专利名称：活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化性细胞障碍抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化性细胞障碍抑制剂。
背景技术：
近年来，活性氧，尤其作为使生物体氧化的因素而为人们所知，但是，对生物体的 不良影响正成为一个问题。活性氧在生物体细胞内能量代谢过程中产生，可以分为过氧化 物(即氧分子的电子还原中产生的过氧化物阴离子· 02-)、双氧水(H202)、乙烯基自由 基(·0Η)以及纯态氧C02)等。这些活性氧是吞噬细胞的杀菌机构所必须的，在驱除细菌、 癌细胞过程中发挥重要作用。但是，活性氧的过量生成攻击构成生物体内膜和组织的生物体内分子，诱发各种 疾病。由于细胞内所含过氧化物歧化酶(SOD)的催化作用，通常，在生物体内产生并成为其 他活性氧促发物质的过氧化物逐渐被清除。当过氧化物的产生过剩或者SOD的作用降低 时，则过氧化物的清除不充分，过氧化物的浓度增高，将引起类风湿性关节炎等组织障碍、 心肌梗塞、脑中风、白内障、皱纹、糖尿病、动脉硬化、肩膀酸痛、冷敏感等。尤其是因皮肤直接接受紫外线等环境因素的刺激，过氧化物容易影响器官，所以， 通过过氧化物浓度的上升，例如分解胶原蛋白等生物体组织、变形、架桥，生成能氧化各种 油脂、障碍细胞的过氧脂质，由活性氧引起的障碍成为皮肤皱纹、皮肤弹性降低等老化的原 因；所以，通过抑制活性氧、生物体内自由基的生成，可以预防、治疗或改善皱纹形成、弹性 降低等皮肤老化、类风湿性关节炎、贝切特氏病等组织伤害、心肌梗塞、脑中风、白内障、糖 尿病、动脉硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧参与的各种障碍。活性氧能引起炎症、过氧脂质的生成、各种酶失去活性、DNA受损等。这些氧化的 细胞障碍被认为是皮肤粗糙、皱纹形成、皮肤弹性降低等皮肤老化的一个原因。所以，基于安全考虑，试图将活性氧清除物质、自由基清除物质等从合适的天然物 中获取，具有该作用的物质有十字花科芸苔属植物的提取物(参照专利文献1)等。另外， 作为抑制因活性氧而产生的氧化的细胞障碍，西洋黑种草、胡黄连、水牛膝草的提取物(参 照专利文献2)正为人们所知。
发明内容
本发明的目的以来自安全性高的天然提取物并具有活性氧清除作用、自由基清 除作用、氧化的细胞障碍抑制作用的物质为中心，提供以该物质为有效成分的活性氧清除 剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂。为达成以上目的，关于本发明的活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化的细胞障 碍抑制剂，其特征为以猕猴桃采摘果实的提取物为有效成分。在本发明中，“猕猴桃采摘果实”是指在猕猴桃栽培过程中，为了将猕猴桃采摘果 实的含糖量和大小提高到希望的范围而隔开距离(修剪)的果实，果实的具体情况是含糖 量为3. 0-7.0%，最佳为4.0-5. 5%;大小(长半径)为Hcm，最佳为2_3cm。
在本发明中，“氧化的细胞障碍”是指因活性氧而产生的细胞障碍，尤其是炎症、 过氧脂质的生成、各种酶失去活性、DNA损伤等氧化障碍，也包括皮肤组织障碍等组织障碍。 另外，作为因活性氧而产生障碍的细胞仅限于因活性氧而产生障碍的生物体细胞，但不属 于被特别限定的物质。发明的效果根据本发明，以天然物“猕猴桃采摘果实”的提取物为有效成分，可以提供安全性 很高的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂。
具体实施例方式以下对本发明的一个实施过程进行说明。关于本实施过程的活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化的细胞障碍抑制剂，以 猕猴桃(学名Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))采摘果实的提取物为有 效成分。这里，在本实施过程中，“提取物”中含有以猕猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))采摘果实为提取原料而得到的提取液、该提取液的稀释液或浓 缩液、将该提取液干燥以后得到的干燥物、或者以上物质的某一种粗/精加工物或精加工 物。