专利名称：：洗涤剂组合物及其中酶组合的使用的制作方法洗涤剂组合物及其中酶组合的使用本发明涉及包含特定酶组合的水性液体或凝胶型洗涤剂(detergent)组合物。所述洗涤剂组合物可以进一步包含硼酸或能够在所述组合物中形成硼酸的硼化合物、多羟基化合物(优选丙二醇)、和相对高水平的4丐离子(用以使蛋白酶和其它酶类的选定组合稳定化)的组合。本发明还涉及用于在蛋白酶与其它酶的组合中于液体或凝胶洗涤剂组合物中增强非蛋白酶酶类的稳定性的方法(enhancingstabilityofthenonproteaseenzymesincombinationofaproteaseenzymewithotherenzymesinaliquidorgeldetergentcomposition)。本发明进一步涉及特定的蛋白酶酶类及它们在洗涤剂组合物中的用途。
背景技术：
：蛋白酶用于洗涤剂组合物已经有大约50年了，而且在过去的10年里通过许多前体蛋白酶的蛋白质工程开发了许多此类蛋白酶。市场上最成功的前体蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶309,或称作Savinase⑧。Savinase的蛋白质工程最初披露于1989年的WO89/06279。随后，该申请人和其它公司长口GenencorInternational,Inc.、Procter&Gamble、UnileverNV等才是交了为数众多涉及Savinase的蛋白质工程的专利申请。还有，NovozymesA/S和GenencorInternational,Inc出售多种Savinase变体。包含修饰Y167A+R170S+A194P的特定Savinase变体披露于WO98/20115。在本申请中，我们将此变体称作枯草杆菌蛋白酶KL。含有酶(包括蛋白酶)的水性液体和凝胶洗涤剂组合物是本领域公知的。此类组合物所遇到的主要问题在于确保酶在组合物中具有足够的贝i存稳定性。在存在蛋白酶的情况下使淀粉酶保持稳定是特别困难的，因为蛋白酶不仅能容易地降解水性液体或凝胶洗涤剂组合物中的淀粉酶，而且蛋白酶常常会降解其它酶，如脂肪酶、纤维素酶等。高碱性淀粉酶如a-淀粉酶记载于英国说明书No.1,296,839。包含硼酸或碱金属硼酸盐与4丐离子及优选与多元醇的混合物的酶稳定系统之用途披露于美国专利4,537，706，Severson。提供改进的清洁处理(cleaning)和染料清除的4某些a-淀粉酶披露于W097/32961,Baeck等、WO96/23873和美国专利6,093,562。
发明内容本发明涉及洗涤剂组合物，其包含与至少一种其它酶组合的枯草杆菌蛋白酶KL和/或其变体，所述其它酶如蛋白酶、脂肪酶、角质酶(cutinase)、淀粉酶、糖酶(carbohydrase);纤维素酶；果胶酶；果胶酸裂合酶(pectatelyase);半纤维素酶例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶；氧化酶例如漆酶；和/或过氧化物酶。本发明的洗涤剂组合物中所使用的淀粉酶是来自地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的淀粉酶和其它淀粉酶，如WO2001/066712、WO2006/002643、WO2000/60060中披露的那些。本发明的洗涤剂组合物中所使用的纤维素酶是如WO1995/024471、WO91/17244、WO2002/099091中披露的那些。本发明的洗涤剂组合物中所使用的脂肪酶是如WO2000/060063中披露的那些。本发明的洗涤剂组合物中所使用的甘露聚糖酶是如WO99/64619中披露的那些，例如SEQIDNO:2。本发明的洗涤剂组合物中所使用的内切葡聚糖酶是如WO91/17244中披露的那些。本发明的枯草杆菌蛋白酶KL变体是如WO98/20115中指明的那些，尤其是表l中指出的那些。表l:枯草杆菌蛋白酶KL中的突变无"36DP14TN18KN62DV83LA133PE136QE136RE136KN140RN140KS141ES141NS141YS141RT143RT143KS153RS156RA160RS162RS162KI165RI165KY171RY171KA172RA172KA174RN173RN173KA174KN76DY176RY176KA187RA187KS188PS190PQ191RY192RY192RQ191PY192AY192PD197ND197RD197ED197KD197GA228VA230VT260RT260KG264RG264KS265TS265RS265KN218SM222SM222AM222GM222TM222VM222SN243RV244RN248RK251RN252RN261R组合S