Fgf-5抑制组合物、毛发生长剂以及家畜动物用外用组合物的制作方法

专利名称：Fgf-5抑制组合物、毛发生长剂以及家畜动物用外用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及适用于抑制FGF-5的组合物、毛发生长剂(生发剂、育毛剂)、以及家畜动物用外用组合物。更详细地说，本发明涉及含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种的、抑制FGF-5的抑制活性优异的FGF-5抑制组合物，以及含有该FGF-5抑制组合物的、毛发脱落防止效果、生毛发效果、养毛发(毛发养护)效果和长毛发效果均优异的毛发生长剂、以及家畜动物用外用组合物。
背景技术：
作为毛发稀疏和脱毛发症状的原因，可举出紧张、内分泌失调、遗传、血液循环不良、营养障碍和老化等。为了缓和这种毛发稀疏和脱毛发症状、以及恢复生毛发、养毛发和长毛发，人们正在研究各种各样的毛发生长剂。人们认为，荷尔蒙、细胞生长因子、维生素和药物类等各种物质对毛发的生长和分化有影响。其中，细胞生长因子被认为在毛乳头和/或外毛根鞘、内毛根鞘等细胞中产生， 通过增殖、抑制细胞，可对调节毛发生长周期(生长期、退行期、休止期)起作用。这种细胞生长因子之一就是FGF-5。已知该FGF-5是由FGF-5基因产生的蛋白质，具有抑制毛囊和毛发生长的性质。因此，可以认为，抑制FGF-5对于缓和毛发稀疏及脱毛发症状，恢复生毛发、养毛发和长毛发是有效的，人们提出了抑制FGF-5的毛发生长剂的各种方案。例如，专利文献 1公开了一种含有多肽的毛发生长剂，该多肽含有成纤维细胞生长因子5的一部分构，对于成纤维细胞生长因子5对毛发生长的抑制作用具有抑制活性。另外，专利文献2公开了含有蜂王浆的毛发生长促进剂。另外，专利文献3记载了睾酮-5 α -还原酶抑制剂、以及含有它的毛发生长 毛发养护剂。而且，还记载了一种睾酮-5 α-还原酶抑制剂，其含有选自绯红密孑L菌(Pycnoporus coccineus)、朱红密孑L菌(Pycnoporus cinnabarinus)、大抱地花菌 (Albatrellus confluens)、蹄形干酪菌(Oligoporustephroleucus (Fr.) Gilbn. et Ryv)、 火木层孔菌(Wiellinusigniarius (Fr.) Quel.)、榆黄菇(金顶侧耳、金顶蘑)、滑子菇、金针菇(朴蕈)、红铆钉菇(Gomphidius roseus)的各子实体中的至少1种子实体提取物。另外，对于人以外的宠物和畜产动物也同样，对于由皮肤病、老龄化和饲养环境等的外部因素等引起的脱毛症状，也需要具有毛发生长效果的外用组合物。现有技术文献专利文献专利文献1 特开2002-293720号公报专利文献2 特开2003-192541号公报专利文献3 特开平7-278006号公报

发明内容
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发明要解决的课题然而，专利文献1和专利文献2记载的毛发生长剂，其FGF-5抑制活性未必充分， 另外，专利文献1 3记载的毛发生长剂，其毛发生长效果也不能说令人满意。另外，人们还需求对宠物和畜产动物等家畜动物的脱毛症状等具有毛发生长效果的家畜动物用外用组合物。进而，对于其体毛用于衣料等的羊等畜产动物，人们需求能够增加该体毛的家畜动物用外用组合物。本发明的目的在于，提供对FGF-5的抑制优异的FGF-5抑制组合物和毛发生长效果优异的毛发生长剂以及家畜动物用外用组合物。用于解决课题的手段本发明如以下所示。1. FGF-5抑制组合物，其特征在于，含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种。2.上述1所述的FGF-5抑制组合物，含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少2种。3.上述1或2所述的FGF-5抑制组合物，还含有榆黄菇提取物。4.毛发生长剂，其特征在于，含有上述1 3任一项所述的FGF-5抑制组合物。5.家畜动物用外用组合物，其特征在于，含有上述1 3任一项所述的FGF-5抑制组合物。发明效果本发明的FGF-5抑制组合物由于含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种，因此具有优异的FGF-5抑制活性，从而具有毛发脱落防止效果。本发明的FGF-5抑制组合物在含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少2种时，具有更优异的FGF-5抑制活性，从而具有毛发脱落防止效果。另外，本发明的FGF-5抑制组合物在进一步含有榆黄菇提取物时，具有更优异的 FGF-5抑制活性，从而具有毛发脱落防止效果。另外，本发明的毛发生长剂通过含有本发明的FGF-5抑制组合物，具有优异的生毛发效果、养毛发效果和长毛发效果。另外，本发明的家畜动物用外用组合剂通过含有本发明的FGF-5抑制组合物，对家畜动物具有优异的生毛发效果、养毛发效果和长毛发效果。


图1为由实验例1获得的BIAC0RE分析仪的传感器曲线图。图2为由实验例2获得的BIAC0RE分析仪的传感器的图。图3为由实验例3获得的BIAC0RE分析仪的传感器的图。图4为由实验例4获得的BIAC0RE分析仪的传感器的图。图5为由实验例5获得的BIAC0RE分析仪的传感器的图。图6为由实验例6获得的经过28天后的小鼠背部图象。
