专利名称：：由il－15刺激和活化毛发生长的方法
技术领域：
：本发明涉及IL-15多核苷酸、多肽或能结合特异性地识别IL-15多肽的抗体，或能特异性地结合IL-15受体α链的化合物在制备用于刺激毛发生长或用于治疗、预防和/或改善脱发的组合物中的用途。此外，本发明包括转基因的非人动物，其包含IL-15多核苷酸。本发明还涉及刺激非人动物中毛发生长的方法和生产动物毛发的方法。最后，本发明涉及治疗、预防和/或改善遭受脱发的受试者的方法。从医学和化妆的观点看，脱发是人类的严重问题。脱发在人类中具有多种原因，包括先天的或获得的疾病状况，和由医学治疗(例如化疗)或环境影响造成的这样的状况。到目前为止，在人类中毛发紊乱的最常见的原因是毛发生长控制缺陷，如斑秃或雄激素性脱发。除了人类外，脱发或缓慢的毛发生长是各种动物的问题，特别是用于生产毛发的那些动物，例如羊、马、lama或骆驼。通常通过剃剪，从那些动物得到毛发。动物已经被剃剪后，在诱导毛发重新生长和可以再次剃剪动物之前，存在一定的时间间隙。所述时间间隙是使用动物生产毛发的重要的限速步骤。毛发生长由存在于皮肤中的毛囊控制。毛囊是复杂的圆柱状结构，由不同的上皮细胞层组成。外室是根鞘。该室连接表皮，且在这里发生细胞增殖(29)。毛囊是高度动态的，在整个生命中，它们以生长(生长期)、退化(退化期)和静止(毛发生长终期)的周期重复地重新塑造自身。在退化期阶段，发生增殖，且在毛囊的较低部分，可以观察到大量的细胞凋亡(30)。已经提示，几种细胞因子，其中有TNF-α、IL-1-β和IFN-γ，在退化期的过程中，在控制和促进毛球角质细胞的细胞凋亡中起作用(33)。显示IL-15能干扰环磷酰胺-诱导的毛囊角质细胞中的细胞凋亡(34)。IL-15是一种多效性的细胞因子，它对于免疫细胞稳态以及外周免疫功能是重要的(1-4)。许多体外和体内研究已经证实了IL-15在NK细胞谱系的发育和存活中的关键作用(5，6)。在小鼠中的其它研究已经表明，IL-15是记忆CD8+(而不是CD4+T)细胞以及某些上皮内淋巴细胞亚群的选择性生长因子(7-10)。因此，IL-15-/-和IL-15Rα-/-小鼠是淋巴细胞减少的(lymphopenic)，且特异性地缺少NK细胞、NKT细胞、肠衍生的上皮内淋巴细胞亚群以及活化的CD8+T细胞(5，11)。在MHCI类启动子控制下的IL-15的普遍存在的转基因超表达，会导致NK和记忆表型CD8+T细胞的初步扩增，且然后导致致命的白血病的发展，从而造成这些突变体小鼠的过早死亡。因此，难以研究IL-15的长期体内作用(6)。而且，IL-15参与肌细胞的合成代谢途径，作为肥大细胞的生长因子起作用，并作为T细胞、B细胞和成纤维细胞中的细胞凋亡的一般抑制剂起作用(12-15)。这些研究与IL-15在多种细胞类型和组织中的广泛表达相一致。因此，几个报道表明在许多组织和细胞类型中存在丰富的IL-15mRNA转录物(3，16)。但是，IL-15表达受到在转录、翻译和胞内运输水平的紧密控制(17-19)。具体地，IL-15蛋白受到几种控制元件的转录后调节，例如，在5′UTR中的12AUG(其能阻止翻译)、2种不足的信号肽和在前体蛋白C-末端的负调节剂。因而，对IL-15的体内功能的研究受到了极大的消弱。在皮肤内，IL-15的主要细胞来源是角质细胞。角质细胞表达IL-15mRNA，但是仅仅在刺激(例如紫外线辐射或受伤)后和在牛皮癣性病变中产生IL-15蛋白(15，20，21)。还已经在新分离的人郎格汉斯细胞(LC)中检测了IL-15转录物。甚至报道IL-15参与人LC从单核细胞的体外发生。IL-15是一种14-15kDa蛋白，其在许多组织和广泛的细胞类型中是在mRNA水平表达的，包括活化的单核细胞、树突细胞、破骨细胞和成纤维细胞(1，3)。异源三聚的IL-15受体(IL-15R)由IL-2Rβ-链和γ-链、以及独特的α-链(IL-15Rα)组成，后者负责向IL-15的高亲和力结合。尽管IL-2Rα主要在活化的T细胞上表达，但已经在多种组织和细胞中鉴别出了IL-15RαmRNA。如IL-2一样，IL-15Rαβγ复合物通过JAK1/3和STAT3/5途径传递信号(3，28)。已经将IL-15描述为对于CD8+记忆T细胞的增殖和维持是必需的，且在高剂量时，起panT细胞和肥大细胞生长因子的作用(2，26，27)。但是，仍然不能得到用于促进毛发生长和用于治疗、预防和/或改善上文所述的疾病的有效方法，但是非常需要。因而，作为本发明的基础的技术问题必须视为，提供用于有效地促进毛发生长和用于治疗、预防和/或改善由疾病造成的或伴随疾病的脱发的方法。通过权利要求书表征的实施方案，解决了该技术问题。因此，本发明涉及下述物质在制备用于刺激毛发生长的组合物中的用途(i)多核苷酸，其包含(a)如SEQIDNO1或3所示的核酸序列，(b)能编码SEQIDNO2或4所示的氨基酸序列的核酸序列，(c)能编码SEQIDNO2或4所示的氨基酸序列的核酸序列，该氨基酸序列具有修饰的信号肽、修饰的N-末端和/或修饰的C-末端，或(d)能在严格条件下与(a)-(c)中的任一项杂交的核酸序列；(ii)由(a)-(d)中的任一项定义的核酸编码的多肽；或(iii)化合物，其能结合特异性地识别在(ii)中定义的多肽的抗体，或其能特异性地结合IL-15受体α链。术语“多核苷酸”涉及能编码具有白细胞介素15(IL-15)的生物活性或抗原活性的多肽的多核苷酸。本领域已经描述了各种IL-15多肽的结构，且代表性的IL-15多肽显示在SEQIDNO2(人IL-15，登记号BC018149；gi34783292)和SEQIDNO4(小鼠IL-15，登记号BC023698；gi23271448)。本领域还报道了IL-15的几种生物功能，且已经在本文前面讨论。IL-15的基本生物活性是它特异性地结合在(对于小鼠IL-15Rα，登记号为BC022705，和对于人IL-15Rα登记号为AY316538，(2，Lodolce，Immunity1998，9669-676))下保藏的IL-15受体α链的能力。其它很好地表征的生物活性包括它刺激NK-/NKT细胞和记忆T-细胞的能力(Flamand，J.Clin.Invest，1996，971373-81；Kv，Science2000，288675-678)和它对淋巴样细胞或间充质细胞的增殖作用以及用细胞凋亡物质诱导后的细胞凋亡预防(14)。优选地，所述生物活性是刺激毛发生长和角质细胞，如所附实施例所证实的。基本的抗原活性是它被如Shinozcki，J.Clin.Invest，2002，109951-960公开的特异性的(即，非交叉反应性的)IL-15抗体特异性地识别的能力。这样的IL-15抗体也可以通过常规方法得到。优选地，抗体是单克隆抗体。通过本领域众所周知的和上面引用的文献详细描述的常规方法，可以测试这些活性。最优选地，本发明的多核苷酸具有如SEQIDNO1(人IL-15)或SEQIDNO3(小鼠IL-15)所示的核酸序列。优选地，IL-15多核苷酸也包括变体多核苷酸，其能在严格的杂交条件下与SEQIDNO1或SEQIDNO3所示的多核苷酸杂交。更优选地，所述条件公开在Ausubel，2001，Currentprotocolsinmolecularbiology。所述多核苷酸与SEQIDNO1或SEQIDNO3最优选地至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同。本发明的变体多核苷酸可以包含修饰的信号肽或前导序列，即SEQIDNO2的氨基酸1-48、SEQIDNO4的氨基酸1-48和在其多肽变体中与之对应的氨基酸。在本文中提及的修饰是，能增加IL-15从细胞中的分泌的那些修饰。用于测试修饰是否增加所述分泌的生物测定是本领域众所周知的，且描述在(5)和(6)。最优选地，通过用CD33多肽(登记号NM021293)的信号肽来替换它，修饰信号肽。此外，可以修饰SEQIDNO2或SEQIDNO4所示的成熟多肽的N-或C-末端氨基酸，或多肽变体中与其对应的氨基酸，以增加成熟多肽的稳定性。通过常规技术(5)和(6)，可以测试成熟IL-15多肽的稳定性。优选的修饰是，将FLAG附加表位插入成熟IL-15的N-末端或C-末端氨基酸。可以使用HA或myc表位代替FLAG表位。所提及的与本发明有关的多核苷酸也包括在SEQIDNO1、SEQIDNO3或前面指出的它的变体中所示的多核苷酸的生物活性的片段。通过缺失各核酸序列的一个或多个核苷酸，可以得到所述片段。通过本领域的技术人员众所周知的标准技术，可以产生片段。如本文使用的，术语“多肽”包括由上文指出的多核苷酸编码的那些多肽，且其具有至少一种、优选所有前述的抗原活性或生物活性。术语“化合物”包括所有类型的化学实体，其能结合特异性地识别本发明的IL-15多肽的抗体，或能特异性地结合如上所述的IL-15受体α链。通过常规技术，包括前文指出的那些，可以测试给定的化合物是否能表现出这些性质。根据本发明使用的优选类型的化学实体是抗体，例如单克隆抗体、多克隆抗体、单链抗体、人或人源化的抗体、灵长类动物源化的、嵌合抗体或其片段。此外，包括双特异性抗体、合成抗体、抗体片段，例如Fab、Fv或scFv片段等，或它们中的任一种的化学修饰的衍生物。本发明的用途包含的其它化合物包括肽、蛋白、核酸、抗体、小有机化合物、配体、肽模仿物、PNA等。根据本发明使用的化合物优选地用作IL-15的激动剂。制备化学衍生物和类似物的方法是本领域的技术人员众所周知的，且描述在，例如，Beilstein，HandbookofOrganicChemistry，SpringereditionNewYorkInc.，175FifthAvenue，NewYork，N.Y.10010美国和OrganicSynthesis，Wiley，NewYork，美国。此外，根据本领域已知的方法，或如所述的，可以测试所述衍生物和类似物的作用。此外，可以使用适当的药物衍生物和类似物的肽模仿物和/或计算机辅助的设计。