 3 -40'C 3.5h; 第一干燥阶段4 -40''C 13:? 第二干燥阶段5 OC 1.5h; 第二干燥阶段6 25'€ 2.5h"
[0058] 各实施例重复5次，冻干后样品检测复溶后的外观、抗体效价，并进行免疫比浊法 鉴定其空白值;同时计算各实施例重复间的重复性。
[0059] 免疫比浊空白值检测方法:将冻干品用蒸馏水复溶后，按照国赛特定蛋白分析仪 Nephstar Plus配套C反应蛋白检测体系，以生理盐水替代病人样本，测试反应光电值初值 作为衡量冻干品空白值的指标。
[0060] 抗体效价检测方法：将冻干品用蒸馏水复溶后，按照国赛特定蛋白分析仪 Nephstar Plus配套C反应蛋白检测体系，取浓度为246mg/L的CRP校准品作为样本，测试反 应光电值差值作为衡量冻干品效价的指标。
[0061] 冻干品重复性检测方法：将冻干品用蒸馏水复溶后，按照国赛特定蛋白分析仪 Nephstar Plus配套C反应蛋白检测体系，取浓度为157mg//L和20.5mg/L的高低浓度质控品 作为样本，将各实施实例冻干品重复测试20次，计算20次的光电值差值CV，评价各实施实例 冻干品的瓶间差。结果如表2:
[0062] 表2检测结果
[0064] 如表2:空白值方面：
[0065]对照组与实施例1的检测空白值配对分析，P<0.01，说明二者之间存在显著差异。 对照组与实施例2~6的检测空白值配对分析，P>0.05，说明存在显著性差异。实施例1与实 施例2~6的检测空白值配对分析，P>0.05,说明存在显著差异。
[0066]抗体效价方面：
[0067]对照组与实施例1的检测效价值配对分析，P<0.01，说明二者之间存在显著差异。 对照组与实施例2~6的检测效价值配对分析，P>0.05,说明不存在显著差异。实施例1与实 施例2~6的检测效价值配对分析，P〈0.05,说明存在显著差异。
[0068]检测结果结果显示，本申请提供的冻干保护剂能够给予抗体较好的保护，能够使 冻干后复溶的抗体保持良好的生物活性，未发生非特异性聚集，抗体效价维持稳定。与采用 对照程序(冻干程序1)的实施例1相比，实施例2~6皆取得了良好的实验效果，对抗体的保 护效果显著优于实施例1 (P〈〇. 05)。
[0069] 实施例7~12
[0070] 采用质量分数为0.4%鼠抗人D-二聚体乳胶抗体溶液。按照表2方案添加冻干保护 剂并实施冻干方案，干燥控制程序1~4与实施例1~6相同：
[0071] 表3实施例7~12
[0073] 各实施例重复5次，冻干后样品检测复溶后的外观、抗体效价，并进行免疫比浊法 鉴定其空白值;同时计算各实施例重复间的重复性。
[0074] 免疫比浊空白值检测方法、抗体效价检测方法、冻干品重复性检测方法，亦与实施 例1~6记载相同。
[0075] 结果如表4:
[0076] 表4检测结果
[0078] 如表4:空白值方面：
[0079]对照组与实施例7的检测空白值配对分析，P<0.01，说明二者之间存在显著差异。 对照组与实施例8~12的检测空白值配对分析，P>0.05,说明存在显著性差异。实施例1与 实施例8~12的检测空白值配对分析，P>0.05,说明存在显著差异。
[0080] 抗体效价方面：
[0081] 对照组与实施例7的检测效价值配对分析，P<0.01，说明二者之间存在显著差异。 对照组与实施例8~12的检测效价值配对分析，P>0.05,说明不存在显著差异。实施例7与 实施例8~12的检测效价值配对分析，P〈0.05,说明存在显著差异。
[0082] 结果显示，本申请提供的冻干保护剂能够给予抗体较好的保护，能够使冻干后复 溶的抗体保持良好的生物活性，未发生非特异性聚集，抗体效价维持稳定。与采用对照程序 (冻干程序1)的实施例7相比，实施例8~12皆取得了良好的实验效果，对抗体的保护效果显 著优于实施例7(?〈〇.〇5)。
[0083] 以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来 说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种冻干保护剂，其特征在于，包括BSA、PEG和PVP;其中，BSA、PEG和PVP的质量比为 (2~4):(0.05~0.07):(2.6~5)。2. 根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，其中还包括糖类;所述糖类、BSA、 PEG和PVP的质量比为（2.6~2.7): (2~4) :(0.05~0.07) :(2.6~5)。3. 根据权利要求2所述的冻干保护剂，其特征在于，所述糖类为蔗糖或海藻糖。4. 权利要求1~3任一项所述的冻干保护剂在制备乳胶偶联抗体冻干制剂中的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述乳胶偶联抗体中，乳胶为聚苯乙烯乳 胶;抗体为C反应蛋白抗体、类风湿因子抗体、抗链球菌溶血素0抗体、胱抑素 C抗体、D-二聚 体抗体、糖化血红蛋白抗体或β2微球蛋白抗体。6. -种乳胶偶联抗体的冻干方法，其特征在于，将乳胶偶联抗体与权利要求1~3任一 项所述的冻干保护剂混合后冻干;所述冻干的程序为： 预冻段 -38°C~-42 °C 2h40min~3h 1 Omin; 预冻段 -18X：~-22X： 3h ~3.5h; 预冻段 -38°C ~-42C 3.5h ~4h; 第一干燥阶段 -38°C~-421： 13h~丨3.5h; 第二千燥阶段 -2°C~2°C 1.5h~2h; 第二干燥阶段 23''C~27°C 2.5h~3h。7. 根据权利要求6所述的冻干方法，其特征在于，所述乳胶偶联抗体与权利要求1~3任 一项所述的冻干保护剂混合的质量比为1: (45~65)。8. 根据权利要求6所述的冻干方法，其特征在于，所述乳胶偶联抗体与权利要求1~3任 一项所述的冻干保护剂溶解于水中；其中，所述乳胶偶联抗体的质量分数为0.1 %~ 0.08%，所述冻干保护剂的质量分数为3.2%~4.6%。9. 根据权利要求6所述的冻干方法，其特征在于，所述乳胶偶联抗体中，乳胶为聚苯乙 烯乳胶;抗体为C反应蛋白抗体、类风湿因子抗体、抗链球菌溶血素0抗体、胱抑素 C抗体、D-二聚体抗体、糖化血红蛋白抗体或β2微球蛋白抗体。10. 根据权利要求6所述的冻干方法，其特征在于，所述冻干为真空冷冻干燥。
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种冻干保护剂及乳胶偶联抗体的冻干方法。本发明提供的冻干保护剂中包括BSA、PEG和PVP。本发明提供的冻干保护剂针对乳胶偶联抗体设计，结合本发明提供的冻干方法，能够保护乳胶偶联抗体在冷冻干燥的过程中，抗体的活性不被破坏。且冻干后复溶的过程中不会发生非特异性聚集，抗体的效价在复溶后也保持稳定。重复多次实验，偏差皆不显著(相对偏差小于±10％)，说明本发明提供的冻干保护剂具有良好的冻干保护效果。
【IPC分类】A61K39/44, A61K47/42, A61K9/19, A61K47/32, A61K47/34
【公开号】CN105709235
【申请号】CN201610200646
【发明人】余嘉陵, 陈明峰, 郑筱雯
【申请人】深圳市国赛生物技术有限公司
【公开日】2016年6月29日
【申请日】2016年3月31日