9R+A15T+T22A+N218S+K251RS9R+A15T+T22A+V84I+N218SV30I+V139L+N218SV84I+V139L+N218SN76D+N218SN76D+A228VN76D+A230VN76D+N218S+A230VN76D+A228V+A230VN218S+R247QN218S+R247HN218S+R247EN218S+R247KD181N+N218SN218S+A230VK251R+S265KP14T+固KT274H+R275H+*275aH+*275bH+*275cH+*275dH=T274H+R275HHHHHT274H+R275H+*275aH+*275bH+*275cH=T274H+R275HHHHS87N+S101G,V104N*36D+N76D+H120D+G195E+K235LA133P+M222S插入及与其的组合*96aA*96aA+A98T*96aA+A133P*96aA+A98T+A133P*96aA+A98T+N218S*97aP+A98T+N218S*98aT，*98aT+S99N+N218SG97D+*98aT+N218S*99aE=S99SE*99aD=S99SD*99aD+M222S=S99SD+M222SN76D+s99A+*99aE=N76D+S99AEN76D+*99aD+A230V=N76D+S99SD+A230VS99A+*99aD=S99ADS99A+*99aD+M222S=S99AD+M222SS99A+*99aD+N218S=S99AD+N218SS99A+*99aE+A230V=S99AE+A230VA228V+A230V*130aL+P194A出人意料地发现枯草杆菌蛋白酶KL及其变体显示与液体洗涤剂组合物中所使用的其它酶(如脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、过氧化物酶/氧化酶和半纤维素酶)的显著相容性。这种特性导致与枯草杆菌蛋白酶KL及其变体组合的这些酶的残余活性与存在其它蛋白酶时的残余活性相比显著升高，即使在长期贮存后也是如此。最后，结果是洗涤剂组合物的性能得到改善，或者，可以降低酶量但获得相似的结果。变体名称的命名法和规则在描述根据本发明产生或预期的各种枯草杆菌蛋白酶KL酶变体时，采用以下命名法和规则以便于引用首先，通过比对亲本酶与枯草杆菌蛋白酶BPN，(BASBPN)来限定参照系。可以通过9.1版GCG软件包的GAP程序来获得比对，其中使用以下参数来给予变体数目缺口创建罚分=8,缺口延伸罚分=8，而所有其它参数保持其缺省值。9另一种方法是使用已知的、公认的枯草蛋白酶(subtilase)之间的比对，如WO91/00345中指明的比对。在大多数情况中，差异是根本不重要的。由此，可以相对于BASBPN(SEQIDNO.l)限定出许多删除和插入。关于在多肽中通过基因操作而引入的修饰的命名法的详细说明，参考WO00/71691第7-12页，在此通过提及来并入。氨基酸位置/残基的编号方式。如果没有提到其它内容，那么本申请中所使用的氨基酸编号方式对应于枯草蛋白酶BPN，(BASBPN)序列的编号方式。关于BPN，序列的进一步说明，见Siezen等，ProteinEngng.4(1991)719-737。"SAVINASE"Savinase⑧由NovozymesA/S销售。它是来自迟緩芽孢杆菌(及&"&"的枯草杆菌蛋白酶309。枯草杆菌蛋白酶KL变体的》务饰。术语"修饰"在用于本申请时定义为包括对编码枯草杆菌蛋白酶KL的DNA的化学修饰以及遗传操作。修饰可以是感兴趣氨基酸中的或感兴趣氨基酸处的氨基酸侧链替换、替代、删除和/或插入。枯草蛋白酶变体。在本发明的语境中，术语枯草蛋白酶变体或突变型枯蛋白酶，所述亲本微生物具有原始或亲本基因且产生相应的亲本酶，所述亲本基因得到了突变以产生突变型基因，所述突变型基因在合适的宿主中表达时产生所述突变型枯草蛋白酶蛋白酶。同源枯草蛋白酶序列。两条氨基酸序列之间的同源性在此语境中通过参数"同一性，，来描述。为了确定两种枯草蛋白酶之间的同一性程度，可以使用相同的设置来应用9.1版GCG软件包的GAP程序(见下文)。在氨基酸比对之外，来自该程序的输出是两条序列之间"百分比同一性"的计算结果。基于此说明，鉴定可以根据本发明修饰的合适的同源枯草蛋白酶对于本领域技术人员而言是常规的。分离的多核苷酸。术语"分离的"当用于多核苷酸时意味着该多核苷酸已经自其天然遗传环境中取出且因此不含其它外来的或不想要的编码序列，而且是适合于在遗传工程蛋白质产生系统内使用的形式。此类分离的分子是那些与其天然环境分开的分子，包括cDNA和基因组克隆。分离的本发明DNA分子不含通常与其相连的其它基因，但是可以包括天然存在的5'和3'非翻译区，如启动子和终止子。