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图7为由实蓝!例7获得的经过观天后的小鼠背部图象。
图8为由实蓝!例8获得的经过观天后的小鼠背部图象。
图9为由实蓝二例9获得的经过观天后的小鼠背部图象。
图10为由实;险例10获得的经过28天后的小1背部图象
图11为由实;险例11获得的经过观天后的小1背部图象
图12为由实;险例12获得的经过28天后的小1背部图象
图13为由实;险例13获得的经过观天后的小1背部图象
图14为由实;险例14获得的经过28天后的小1背部图象
图15为由实;险例15获得的经过观天后的小1背部图象
图16为由实;险例16获得的经过观天后的小1背部图象
图17为由实;险例17获得的经过观天后的小1背部图象
图18为由实;险例18获得的经过28天后的小1背部图象
具体实施例方式在本说明书中，FGF-5是指由FGF-5基因产生的蛋白质。[1]FGF_5抑制组合物本发明的FGF-5抑制组合物的特征在于，含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种。本发明的FGF-5抑制组合物含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种，优选含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少2种。米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶各自具有优异的FGF-5抑制活性。因此，通过含有它们中的至少1种，可以制成FGF-5抑制活性优异的 FGF-5抑制组合物。另外，当含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少2种时，通过由2种以上成分所产生的协同效果，可以制成FGF-5抑制活性更优异的FGF-5抑制组合物。上述米糠/大豆发酵物是通过使用枯草杆菌使米糠和大豆肽发酵后，再进行精制处理而制造的发酵物。作为上述米糠和上述大豆肽，可以使用市售的米糠和大豆肽。使米糠和大豆肽发酵时的用量比例，以米糠大豆肽的质量为基准，优选为(100 1) (100 20)。当处于该范围内时，最有利于菌的繁殖。另外，上述米糠/大豆发酵物也可以通过使用枯草杆菌使米糠提取物和大豆提取物发酵后，再进行精制处理来制造。另外，作为上述米糠提取物和上述大豆提取物，可以使用市售的米糠提取物和大豆提取物。使米糠提取物和大豆提取物发酵时的用量比例，以米糠提取物大豆提取物的质量为基准，优选为(100 1) (100 20)。当处于该范围内时，最有利于菌的繁殖。另外，用于米糠和大豆肽等的发酵的枯草杆菌(Bacillussubtilis)是具有代表性的好气性孢子形成菌。作为该枯草杆菌，只要是安全性能够得到保证，就没有特殊限定，从获得的容易性、制造成本的观点考虑，优选纳豆杆菌(Bacillus natto) 0为了利用枯草杆菌使米糠和大豆肽发酵，获得米糠/大豆发酵物，必须赋予最佳的PH值和营养条件等。即，需要添加葡萄糖等糖类、碳酸氢钠等盐类、蛋白酶等酶、以及水 (净化水)等。另外，发酵后所进行的精制处理是通过将上述发酵后的发酵液压榨、过滤来进行的。进而，根据需要，可以在发酵、压榨、过滤之后，接着进行利用活性炭等的除臭·脱色处理、和/或沉淀物的去除处理。另外，在这些处理之后，也可以再次进行过滤处理。另外，作为米糠/大豆发酵物，可以使用市售品。例如可举出，“CELABI0”(株式会社东洋发酵制)等。上述蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物(以下简称为“蔷薇提取物”)是从蔷薇科蔷薇属植物的花瓣中提取出的提取物。作为上述蔷薇科蔷薇属植物，只要是属于蔷薇科蔷薇属的蔷薇(Rosa spp.)，就没有特殊限制。具体地可举出法国蔷薇(Rosagallica)、洋蔷薇(Rosa centifolia)、麝香蔷薇(Rosa moschata)、异味蔷薇(Rosa foetida)、巨花蔷薇(Rosa gigantea)、里予蔷薇 (Rosamultiflora)、光叶蔷薇(Rosa wichuraiana)、玫瑰(Rosa rugosa)、突厥蔷薇(Rosa damascea)等野生品种、或者将它们交配而成的园艺品种。另外，为了获得蔷薇提取物而使用的上述蔷薇科蔷薇属植物，可以在收获后直接使用其植物体的一部分和/或全部，也可以将其干燥后再使用。进而，在获得上述蔷薇科蔷薇属植物的提取物时，提取原料可以是未粉碎的或粉碎的，也可以进行去除杂质等预处理。在获得蔷薇提取物时，其提取方法、提取条件没有特殊限定。作为提取用溶剂，除了水或热水以外，还可以使用醇类(甲醇和乙醇等)、乙酸乙酯、正己烷、丙酮等有机溶剂、 或是这些有机溶剂与水或热水的混合溶剂等。通常使用水或热水、或者水或热水与醇类的混合溶剂。这些提取用溶剂中，优选使用热水。作为混合溶剂，例如可举出，水-甲醇混合溶剂、水-乙醇混合溶剂等。另外，当使用上述水或热水与醇类的混合溶剂时，当以混合溶剂的总量为100体积％时，醇类的比例通常为20 90体积％，优选为30 70体积％，更优选为40 60体积％。