通过对类似结构基序的计算机辅助的搜索，适当的计算机程序可以用于识别IL-15的推定的激动剂的相互作用位点。用于蛋白和肽的计算机辅助设计的其它适当的计算机系统描述在现有技术中，例如，Berry，Biochem.Soc.Trans.22(1994)，1033-1036；Wodak，Ann.N.Y.Acad.Sci.501(1987)，1-13；Pabo，Biochemistry25(1986)，5987-5991。从上述计算机分析得到的结果可以与本发明的方法组合使用，用于，例如最优化已知的抑制剂、类似物、拮抗剂或激动剂。通过连续化学修饰合成肽模仿物组合文库，并测试得到的化合物，例如根据本文所述的方法，也可以鉴别出适当的肽模仿物和其它抑制剂。产生和使用肽模仿物组合文库的方法描述在现有技术中，例如，Ostresh，MethodsinEnzymology267(1996)，220-234和Dorner，Bioorg.Med.Chem.4(1996)，709-715。此外，所述化合物和本发明的多肽的三维和/或晶体结构可以用于设计肽模仿物药物。众所周知如何得到所述化合物，例如，通过化学的或生化的标准技术。根据本发明使用的用于鉴别化合物的合适的测定，优选地包含下述步骤(a)接触已知能对IL-15响应的细胞，优选地为角质细胞、NK或NKT细胞、记忆和效应或调节T细胞或淋巴样细胞或间充质细胞，和(b)测定所述细胞对化合物的施用的反应，从而与IL-15诱导的响应相当的响应指示根据本发明的化合物。优选的待测反应是，在角质细胞、T细胞亚群、NK细胞或NKT细胞的情况生长的刺激，或在淋巴样细胞或间充质细胞的情况下细胞凋亡刺激诱导后的程序性细胞死亡的预防。如何进行这样的测定，是本领域众所周知的(5，6，11，12，14，20，21)。或者，通过包含下述步骤的测定，可以测定根据本发明使用的化合物(a)使特异性的IL-15抗体或IL-15受体α链接触IL-15和候选化合物，和(b)测定IL-15和所述化合物之间对抗体或受体结合的竞争。为了测定竞争，优选地将化合物或IL-15连接到可检测的标记上，例如放射性同位素或产色的化学实体。此外，通过(a)使IL-15受体α链接触候选化合物，和(b)测定所述受体的活化或反应，从而与IL-15诱导的反应或活化相当的反应或活化指示根据本发明使用的化合物，可以检测根据本发明的化合物。如何进行这样的测定，是本领域众所周知的(5，6，11，12，14，20，21)。术语“组合物”指任意的组合物，其配制成固体、液体或气体形式，尤其是，可以表现为粉末、片剂、溶液或气雾剂。所述组合物包含本发明的IL-15多核苷酸、多肽或化合物，其任选地与合适的稀释剂、赋形剂和/或载体在一起。合适的稀释剂和/或载体取决于组合物的使用目的和其它成分。本领域的技术人员无需其它工作，就可以确定这样的合适的稀释剂、赋形剂和/或载体。合适的载体、赋形剂和/或稀释剂的实例，是本领域众所周知的，且包括磷酸缓冲盐水溶液、水、乳剂，例如油/水乳剂、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。通过众所周知的常规方法，可以配制包含这样的载体的组合物。这些组合物可以以合适的剂量施用给受试者。通过不同的方式，例如通过局部的、皮下的、皮内的或静脉内的施用，可以实现组合物的施用。特别优选地，通过送递到要刺激毛发生长的区域，进行所述施用。这可以优选地通过皮下的或表皮的注射或局部应用来实现，例如，以溶液或气雾剂的形式，或通过载体例如对于核酸的脂质体或大分子笼形分子例如富勒烯(fullerenes)。此外，如果要施用本发明的核酸，可以使用常规的基因治疗方法。基因治疗基于通过离体(ex-vivo)或体内技术将治疗基因导入细胞中，是基因转移的最重要应用之一。使用“神经抗体(neuroantibody)”技术，已经产生了能表达针对神经生长因子的中和抗体的转基因小鼠；Capsoni，Proc.Natl.Acad.Sci.USA97(2000)，6826-6831和Biocca，EmboJ.9(1990)，101-108。用于体外或体内基因治疗的合适的载体、方法或基因送递系统描述在文献中，且是本领域的技术人员已知的；见，例如，Giordano，NatureMedicine2(1996)，534-539；Schaper，Circ.Res.79(1996)，911-919；Anderson，Science256(1992)，808-813，Isner，Lancet348(1996)，370-374；Muhlhauser，Circ.Res.77(1995)，1077-1086；Onodua，Blood91(1998)，30-36；Verzeletti，Hum.GeneTher.9(1998)，2243-2251；Verma，Nature389(1997)，239-242；Anderson，Nature392(Supp.1998)，25-30；Wang，GeneTherapy4(1997)，393-400；Wang，NatureMedicine2(1996)，714-716；WO94/29469；WO97/00957；US5,580,859；US5,589,466；US4,394,448或Schaper，CurrentOpinioninBiotechnology7(1996)，635-640，和其中引用的文献。本发明的核酸分子和载体可以设计用于直接导入或通过脂质体、病毒载体(例如，腺病毒的、逆转录病毒的)、电穿孔、冲击(例如，基因枪)或其它送递系统导入细胞。另外，杆状病毒系统可以用作本发明的核酸分子的真核表达系统。导入和基因治疗方法应当，优选地，导致本发明的功能性IL-15多肽的表达，从而所述表达的多肽对于受试者中的毛发生长的刺激是特别有用的。主治医师和临床因素将决定剂量方案。如医学领域众所周知的，任意一位患者的剂量取决于许多因素，包括患者的大小、体表面积、年龄、要施用的具体化合物、性别、施用时间和途径、总体健康和同时施用的其它药物。蛋白性的药学上的活性物质可以以每剂1ng至10mg/kg体重的量存在。但是，特别地考虑前述的因素，可以预见低于或高于该示例范围的剂量。如果方案是连续输注，它也应当是1μg-10mg单位/kg体重/分钟的范围。通过周期性评价，可以监控进程。可以局部地或全身地施用本发明的组合物。用于肠胃外施用的制剂包括无菌的水性或非水性溶液、悬浮液和乳剂。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油和可注射的有机酯例如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳剂或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外的载体包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸盐化的林格氏或固定油类。静脉内的载体包括流体和营养物补充剂、电解质补充剂(例如基于林格氏右旋糖的那些)等。也可以存在防腐剂和其它添加剂，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。依赖于组合物的预期用途，本发明的组合物可以包含其它的试剂。所述试剂可以是作用于毛发生长的药物，包括本文下面提及的那些。术语“刺激毛发生长”指，显著诱导和/或增加在皮肤、头皮或需要毛发生长的任何表面上的毛发生长。通过与未被处理的皮肤(对照皮肤)对比，可以测定诱导或增加。通过统计学检验，例如斯氏t-检验、卡方检验或根据Mann和Whitney的U-检验，可以测定诱导或增加是否是显著的。治疗或改善本文详细指出的各种医学状况，需要毛发生长的刺激。此外，从化妆的观点看，毛发生长的刺激可以是重要和需要的。为了制造毛发，用于生产货物，例如衣服、毯子、家具等，甚至健康皮肤上也需要毛发生长的刺激，以使动物剃剪之间的时间间隙最小化，从而增加毛发的产量。因此，甚至健康的皮肤或头皮上也需要毛发生长的刺激。IL-15是一种多效性的细胞因子，其基于它的体外活性，对免疫细胞稳态以及体内外周免疫功能是重要的。为了更好地理解体内作用，在作为本发明基础的研究中，产生了转基因的(tg)小鼠模型，其中IL-15在表皮中超表达。转基因在皮肤中表达的原因如下在MHCI类启动子控制下的IL-15的普遍存在的转基因超表达，造成了致命的白血病的发展，从而导致这些tg动物的过早死亡(6)。因而，该模型不允许研究IL-15的长期体内作用。此外，选择皮肤，因为已经证实，角质细胞可以作为IL-15的天然来源发挥作用，且这些细胞的IL-15分泌是可诱导的。此外，因为它的多效性的表达，认为IL-15对许多细胞类型的调节是重要的。因此，假定该细胞因子也可以驱动皮肤细胞的刺激、活化或增殖。令人惊奇地，在作为本发明基础的研究中显示，tg动物中角质细胞衍生的IL-15能通过刺激毛囊根鞘细胞的增殖和或分化来增强毛发生长和毛发发育。毛囊是高度动态的，在整个生命中，它们以生长(生长期)、退化(退化期)和静止(毛发生长终期)的周期重复地重新塑造自身。在退化期阶段，发生增殖，且在毛囊的较低部分，可以观察到大量的细胞凋亡(30)。如上所述，IL-15能增加各种细胞类型的增殖。根据作为本发明基础的研究的结果，IL-15似乎也能驱动毛囊细胞的增殖。被剃剪和脱毛的Tg动物也表现出毛囊的从头发育，如通过组织学分析和临床表现所检测到的，因此IL-15也可以影响脱毛后剩余在真皮中的乳头细胞或毛发干细胞的增殖。这些结果提示，IL-15可能也是新毛发生长周期的启动所必需的。另外，IL-15是T和B细胞以及成纤维细胞中的细胞凋亡的一般抑制剂(12-15)。该细胞因子可能也会抑制基底毛囊细胞中的细胞凋亡，且因此认为IL-15能通过刺激毛囊细胞的增殖和通过抑制毛囊下部中的细胞凋亡(二者都会导致延长的寿命和IL-15tg小鼠的每个小囊的更高活性)，来增强毛发生长，如我们通过剃剪和脱毛动物所能证实的。仍然没有完全理解控制毛囊周期的信号。但是，许多重要的信号传导途径都参与周期性生长。