相连区域的鉴定对于本领域普通技术人员是显而易见的(参见例如Dynan和Tijan，Nature316:774_78，l985)。术语"分离的多核苷酸，，也可以称作"克隆的多核苷酸"。分离的蛋白质。在用于蛋白质时，术语"分离的"指该蛋白质已经自其天然环境中取出。在一种优选的形式中，分离的蛋白质基本上不含其它蛋白质，特别是其它同源蛋白质(即"同源杂质"(见下文))。分离的蛋白质是超过10%纯的，优选超过20%純的，更优选超过30%纯的，如通过SDS-PAGE所测定的。而且，优选以高度纯化的形式来提供蛋白质，即超过40°/。纯的、超过60%纯的、超过80%纯的、更优选超过95%纯的、且最优选超过99%纯的，如通过SDS-PAGE所测定的。术语"分离的蛋白质"也可以称作"纯化的蛋白质"。同源杂质。术语"同源杂质"意指源自同源细胞的任何杂质(例如与本发明枯草蛋白酶不同的多肽)，即本发明的枯草蛋白酶最初就是源自该同源细月包的。得自。术语"得自"在本申请中与特定微生物来源相连使用时意指该多核苷酸和/或枯草蛋白酶由该特定来源产生或者由其中插入有来自该来源的基因的细胞产生。底物。术语"底物"在本申请中与蛋白酶的底物相连使用时应当解释为其最宽的形式，即包括含有至少一个对枯草杆菌蛋白酶蛋白酶的水解作用易感的肽(酰胺)4建的化合物。产物。术语"产物"在本发明的语境中与衍生自蛋白酶酶促反应的产物相连使用时应当解释为包括涉及枯草蛋白酶蛋白酶的水解反应的产物。产物可以是后续水解反应的底物。洗涤性能。在本发明的语境中，术语"洗涤性能"用作在例如洗涤或硬表面清洁过程中酶去除有待清洁的物体上存在的蛋白质或有机污迹的能力。本发明的洗涤剂组合物可以配制成例如手洗或才几洗洗衣洗涤剂组合物，包括适合于玷污织物预处理的洗衣添加剂组合物和漂洗添加的织物柔顺剂组合物，或者配制成供普通家庭硬表面清洁操作使用的洗涤剂组合物，或者配制成供手洗或机洗碗碟清洗操作使用。在一个具体的方面，本发明提供了包含本发明的酶的洗涤剂添加剂。所述洗涤剂添加剂以及所述洗涤剂组合物包含至少一种其它酶，如蛋白酶、脂肪酶；角质酶；淀粉酶；糖酶；纤维素酶；果胶酶；果胶酸裂合酶；半纤维素酶例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶；氧化酶例如漆酶；和/或过氧4b物酶。一般而言，所选酶的性质应当与所选洗涤剂相容(即最适pH、与其它酶和非酶组分的相容性等)，而且所述酶应当以有效量存在。脂肪酶合适的脂肪酶包括那些细菌或真菌起源的。包括化学修饰的或蛋白质工程的突变体。有用的脂肪酶的例子包括来自腐质霉属(/7wm/co/a)(同物异名嗜热霉属(77^附ow;;c^))的脂肪酶，例如来自特异腐质霉(//./rao/e"》(记载于WO96/13580)的脂肪酶，假单胞菌属CP化wdomowos)脂肪酶，例如来自假单胞菌属菌种菌抹SD705(WO95/06720和WO96/27002)、威斯康星假单胞菌(尸M^cww'"e"^)(WO96/12012)的脂肪酶，或芽孢杆菌属(5ac/〃w力的脂肪酶(披露于WO2000/060063)。其它例子有脂肪酶变体，如WO92/05249、WO94/01541、EP407225、EP260105、WO95/35381、WO96/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079和WO97/07202中记载的那些。优选的商业上使用的脂肪酶包括Lipolase⑧、LipolaseUltra⑥和Lipex⑧(NovozymesA/S)。淀粉酶合适的淀粉酶(a和/或p)包括那些细菌或真菌起源的。包括化学修饰的或蛋白质工程的突变体。淀粉酶包括例如得自芽孢杆菌属的a-淀粉酶。有用淀粉酶的例子有WO94/02597、WO94/18314、WO96/23873、WO2000/60060、和WO97/43424中记载的变体，尤其是在一个或多个以下位置具有替代的变体15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408、和444。商业'1"生1吏用的;定4分酶有Duramy1⑧、Termamyl、Stainzyme、StainzymePlus、Stainzymeultra、Fungamyl和BAN(NovozymesA/S)、Rapidase、Purastar丁M和PurastarOxAmTM(GenencorInternationalInc.)。纤维素酶合适的纤维素酶包括那些细菌或真菌起源的。包括化学修饰的或蛋白质工程的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属(Fwan'wm)、梭孢壳属(777/e/flvz'a)、枝顶孢霉属(Jcmw"&m)的纤维素酶，例如US5,648,263、US5,691,178、US5,776,757和WO89/09259中4皮露的，由特异腐质酶、嗜热毁丝霉(M^ce/Zop/^ora&￡^20;/7//(3)和尖镰孢(尸^^/"附ox;^jwra附)产生的真菌纤维素酶。