一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物有机肥技术领域，具体涉及一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制 备方法。
【背景技术】
[0002] "草莓"素有"水果皇后"之称，深受消费者喜爱。但"重茬病"是草莓栽培的一大难 题，其带来的草莓苗成活率低、结果少、病果\畸果多、果品品质下降等问题给草莓种植者带 来了极大的经济损失。许多研究指出，"重茬病"的主要病因归结为土壤病原菌增多、自毒物 质增多和土壤营养元素亏缺三方面。在提倡绿色、环保、有机、无公害生产的今天，化学农药 正逐渐被生物农药取代，化肥的使用量也正在减少，有机肥的重要性被提到新的高度。
[0003]蘑菇菌渣是种植食用菌以后的废菌糠，常由稻草、玉米芯、麦秸等组成，栽培后的 菌渣不仅含有粗蛋白、粗纤维、粗脂肪、氮、磷、钾、钙、氨基酸等各类营养物质，还含有种类 繁多、数量庞大的微生物群落，尤其是纤维素降解类真菌数量较多，它们分泌的纤维素降解 酶和水解酶也较多。每年在种植蘑菇的地方都会产生大量菌渣，这些菌渣往往被就菇农抛 弃，这不仅是对资源的浪费，还会对环境造成污染。菇渣的肥料化一直是菇渣有效再利用的 重要途径之一。如专利（【申请号】200910262948.3)就是对菇渣及禽畜粪便采用微生物发酵 技术进行处理后作为人造基质或有机肥再利用。菇渣质优价廉，将其作为发酵基质与功能 菌种相配合制成生物菌肥，有很好的应用前景和开发价值。
[0004] 申请号为：201210021687.8,名称为:《一种防治草莓重茬病的生防制剂及制备方 法》的发明专利中提到一种防治草莓重茬病的生防制剂，以山百混合物（山柰与百部等重量 比）、玉米秸杆粉、麦麸为固体原料，以解酚菌为生防菌制成生防制剂很适合用于草莓重茬 地块，该制剂施入重茬地块后，能明显减轻土传病害的发病程度，降低土壤中强自毒物质对 羟基苯甲酸和苯甲酸的含量，促进草莓生长指标的发育，最终能显著提高草莓产量。本发明 产品主要适用于草莓枯萎病、菌核病和黄萎病等土传病害的防治，有利于优化草莓重茬土 壤的理化性状，不污染环境，对人畜安全，成本低，施用方便。但该菌剂配方中含有苦参、枳 实等6种中药材，来源并不十分广泛，而且他获得的是生物菌剂成品，因此制作不易，且难以 进行扩大化生产，且只有生物农药的作用而没有生物肥料的效果。
【发明内容】
[0005]本发明为了解决草莓重茬病的防治且同时提供草莓生物有机肥的问题，提供了一 种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法。
[0006]本发明由如下技术方案实现的：一种草莓专用抗重茬生物有机肥的制备方法，将 畜禽奠和食用菌栽培后的菌渣混合，用解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens) JN2、沼泽红假单胞菌（Rhodopseudanonaspalustris)和黑曲霉（Aspergillusnige)发 酵食用菌栽培后的菌渣和畜禽粪的混合物，即为草莓专用抗重茬生物有机肥，具体制备方 法如下： (1) 基质混合:将食用菌栽培后的菌渣与牛粪按重量比1:1混合均匀，调整C/N比值为20 ~30，pH值调至中性，水分调节至55-65%; (2) 菌剂的制备： A. 解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)JN2菌液的制备:4°C保存的解淀粉 芽孢杆菌JN2接种于羧甲基纤维素钠液体培养基上37°C，100~150rpm摇床培养过夜，制备成 种子液； 将种子液按体积比1%~5%的接种量接种于发酵罐中灭菌的羧甲基纤维素钠液体培养 基中，罐内压保持0.02-0.04MPa，温度37°C，溶解氧1.8 ±0.2mg/L，转速150r/min，发酵培养 两天，得到JN2发酵液，检测发酵液中有效活菌数为4X108cfu/mL; B. 沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonaspalustris)菌液的制备:GH培养基装满整支 试管，将沼泽红假单胞菌菌种无菌条件接种于GH培养基中，温度30°C，光照强度5000LX静置 厌氧培养，至菌液变为深红色即得种子液； 将沼泽红假单胞菌扩大培养，培养基和培养条件与制备种子液的方法相同；当菌液颜 色变成深红色时，得到沼泽红假单胞菌发酵液，检测发酵液中有效活菌数为4X108cfu/mL; C. 