例如，退化期阶段由转化生长因子(TGF)α和β的表达启动，而在生长期阶段(生长阶段)，2种其它的因子是主要活性的成纤维细胞生长因子(FGF)和转录因子的信号转导物和活化剂(STAT3；29，31，32)。如已经提及的，IL-15通过STAT途径传递信号(结合它的受体后)，从而提示该细胞因子另外对毛发的生长阶段具有直接作用，因为IL-15能干预对于启动生长阶段重要的信号途径。到目前为止，在人类中毛发紊乱的最常见原因是毛发生长控制的缺陷，如斑秃或雄激素性脱发。因为它的增殖和刺激能力，预期使用IL-15来重新刺激和重新活化毛囊。还可能预防化疗造成的脱发。而且，通过将该细胞因子应用于剃剪的羊或兔皮，IL-15可以用于，例如，增强美利奴羊或安哥拉山羊羊毛生产。有利地，由于在作为本发明基础的研究中，将IL-15鉴别为体内毛发生长的关键调节剂，所以已经可能以受控的和有效的方式刺激毛发生长。关于这一点，应当强调，IL-15不仅仅能预防细胞凋亡，还能刺激和促进细胞的生长。对术语的解释和本文上面和下面作出的说明已作必要的改动以适用于本文所述的所有实施方案。考虑到前面的内容，本发明涉及如上定义的多核苷酸、多肽或化合物在制备用于治疗、预防和/或改善脱发的组合物中的用途。如本文使用的，术语“治疗”指，所述治疗后，不存在与疾病状况有关的所有临床症状。术语“预防”指，疾病的临床症状变得不可测定。术语“改善”指，疾病的症状明显减少。所述治疗、预防或改善应该优选地在显著数目的已经施用该组合物的受试者中发生。如上所述，脱发是人类的突出疾病状况。由于本发明的应用，已经可能有利地在发作的早期阶段过程中预防脱发，并在剃剪的皮肤上，或在化疗后损失头发后刺激新的毛发生长。在本发明的用途的优选的实施方案中，所述组合物还包含第二种毛发生长刺激剂。术语“第二种毛发生长刺激剂”指也能明显刺激毛发生长的试剂。如上所述，可以测定试剂是否能刺激毛发生长。更优选地，所述第二种毛发生长刺激剂选自羧酸的锌盐，皂苷类，三萜类，优选齐墩果酸或熊果酸，山楂酸，南蛇藤醇，亚洲积雪草酸，5-[α]-还原酶的抑制剂，优选孕酮，1，4-甲基-4-氮杂类固醇，优选17-[β]-N，N-二乙基氨甲酰基-4-甲基-4-氮杂-5-[α]-雄烷-3-酮，雄激素受体拮抗剂，优选醋酸环丙氯地孕酮，米诺地尔(R)，azaelaicacid和其衍生物，环孢菌素，三碘甲腺原氨酸，二氮嗪，钾通道开放剂(opener)，优选cromakalin，苯妥英和其混合物，和雌激素的衍生物，优选戊酸雌二醇。在US2003114526中详细描述了这些试剂的结构，其公开内容在这里引作参考。此外，如上所述，在本发明的用途的另一个优选的实施方案中，所述组合物还包含药学上或化妆上可接受的载体。本文上面和下面详细公开了合适的药学上或化妆上可接受的载体。此外，这样的载体公开在US2003114526中，其公开内容在这里引作参考。在本发明的用途的另一个优选的实施方案中，所述组合物是药物组合物。如本文使用的，术语“药物组合物”包含本发明的物质和任选的一种或多种药学上可接受的载体。本发明的物质可以配制成药学上可接受的盐。可接受的盐包含醋酸盐、甲酯、HCl、硫酸盐、氯化物等。通过任一种常规地用于药物施用的途径，例如局部地，可以方便地施用药物组合物。可以以根据常规方法将该药物和标准药物载体组合制备的常规剂量形式来施用物质。这些方法可以包含混合、粒化和压紧或溶解成分，这按照适用于需要的制剂而定。可以明白，药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特征取决于它要组合的活性成分的量、施用途径和其它众所周知的变量。载体必须是“可接受的”，即与制剂中的其它成分相容，且对其受体无害。采用的药物载体可以是，例如，固体或液体。固体载体的示例是乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载体的示例是磷酸盐缓冲盐水溶液、糖浆、油例如花生油和橄榄油、水、乳剂、各种类型的润湿剂、无菌的溶液等，如上所述。类似地，载体或稀释剂可以包含本领域众所周知的延时物质，例如单独的或与蜡一起的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。可以以多种方式施用根据本发明的药物组合物，以达到需要的效果。可以将所述药物组合物单独地或配制成药物制剂经口地、局部地或肠胃外地施用给治疗的受试者。此外，在普通药物组合物中或作为分开的药物组合物，将物质与其它物质组合地施用。选择稀释剂，以便不影响组合的生物活性。这样的稀释剂的实例是蒸馏水、生理盐水、林格液、右旋糖溶液和Hank氏溶液。另外，药物组合物或制剂也可以包含其它载体、佐剂或无毒的、非治疗性的、非免疫原性的稳定剂等。治疗有效剂量指能改善症状或状况的根据本发明的物质的量。通过在细胞培养物或实验动物中的标准药物方法，可以测定这样的化合物的治疗效果和毒性，例如，ED50(在50％群体中治疗上有效的剂量)和LD50(对50％群体致死的剂量)。治疗和毒性效果之间的剂量比率是治疗指数，且它可以表达为比率LD50/ED50。如前所述，基于临床因素，主治医师可以确定剂量方案。如医学领域众所周知的，任意一位患者的剂量取决于许多因素，包括患者的大小、体表面积、年龄、要施用的具体化合物、性别、施用时间和途径、总体健康和同时施用的其它药物。通过周期性评价，可以监控进程。上面指出了一般的剂量。根据本发明的用途，施用本文所述的药物组合物和制剂至少一次。但是，可以施用所述药物组合物和制剂超过一次，例如，从每天1-4次，直到不限数目的天数。以制药领域众所周知的方式制备根据本发明的具体制剂，且其通常包含至少一种上述的活性物质，后者与其药学上可接受的载体或稀释剂相混合或缔合。为了制备那些制剂，通常将活性物质与载体相混合，或用稀释剂稀释，或包装或被囊化在胶囊、小药囊、扁胶剂、纸或其它合适的容器或载体中。载体可以是固体、半固体、基于凝胶的或液体材料，其用作活性成分的载体、赋形剂或介质。所述合适的载体包含上述的那些载体和本领域众所周知的其他载体，见，例如，Remington′sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCompany，Easton，Pennsylvania。制剂可以适应施用方式，包含片剂、胶囊、栓剂、溶液、悬浮液等形式。产品标签会指示给药建议，其允许处方医师根据考虑的患者组，预期剂量调整，其具有关于避免以错误的剂量将错误的药物开处方给错误的患者的信息。也优选本发明的用途，其中所述组合物是化妆品组合物。术语“化妆品组合物”指可以如关于上面的药物组合物所述配制的组合物。但是，替代药学上可接受的制剂、载体稀释剂等，载体、稀释剂和赋形剂必须是化妆上可接受的。此外，优选地局部地施用化妆品组合物。在本发明的用途的另一个优选的实施方案中，将所述组合物配制成生发油、生发药组合物、洗发剂、粉剂、胶冻、护发素、软膏、美发乳、糊剂、发乳、发胶和/或毛发气雾剂。更优选地，将所述组合物局部地施用到受试者的皮肤或头皮上。在US2003114526中，详细描述了局部施用，其公开内容在这里引作参考。在本发明的用途的一个更优选的实施方案中，所述受试者是哺乳动物。最优选地，所述哺乳动物是人、狗、猫、马、兔子、羊、骆驼、小鼠、大鼠、羊驼、骆马、原驼或lama。在本发明的用途的一个更优选的实施方案中，所述受试者患有遗传决定的和/或获得形式的脱发。最优选地，所述遗传决定的或获得形式的脱发是斑秃、部分脱发(alopeciasubtotalis)、全部脱发、拔毛癖或药物诱导的脱发。与这些疾病有关的症状，是医生众所周知的，且详细记载在医学标准教科书中，例如Stedman或Pschyrembel。本发明还涉及转基因的非人动物，其包含如上定义的能编码IL-15多肽的核酸，其中所述核酸特异性地在毛球的角质细胞、郎格汉斯细胞、黑素细胞、树突表皮T-细胞、肥大细胞、皮肤神经纤维或成纤维细胞中表达。术语“转基因的非人动物”指动物，优选哺乳动物，和这样的动物的细胞，其含有(优选地稳定地整合进它们的基因组中)至少一种前述的核酸。所述核酸优选地连接到合适的调节元件上，后者能实现在前述组织中的特异性表达。通过将包含IL-15核酸的转基因和能编码调节序列的核酸导入基因组，或通过将IL-15核酸特异性地导入到存在于所述动物(“敲入(knockin)”动物)的内源调节元件的下游，也可以实现。如果插入了包含调节序列的转基因，所述转基因则优选地稳定地整合进宿主动物的基因组中。将转基因或敲入构建体设计成能充分表达由IL-15核酸编码的IL-15多肽。合适的调节元件优选地是对郎格汉斯细胞特异性的langerin-启动子(Valladeau，Immunity2000，12(1)71-81)，对黑素细胞特异性的酪氨酸酶-启动子(Kelsall，CancerRes.1998，584061-65)，或能指导向成纤维细胞的表达的胶原-1α2-启动子(Hibbard，CancerRes.2000，60(17)4862-4872)。生产转基因的非人动物(例如，转基因的小鼠)的方法包含，将IL-15核酸或靶向载体导入生殖细胞、胚胎细胞、干细胞或卵或源自它们的细胞。可以生产转基因的胚胎，并筛选它们，例如，如A.L.JoynerEd.，GeneTargeting，APracticalApproach(1993)，OxfordUniversityPress所述。使用例如上面的具有适当的探针的DNA印迹，可以分析胚胎胚膜的DNA。制备转基因的非人动物的一般方法在本领域有描述，见例如，WO94/24274。为了制备转基因的非人生物，包括通过同源重组得到的非人动物，胚胎干细胞(ES细胞)是优选的。在基本上如(Robertson，E.J.(1987)inTeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsAPracticalApproach.E.J.Robertson，ed.