特别合适的纤维素酶是具有色彩维护(colourcare)和白度维持(whitenessmaintenance)益处的^5威性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的例子有EP0531372、WO96/11262、WO96/29397、WO98/08940中记载的纤维素酶。其它例子有纤维素酶变体，如WO94/07998、EP0531315、US5,457,046、US5,686,593、US5,763,254、WO95/24471、WO98/12307和PCT/DK98/00299中记载的那些。商业性使用的纤维素酶包括Renozyme、Celluzyme、Celluclean、Endolase⑧和Carezyme⑧(NovozymesA/S)、ClazinaseTM、和PuradaxHATM(GenencorInt.Inc.)、和KAC-500(B)tm(KaoCorporation),过氧化物酶/氧化酶合适的过氧化物酶/氧化酶包括那些植物、细菌或真菌起源的。包括化学修饰的或蛋白质工程的突变体。有用的过氧化物酶的例子包括来自鬼伞属(Cop^ms)的过氧化物酶，例如来自灰盖鬼伞(C.c/"erew"的过氧化物酶及其变体，如WO93/24618、WO95/10602、和W098/15257中记载的那些。商业性使用的过氧化物酶包括GuardzymeTM(NovozymesA/S)。半纤维素酶合适的半纤维素酶包括那些细菌或真菌起源的。包括化学修饰的或蛋白质工程的突变体。合适的半纤维素酶包括甘露聚糖酶、地衣聚糖酶(lichenase)、木聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、乙酰基木聚糖酯酶、葡糖醛酸糖苷酶(glucorunidase)、阿魏酸(ferulicacid)酯酶、香豆素(coumaricacid)酯酶和阿拉伯呋喃糖苷酶(arabinofbranosidase)(如WO95/35362中所记载的)。合适的甘露聚糖酶记载于WO99/64619。商业性使用的半纤维素酶包括Mannaway⑧(NovozymesA/S)。可以通过添加分开的、含有一种或多种酶的添加剂或通过添加组合的、含有所有这些酶的添加剂将洗涤剂酶包括在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即分开的添加剂或组合的添加剂，可以配制成例如凝胶、液体、浆体等。优选的洗涤剂添加剂配制物是液体，特别是经过稳定化的液体(stabilizedliquid)、或浆体。可以根据已确立的方法例如通过添加多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸来使液体酶制备物稳定化。受到保护的酶可以根据EP238，216中披露的方法来制备。本发明的洗涤剂组合物可以是任何便利的形式，例如糊剂、凝胶或液体。液体洗涤剂可以是水性的，通常含有多至70°/。的水和0-30%的有机溶剂，或者是非水性的。洗涤剂组合物可以含有一种或多种表面活性剂，其可以是非离子型的(包括半极性的)和/或阴离子的和/或阳离子的和/或两性离子的。表面活性剂通常以按重量计O.1%至60%的水平存在。在包含阴离子表面活性剂的情况中，洗涤剂通常会含有约1%-约40%的阴离子表面活性剂，如线性烷基苯石黄酸盐(linearalkylbenzenesulfonate)、a-烯烃磺酸盐(alpha-olefmsulfonate)、烷基硫酸酯盐(alkylsulfate)(脂肪醇硫酸酯盐(fattyalcoholsulfate))、醇乙氧基硫酸酯盐(alcoholethoxysulfate)、仲烷基磺酸酯盐(secondaryalkanesulfonate)、a-磺基脂肪酸曱酯(alpha-sulfofattyacidmethylester)、A克基或蜂基玻J白酸(alkyl-oralkenylsuccinicacid)或急(soap)。在包含非子表面活性剂的情况中，洗涤剂通常会含有约0.2%-约40%的非离子表面活性剂，如醇乙氧基化物(alcoholethoxylate)、壬基酚乙lt&化物(nonylphenolethoxylate)、烷基多糖苷(alkylpoly-glycoside)、烷基二曱胺氧化物(alkyldimethylamineoxide)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(ethoxylatedfattyacidmonoethanolamide)、脂肪酸单乙醇酰胺(fattyacidmonoethanolamide)、多羟基烷基脂肪酸酰胺(polyhydroxyalkylfattyacidamide)、或葡糖胺的N-酰基N-烃基衍生物(N-acylN-alkylderivativesofglucosamine)("葡糖酰胺，，(glucamides))。