称猴桃(学名Actinidiachinensis Planch. (Actinidiaceae))是属于称猴桃 科猕猴桃属的落叶攀缘灌木，在日本各地都有栽培，其果实很容易从栽培地区获得。作为提 取原料而被利用的猕猴桃的部位是采摘果实。另外，在本发明中，作为提取原料而被利用的 猕猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))的栽培品种没有特别的限定，但 是，憬红色、苹果猕猴桃、红心、金王、小林39、Viewer Country、始皇帝、泪珠、红鲜、葡萄猕 猴桃、赞岐黄金、丰蜜等是使用的最佳品种。对于作为提取原料而被使用的猕猴桃的采摘果实，其含糖量为3. 0-7.0%，大小 (长半径)为l-4cm，最佳糖量为4. 0-5. 5 %，大小(长半径)为2_3cm。关于猕猴桃采摘果实的提取物，将提取原料用粉碎机器，通过提取的溶剂进行提 取，最后得到提取物。作为提取的溶剂，使用极性溶剂比较好，例如水、亲水性有机溶剂等，单独或混合 两种以上，在常温或溶剂沸点以下使用比较好。作为提取的溶剂而使用的水除了纯净水、自来水、井水、矿泉水、温泉水、淡水、酸 性或碱性离子水、海洋深层水等以外，也包括对它们处理后的水。对水的处理包括精制、加 热、杀菌、过滤、离子交换、渗透压调整、缓冲化等。因此，在本发明中，作为提取的溶剂而使 用的水，也包括精制水、热水、离子交换水、生理食盐水、磷酸缓冲液、磷酸缓冲生理食盐水寸。作为提取的溶剂而使用的亲水性有机溶剂有甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等碳原子 数在1-5的低级脂肪族乙醇；丙酮、丁酮等低级脂肪族酮；1，3_丁二醇、丙二醇、丙三醇等碳 原子数在2-5的多价乙醇等。将两种以上极性溶剂的混合液作为提取溶剂进行使用时，其混合比例可以适当地 进行调整。例如在使用水和低级脂肪族乙醇的混合液时，对于1体积的水，最好混合1-100
4体积的低级脂肪族乙醇；在使用水和低级脂肪族酮的混合液时，对于1体积的水，最好混合 1-100体积的低级脂肪族酮；在使用水和多价乙醇的混合液时，对于1体积的水，最好混合 1-100体积的多价乙醇。在提取处理中，将提取的原料中所含的可溶性成分在提取溶剂中溶解，无特殊限 定，可以采用常用的方法。例如在相当于提取原料5-15倍(比重)的提取溶剂中，浸入提 取原料，在常温或回流加热下，提取可溶性成分；然后，通过过滤并清除残渣而获得提取液。 对于获得的提取液，为了得到该提取液的稀释液或浓缩液、该提取液的干燥物、粗/精制物 或精制物，根据常用方法，进行稀释、浓缩、干燥、精制等处理。在精制中，可以通过活性炭处理、吸附树脂处理、离子交换树脂处理等进行实施。 获得的提取液可以直接作为活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂的有效 成分进行使用，但是，如果作为浓缩液或干燥物，则比较容易使用。猕猴桃采摘果实的提取物具有特有的气味，所以，在不降低其生理活性的情况下， 可以实施以退色、除臭等为目的的精制，但在用于皮肤化妆品等方面时，不能大量使用。因 此，即使未精制也可以使用。如上所述，从猕猴桃采摘果实获得的提取物具有活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的细胞障碍抑制作用，所以，可以利用其各个作用，将其作为活性氧清除剂、自由基 清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂的有效成分进行使用。另外，从下述的实施事例可以看出，猕猴桃采摘果实从获得的提取物具有表皮角 化细胞增殖促进作用、丝聚蛋白原mRNA发现促进作用、紫外线照射引起的细胞障碍抑制作 用，因此，利用其各自的作用，可以将该提取物作为抗老化剂、表皮角化细胞增殖促进剂、丝 聚蛋白原mRNA发现促进剂、紫外线照射引起的细胞障碍抑制剂的有效成分。关于上述各种药剂的成分，可以只是猕猴桃采摘果实的提取物，也可以是猕猴桃 采摘果实的提取物的制剂。在猕猴桃采摘果实的提取物中，使用糊精、环糊精等药物学上允许的物质及其他 任何助剂，根据通常的方法，可以制成粉末状、颗粒状、药丸状、液状等任意形式。此时，可以 使用助剂，例如赋形齐 、结合剂、崩溃剂、润滑齐 、稳定齐 、除臭剂等。另外，猕猴桃采摘果实 的提取物可以与其他成分(皮肤化妆品等)一起使用。