(OxfordIRLPress)，p.71-112)所述的有丝分裂(mitotically)无活性的SNL76/7细胞饲养层(McMahon和Bradley，Cell621073-1085(1990))上生长的鼠ES细胞，例如AB-1系，可以用于同源基因寻靶。其它合适的ES系包括，但不限于，E14系(Hooper等，Nature326292-295(1987))、D3系(Doetschman等，J.Embryol.Exp.Morph.8727-45(1985))、CCE系(Robertson等，Nature323445-448(1986))、AK-7系(Zhuang等，Cell77875-884(1994)，其在本文引作参考)。成功地从携带具体靶向的突变的ES细胞产生小鼠系，依赖于ES细胞的多能性，即它们在被注射进宿主发育胚胎例如胚泡或桑椹胚后，参与胚胎发生和有助于得到的动物的生殖细胞的能力。使含有注射的ES细胞的胚泡在假孕的非人雌性动物的子宫中发育，并生育成嵌合的小鼠。得到的转基因小鼠是具有重组酶或报告基因座的细胞的嵌合体，且回交，并通过对后代尾巴活组织检查DNA的PCR或DNA印迹分析，筛选正确靶定的转基因的存在，以鉴别对重组酶或报告基因座杂合的转基因小鼠。在所附实施例中，详细描述了制备IL-15转基因非人动物的方法。本发明的转基因动物可以有利地用于生产要用于工业货物上的毛发。因此，转基因动物的合适的候选物是狗、猫、马、兔子、羊、骆驼、小鼠、大鼠、羊驼、骆马、原驼或lama。因此，本发明还涉及刺激非人动物的毛发生长的方法，其包含下述步骤(a)用如权利要求1所定义的核酸转化所述动物；和(b)表达由所述核酸编码的IL-15多肽。如本文使用的，术语“转化”指用于将转基因导入前面公开的动物中的所有技术。另外，所述术语包括，用于导入要在例如皮肤或头皮上局部地表达的核酸的方法。这可以通过使用上面公开的基因治疗方法来实现。术语“表达IL-15多肽”包括允许在所述动物中生产IL-15多肽必需的所有方法，例如刺激、诱导等。依赖于用于控制核酸表达的调节元件，表达会永久发生，或可能需要诱导或刺激。这样的刺激可以是紫外线辐射。此外，几种用于控制基因表达的诱导型调节元件是本领域众所周知的。这些元件可以被例如热激、地塞米松或金属离子诱导。下面详细公开了优选的调节元件。另外，本发明包括生产动物毛发的方法，其包含下述步骤(a)用如权利要求1所定义的核酸转化所述动物；和(b)表达由所述核酸编码的IL-15多肽。应当理解，如本文使用的，术语“生产”除具有如上面所述的步骤的方法之外，包含含有已知生产毛发所需的其他步骤的方法。在本发明的方法的优选的实施方案中，所述IL-15多肽在调节元件控制下表达。如本文使用的，术语“调节元件”指能控制DNA分子的表达或RNA分子的翻译的核酸序列。这样的调节元件通常源自天然产生的基因调节元件。本领域众所周知，基因包含能编码氨基酸序列的结构元件以及能参与调节所述基因的表达的调节元件。结构元件由外显子代表，其可以编码氨基酸序列，或其可以编码RNA，后者不能编码氨基酸序列，但是会参与RNA功能，例如，通过调节RNA的稳定性或RNA的核输出。基因的调节元件可以包含启动子元件或增强子元件，二者都参与基因表达的转录控制。本领域众所周知，启动子出现在基因的结构元件的上游。但是，调节元件，例如增强子元件，可以分布在基因的整个位置。所述元件可以存在于例如内含子中，即分隔基因的外显子的基因组DNA区域。启动子或增强子元件对应着多核苷酸片段，其能吸引或结合参与调节包含所述启动子或增强子元件的基因的多肽。例如，参与调节所述基因的多肽包含所谓的转录因子。所述内含子可以包含其它的调节元件，后者是正确的基因表达所需的。内含子通常与基因的外显子一起转录，从而产生新生的RNA转录物，其含有外显子和内含子序列。通常，通过称作RNA剪接的过程，去除内含子编码的RNA序列。但是，所述过程也需要存在于RNA转录物上的调节序列，所述调节序列可以由内含子编码。另外，除了它们在转录控制和控制正确的RNA加工和/或稳定性中的功能外，基因的调节元件也可以参与基因座的遗传稳定性的控制。所述元件控制例如重组事件，或用于维持DNA的某些结构或染色体中的DNA排列。更优选地，所述调节元件能特异性地在毛球的角质细胞、郎格汉斯细胞、黑素细胞、树突表皮T-细胞、肥大细胞、皮肤神经纤维或成纤维细胞中表达。通过表达在合适的调节元件控制下的本发明的IL-15多肽，可以实现这样的特异性的表达。这样的元件优选地是对郎格汉斯细胞特异性的langerin-启动子，对黑素细胞特异性的酪氨酸酶-启动子，或能指导向成纤维细胞的表达的胶原-1α2-启动子。在本发明的方法的另一个更优选的实施方案中，所述方法还包含向非人动物的皮肤和/或头皮施用如上所述的本发明的组合物的步骤。本发明还包括生产动物毛发的方法，其包含向非人动物的皮肤和/或头皮施用如上所述的本发明的组合物的步骤。在本发明的方法的另一个优选的实施方案中，所述方法还包含得到所述动物的毛发的步骤。如本文使用的，术语“得到”指从所述动物分离毛发的方法。这可以如下实现通过从动物的皮肤或头皮分离毛发，例如，通过剃剪，或通过从所述动物分离包含毛发的皮肤或头皮。依赖于毛发的使用目的和动物，本领域的技术人员无需再费周折，即可选择合适的方法。最优选地，上文提及的动物是狗、猫、马、兔子、羊、骆驼、小鼠、大鼠、羊驼、骆马、原驼或美lama。此外，本发明包括生产如上所述的IL-15的抑制剂的方法，其包含测定IL-15多肽的至少一种或优选的所有生物活性的抑制剂的步骤。使用包含下述步骤的确定IL-15抑制剂的测定，可以进行这样的抑制剂测定(a)使已知能对IL-15响应的细胞，优选角质细胞、NK或NKT细胞、T细胞、抗原呈递细胞或淋巴样细胞或间充质细胞接触IL-15多肽和潜在的抑制剂，和(b)测定所述细胞在施用潜在抑制剂后的反应，由此抑制剂能预防IL-15诱导的生物效应。优选的要测定的反应是，在角质细胞、T细胞、NK细胞或NKT细胞的情况下，生长的刺激，或在淋巴样细胞或间充质细胞的情况下，由细胞凋亡刺激诱导的程序性细胞死亡的预防，或抗原呈递功能的活化。通过向所述细胞仅仅施用IL-15多肽，可以测定所述反应。在本说明书的其它地方，已经公开了这样的测定的细节。或者，通过包含下述步骤的测定，可以确定抑制剂(a)使特异性的IL-15抗体或IL-15受体α链接触IL-15和潜在抑制剂，和(b)测定IL-15和所述抑制剂之间对抗体或受体结合的竞争。通过所述测定鉴别出的抑制剂必须不具有IL-15活性。优选地，除了抑制/竞争IL-15多肽外，抑制剂根本不具有生物活性。为了测定竞争，优选地将潜在抑制剂或IL-15连接到可检测的标记上，例如放射性同位素或产色的化学实体。可以在上文提及的筛选测定中使用的合适的分子优选地是那些要从中筛选根据本发明的候选化合物的化学实体。此外，生产抑制剂的方法优选地包含其它步骤化学地或生物地配制如上所述测定的抑制剂。配制的方法取决于鉴别的抑制剂的化学性质。例如，通过生物化学或化学标准教科书所述的众所周知的技术，可以合成化学实体，例如小有机分子或短肽。通过标准的分子生物学技术，可以生产生物分子，例如多肽、抗体等。根据要求的标准，例如药品生产质量管理规范(GMP)或相对等标准，配制也包括药物或化妆品配制的其它步骤。因此，本发明也涉及生产药物或化妆品组合物的方法，其包含下述步骤测定和生产如上所述的IL-15多肽抑制剂，和将所述抑制剂配制成药学上或化妆上可接受的形式，任选地与本说明书其它地方所述的药物或化妆品载体在一起。本发明包括这样的IL-15抑制剂在制备用于抑制毛发生长的药物组合物中的用途。这样的毛发生长可以由疾病状况造成，所述疾病状况会导致患有所述疾病状况的受试者皮肤中的IL-15超表达。要用于抑制毛发生长的IL-15的抑制剂还包含抗体，包括在本说明书其它地方定义的那些类型，其能特异性地识别IL-15多肽、反义RNA分子或小干扰RNA分子(RNAi)。最后，本发明涉及治疗、预防和/或改善遭受脱发的受试者的方法，其包含以有效的剂量，将如上所述的本发明的组合物施用给所述受试者的步骤。在本发明的用途方面指出的所有实施方案已作必要的改动以适用于所述方法。通过名称或通过在括号中的编号指示，在贯穿本说明书中引用了几篇文献。下面给出了完整的文献引用。本文引用的每篇文献的相关公开内容，包括任何的生产商说明书，使用说明等，都特此引作参考。附图显示了图1IL-15tg小鼠的产生。使用携带人K14启动子(白框)、兔子β-珠蛋白内含子(灰框)、融合到CD33信号肽和FLAG附加表位上的mIL-15cDNA(黑框)以及K14多腺苷酸化位点(polyA，阴影线框)的K14-IL-15表达盒，进行显微注射。图2(A)使用抗-FLAGAb的耳皮肤的免疫组织化学染色显示了基底角质细胞中的转基因表达(用黑色箭标指示)。(B)皮肤、血清和胸腺的IL-15免疫印迹。装载了等量的总蛋白，并使用抗-鼠IL-15Ab进行分析。图3tg小鼠中增加的毛发生长。在背部剃剪同窝对照(左)和IL-15tg小鼠(右)，且6天后，通过数码照相记录毛发生长。图4IL-15-tg小鼠的毛囊的改善的从头发育。在背部给同窝对照(左)和IL-15tg小鼠(右)脱毛，且14天后，通过数码照相记录毛发生长(A)。脱毛后14天，通过来自野生型和IL-15tg小鼠的皮肤的苏木精-曙红染色的组织切片，证实了tg小鼠中的毛囊分化(用黑色箭标指示)(B)。图5修饰的mIL-15的核酸序列(SEQIDNO7)。现在，参考下面的生物实施例描述本发明，所述实施例仅仅用于解释，而不应当理解为对本发明范围的限制。实施例1基本方法IL-15转基因小鼠的产生使用如下的标准方法，将鼠IL-15的基因置于人K14启动子的控制下使用的K14表达盒包含K14启动子、兔子β-珠蛋白内含子、BamHI克隆位点和K14多腺苷酸化位点(22，23)。通过将多接头连接进该位点，从而产生含有限制酶位点SalI、BglII、BamHI和XbaI的多克隆位点，从而产生质粒pAMM11，来修饰BamHI克隆位点。将CD33IL-15FLAG的约500bpBglII/XbaI片段克隆进pAMM11的BglII/XbaI位点，以生成pAMM77。