黑曲霉（Aspergillusnige)菌剂的制备:黑曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖固体培 养基平板上，28°C温度倒置黑暗培养，待长出新鲜菌丝后，挑菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体 培养基中，28°C，100~150rpm摇床培养，待培养基中长出大量菌丝团后，即获得黑曲霉种子 液； 将小麦麸皮洒水拌匀，制成含水率55-65%的麸皮培养基，110-120°C高压灭菌后冷却， 按每千克麸皮培养基接入150mL菌液的比例接入黑曲霉种子液，搅拌均匀，28°C静置培养至 大量孢子产生时停止培养，将培养物置于30°C烘箱内烘干后即得黑曲霉菌粉； (3) 接种微生物发酵:按每平方米混合肥料中接入10kg的比例向混合肥料中加入黑曲 霉菌粉，拌匀后堆置发酵，当温度低于50°C时翻堆后继续发酵，发酵时间为30~45天;发酵完 成后，按每平方混合肥料中接入10L的比例分别加入解淀粉芽孢杆菌菌液和沼泽红假单胞 菌菌液，调整pH值为6~7,水分含量为55-65%，搅拌均匀后，摊成15-25cm的薄层进行第二次 发酵，控制温度为25~30°C，发酵7~10天后，将其搅拌均匀风干至含水率<15%，即得到草莓 专用抗重茬生物有机肥。
[0007] 所述羧甲基纤维素钠培养基配方为:羧甲基纤维素钠15g/L，酵母粉lg/L，磷酸二 氢钾lg/L，硝酸铵lg/L，硫酸镁0.5g/L;所述GH培养基配方为:磷酸二氢钾lg/L，乙酸钠lg/ L，硫酸镁0.5g/L，硫酸铵lg/L，氯化钠lg/L，氯化妈0.lg/L，琥?自酸钠lg/L，酵母粉0.5g/L， 蛋白胨〇.58/1，？!1值6.2。
[0008] 所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)JN2在中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为:CGMCCNo: 10677，保藏日期为:2015年4月1 日，保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码 为100101。
[0009] 所述沼泽红假单胞菌(Rhodopseudanonaspalustris)菌种购自中国农业微生物 菌种保藏管理中心，编号ACCC10649。所述黑曲霉（Aspergillusnige)菌种购自中国普通 微生物菌种保藏管理中心，编号CGMCC3.6477。
[0010] 所制备的草莓专用抗重茬生物有机肥总有效活菌数含量2 4X108CFU/mL。
[0011] 本发明所采用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)JN2针对草莓重 荏病的主要病原菌，对灰葡萄孢霉（BotrytiscinereaPers.，引起灰霉病）、镰刀菌属 (Fusariumspp.，引起枯萎病）、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis，引起叶斑病）具有较强诘 抗作用，同时兼有良好的纤维素降解作用，与沼泽红假单胞菌（Rhodopseudanonas palustris)和黑曲霉（Aspergillusnige)复合作为功能菌群。沼泽红假单胞菌具有增强 植物养分吸收、解毒和刺激植物生长功效;黑曲霉对纤维素具有较强分解能力。将价格低廉 且资源广泛的食用菌栽培后的菌渣和畜禽粪作为主要原料，用制备的复合功能菌群发酵， 发酵后的产物即为能有效防治草莓重茬障害的生物有机肥。
[0012] 本发明所制备的草莓专用抗重茬生物有机肥与其它生物有机肥的区别在于，它同 时具有下列两种功能：（1)它针对草莓重茬病的主要三种病原菌有较强的拮抗作用，对草莓 重茬病有较高的防效。（2)食用菌栽培后的菌渣中含有丰富的有机质、矿质元素、微量元素、 有机营养物质及生物活性成分等，一方面使得以它为主要原料生产出来的有机肥具有养分 多样性、均衡性和长效性的特点，另一面为添加的功能微生物菌株生长提供了较好的物质 基础，有利于功能菌群的定殖和增殖。该生物有机肥是药也是肥，一招解决了重茬草莓的病 害和肥力问题，质优价廉，有很好的应用前景和开发价值。
【附图说明】
[0013] 图1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)JN2在羧甲基纤维素钠固 体平板上培养2天后刚果红染色显示透明圈的结果图；图2为JN2菌株在羧甲基纤维素钠固 体平板上的形态特征图；图3为JN2菌种在40倍显微镜下观察细胞形态图；图4为活体组织法 测定JN2菌株对灰霉病的防效实验结果图，图中左图为对照组无菌水处理组，右图为JN2发 酵液处理组；图5为解淀粉芽孢杆菌JN2对镰刀菌属和拟盘多毛孢属病原菌的的平板对峙结 果图，图中：A:镰刀菌对照;B镰刀菌与JN2对峙；C:拟盘多毛孢菌对照;D:拟盘多毛孢菌与 JN2对峙；图6为还原糖法测定JN2菌株的滤纸酶活力和羧甲基纤维素