另外，对于本实施过程的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂， 如果需要，可以与具有活性氧清除作用、自由基清除作用、氧化的细胞障碍抑制作用的其他 天然提取物等一起作为有效成分进行使用。关于本实施过程的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂的使用 方法，通常，有经皮实施等，但是，最好灵活采取符合预防、治疗等的方法(经皮实施、经黏 膜实施)。关于本实施过程的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂的使用 量，也要根据疾病种类、重症程度、患者的个人差另I」、使用方法、使用期间等，进行合理增减。关于本实施过程的活性氧清除剂，通过猕猴桃采摘果实的提取物所拥有的活性氧 清除作用，可以预防、治疗或改善皱纹形成、弹性降低等皮肤老化、类风湿性关节炎、贝切特 氏病等组织伤害、心肌梗塞、脑中风、白内障、糖尿病、动脉硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性 氧参与的各种障碍。然而，关于本实施过程的活性氧清除剂，也可以用于以上用途以外能发挥活性氧清除作用的所有用途。关于本实施过程的自由基清除剂，通过猕猴桃采摘果实的提取物所拥有的自由 基清除作用，可以预防或改善皱纹形成、弹性降低等皮肤老化、类风湿性关节炎、贝切特氏 病等组织伤害、心肌梗塞、脑中风、白内障、糖尿病、动脉硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧 (自由基)参与的各种障碍。然而，关于本实施过程的自由基清除剂，也可以用于以上用途 以外能发挥自由基清除作用的所有用途。关于本实施过程的氧化的细胞障碍抑制剂，通过猕猴桃采摘果实的提取物所拥有 的氧化的细胞障碍抑制作用，可以抑制因活性氧引起的细胞障碍，结果是可以预防或改善 皮肤粗糙、皱纹形成、皮肤弹性降低等皮肤老化等。然而，关于本实施过程的细胞障碍抑制 剂，也可以用于以上用途以外能发挥细胞障碍抑制作用的所有用途。猕猴桃采摘果实的提取物具有活性氧清除作用、自由基清除作用、氧化的细胞障 碍抑制作用，在用于皮肤时，使用效果和安全性俱佳，所以，若配合皮肤化妆品使用，则效果 更佳。此时，对于皮肤化妆品，可以直接与猕猴桃采摘果实的提取物一起使用，也可以与 猕猴桃采摘果实的提取物制成的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂一 起使用。通过同时使用猕猴桃采摘果实的提取物或者由该提取物制成的活性氧清除剂、自 由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂，能对皮肤化妆品提供活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的细胞障碍抑制作用。对于与猕猴桃采摘果实的提取物一起使用的皮肤化妆品，其种类不固定，例如软 膏、霜、乳液、洗剂、面膜、底妆等。将猕猴桃采摘果实的提取物等与皮肤化妆品一起使用时，根据皮肤化妆品的种 类，可以适当调整提取物的用量。但是，合适的比例为0.0005-0. 45%重量(固体时)，最佳 比例为0. 005-0. 05%重量(固体时)。另外，由下文的实施事例可以看出，与猕猴桃熟透果 实的提取物相比，在更低浓度下，猕猴桃采摘果实的提取物具有活性氧清除作用、自由基清 除作用、氧化的细胞障碍抑制作用、紫外线照射引起的细胞障碍抑制作用、表皮角化细胞增 殖促进作用、丝聚蛋白原mRNA发现促进作用。所以，即使猕猴桃采摘果实的提取物与皮肤 化妆品的比例很低-0. 0005-0. 001%重量(固体时)，也能使皮肤化妆品产生理想的作用。上述皮肤化妆品不影响猕猴桃采摘果实的提取物所具有的活性氧清除作用、自由 基清除作用、氧化的细胞障碍抑制作用、紫外线照射引起的细胞障碍抑制作用、表皮角化细 胞增殖促进作用、丝聚蛋白原mRNA发现促进作用，可以与普通皮肤化妆品生产中使用的主 要药剂、助剂或其他成分(例如收敛剂、杀菌/抗菌剂、紫外线吸收剂、保湿剂、细胞刺激 剂、消炎/抗过敏剂、抗氧化/活性氧清除剂、油脂类、油性物质、碳氢类、脂肪酸类、乙醇类、 酯类、表面活性剂、香料等)同时使用。这样，通过同时使用，使其成为大众商品，以与上述 成分发生增效作用，并产生极佳的使用效果。