通过CsCl梯度离心，首先纯化出用于显微注射的质粒DNA。从质粒释放出含有IL-15基因的表达盒，并在用SphI和SmaI消化后通过0.7％琼脂糖凝胶电泳纯化，从凝胶提取(PCR纯化试剂盒；Roche，Mannheim，德国)，重新悬浮在TE*缓冲液(10mMTrispH7.4/0.1mMEDTA)中，并用于以2ng/μl的浓度显微注射进小鼠C57BL/6/C3H/HeNF1xC57BL/6和FVB/N卵母细胞。通过PCR(AM28CAATGATATACACTGTTTGAGATGA(SEQIDNO5)；AM65CGTGTTGATGAACATTTGGACAA(SEQIDNO6)，循环特征95℃、3分钟；[95℃、1分钟；54℃、1分钟；72℃、1分钟×35；72℃、5分钟]和DNA印迹，鉴别出具有类似转基因表达的2个起始系。在C57BL/6/C3H/HeN背景下，用tg小鼠进行实验。将小鼠圈养在无具体病原体的(spf)条件下，并根据制度规则，进行实验。脱毛和剃剪用1％氯胺酮(1.5μl/g体重；Merck，Darmstadt，德国)麻醉IL-15转基因的(IL-15tg)小鼠和野生型对照，然后，使用电动动物剃刀，剃剪背部。为了脱毛，用镊子拔去毛发。每天一次观察小鼠的毛发生长，并通过数码照相记录结果。使用的所有小鼠都是8-12周龄。组织病理学分析对于光学显微镜术，通过浸泡在10％中性的缓冲的福尔马林中，固定鼠皮肤的打孔活组织检查(8mm直径)。随后，使用标准的组织学技术，用乙醇将组织脱水，转移到二甲苯，并包埋入石蜡中，切成5-μm切片，并用苏木精和曙红染色。将组织切片封固到载玻片上，并使用OlympusBX61显微镜和MetaMorph软件(VisitronSystems，Puchheim，德国)进行分析。免疫组织学根据标准方法，在丙酮中固定的耳朵恒冷箱切片(6-8μm)上，进行免疫组织化学(24，25)。用溶于PBS中的0.5％牛血清清蛋白(Sigma，Taufkirchen，德国)封闭切片，然后在单克隆抗体或同种型对照的适当稀释液中温育，且随后与辣根过氧化物酶(HRP)-偶联的第二抗体一起温育。使用3-氨基-9-乙基-咔唑作为色原，使过氧化物酶活性可视化。用MAYER′Shemalaun溶液(Merck，Darmstadt，德国)，将组织复染。从Sigma得到生物素化的小鼠抗-FLAG。使用OlympusBX61显微镜和MetaMorph软件，检查切片。蛋白印迹分析将IL-15tg小鼠和野生型对照的血清以及皮肤和胸腺裂解物直接装载到15％聚丙烯酰胺凝胶上。重组的mIL-15蛋白用作阳性对照。在变性条件下电泳蛋白，并在150mA，向硝酸纤维素膜(AmershamBiosciencesEurope，Freiburg，德国)上电印迹1小时。用溶于TBS+0.5％Tween20(TBST)中的5％脱脂奶粉封闭膜2小时，然后与在TBST+1％脱脂奶粉中1∶500稀释的适当的抗体(抗-小鼠IL-15，克隆M49，Genmab，Utrecht，荷兰的赠品)温育过夜。用TBST洗涤膜，并与在TBST中1∶1000稀释的辣根过氧化物酶-缀合的第二抗体一起温育2小时。使用增强的化学发光试剂(AmershamPharmaciaBiosciences，Europe)，检测蛋白。实施例2IL-15tg小鼠的表型为了研究角质细胞衍生的IL-15的体内作用，使用图1所示的K14表达盒，将IL-15表达导向表皮。已经鉴别出了几种转录后调节机理，其控制IL-15翻译和分泌(17，19)。因此，克隆了修饰的小鼠IL-15cDNA，其缺少能控制内源IL-15生产的转录后关卡，从而产生最佳的IL-15超表达和分泌。图1描述了转基因构建体的修饰，且包含去除有损翻译的上游AUG，用CD33信号肽替换不足翻译的和分泌的内源IL-15信号肽，和用FLAG附加表位稳定IL-15蛋白的COOH末端。该FLAG附加表位也能实现皮肤中的内源和tgIL-15表达之间的区别。K14启动子能驱动复层扁平上皮(包括表皮)的大多数基底细胞的基因表达。为了显示转基因的正确表达，使用抗-FLAG和抗-IL-15Ab，在tg皮肤组织上进行免疫组织化学和蛋白印迹分析。如图2A所示，在tg动物的表皮中，检测到了强烈且均匀的IL-15/FLAG表达。使用抗-IL-15Ab，可以检测转基因小鼠血清中的IL-15蛋白(图2B)。转基因表达遵循其它组织中的预期模式，例外是，IL-15表达在胸腺中不可检测到，以前的一些转基因品系中已经记载了其中的K14表达(22)。转基因插入基因座或可能的转基因拷贝数能解释胸腺中IL-15表达的缺乏。纯合的tg小鼠饲养良好且健康，即使观察了15个月的时间段。实施例3剃剪和脱毛后tg小鼠的增强的毛发生长由于已经报道IL-15能介导细胞存活，并起肥大细胞的生长因子的作用(26，27)，所以我们假设tg小鼠中角质细胞衍生的IL-15可能也对毛囊具有刺激作用。为了评价皮肤IL-15超表达是否能体内诱导毛发生长，剃剪同窝仔和tg动物组的后背，并每天一次观察毛发生长，进行2周。与同窝对照相反，IL-15tg小鼠在6天内表现出了显著增强的毛发生长(图3)，从而表明tg小鼠中有效分泌的IL-15会导致毛囊细胞的活化，且结果导致改善的毛发生长。我们接着提出，拔去数丛毛、从而彻底去除毛干，是否也会导致IL-15tg小鼠中增加的毛发生长。为此，麻醉了野生型和IL-15tg小鼠，并使用镊子脱毛。每天一次观察2组动物的毛发生长。如图4A所示，与对照相反，脱毛后14天，IL-15tg小鼠已经表现出了完全重构的毛发覆盖物。除了前面所述的结果(图3)，这还证实了tg小鼠中分泌的IL-15不仅仅负责原状毛囊的活化，而且可能也是体内从头发育所需的。为了证实该假设，我们从脱毛后14天的IL-15tg和野生型小鼠的脱毛皮肤区域制备了8mm打孔活组织检查。对该石蜡包埋的苏木精-曙红染色的皮肤切片的组织病理学分析揭示了IL-15tg表皮中的多个形态上完整的毛囊，尽管野生型皮肤的毛囊未完全恢复(图4B)。这些发现表明，IL-15对毛囊细胞的活化具有巨大作用，从而导致增强的毛发生长，且也是毛囊的从头合成所绝对必需的。参考文献1.Grabstein，K.H.，J.Eisenman，K.Shanebeck，C.Rauch，S.Srinivasan，V.Fung，C.Beers，J.Richardson，M.A.Schoenborn，M.Ahdieh，L.Johnson，M.R.Alderson，J.D.Watson，D.M.Anderson，andJ.G.Giri.1994.CloningofaTcellgrowthfactorthatinteractswiththeβchainoftheinterleukin-2receptor.Science264965.2.Zhang，X.，S.Sun，I.Hwang.D.F.Tough，andJ.Sprent.1998.Potentandselectivestimulationofmemory-phenotypeCD8+TcellsinvivobyIL-15.Immunity8591.3.Waldmann，T.A.，Y.Tagaya.1999.Themultifacetedregulationofinterleukin-15expressionandtheroleofthiscytokineinNKcelldifferentiationandhostresponsetointracellularpathogens.Ann.Rev.Immunol.1719.4.WaldmannT.A.，S.Dubois，andY.Tagaya.2001.ContrastingrolesofIL-2andIL-15inthelifeanddeathoflymphocytesimplicationsforimmunotherapy.Immunity14105.5.Kennedy，M.K.，M.Glaccum，S.N.Brown，E.A.Butz，J.L.Viney，M.Embers，N.Matsuki，K.Charrier，L.Sedger，C.R.Wills，K.Brasel，P.J.Morrissey，K.Stocking，J.C.L.Schuh，S.Joyce，andJ.J.Peschon.2000.ReversibledefectsinnaturalkillerandmemoryCD8Tcelllineagesininterleukin-15-deficientmice.J.Exp.Med.191771.6.Fehniger，T.A.，K.Suzuki，A.Ponnappan，J.B.VanDeusen，M.A.Cooper，S.M.Florea，A.G.Freud，M.L.Robinson，J.Durbin，andM.A.Caligiuri.2001.Fatalleukemiaininterleukin-15transgenicmicefollowsearlyexpansioninnaturalkillerandmemoryphenotypeCD8+Tcells.J.Exp.Med.193219.7.Hayday，A.，E.Theodoridis，E.Ramsburg，andJ.Shires.2001.Intraepitheliallymphocytesexploringthethirdwayinimmunology.Nat.Immunol.2997.8.Dooms，H.，M.Desmedt，S.Vancaeneghem，P.Rottiers.V.Goossens，W.Fiers，andJ.Grooten.1998.Quiescence-inducingandanti-apoptoticactivitiesofIL-15enhancesecondaryCD4+Tcellresponsivenesstoantigen.J.Immunol.1612141.9.Ye，S.-K.