另外，提取时的提取用溶剂的pH值，通常为3 7，优选为4 6，更优选为4 5。 提取温度没有特殊限制，优选为常温提取或者加热提取。如果是常温提取，例如，可以通过将原料浸渍到水-甲醇混合溶剂等溶剂中，并在室温下放置1 5天左右来提取。当加热提取时，作为加热温度，通常为40 100°C，优选为50 80°C，更优选为50 70°C。通过使加热温度处于该范围内，可以高效地进行提取，因此是优选的。当在本发明的FGF-5抑制组合物中使用上述蔷薇提取物时，通常将提取后的提取物残余物(提取后的蔷薇科蔷薇属植物的花瓣)与提取液(含有蔷薇提取物和提取用溶剂的溶液)进行分离。此时的分离方法没有特殊限定，可以采用压滤机和过滤(加压、常压) 等方法来分离。从提取物残余物中分离出来的提取液，可以直接用于配制本发明的FGF抑制组合物。另外，提取液随后也可以进一步在除去其中所含的提取用溶剂后再使用。从提取液中除去提取用溶剂的方法没有特殊限定，可以采用例如，喷雾干燥法、蒸发和冻干法等来进行。从提取液中分离收集的固体成分(蔷薇提取物固体成分)可以直接使用，也可以进一步进行精制。即，可以通过使该固体成分溶解于水和/或有机溶剂等中之后，进行过滤，除去夹杂物等，再除去溶剂来进行精制。进而，还可以根据需要实施灭菌处理等。另外，蔷薇提取物可以使用市售品。例如可举出，“ROSE CYRSTA”(株式会社东洋发酵制)等。上述卡拉胶是从红藻类海藻中提取并精制的天然高分子物质，是一种以分子量为 100, 000 500，000的半乳糖和3，6-脱水半乳糖为主成分的多糖类，在分子内具有半酯型的硫酸酯基。该卡拉胶大致分为3类，KAPPA型、IOTA型和LAMBDA型。它们可根据卡拉胶中所含的半乳糖重复单元的性质来区分。其中，本发明中优选含有IOTA型卡拉胶。作为用于获得上述IOTA型卡拉胶的提取原料，可以是红藻类海藻等，例如可举出，麒麟菜属的刺麒麟菜(Eucheuma spinosum)等红藻。另外，在获得IOTA型卡拉胶时，其提取方法、提取条件没有特殊限定。作为提取方法和提取条件，例如可举出以下方法。最初将海藻用冷水洗涤，除去海藻中存在的砂子和其他微粒。在此，海藻中的卡拉胶由海藻的构成成分与通常的纤维素缔合而成，因此，在冷水洗涤的过程中不会发生溶胀。然后，在冷水洗涤之后，接着实施热水提取工序。然后，将该热水提取液进一步在高温下用碱水溶液进行处理。作为该碱水溶液中使用的碱，可举出NaOH、 Ca (OH) 2或KOH之类的碱或碱土金属氢氧化物。通过该高温碱水溶液的处理，可以引发半乳糖单元中的3，6_脱水键合的生成。然后，在碱改性后，将提取液过滤，除去纤维素、半纤维素和其他微粒等不溶性物质，随后加入酸，将PH值调节至9或9以下。另外，提取后，可以根据希望设置离心分离和利用漂白剂的漂白工序。然后，通过向提取液中添加KCl或异丙醇等醇类，使其作为提取物从提取液中沉淀来获得。另外，也可以通过使提取液的提取用溶剂蒸发，将提取液浓缩，然后使其干燥来获得。进而，通过干燥获得的干燥物也可以用粉碎机等进行粉碎、粉末化。予以说明，从提取液中分离收集的固体成分可以直接使用，也可以进一步进行精制。另外，IOTA型卡拉胶可以直接使用市售品。例如可举出，“VicarinSD389” (FMC化学品有限公司制)等。另外，本发明的FGF-5抑制组合物还可以含有榆黄菇提取液。上述榆黄菇提取物是指从榆黄菇的子实体等中提取出的提取物。上述榆黄菇是指担子菌亚门真担子菌纲层菌亚纲伞菌目侧耳科侧耳属的榆黄菇(学名“Pleur0tUS cornucopiae” (白黄侧耳))。另外，作为榆黄菇提取物的含有成分，可举出海藻糖、甘露糖醇、苹果酸、糖原、赖氨酸、谷氨酸、D-木糖、神经酰胺、β-D葡聚糖类、麦角留醇、不饱和脂肪酸类、焦谷氨酸、戊糖醇、己糖醇、胱硫醚、鸟氨酸、鞘糖脂等糖基神经酰胺、麦角硫因、Tamavidin (夕7 ^
S^ y )等。作为榆黄菇提取物原料的榆黄菇，可以利用新鲜的子实体、或其干燥物，优选新鲜的子实体。在获得该榆黄菇提取物时，其提取方法没有特殊限定。作为提取用溶剂，除了水或热水以外，还可以使用醇类(甲醇和乙醇等)、乙酸乙酯、正己烷、丙酮等有机溶剂、或是这些有机溶剂与水或热水的混合溶剂等，通常使用水或者水与醇类的混合溶剂。另外，提取时的提取用溶剂的PH值通常为5 9，优选为6 8。作为提取方法，没有特殊限定，例如， 将原料与溶剂一起用粉碎机等进行粉碎，制备粉碎品。然后，将该粉碎品进行常温提取或者
7加热提取。如果是常温提取，放置1天 5天左右。加热提取的情况，作为加热温度，通常为40 100°C，优选为70 90°C。通过使加热温度处于该范围内，可以高效地进行提取。另外，在制备粉碎品之前，也可以对原料进行预处理。作为该预处理，在常温下将原料浸渍到溶剂中，在室温下放置5小时 3天。进而，根据需要，在恒温槽中对浸渍后的原料进行保温(孵育)。保温的条件没有特殊限定，通常为温度60°C以上、湿度70%以上， 保温时间为10分钟 2小时。然后，当进行上述预处理时，使用预处理后的原料，用粉碎机等进行粉碎，制备粉碎品。当本发明的FGF-5抑制组合物中使用榆黄菇提取物时，通常将提取后的提取物残渣(提取后的榆黄菇)与提取液(含有榆黄菇提取物的提取用溶剂)进行分离。此时的分离方法没有特殊限定，可以采用压滤机和过滤(加压、常压)等来分离。