洗涤剂可以含有0-65%的洗涤剂增清剂(builder)或络合剂(complexingagent)如沐石(zeolite)、二石粦酸盐(diphosphate)、三石粦酸盐(triphosphate)、膦酸盐(phosphonate)、碳酸盐(carbonate)、柠檬酸盐(citrate)、氮川三乙酸(nitrilotriaceticacid)、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)、二亚乙基三胺五乙酸(diethylenetriaminepentaaceticacid)、*克基或蜂基琥3白酉臾(&11<:}4-oralkenylsuccinicacid)、可溶性娃酸盐(solublesilicate)或层状娃酸盐(layeredsilicates)(例如Hoechst的SKS-6)。洗涤剂可以包含一种或多种聚合物。例子有羧曱基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)、聚(乙烯咪唑)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酉^/丙烯酸共聚物和曱基丙烯酸月桂g旨/丙烯酸共聚物。洗涤剂可以含有漂白系统，其可以包含^1202源，如过硼酸盐或过碳酸盐，其可以与形成过酸的漂白激活剂(如四乙酰基乙二胺或壬酰氧基苯磺酸盐)组合。或者，漂白系统可以包含例如酰胺、酰亚胺或^5风类型的过氧酸。本发明的洗涤剂组合物的酶可以使用常规稳定剂来实现稳定，例如多元醇如丙二醇、二乙二醇、曱基丙二醇或甘油，糖或糖醇，乳酸，硼酸或硼酸衍生物例如芳香族硼酸酯或苯基硼酸衍生物如4-曱酰基苯基硼酸或单或三乙醇胺，而且可以如例如WO92/19709、WO92/19708、US5，972,873或EP0832174中所述配制所述组合物。14洗涤剂还可以含有其它常规洗涤剂成分，例如织物调节剂(fabricconditioners)(包4舌粘土(clays))、增泡剂(foamboosters)、抑泡剂(sudssuppressors)、抗腐蚀剂(anti-corrosionagents)、悬污齐寸(soil-suspendingagents)、抗污物再沉积剂(anti-soilredepositionagents)、染泮牛(dyes)、杀纟田菌剂(bactericides),光学增亮剂(opticalbrighteners)、助水溶剂(hydrotropes)、晦暗承卩制齐'J(tarnishinhibitors)或香津+(perfUmes)。在洗涤剂组合物中，可以以对应于0.01-100mg酶蛋白质每升洗涤液、优选0.05-5mg酶蛋白质每升洗涤液、特别是0.1-lmg酶蛋白质每升洗涤液的量添加任何酶，特别是本发明的酶。地方性和地区性条件(如水硬度和洗涤温度)的变异要求地区性洗涤剂组合物。洗涤剂实例1提供了液体洗涤剂的组合物的范围。材料和方法酶在下文实施例中使用以下商品化酶。使用Alcalase⑧和Savinase⑧作为比4交的标准<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>还使用了称作枯草杆菌蛋白酶KL的蛋白酶及其变体。枯草杆菌蛋白酶KL是Savinase的Y167A+R170S+A194P变体(使用BPN，编号方式)。测定法蛋白酶相容性酶的蛋白酶相容性通过如下测定如每个实施例中所示制备洗涤剂组合物，并在该实施例中所指示的时间段后测量其它酶活性的残余活性。酶活性酶活性使用公知的、公认的标准方法来测量。洗涤剂组合物洗涤剂，或是商品化液体洗衣洗涤剂(例如Tide、Era、Gain、Cheer、Wisk、All、Purex、Arm&Hammer、Sun、GreatValue、Ariel、Persil、Total、Skip、Dash、Dixan、Ava或任何其它品牌外延)或液体洗涤剂的浓缩型式。如果所使用的商品化洗衣洗涤剂包含酶，那么在使用前通过将洗涤剂在微波炉中于85。C加热5分钟来灭活这些酶。模式洗涤剂组合物A-洗涤剂实施例l<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>实施例l向一种用于洗衣的商品化液体洗涤剂中添加如下文所列的商品化蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、和纤维素酶(如果该洗涤剂已经含有酶，那么可以通过将洗涤剂在微波炉中于高至85。