，K.Maki，H.-C.Lee，A.Ito，K.Kawai，H.Suzuki，T.W.Mak，Y.-H.Chien，T.Honjo，andK.Ikuta.2001.DifferentialroleofcytokinereceptorsinthedevelopmentepidermalγδTcells.J.Immunnol.1671929.10.DeCreus，A.，K.VanBeneden，F.Stevenaert，V.Debacker，J.Plum，andG.Leclercq.2002.DevelopmentalandfunctionaldefectsofthymicandepidermalVgamma3cellsinIL-15-deficientandIFNregulatoryfactor-1-deficientmice.J.Immunol.1686486.11.Lodolce，J.P.，D.L.Boone，S.Chai，R.E.Swain，T.Dassopoulos，S.Trettin，andA.Ma.1998.IL-15receptormaintainslymphoidhomeostasisbysupportinglymphocytehomingandproliferation.Immunity9669.12.Quinn，L.S.，K.L.Haugk，andK.H.Grabstein.1995.Interleukin-15anovelanaboliccytokineforskeletalmuscle.Endocrinology1363669.13.Tagaya，Y.，J.D.Burton，Y.Miyamoto，andT.A.Waldmann.1996.Identificationofanovalreceptor/signaltransductionpathwayforIL-15/Tinmastcells.EMBOJ.154928.14.Bulfone-Paus，S.，D.Ungureanu，T.Pohl，G.Lindner，R.Paus，R.Rückert，H.Krause，andU.Kunzendorf.1997.Interleukin-15protectsfromlethalapoptosisinvivo.Nat.Med.31124.15.Rückert，R.，K.Asadullah，M.Seifert，V.M.Budagian，R.Arnold，C.Trombotto，R.Paus，andS.Bulfone-Paus.2000.InhibitionofkeratinocyteapoptosisbyIL-15Anewparameterinthepathogenesisofpsoriasis？J.Immunol.1652240.16.Reinecker，H.-C.，R.P.MacDermott，S.Mirau，A.Dignass，andD.Podolsky.1996.Intestinalepithelialcellsbothexpressandrespondtointerleukin15.Gastroenterology1111706.17.Bamford，RN.，J.D.Battiata，J.D.Burton，H.Sharma，andT.A.Waldmann.1996.Interleukin(IL)-l5/IL-TproductionbytheadultT-cellleukemiacelllineHuT-102isassociatedwithahumanT-celllymphotrophicvirustypeIregion/IL-15fusionmesagethatlacksmanyupstreamAUGsthatnormallyattenuatesIL-15mRNAtranslation.Proc.Natl.Acad.Sci.USA932897.18.Onu，A.，T.Pohl，H.Krause，andS.Bulfone-Paus.1997.RegulationofIL-15secretionviatheleaderpeptideoftwoIL-15isoforms.J.Immunol.158255.19.Tagaya，Y.，G.Kurys，T.A.Thies，J.M.Losi，N.Azimi，J.A.Hanover，R.N.Bamford，andT.A.Waldmann.1997.Generationofsecretableandnonsecretableinterleukin15isoformsthroughalternatusageofsignalpeptides.Proc.Natl.Acad.Sci.USA9414444.20.Mohamadzadeh，M.，A.Takashima，I.Dougherty，J.Knop，P.R.Bergstresser，andP.D.Cruz，Jr.1995.UltravioletBirradiationup-regulatestheexpressionofIL-15inhumanskin.J.Immunol.1554492-4496.21.Blauvelt，A.，H.Asada，V.Klaus-Kovtun，D.J.Altman，D.R.Lucey，andS.I.Katz.1996.Interleukin-15mRNAisexpressedbykeratinocytes，Langerhanscells，andblood-deriveddendriticcellsandisdown-regulatedbyultravioletBirradiation.J.Invest.Dermatol.1061047.22.Vassar，R.，M.Rosenberg，E.Ross，A.Tyner，andE.Fuchs.1989.Tissue-specificanddifferentiation-specificexpressionofahumanK14keratingeneintransgenicmice.Proc.Natl.Acad.Sci.USA861563.23.Saitou，M.，S.Sugai，T.Tanaka，K.Shimouchi，E.Fuchs，S.Narumiya，andA.Kakizuka.1995.Inhibitionofskindevelopmentbytargetedexpressionofadominant-negativeretinoicacidreceptor.Nature374159.24.Grabbe，S.，K.Steinbrink，M.Steinert，T.A.Luger，andT.Schwarz.1995.RemovalofthemajorityofepidermalLangerhanscellsbytopicalorsystemicsteroidapplicationenhancestheeffectorphaseofmurinecontacthypersensitivity.J.Immunol.1554207.25.Mehling，A.，K.Loser，G.Varga，D.Metze，T.A.Luger，T.Schwarz，S.Grabbe，andS.Beissert.2001.OverexpressionofCD40ligandinmurineepidermisresultsinchronicskininflammationandsystemicautoimmunity.J.Exp.Med.194615.26.Ku，C.C.，M.Murakami，A.Sakamoto，J.Kappler，andP.Marrack.2000.ControlofhomeostasisofCD8+Tcellsbyopposingcytokines.Science288675.27.Judge，A.D.，X.Zhang，H.Fuji，C.D.Surh，andJ.Sprent.2002.Interleukin-15controlsbothproliferationandsurvivalofasubsetofmemory-phenotypeCDδ+Tcells.J.Exp.Med.196935-946.28.Liew，F.Y.2003.Theroleofinnatecytokinesininflammatoryresponse.Immunol.Lett.85131-13429.Porter，R.M.2003.Mousemodelsforhumanhairlossdisorders.J.Anat.202125-13130.Müller-Rover，S.，H.Rossiter，G.Lindner，E.M.J.Peters，T.S.KupperandR.Paus.1999.HairfollicleapoptosisandBcl-2.J.Invest.Dermatol.Sympos.Proc.4272-27731.ReddyS.，T.Andl，A.Bagasra，M.M.Lu，D.J.Eppstein，E.E.Morrisey.2001.Characterisationofwntgeneexpressionindevelopingandpostnatalhairfolliclesandidentificationofwnt5aasatargetofsonichedgehoginhairfolliclemorphogenesis.Mech.Dev.10769-8232.StennK.S.，R.Paus.2001.Controlsofhairfolliclecycling.Physiol.Rev.81449-49433.RückertR.，G.Lindner，S.Bulfone-Paus，R.Paus.2000.High-doseproinflammatorycytokinesinduceapoptosisofhairbulbkeratinocytesinvivo.BritishJ.Dermatology1431036-103934.LindnerG.