与提取物残渣分离后的提取液，可以直接用作本发明的FGF-5抑制组合物的原料。另外，提取液进而还可以通过去除其中所含的提取用溶剂后再使用。从提取液中去除提取用溶剂的方法没有特殊限定，可以采用例如，喷雾干燥法、蒸发和冻干法等来进行。从提取液中分离收集的固体成分可以直接使用，也可以进一步进行精制。即，可以在使该固体成分溶解于水和/或有机溶剂等中之后，进行过滤，除去夹杂物等，然后除去溶剂来进行精制。进而，还可以根据需要实施灭菌处理等。本发明的FGF-5抑制组合物含有从米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和I OTA型卡拉胶中选出的至少1种，如上所述，优选含有从米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶中选出的至少2种。米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶对FGF-5的亲合性都很高，都具有FGF-5抑制活性。因此，本发明的FGF-5抑制组合物对于能够对毛囊和/或毛的生长起抑制作用的FGF-5，具有优异的抑制活性。因此，本发明的FGF-5抑制组合物具有毛发脱落防止效果，进而，具有生毛发效果、养毛发效果和长毛发效果。如上所述，作为含有从米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶中选出的至少2种的方案，例示于下。(1)含有米糠/大豆发酵物、以及蔷薇提取物的组合物。(2)含有米糠/大豆发酵物、以及IOTA型卡拉胶的组合物。(3)含有蔷薇提取物、以及IOTA型卡拉胶的组合物。(4)含有米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶的组合物。本发明中，更优选含有从米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物中选出的至少1种以及榆黄菇提取物，特别优选含有从米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物中选出的至少2种以及榆黄菇提取物。另外，本发明的FGF-5抑制组合物中所含的米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA 型卡拉胶的量没有特殊限定，可以只作为FGF-5抑制组合物的一部分而含有，也可以构成 FGF-5抑制组合物的全部。即，当将FGF-5抑制组合物的总质量设定为100质量％时，米糠 /大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶的合计含量为0. 1 100质量％，优选为3 100质量％，更优选为15 100质量％，特别优选为20 100质量％。当合计含量在上述范围内时，可以获得足够的FGF-5抑制性。另外，当本发明的FGF-5抑制组合物含有榆黄菇提取物时，米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶、以及榆黄菇提取物的含量没有特殊限定，可以作为FGF-5抑制组合物的一部分而含有，也可以构成FGF-5抑制组合物的全部。S卩，当以FGF-5抑制组合物的总质量为100质量％时，米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶以及榆黄菇提取物的合计含量为0. 1 100质量％，优选为3 100质量％，更优选为15 100质量％， 特别优选为20 100质量％。当合计含量在上述范围内时，可以获得足够的FGF-5抑制性。FGF-5抑制组合物的固体成分浓度没有特殊限定，通常为0. 0005 100质量％，优选为0. 001 50质量％，更优选为0. 01 5质量％，特别优选为0. 01 1. 5质量％。予以说明，FGF-5抑制组合物的固体成分浓度中的固体成分是指构成成分中所含的包括米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶的固体成分。另外，当FGF-5抑制组合物含有榆黄菇提取物时，固体成分浓度中的固体成分是指作为构成成分的包括米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA型卡拉胶以及榆黄菇提取物的固体成分。在FGF-5抑制组合物含有从米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物中选出的至少2种的情况下，当将米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物的合计固体成分设定为100质量％时，这2种物质中的一方与另一方的固体成分的质量比可以为10 90质量％与10 90质量％。另外，当FGF-5抑制组合物含有米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物这3种时，当将米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物的合计固体成分设定为100 质量％时，这3种固体成分的质量比，米糠/大豆发酵物可以为1 90质量％，IOTA型卡拉胶可以为1 90质量％，蔷薇提取物可以为1 90质量％。