C加热5分钟来灭活这些酶)。在使用枯草杆菌蛋白酶KL与商品化蛋白酶进行比较时，使用相同量的活性单位。表2-5显示了酶的稳定性，其是通过于20。C贮存1、2和4周后的％残余酶活性来测定的。贮存条件20。C，1、2、4周，在密闭玻璃容器中。表2:残余淀粉酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表3:残余脂肪酶活性周12340.5%AlcalaseUltra2.5L0.3%LipaseA画L121189枯草杆菌蛋白酶KL0,3%LipaseA100L72544638表4:残余纤维素酶活性周12340.5%AlcalaseUltra2,5L0.3%CellulaseA5000L857668枯草杆菌蛋白酶KL0.30/。CellulaseA5000L998788表5:残余蛋白酶活性周12340.5%AlcalaseUltra2.5L0.3%CellulaseA5000L86645750枯草杆菌蛋白酶KL0.3%CellulaseA5000L84746556从上文中可以看出，在选择枯草杆菌蛋白酶KL作为蛋白酶以替代Alcalase2.5L时，本发明的酶相容性显然得到了改善。如果蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶KL的话，CellulaseA5000L、LipaseA100L、Termamyl300L和AmylaseA12L于30。C贮存1、2、3和4周后的酶稳定性显然得到了改善。枯草杆菌蛋白酶KL蛋白酶就像所使用的参照蛋白酶Alcalase2.5L—样稳定。实施例2向实施例1的用于衣物的商品化液体洗涤剂中添加如下文所列的商品化蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶(如果该洗涤剂已经含有酶，那么可以通过将洗涤剂在微波炉中于高至85。C加热5分钟来灭活这些酶)。在使用枯草杆菌蛋白酶KL与商品化蛋白酶进行比较时，使用相同量的活性单位。表6-9显示了酶的稳定性，其是通过于30。C贮存1、2和4周后的°/。残余酶活性来测定的。18表6:残余淀粉酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表7:残余脂肪酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表8:残余纤维素酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表9:残余蛋白酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>从上文中可以看出，在选择枯草杆菌蛋白酶KL作为蛋白酶以替代Alcalase2.5L时，本发明的酶相容性显然得到了改善。如果选择枯草杆菌蛋白酶KL作为蛋白酶的话，CellulaseA5000L、LipaseA100L、Termamyl300L和AmylaseA12L于30。C贮存1、2、3和4周后的酶稳定性显然得到了改善。枯草杆菌蛋白酶KL蛋白酶就像所使用的参照蛋白酶Alcalase2.5L—样稳定。实施例3向一种用于衣物的商品化液体洗涤剂中添加如下文所列的商品化蛋白酶、淀粉酶、和脂肪酶(如果该洗涤剂已经含有酶，那么可以通过将洗涤剂在微波炉中于高至85。C加热5分钟来灭活这些酶)。在使用枯草杆菌蛋白酶KL与商品化蛋白酶进行比较时，使用相同量的活性单位。表10-11显示了酶的稳定性，其是通过于30。C贮存1、2、4和8周后的％残余酶活性来测定的。表10:残余淀粉酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>从上文中可以看出，在选择枯草杆菌蛋白酶KL作为蛋白酶以替代Savinase16L和Alcalase2.5L时，本发明的酶相容性显然得到了改善。如果选择枯草杆菌蛋白酶KL作为优选蛋白酶的话，LipaseAlOOL和AmylaseA12L贮存2和8周后的酶稳定性显然得到了显著改善。实施例4制备具有表13所示如下配方的液体洗涤剂。