，VABotchkarev，NVBotchkarevetal.1997.Analysisofapoptosisduringhairfollicleregression.Am.J.Pathol.1511601-17序列表<110>Universit？tsklinikumMünster<120>由IL-15刺激和活化毛发生长的方法<130>1175-04<160>7<170>PatentInversion3.2<210>1<211>1968<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>1actccgggtggcaggcgcccgggggaatcccagctgactcgctcactgccttcgaagtcc60ggcgccccccgggagggaactgggtggccgcaccctcccggctgcggtggctgtcgcccc120ccaccctgcagccaggactcgatggaggtacagagctcggcttctttgccttgggagggg180agtggtggtggttgaaagggcgatggaattttccccgaaagcctacgcccagggcccctc240ccagctccagcgttaccctccggtctatcctactggccgagctgccccgccttctcatgg300ggaaaacttagccgcaacttcaatttttggtttttcctttaatgacacttctgaggctct360cctagccatcctcccgcttccggaggagcgcagatcgcaggtccctttgcccctggcgtg420cgactccctactgcgctgcgctcttacggcgttccaggctgctggctagcgcaaggcggg480ccgggcaccccgcgctccgctgggagggtgagggacgcgcgtctggcggccccagccaag540ctgcgggtttctgagaagacgctgtcccgcagccctgagggctgagttctgcacccagtc600aagctcaggaaggccaagaaaagaatccattccaatatatggccatgtggctctttggag660caatgttccatcatgttccatgctgctgacgtcacatggagcacagaaatcaatgttagc720agatagccagcccatacaagatcgtattgtattgtaggaggcatcgtggatggatggctg780ctggaaaccccttgccatagccagctcttcttcaatacttaaggatttaccgtggctttg840agtaatgagaatttcgaaaccacatttgagaagtatttccatccagtgctacttgtgttt900acttctaaacagtcattttctaactgaagctggcattcatgtcttcattttgggctgttt960cagtgcagggcttcctaaaacagaagccaactgggtgaatgtaataagtgatttgaaaaa1020aattgaagatcttattcaatctatgcatattgatgctactttatatacggaaagtgatgt1080tcaccccagttgcaaagtaacagcaatgaagtgctttctcttggagttacaagttatttc1140acttgagtccggagatgcaagtattcatgatacagtagaaaatctgatcatcctagcaaa1200caacagtttgtcttctaatgggaatgtaacagaatctggatgcaaagaatgtgaggaact1260ggaggaaaaaaatattaaagaatttttgcagagttttgtacatattgtccaaatgttcat1320caacacttcttgattgcaattgattctttttaaagtgtttctgttattaacaaacatcac1380tctgctgcttagacataacaaaacactcggcatttcaaatgtgctgtcaaaacaagtttt1440tctgtcaagaagatgatcagaccttggatcagatgaactcttagaaatgaaggcagaaaa1500atgtcattgagtaatatagtgactatgaacttctctcagacttactttactcattttttt1560aatttattattgaaattgtacatatttgtggaataatgtaaaatgttgaataaaaatatg1620tacaagtgttgttttttaagttgcactgatattttacctcttattgcaaaatagcatttg1680tttaagggtgatagtcaaattatgtattggtggggctgggtaccaatgctgcaggtcaac1740agctatgctggtaggctcctgcctgtgtggaaccactgactactggctctcattgacttc1800cttactaagcatagcaaacagaggaagaatttgttatcagtaagaaaaagaagaactata1860tgtgaatcctcttctttacactgtaatttagttattgatgtataaagcaactgttatgaa1920ataaagaaattgcaataactggcaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa1968<210>2<211>162<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>2MetArgIleSerLysProHisLeuArgSerIleSerIleGlnCysTyr151015LeuCysLeuLeuLeuAsnSerHisPheLeuThrGluAlaGlyIleHis202530ValPheIleLeuGlyCysPheSerAlaGlyLeuProLysThrGluAla354045AsnTrpValAsnValIleSerAspLeuLysLysIleGluAspLeuIle505560GlnSerMetHisIleAspAlaThrLeuTyrThrGluSerAspValHis65707580ProSerCysLysValThrAlaMetLysCysPheLeuLeuGluLeuGln859095ValIleSerLeuGluSerGlyAspAlaSerIleHisAspThrValGlu100105110AsnLeuIleIleLeuAlaAsnAsnSerLeuSerSerAsnGlyAsnVal115120125ThrGluSerGlyCysLysGluCysGluGluLeuGluGluLysAsnIle130135140LysGluPheLeuGlnSerPheValHisIleValGlnMetPheIleAsn145150155160ThrSer<210>3<211>1312<212>DNA<213>小鼠(Musmusculus)<400>3ccacgcgtccgcaatactcagtggcactgtattccccttctgtccagccactcttcccca60gagttctcttcttcatcctcccccttgcagagtagggcagcttgcaggtcctcctgcaag120tctctcccaattctctgcgcccaaaagacttgcagtgcatctccttacgcgctgcaggga180ccttgccagggcaggactgcccccgcccagttgcagagttggacgaagacgggatcctgc240tgtgtttggaaggctgagttccacatctaacagctcagagagaatccaccttgacacatg300gccctctggctcttcaaagcactgcctcttcatggtccttgctggtgaggtccttaagaa360cacagaaacccatgtcagcagataaccagcctacaggaggccaagaagagttctggatgg420atggcagctggaagcccatcgccatagccagctcatcttcaacattgaagctcttacctg480ggcattaagtaatgaaaattttgaaaccatatatgaggaatacatccatctcgtgctact540tgtgtttccttctaaacagtcactttttaactgaggctggcattcatgtcttcattttgg600gctgtgtcagtgtaggtctccctaaaacagaggccaactggatagatgtaagatatgacc660tggagaaaattgaaagccttattcaatctattcatattgacaccactttatacactgaca720gtgactttcatcccagttgcaaagttactgcaatgaactgctttctcctggaattgcagg780ttattttacatgagtacagtaacatgactcttaatgaaacagtaagaaacgtgctctacc840ttgcaaacagcactctgtcttctaacaagaatgtagcagaatctggctgcaaggaatgtg900aggagctggaggagaaaaccttcacagagtttttgcaaagctttatacgcattgtccaaa960tgttcatcaacacgtcctgactgcatgcgagcctcttccgtgtttctgttattaaggtac1020ctccacctgctgctcagaggcagcacagctccatgcatttgaaatctgctgggcaaatta1080agcttcctaacaaggagataatgagccacttggatcacatgaaatcttggaaatgaagag1140aggaaaagagctcgtctcagacttatttttgcttgcttatttttaatttattgcttcatt1200tgtacatatttgtaatataacagaagatgtggaataaagttgtatggatattttatcaat1260tgaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa1312<210>4<211>162<212>PRT<213>小鼠(Musmusculus)<400>4MetLysIleLeuLysProTyrMetArgAsnThrSerIleSerCysTyr151015LeuCysPheLeuLeuAsnSerHisPheLeuThrGluAlaGlyIleHis202530ValPheIleLeuGlyCysValSerValGlyLeuProLysThrGluAla354045AsnTrpIleAspValArgTyrAspLeuGluLysIleGluSerLeuIle505560GlnSerIleHisIleAspThrThrLeuTyrThrAspSerAspPheHis65707580ProSerCysLysValThrAlaMetAsnCysPheLeuLeuGluLeuGln859095ValIleLeuHisGluTyrSerAsnMetThrLeuAsnGluThrValArg100105110AsnValLeuTyrLeuAlaAsnSerThrLeuSerSerAsnLysAsnVal115120125AlaGluSerGlyCysLysGluCysGluGluLeuGluGluLysThrPhe130135140ThrGluPheLeuGlnSerPheIleArgIleValGlnMetPheIleAsn145150155160ThrSer<210>5<211>25<212>DNA<213>人工的<220><223>寡核苷酸<400>5caatgatatacactgtttgagatga25<210>6<211>23<212>DNA<213>人工的<220><223>寡核苷酸<400>6cgtgttgatgaacatttggacaa23<210>7<211>1250<212>DNA<213>人工的<220><223>修饰的cDNA<400>7cttctgtccagccactcttccccagagttctcttcttcatcctcccccttgcagagtagg60gcagcttgcaggtcctcctgcaagtctctcccaattctctgcgcccaaaagacttgcagt120gcatctccttacgcgctgcagggaccttgccagggcaggactgcccccgcccagttgcag180agttggacgaagacgggatcctgctgtgtttggaaggctgagttccacatctaacagctc240agagaggtcaggaaagaatccaccttgacacatggccctctggctcttcaaagcactgcc300tcttcatggtccttgctggtgaggtccttaagaacacagaaacccatgtcagcagataac360cagcctacaggaggccaagaagagttctggatggatggcagctggaagcccatcgccata420gccagctcatcttcaacattgaagctcttacctgggcattaagtaatgaaaattttgaaa480ccatatatgaggaatacatccatctcgtgctacttgtgtttccttctaaacagtcacttt540ttaactgaggctggcattcatgtcttcattttgggctgtgtcagtgtaggtctccctaaa600acagaggccaactggatagatgtaagatatgacctggagaaaattgaaagccttattcaa660tctattcatattgacaccactttatacactgacagtgactttcatcccagttgcaaagtt720actgcaatgaactgctttctcctggaattgcaggttattttacatgagtacagtaacatg780actcttaatgaaacagtaagaaacgtgctctaccttgcaaacagcactctgtcttctaac840aagaatgtagcagaatctggctgcaaggaatgtgaggagctggaggagaaaaccttcaca900gagtttttgcaaagctttatacgcattgtccaaatgttcatcaacacgtcctgactgcat960gcgagcctcttccgtgtttctgttattaaggtacctccacctgctgctcagaggcagcac1020agctccatgcatttgaaatctgctgggcaaactaagcttcctaacaaggagataatgagc1080cacttggatcacatgaaatcttggaaatgaagagaggaaaagagctcgtctcagacttat1140ttttgcttgcttatttttaatttattgcttcatttgtacatatttgtaatataacagaag1200atgtggaataaagttgtatggatattttatcaattgaaatttaaaaaaaa1250权利要求1.下述物质在制备用于刺激毛发生长的组合物中的用途(i)多核苷酸，其包含(a)如SEQIDNO1或3所示的核酸序列，(b)能编码SEQIDNO2或4所示的氨基酸序列的核酸序列，(c)能编码SEQIDNO2或4所示的氨基酸序列的核酸序列，该氨基酸序列具有修饰的信号肽、修饰的N-末端和/或修饰的C-末端，或(d)能在严格条件下与(a)-(c)中的任一项杂交的核酸序列；(ii)由(a)-(c)中的任一项定义的核酸编码的多肽；或(iii)化合物，其能结合特异性地识别在(ii)中定义的多肽的抗体，或其能特异性地结合IL-15受体α链。2.权利要求1所定义的多核苷酸、多肽或化合物在制备用于治疗、预防和/或改善脱发的组合物中的用途。3.权利要求1或2的用途，其中所述组合物还包含第二种毛发生长刺激剂。4.权利要求3的用途，其中所述第二种毛发生长刺激剂选自羧酸的锌盐，皂苷类，三萜类，优选地齐墩果酸或熊果酸，山楂酸，南蛇藤醇，亚洲积雪草酸，5-[α]-还原酶的抑制剂，优选孕酮，1，4-甲基-4-氮杂类固醇，优选17-[β]-N，N-二乙基氨甲酰基-4-甲基-4-氮杂-5-[α]-雄烷-3-酮，雄激素受体拮抗剂，优选醋酸环丙氯地孕酮，米诺地尔(R)，azaelaicacid和其衍生物，环孢菌素，三碘甲腺原氨酸，二氮嗪，钾通道开放剂，优选cromakalin，苯妥英和其混合物，和雌激素的衍生物，优选戊酸雌二醇。5.权利要求1-4中的任一项的用途，其中所述组合物还包含药学上或化妆上可接受的载体。6.权利要求1-5中的任一项的用途，其中所述组合物是药物组合物。7.权利要求1-5中的任一项的用途，其中所述组合物是化妆品组合物。8.权利要求1-7中的任一项的用途，其中所述组合物配制成生发油、生发药组合物、洗发剂、粉剂、胶冻、护发素、软膏、美发乳、糊剂、发乳、发胶和/或毛发气雾剂。9.权利要求1-8中的任一项的用途，其中所述组合物要局部地施用到受试者的皮肤或头皮上。10.权利要求9的用途，其中所述受试者是哺乳动物。11.权利要求10的用途，其中所述哺乳动物是人、狗、猫、马、兔子、羊、骆驼、小鼠、大鼠、羊驼、骆马、原驼或lama。12.权利要求9-11中的任一项的用途，其中所述受试者患有遗传决定的和/或获得形式的脱发。13.权利要求12的用途，其中所述遗传决定的或获得形式的脱发是斑秃、部分脱发、全部脱发、拔毛癖或药物诱导的脱发。14.转基因的非人动物，其包含如权利要求1所定义的核酸，其中所述核酸特异性地在毛球的角质细胞、郎格汉斯细胞、黑素细胞、树突表皮T-细胞、肥大细胞、皮肤神经纤维或成纤维细胞中表达。15.刺激非人动物的毛发生长的方法，其包含下述步骤(a)用如权利要求1所定义的核酸转化所述动物；和(b)表达由所述核酸编码的多肽。16.生产动物毛发的方法，其包含下述步骤(a)用如权利要求1所定义的核酸转化所述动物；和(b)表达由所述核酸编码的多肽。17.权利要求15或16的方法，其中所述IL-15多肽是在调节元件控制下表达的。18.权利要求17的方法，其中所述调节元件使得能特异性地在毛球的角质细胞、郎格汉斯细胞、黑素细胞、树突表皮T-细胞、肥大细胞、皮肤神经纤维或成纤维细胞中表达。19.权利要求16-18中的任一项的方法，还包含向非人动物的皮肤和/或头皮施用如权利要求1所定义的组合物的步骤。20.生产动物毛发的方法，其包含向非人动物的皮肤和/或头皮施用如权利要求1所定义的组合物的步骤。21.权利要求16-20中的任一项的方法，还包含得到所述动物的毛发的步骤。22.权利要求14的转基因的非人动物或权利要求15-21中的任一项的方法，其中所述动物是狗、猫、马、兔子、羊、骆驼、小鼠、大鼠、羊驼、骆马、原驼或lama。23.治疗、预防和/或改善遭受脱发的受试者的方法，其包含以有效的剂量，将如权利要求1所定义的组合物施用给所述受试者的步骤。全文摘要本发明涉及IL－15多核苷酸、多肽或能结合特异性地识别IL－15多肽的抗体，或能特异性地结合IL－15受体α链的化合物在制备用于刺激毛发生长或用于治疗、预防和/或改善脱发的组合物中的用途。此外，本发明包括转基因的非人动物，其包含IL－15多核苷酸。本发明还涉及刺激非人动物中毛发生长的方法和生产动物毛发的方法。最后，本发明涉及治疗、预防和/或改善遭受脱发的受试者的方法。文档编号A61Q7/00GK1921879SQ200480042168公开日2007年2月28日申请日期2004年12月7日优先权日2003年12月29日发明者S·贝泽尔特,K·洛泽尔申请人:明斯特大学临床医学院