另外，当FGF-5抑制组合物含有榆黄菇提取物时，从米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物中选出的至少1种的合计量与榆黄菇提取物的固体成分的质量比，当将上述固体成分设定为100质量％时，可以为10 90质量％与10 90质量％。予以说明，固体成分浓度是指采用一般的干燥减量法(在105°C下干燥4小时)测得的干燥固体成分的质量％ (下同)。另外，浓缩是指在将物质保持在水分蒸发的状态下， 以提高固体成分浓度的处理。浓缩的方法没有特殊限定，例如可举出，减压浓缩和瞬间减压浓缩等。对于本发明的FGF-5抑制组合物的形态没有特殊限定。通常以发酵物和提取物的各种形态来使用。例如，可以制成液态、固态、粉末状、颗粒状、制粒后的颗粒状等。另外，含有成分的发酵物(培养得到的培养发酵液)和提取液，可以是过滤后的原液，也可以是对其进行脱色等后处理的液体，或者也可以是将其浓缩后的浓缩液。此外，也可以是采用冻干等公知的方法除去了溶剂的固形物或粉末化了的粉状物。另外，本发明的FGF-5抑制组合物除了含有米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和IOTA 型卡拉胶以及榆黄菇提取物以外，还可以含有其他的FGF-5抑制成分。作为其他的FGF-5 抑制成分，可举出LAMBDA型卡拉胶、KAPPA型卡拉胶等。本发明的FGF-5抑制组合物具有FGF-5抑制活性。该FGF-5抑制活性的测定方法， 例如可以采用BIAC0RE分析仪来测定。采用该BIAC0RE分析仪的测定是采用BIAC0RE分析法来测定待测FGF-5抑制活性的成分(以下称为“样品”)与被固定化的FGF-5蛋白质发生结合时的结合速度常数和解离速度常数，由此导出KD值来进行的。将FGF-5固定在2分子间相互作用测定装置的传感器芯片的表面上，采用表面等离子体共振法(使用2分子间相互作用测定装置等)测定与样品的结合，由此测定与FGF-5的亲合性。具体地，使涂布在基于表面等离子体共振效果的2分子间相互作用测定装置 (BIAC0RE公司制)(以下简称为“测定装置”)的传感器芯片(“CM5"BIAC0RE公司制)的表面上的右旋糖酐活化后，使该活化的右旋糖酐与一定量的FGF-5进行胺键合。将该传感器芯片安装到测定装置内，为了观察FGF-5与样品之间的相互作用，使样品的系列稀释溶液按顺序地通过微小通道。当FGF-5与样品之间发生相互作用时，在传感器曲线图上表示相互作用(结合)的线条上升。另外，当失去上述的相互作用时，立即显示出线条快速下降的图案。另外，即使由于上述相互作用的反应而导致相互作用物残留，通过再生操作也可以使 FGF-5恢复到固定化的最初状态，从而可以重复进行测定。作为该再生操作，只要用Smmol/ 1的氢氧化钠作用30秒钟即可。亲合性的研究基于反应速度论，由该传感器曲线图的斜率(一定时间内的变化率)求出结合常数和解离常数，进而，计算出反应常数KD(M)。该反应常数的值越小，可判定 2分子间的亲合性越高。另外，该反应常数KD的值，对于一般的抗原抗体反应等，为10_7 10_8M，对于生物素和抗生物素蛋白之类的特异性极高的物质，为10_12 10_"M。例如，当反应常数KD为10_8M时，相对于1(ΓΜ，评价为亲合性高10倍。而且，其亲合性越高，表示与 FGF-5的相互作用越强，由样品与FGF-5形成的“样品-(FGF-幻复合体”变得更容易形成， 从而能提高对FGF-5抑制活性。另外，本发明的FGF-5抑制组合物的每1天的使用量没有特殊限定，上述必须成分的总量按固体成分换算，优选为0. 0005 50g，更优选为0. 001 5g，进一步优选为0. 01 1.5g。当1天的用量处于上述范围内时，具有优异的毛发脱落防止效果。另外，通过将具有FGF-5抑制活性的本发明的FGF-5抑制组合物用于外用剂，可以制成具有毛发脱落防止效果、生毛发效果、养毛发效果和长毛发效果的外用剂。[2]毛发生长剂本发明的毛发生长剂的特征在于，含有上述FGF-5抑制组合物。该FGF-5组合物如上所述。本发明的毛发生长剂中所含的上述FGF-5抑制组合物的含量没有特殊限定，可以作为毛发生长剂的一部分而含有，也可以构成毛发生长剂的全部。当构成毛发生长剂的全部时，可以将FGF-5抑制组合物直接作为毛发生长剂使用。另外，当将毛发生长剂的总质量设定为100质量％时，FGF-5抑制组合物的含量为 0. 1 100质量％，优选为3 100质量％，更优选为15 100质量％，特别优选为20 100质量％。当组合物的含量处于上述范围内时，具有优异的毛发生长效果。本发明的毛发生长剂的固体成分浓度没有特殊限定，通常为0. 0005 100%，优选为0. 001 50%，更优选为0. 01 5%，特别优选为0. 01 3%。予以说明，在上述毛发生长剂的固体成分浓度中所说的固体成分，是指作为FGF-5 抑制组合物的构成成分的、包括米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物和I OTA型卡拉胶的固体成分、以及包括米糠/大豆发酵物、蔷薇提取物、IOTA型卡拉胶和榆黄菇提取物的固体成分。另外，作为本发明的毛发生长剂中所含的FGF-5抑制组合物，优选为含有榆黄菇提取物的组合物。