表13:洗涤剂配方子名含量氯化4丐0.1%LAS-钠盐11.81%大豆癸二酸-钠盐5.94%丙二醇5.05%C-13-氧醇乙氧基化物9.45%(C-13-Oxoalcoholethoxylat)，8EO膦酸盐1.00%椰子癸二酸-三乙醇胺盐6.50%柠檬酸钠1.00%乙醇4.63%遮光齐寸(Opacifier)0.12%香料0.35%颜料(Colour)—水，至100%所4吏用的酶蛋白酶:脂肪酶淀粉酶甘露聚糖酶:Savinase16LAlcalase2.5L枯草杆菌蛋白酶KL枯草杆菌蛋白酶KLM222S枯草杆菌蛋白酶KL+36D枯草杆菌蛋白酶KLN76D+S99SE+A230V枯草杆菌蛋白酶KLS162R枯草杆菌蛋白酶KLS99SE+N76D枯草杆菌蛋白酶KLN76D枯草杆菌蛋白酶KLA228V枯草杆菌蛋白酶KLA230V枯草杆菌蛋白酶KLA228V+A230VLipaseA100L'Termamyl300LMannanA4.0L测试设置I添力口酶I)Savinase16L(0.17mgEP/g)II)枯草杆菌蛋白酶KL(0.17mgEP/g)III)Alcalase2.5L(0.17mgEP/g)淀粉酶Termamyl300L(0.4%)蛋白酶的量以酶蛋白质(有活性的)每克[EP/g]给出。将洗涤剂配制物在密闭玻璃容器中于30。C贮存2和4周。贮存后，测定残余蛋白酶和淀粉酶活性。表14:%残余蛋白酶活性周240,17mgSavinase16L+0,4%Termamyl300L21150.17mgAlcalase2.5L+0.4%Termamyl300L23160.17mg枯草杆菌蛋白酶KL+0.4%Termamyl300L1610表15:%残余淀粉酶活性周240.17mgSavinase16L+0.4%Termamyl300L卯920.17mgAlcalase2.5L+0.4%Termamyl300L94950.17mg枯草杆菌蛋白酶KL+0.4%Termamyl300L9797测试设置n添加酶I)Savinase16L(0.07mgEP/g)II)枯草杆菌蛋白酶KL(0.07mgEP/g)III)Alcalase2.5LC0.07mgEP/g)IV)枯草杆菌蛋白酶2.5KLM222S(0.07mgEP/g)V)枯草杆菌蛋白酶2.5KL*36D(0.07mgEP/g)VI)枯草杆菌蛋白酶KLN76D+S99SE,A230VLipaseA100L(0.2%)Te腿myl300L(0.2%)MannanA4.0L(0.2%)将洗涤剂配制物在密闭玻璃容器中于30。C贮存2和4周。贮存后，测定残余蛋白酶、脂肪酶(Lip.)、甘露聚糖酶(Man.)和淀粉酶(Ter.)活性。表16:%残余蛋白酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表17:%残余淀粉酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表18:%残余脂肪酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>测试设置III添力口酶I)Savinase16L(0.05mgEP/gdet.)II)枯草杆菌蛋白酶KL(0.05mgEP/gdet.)III)Alcalase2.5L(0.05mgEP/gdet.)VII)枯草杆菌蛋白酶2.5KLS162R(0.05mgEP/gdet.)Vin)枯草杆菌蛋白酶KLS99SE+N76D(0.05mgEP/gdet.)IX)枯草杆菌蛋白酶KLN76D(0.05mgEP/gdet.)X)枯草杆菌蛋白酶KLA228V(0.05mgEP/gdet.)XI)枯草杆菌蛋白酶KLA230V(0.05mgEP/gdet.)XII)枯草杆菌蛋白酶KLA228V,A230V(0.05mgEP/gdet.)EP三酶蛋白质det=洗涤剂脂肪酶LipaseA100L(0.2%)淀粉酶Termamyl300L(0.2%)甘露聚糖酶MannanA4.0L(0.2%)将洗涤剂配制物在密闭玻璃容器中于30。C贮存1、2和3周。贮存后，测定残余蛋白酶、脂肪酶(Lip.)、甘露聚糖酶(Man.)和淀粉酶(Ter.)活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表22:%残余脂肪酶活性<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>0.05mg枯草杆菌蛋白酶KLS99SE+N76D0.2%Ter.,0.2%Lip.和0.20/0Man.98981000.05mg枯草杆菌蛋白酶KLN76D0.2%Ter.，0.2%Lip.和0.2。/。Man.8996900.05mg枯草杆菌蛋白酶KLA228V0.2%Ter.,0.2%Lip.和0.2。/。Man.9596920.05mg枯草杆菌蛋白酶KLA230V0.20/。Ter.,0.2%Lip.和0.2。/。Man.10790890.05mg枯草杆菌蛋白酶KLA228V+A230V0.2%Ter"0.2%Lip.和0.2。/。Man.97888428权利要求1.