上述皮肤化妆品具有很高的安全性，而且，在由活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的细胞障碍抑制作用、紫外线照射引起的细胞障碍抑制作用、表皮角化细胞增殖促 进作用、丝聚蛋白原mRNA发现促进作用组成的群里选择1种或2种以上的作用，可以预防、 治疗或改善皱纹形成、弹性降低等皮肤老化、类风湿性关节炎、贝切特氏病等组织伤害、心肌梗塞、脑中风、白内障、糖尿病、动脉硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧参与的各种障碍。另外，本实施过程的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂可完全 用于人，但是，各作用效果明显，也可以用于人以外的动物。〔实施例〕以下表示实施事例和比较事例，对本发明进行详细说明，本发明不受以下各例的 限制。〔实施例1〕猕猴桃采摘果实提取物的制造在称猴桃(Actinidiachinensis Planch. (Actinidiaceae)，憬红色种)采摘果实 (含糖量4. 3%，长半径:2cm)的粉碎物200g中，加入提取溶剂(精制水)400mL，在30°C条 件下加温、提取1小时，热过滤。关于残渣，则进行同样的提取处理。将获得的提取液混合， 在减压条件下浓缩，干燥以后，得到猕猴桃采摘果实的提取物5. 5g。〔比较例〕猕猴桃果实提取物的制造除了称猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae)，憬红色种)熟透果 实(含糖量13.4%，长半径5cm)的粉碎物200g以外，其他内容与实施事例1相同，得到 猕猴桃果实的提取物18. 5g。〔试验例1〕过氧化物清除作用试验(NBT法)关于实施事例1的猕猴桃采摘果实提取物、比较事例1的猕猴桃果实提取物，按照 以下方法，对过氧化物清除作用进行试验。在试验管内加入0. 05M的NaHC03缓冲液(pH10. 2) 2. 4mL,再加入3mM的黄嘌呤、 3nM 的 EDTA、50ug/mL 的牛血清清蛋白溶液、0. 75mM 的 NBT (nitroblue tetrazolium)，每次 0. lmL，然后加入样品溶液(实施事例1和比较事例1，样品的浓度请参照下表1)0. lmL，在 25°C条件下放置10分钟。然后，加入酶溶液“黄嘌呤氧化酶”0. lmL，立即搅拌，在25°C条件 下使其反应20分钟。之后，加入6mM的氯化铜0. ImL,使反应停止，测试波长560nm时的吸 光度。在不加入酶溶液的情况下，实施同样的操作、吸光度的测试；然后，在不加入样品 溶液而加入蒸馏水的情况下，实施同样的测试。根据得到的结果，由以下公式算出过氧化物 清除率(％)。过氧化物清除率(%) = {1-(A-B) / (C-D)} X 100这里，A表示“酶溶液添加、样品溶液添加时的吸光度”，B表示“酶溶液不添加、样 品溶液添加时的吸光度”，C表示“酶溶液添力卩、样品溶液不添加时的吸光度”，D表示“酶溶 液不添加、样品溶液不添加时的吸光度”。结果如表1所示。表1
权利要求
1.一种活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化性细胞障碍抑制剂，其特征在于，包括 活性氧清除剂，所述活性氧清除剂以猕猴桃采摘果实的提取物为有效成分。
2.一种活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化性细胞障碍抑制剂，其特征在于，包括 自由基清除剂，所述自由基清除剂以猕猴桃采摘果实的提取物为有效成分。
3.一种活性氧清除剂、自由基清除剂以及氧化性细胞障碍抑制剂，其特征在于，包括 自由基清除剂，所述自由基清除剂以猕猴桃采摘果实的提取物为有效成分；氧化性细胞障 碍抑制剂，所述氧化性细胞障碍抑制剂以猕猴桃采摘果实的提取物为有效成分。
全文摘要
本发明提供一种以安全性高的天然提取物为有效成分的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂。在本发明所说明的活性氧清除剂、自由基清除剂、氧化的细胞障碍抑制剂中，获取猕猴桃采摘果实的提取物。
文档编号A61Q19/08GK102125585SQ20101056571
公开日2011年7月20日 申请日期2010年11月30日 优先权日2010年1月12日
发明者小谷麻由美, 田部早已, 藤田晃人 申请人:株式会社布伦克蕾喜