由于榆黄菇提取物具有更优异的生毛发效果和长毛发效果，因此，通过使用含有榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物，可以制成生毛发效果和长毛发效果更优异的毛发生长剂。作为本发明的毛发生长剂的优选方案，例示于下。(1)包含含有米糠/大豆发酵物、和榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。(2)包含含有蔷薇提取物、和榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。(3)包含含有IOTA型卡拉胶、和榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。(4)包含含有米糠/大豆发酵物、和IOTA型卡拉胶、以及榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。(5)包含含有米糠/大豆发酵物、和蔷薇提取物、以及榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。(6)包含含有IOTA型卡拉胶、和蔷薇提取物、以及榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。(7)包含含有米糠/大豆发酵物、IOTA型卡拉胶和蔷薇提取物、以及榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物的毛发生长剂。上述方案中，由于榆黄菇提取物具有更优异的生毛发效果和长毛发效果，IOTA型卡拉胶具有更优异的FGF-5抑制作用，因此，含有榆黄菇提取物和IOTA型卡拉胶的(3) (7)的毛发生长剂是更优选的。进而，特别优选是(6)和(7)，它们的毛发生长剂中所含的 FGF-5抑制组合物含有榆黄菇提取物和IOTA型卡拉胶、以及从米糠/大豆发酵物和蔷薇提取物中选出的至少1种。如果使用含有榆黄菇提取物和IOTA型卡拉胶、以及从米糠/大豆发酵物和蔷薇提取物中选出的至少1种的FGF-5抑制组合物，则可以协同地发挥它们所具有的FGF-5抑制效果和毛发生长效果，从而可以制成生毛发效果和长毛发效果更优异的毛发生长剂。另外，本发明的毛发生长剂中可以含有公知的添加剂。例如可举出，细胞赋活剂、 维生素类、激素类、血管扩张剂、氨基酸类、抗炎症剂、杀菌剂、角质溶解剂等。它们可以单独使用，或者将2种以上组合使用。具体地，作为上述细胞赋活剂，可举出十五烷酸甘油酯、日柏醇、毛喉素、反式_3， 4’ - 二甲基-3-羟基黄烷酮等。作为上述维生素类，可举出维生素A、维生素B族、生育酚类、烟酸、烟酰胺、棕榈酸视黄醇、β-胡萝卜素、钙化醇、叶酸、生物素、D-泛酰醇、乙酰泛酰乙基醚、泛酸类等。作为上述激素类，可举出雌二醇等。作为上述血管扩张剂，可举出米诺地尔、当药提取液等。作为上述氨基酸类，可举出精氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、甘氨酸、谷氨酸、胱氨酸等；作为抗炎剂，可举出甘草次酸、甘草酸类、盐酸吡哆醇等。作为上述杀菌剂，可举出异丙基甲基苯酚、吡罗克酮乙醇胺等。本发明的毛发生长剂含有本发明的上述FGF-5抑制组合物等，而且只要不抑制本发明的作用效果，还可以含有其他的成分。例如，可以添加以往化妆品和毛发生长剂等中含有的公知成分。具体地，可举出表面活性剂、油剂、醇、PH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、增粘齐U、色素、香料等。它们可以单独使用，或者将2种以上组合使用。本发明的毛发生长剂的形态没有特殊限定，可以根据需要适宜选择各种形态。例如，液状(化妆水、乳液、分散液等)、凝胶状、乳状、喷雾状、粉末状等。在液状的情况下，可以是通过将上述成分等溶于水、乙醇、丙二醇等水系溶剂等中而得到的液状，除此之外，还可以通过适宜配合液体石蜡等烃油、橄榄油、小麦胚芽油、坚果油、玉米油、米糠油、米胚芽油、薏苡油、霍霍巴油、和葡萄籽油等植物油、角鲨烷和马油等动物油、其他的油、以及
7 — >改性乙醇等低级乙醇中的1种或者2种以上来获得。另外，在凝胶状的情况下，可以通过除了配合上述油或乙醇以外，还配合CMC等纤维素衍生物、PVP,以及羧乙烯基聚合物等增粘剂中的1种或者2种以上来制造。进而，在乳状的情况下，可以仅仅是液体石蜡、凡士林、蜂蜡等油成分，也可以是用表面活性剂将这些油成分与水一起乳化而成的乳液。另外， 作为乳化类型，可以是W/0乳化型、Ο/ff乳化型中的任一种。另外，在喷雾状的情况下，除了上述成分以外，还可以配合正丙醇、异丙醇等低级醇；丁烷、丙烷、异丁烷、液化石油气、二甲醚等可燃性气体；氮气、氧气、二氧化碳气体、一氧化二氮气体等压缩气体，也可以使用它们的混合物。在该情况下，可以将二甲醚与氮气按质量比(二甲醚/氮气)=(99. 99/0.01) (50/50)进行配合、将液化石油气与二甲醚按质量比(液化石油气/ 二甲醚)=(99/1) (1/99)进行配合、将液化石油气与氮气按质量比(液化石油气/氮气)=(99. 99/0.01) (50/50)进行配合来得到。另外，上述毛发生长剂的每1天的使用量没有特殊限定，上述含有成分的总量按固体成分换算，优选为0. 0005 50g，更优选为0. 001 5g，进一步优选为0. 01 3g。当每1天的使用量处于上述范围内时，具有优异的毛发脱落防止效果。[3]家畜动物用外用组合物本发明的家畜动物用外用组合物的特征在于含有上述FGF-5抑制组合物。本发明的家畜动物用外用组合物，只要含有上述FGF-5抑制组合物，就没有特殊限定，更优选包含含有榆黄菇提取物的FGF-5抑制组合物。本发明的家畜动物用外用剂的目的在于，将本发明的毛发生长剂用于人以外的动物，是以宠物和畜产动物等家畜动物为使用对象的外用组合物。因此，本发明的家畜动物用外用组合物中，含有成分、含有成分的制造方法、含有成分的性状、含有成分的物性、其他含有成分、以及本外用组合物的形态等，与本发明的毛发生长剂是同样的。使用本发明的家畜动物用外用组合物的家畜动物没有特殊限定。该家畜动物是指人类饲养的禽兽，例如可举出，狗、猫、马、羊、山羊、牛、猪、驴、骆驼、羊驼、豚鼠、兔子、水貂、 大鼠、和老鼠等哺乳类；鸡、鸭、鹅、火鸡、野鸡、和鹌鹑等禽类。本发明的家畜动物用外用组合物由于含有上述的成分，因此对家畜动物等动物具有生毛发、长毛发、和防止毛发防脱的效果。作为本发明的家畜动物用外用组合物的使用方案，例如可举出以下的方案。(1)用于增加从畜产动物得到的体毛的收获量的外用剂。(2)针对因皮肤病和老龄化等造成的脱毛等的、用于生毛、长毛或者预防脱毛的外用剂。作为上述(1)的方案，对于体毛用于衣料等的羊等畜产动物，可以制成能够促进其体毛的增长速度和体毛量的增加、并有效地增加从这些畜产动物获得的体毛收量的家畜动物用外用组合物。作为上述O)的方案，可以制成针对因皮肤病、老龄化、和饲养环境产生的应变等造成的家畜动物的脱毛症状的、用于生毛、长毛、或者预防脱毛的家畜动物用外用剂。本发明的家畜动物用外用组合物以从天然物中提取出的提取物作为主要成分，与以合成成分作为主要成分的外用剂相比较，可以对家畜动物更安全地使用。特别地，对于家畜动物而言，当在皮肤上涂布外用组合物时，动物往往会舔到该涂布部位的外用组合物。而本发明的家畜动物用外用组合物由于以由天然物提取的提取物为主成分，因此，即使被家畜动物摄取也可以安全地使用。另外，本发明的家畜动物用外用组合物对于家畜动物具有生毛效果、长毛效果或防脱毛效果，因此，适宜用作家畜动物用的毛发生长剂、长毛发剂或者防脱毛剂等。上述家畜动物用外用组合物的每1天的使用量没有特殊限定，上述含有成分的总量按固体成分换算，优选为0. 0005 50g，更优选为0. 001 5g，进一步优选为0. 01 3g。 当每1天的使用量处于上述范围内时，可以制成具有优异的防脱毛效果和生毛效果以及长毛效果的家畜动物用外用组合物。
实施例以下举出实施例，更详细地说明本发明，但在不超出本发明主旨的范围内，本发明不限定于这些实施例。另外，各种提取物(提取液)为采用水系介质获得的提取液，对于 IOTA型卡拉胶和LAMBDA型卡拉胶，使用其干燥粉末。予以说明，在下文中，只要没有特别说明，％均为质量基准。[1JFGF-5抑制组合物的原料成分的制备采用下述方法制备蔷薇提取物、米糠/大豆发酵物、和榆黄菇提取物。另外，IOTA 型卡拉胶和LAMBDA型卡拉胶使用下述市售品。(1)制备例1 蔷薇提取物1的制备作为蔷薇科蔷薇属植物，使用洋蔷薇(Rosa centifolia)。将其花瓣的干燥物(粉碎品)20g用70°C的热水500ml提取30分钟后，过滤(使用珍珠岩作为过滤助剂)。接着， 减压浓缩后，冷冻干燥，获得蔷薇提取物10g。然后，将上述得到的蔷薇提取物用水稀释，调整至固体成分浓度2%后使用。(2)制备例2 米糠/大豆发酵物1的制备将米糠30g、磷酸一氢钠10g、大豆肽4g、碳酸氢钠45g、葡萄糖5g、碱性蛋白酶 0. lg、水500g混合后，用pH值调整至8. 8 9. 0的培养基在42°C下培养纳豆杆菌(Bacillus natto) 48小时后，将该培养液压榨、过滤、用活性炭脱色脱臭后，再次过滤，获得液状的米糠 /大豆发酵物5g。然后，将上述得到的米糠/大豆发酵物用水稀释，将固体成分浓度调整至 0.8%后使用。(3)制备例3 榆黄菇提取物的制备将鲜的榆黄菇IKg在25L水中浸渍20小时后，在设定温度为约85°C、湿度为约 90%的恒温槽中熏蒸(steam)。接着，将经过熏蒸的榆黄菇、熏蒸工序中使用的水以及用蒸汽从榆黄菇中提取出的成分全部合并到一起，在温度设定为40°C的水浴中转移至粉碎机 (“水。一夕A ^ 寸一 A510” TERA0KA公司制)中。该粉碎使用混合机，以1200rpm左右
13的速度来进行，直到成为糊状。接着，将该糊料在约85 90°C的条件下熬煮。然后，将煮得的提取液全部过滤，除去固体成分。将得到的过滤液进行加温杀菌，获得含有榆黄菇提取物和提取用溶剂(水)的提取液20L。另外，将该提取液在^Onm的吸光度下用水稀释至 10mg/ml的样品用作试样1、稀释至20mg/ml的样品用作试样2。予以说明，该试样1的榆黄菇提取物的固体成分浓度为1%，试样2的榆黄菇提取物的固体成分浓度为2%。(4) IOTA 型卡拉胶使用"Vicarin SD 389，，(FMC化学品有限公司制)。(5) LAMBDA 型卡拉胶使用商品名“Viscarin GP209” (FMC化学品有限公司制)。[2] FGF-5抑制效果实验(BIACORE分析仪)采用下述方法，测定上述得到的FGF-5抑制组合物的原料成分对FGF-5的亲合性， 由此考察FGF-5抑制效果。