一种洗涤剂组合物，其包含与下列的至少一种酶组合的枯草杆菌蛋白酶KL或其变体蛋白酶；脂肪酶；角质酶；淀粉酶；糖酶；纤维素酶；果胶酶；果胶酸裂合酶，半纤维素酶，例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶；氧化酶，例如漆酶，或过氧化物酶。2.根据权利要求l的洗涤剂组合物，其中所述脂肪酶选自下组来自腐质霉属(Z/wm'co/a)(嗜热霉属(772em2w^ce")的脂肪酶，例如来自疏棉状腐质霉(//./"認g/"oya)(细毛嗜热霉(7:/"wwg/"oy^))或来自特异腐质霉(H/朋o/e"力的脂肪酶，假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌(/5"/^//取"&5)或类产碱假单胞菌(P;weMcfc^/ca//ge"M)、洋葱假单胞菌(Pce/ac/a)、施氏假单胞菌CPWwfeen')、焚光假单胞菌CRyMomscera)、假单胞菌属菌种菌抹SD705、威斯康星假单胞菌(PM^cwm'"m^)的脂肪酶，芽孢杆菌属(5ac/〃^)脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(及^to'fe)、嗜热脂肪芽孢杆菌(及WearaAerwo^/z//z)或短小芽孢杆菌(&/^柳7^)的脂肪酶，及它们的化学或蛋白质工程变体。3.根据权利要求1或2的洗涤剂组合物，其中所述枯草杆菌蛋白酶KL或其变体与下列的至少一种酶组合糖酶；果胶酶；果胶酸裂合酶或半纤维素酶例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶。4.根据权利要求1或2的洗涤剂组合物，其中所述淀粉酶选自下组来自芽孢杆菌属例如地衣芽孢杆菌06.//c/^m/orm/"的淀粉酶。5.根据权利要求1或2的洗涤剂组合物，其中所述纤维素酶选自下组来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、毁丝霉属(肘^^'0^/2^20^)、腐质霉属、镰孢属(Fwan'wm)、冲麦孑包壳属(77n'e/aWa)、斗支丁贞孑包霉属(/icrewow/ww)例^口来自4争异腐质酵、p^^^f^ii^(Afyce//o//2^2ora^^/7^0^/2/'/)和尖嫌孑包(7710^/"附oxjvw/orww)的纤维素酶。6.根据权利要求l-5任一项的洗涤剂组合物，其中枯草杆菌蛋白酶KL或其变体的含量与脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、半纤维素酶例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶例如漆酶、或过氧化物酶的含量之间的重量比为0.001至100,优选0.01至10，尤其是0.5至5，尤其是1至3。7.根据权利要求l-5任一项的洗涤剂组合物，其中枯草杆菌蛋白酶KL或其变体的含量为0.001-5重量％且如果存在的话，下列每种的含量为0.001-5重量％:脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、半纤维素酶，例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶例如漆酶、或过IUt物酶。8.与下列的至少一种酶组合的枯草杆菌蛋白酶KL或其变体用于制备水性液体或凝胶型洗涤剂组合物的用途蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、半纤维素酶例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶例如漆酶、或过氧化物酶，所述水性液体或凝胶型洗涤剂组合物具有增强的非蛋白酶酶类稳定性。9.用于在蛋白酶与其它酶的组合中于包含蛋白酶和至少一种非蛋白酶酶类的液体或凝胶洗涤剂组合物中增强非蛋白酶酶类的稳定性的方法，其中所述液体或凝胶洗涤剂组合物是使用枯草杆菌蛋白酶KL或其变体作为蛋白酶制备的。10.根据权利要求8的方法，其中所述至少一种非蛋白酶酶类选自脂肪酶，角质酶，淀粉酶，糖酶，纤维素酶，果胶酶，果胶酸裂合酶，半纤维素酶例如甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶，氧化酶例如漆酶、或过氧化物酶。全文摘要本发明披露了新的洗涤剂组合物及其中酶组合的使用。对于所述组合物中存在的非蛋白酶酶类，该组合物具有增强的非蛋白酶酶类稳定性。文档编号C11D3/386GK101522878SQ200780037528公开日2009年9月2日申请日期2007年10月8日优先权日2006年10月6日发明者克劳斯·拉德福吉德,尼尔斯·M·赖奥姆,桑德拉·弗里斯-詹森,迈克尔·米克尔森申请人:诺维信公司