使涂敷在基于表面等离子(/，* > )共振效果的2分子间相互作用测定装置 ("BIACORE 2000”，GE healthcare life science 公司制)(以下简称为“测定装置”)的传感器芯片("CM5",GEhealthcare life science公司制)的表面上的右旋糖酐(羧甲基葡聚糖)活化后，使该活化的右旋糖酐与一定量FGF-5蛋白质进行胺键合，将该传感器芯片安装到测定装置内，为了观察FGF-5蛋白质与样品(称为实验例1 5的FGF-5抑制组合物，下同)之间的相互作用，流过微小通道使样品的系列稀释溶液依次地起作用。上述测定实验按照以下方法进行。为了将FGF-5固定在Biacore传感器芯片CM5(涂敷了羧甲基葡聚糖的芯片)上的 4个流动池中，在羧甲基葡聚糖中进行18分钟胺偶联处理。然后，通过将FGF-5以10μ 1/ 分的流速注入300秒，将FGF-5固定在传感器芯片上。另外，使芯片表面上存在的游离氨基与乙醇胺Imol反应18分钟，以不使其发生非特异性结合。然后，在研究相互作用时，使作为缓冲液的HBS缓冲剂(lOmmol/1的HEPES、pH7. 4、 150mmol/l 的 NaCl、3mmol/l 的 EDTA)流过 150 秒(10 μ 1/ 分)。接着，以 10 μ 1/ 分的流速注入样品180秒，获得显示出FGF-5与样品之间的相互作用的传感器曲线图。另外，一个样品测定后，使Smmol/l的氢氧化钠溶液流过30秒，用pH约8. 0的脉冲使流动池再生。另外，KD(M)值由测定各8种不同浓度的样品得到的传感器曲线图，用BIACORE专用分析软件(Bi Aevaluation ver. 3. 0)算出。使用下述实验例1 5得到的FGF-5抑制组合物的原料成分，制备样品，测定 KD(M)值。然后，将得到的KD(M)值示于表1。另外，将下述实验例1 5的传感器曲线图分别示于图1 5。予以说明，图1 5的传感器曲线图中，各8种曲线图为按照从上至下浓度由高变低的顺序排列的曲线图。另外，实验例1 5中的测定用样品的制备方法及浓度如下所述。予以说明，作为用于制备(稀释)下述各样品的溶剂，使用上述的HBS缓冲剂。(1)实验例 1将制备例1获得的蔷薇提取物用上述HBS缓冲剂稀释，制作固体成分浓度分别为 0. 002 %,0. 001 %,0. 0005 %,0. 00025 %,0. 000125 %,0. 0000625 %,0. 0000313 %、禾口0. 0000156%的8种浓度的样品。然后，使用这些样品，测定对FGF-5的亲合性。(2)实验例 2将制备例2获得的米糠/大豆发酵物用上述HBS缓冲剂稀释，制作固体成分浓度分别为 0. 0008%,0. 0004%,0. 0002%,0. 0001%,0. 00005%,0. 000025%,0. 0000125%、和 0. 00000625%的8种浓度的样品。然后，使用这些样品，测定对FGF-5的亲合性。(3)实验例 3将上述IOTA型卡拉胶用上述HBS缓冲剂稀释，制作固体成分浓度分别为1%、 0. 5%,0. 25%,0. 125%,0. 0625%,0. 00313%,0. 00156%、和 0. 000781% 的 8 种浓度的样品。然后，使用这些样品，测定对FGF-5的亲合性。⑷实验例4将制备例3获得的榆黄菇提取物(试样1)用上述HBS缓冲剂稀释，制作固体成分浓度分别为 1%>0. 5%,0. 25%,0. 125%,0. 0625%,0. 00313%,0. 00156%、和 0. 000781% 的8种浓度的样品。然后，使用这些样品，测定对FGF-5的亲合性。(5)实验例 5将上述LAMBDA型卡拉胶用上述HBS缓冲剂稀释，制作固体成分浓度分别为1 %、 0. 5%,0. 25%,0. 125%,0. 0625%,0. 00313%,0. 00156%、和 0. 000781% 的 8 种浓度的样品。然后，使用这些样品，测定对FGF-5的亲合性。[表1]
权利要求
1.FGF-5抑制组合物，其特征在于，含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种。
2.权利要求1所述的FGF-5抑制组合物，含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少2种。
3.权利要求1或2所述的FGF-5抑制组合物，还含有榆黄菇提取物。
4.毛发生长剂，其特征在于，含有权利要求1 3任一项所述的FGF-5抑制组合物。
5.家畜动物用外用组合物，其特征在于，含有权利要求1 3任一项所述的FGF-5抑制组合物。
全文摘要
本发明的FGF-5抑制组合物的特征在于，含有选自米糠/大豆发酵物、蔷薇科蔷薇属植物的花瓣提取物和IOTA型卡拉胶中的至少1种。另外，本发明的毛发生长剂的特征在于，含有本发明的FGF-5抑制组合物。另外，本发明的家畜动物用外用组合物的特征在于，含有本发明的FGF-5抑制组合物。由此可以提供FGF-5抑制活性优异的FGF-5抑制组合物、以及含有该FGF-5抑制组合物的毛发生长效果优异的毛发生长剂、以及家畜动物用外用组合物。
文档编号A61K36/48GK102209551SQ20098014478
公开日2011年10月5日 申请日期2009年11月10日 优先权日2008年11月12日
发明者团克昭, 藤泽贤司 申请人:株式会社东洋发酵