2－炔基腺苷衍生物的制备方法

专利名称：2－炔基腺苷衍生物的制备方法
技术领域：
本发明涉及2-炔基腺苷衍生物的改良制备方法，具体地说，在某些的实施方案中涉及腺苷受体激动剂这类2-炔基腺苷衍生物的改良制备方法，更具体地说，在某些的实施方案中涉及A2腺苷受体激动剂这类2-炔基腺苷衍生物的改良制备方法。
背景技术：
已知腺苷参与调节许多生理机能。在心血管系统，腺苷是一种强血管舒张剂与心脏抑制剂。在中枢神经系统，腺苷产生镇静、抗焦虑和抗癫痫作用。在肾脏，腺苷发挥双向调节作用，低浓度时产生血管收缩作用，而在高剂量时产生血管舒张作用。腺苷是脂肪细胞的脂解抑制剂和血小板抗凝集剂。(Stone T.W.，嘌呤受体及其药理作用(Purine Receptors and their Pharmacological Roles)，Advancesin Drug Research，Academic Press Limited，1989，18，291-429；ProgressCardiovasc.Dis.1989，32，73-97)许多研究显示腺苷的作用由位于细胞膜的两种受体亚型介导一种为高亲和性亚型，抑制腺苷酸环化酶活性(A1受体)，另一种为低亲和性亚型，兴奋同一种酶的活性(A2受体)(J.Med.Chem.1982，25，197-207；Physiol.Rev.1990，70(3)，761-845；J.Med.Chem.1992，35，407-422)。这两种受体均广泛分布在机体的不同系统。然而在一些组织中仅主要存在所述受体中的一个亚型。例如，在心脏A1受体远多于A2受体，而在血管与血小板A2受体远多于A1受体。能选择性作用于A1或A2受体的化合物可具有令人感兴趣的药理学模式。而且，作用于A2受体的化合物的血管舒张活性与抗血小板凝集作用可导致其在治疗严重心血管疾病，如缺血性心脏病、高血压与动脉粥样硬化，中的有益治疗应用。此外，由于具有中枢神经系统作用，选择性作用于A2受体的药物的使用可考虑用于治疗脑血管缺血、癫痫及多种情绪紊乱，如焦虑与精神病。以前，仅仅有腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺(ethyluronamide)或NECA(Mol.Pharmacol.，1986，25，331-336)是除腺苷之外已知的具A2受体激动活性的化合物。遗憾的是，NECA也作用于A1受体，因而缺少单独针对A2受体的专一性。因为NECA是唯一能得到的具A2受体亲和性的化合物，所以NECA被用来进行受体结合的药理学试验。不过最近已开发出某些具A2受体选择性的NECA衍生物。这些化合物是C2位有苯氨基取代的NECA衍生物。例如，化合物2-(对-(羧乙基)苯乙氨基)-5’-N-乙基糖醛酰胺，命名为CGS 21680(J.Pharmacol Exp.Ther.，1989，251，888-893)，已成为A2受体药理学研究的参比化合物。其它具选择性A2受体激动活性的嘌呤衍生物在例如GB-A-2203149；EP-A-0309112；EP-A-0267878；EP-A-0277917和EP-A-0323807中被公开。在嘌呤基2位的取代被认为有希望产生所需的选择性(J.Med.Chem.1992，35，407-422)。2-炔基嘌呤衍生物已在EP-A-0219876和US-A-4,956,345中公开。US-A-5,593,975公开了乙炔位有芳基，杂环或羟烷基取代的2-炔基腺苷衍生物，且其核糖核苷残基有N-烷基-(或环烷基)-糖醛酰胺取代。据报道这些化合物显示出强A2受体激动选择性，因此对于心血管疾病，如心脏缺血、高血压和动脉粥样硬化，及中枢神经系统疾病，如脑血管缺血、癫痫和情绪紊乱(焦虑和精神病)的治疗有用。US-A-5,593,975中的2-炔基腺苷衍生物具以下通式 其中R是氢、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、苯基C1-C3烷基；其中R1具以下一种含义(a)任选被1至3个卤素原子(氯、氟或溴)、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、C2-C6烷氧羰基、C2-C6烷氧烷基、C1-C6烷硫基、硫基(thio)、CHO、氰甲基、硝基、氰基、羟基、羧基、C2-C6酰基、氨基、C1-C3单烷基氨基、C2-C6二烷基氨基、亚甲二氧基取代的苯基或萘基；或氨基羰基；(b)式为-(CH2)m-Het的基团，其中m为0或为1至3的整数，Het为5或6元芳香杂环或非芳香杂环，任选地与苯稠合的、含1至3个由氧、氮或硫中选取的杂原子、通过碳原子或氮原子连接；(c)任选含有不饱和键或C2-C4链烯基的C3-Cx环烷基；(d)下式的各部分为 其中R2为氢、甲基或苯基；R4为羟基、氨基、二烷基氨基、卤素或氰基；R5为氢、C1-C6直链或支链烷基、C5-C6环烷基或C3-C7环烯基、苯基-C1-C2-烷基或R2与R5一起形成一个五或六元碳环或R3为氢，R2和R4一起形成一个氧代基团或一个相应的缩醛衍生物；如R不是氢且/或R3不是乙基，R也可以是C1-C6直链或支链烷基；且n为0或在1至4取值；且其中R3为C1-C6烷基、C3-C7环烷基、苯基或苯甲基；如R不是氢或R为氢且R3为环戊基、苯基或苯甲基，R1也可以是C1-C6直链或支链烷基。US-A-5,593,975中的2-炔基腺苷化合物按如下的通用合成方案制备。
方案I 方案II 在方案I与II中，R′及R′1分别与R及R1具相同含意，或它们是可以分别转化成R及R1的基团，例如，通过除去与反应条件相容的可在R′和R′1上存在的任何保护基团；Y为溴或碘，X为氯、溴或碘。方案I与II列出的反应是在催化剂(例如二氯双(三苯基膦)钯和卤化亚铜)和一种合适的酸结合剂，如有机碱(例如三乙胺、二异丙基乙胺或吡啶)，存在的条件下进行的。作为溶剂，优选使用取代酰胺(如二甲基甲酰胺)、醚(如二氧杂环己烷或四氢呋喃)、乙腈或任选所述溶剂中的两种或多种组成的混合溶剂。式II化合物，其中Y为碘，R′为氢，可按如下的方案III由2-碘腺苷制备(Nair等，Synthesis，1982，670-672)方案III
式VIII化合物，其中Y为碘，R′不是氢，可按如下的方案IV制备方案IV
在上述方案IV中，R、R1与R3与前述定义相同。式V化合物由式II化合物与乙炔衍生物，例如1-三甲基甲硅烷基乙炔的反应，在所报道的化合物II与III之间的反应的条件下制备。化合物III与IV为已知化合物或可按众所周知的方法制备。
US-B-6,322,771公开了式IX化合物
其中(a)每个R各自为氢、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、苯基或苯基(C1-C3)-烷基；(b)X为-CH2OH、-CO2R2、-OC(O)R2、-CH2OC(O)R2或-C(O)NR3R4；(c)R2、R3及R4各自为氢、C1-C6-烷基；被1-3个C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6-烷硫基、卤素、羟基、氨基、单(C1-C6-烷基)氨基、二(C1-C6-烷基)氨基或C6-C10-芳基取代的C1-C6-烷基，其中芳基可被1-3个卤素、C1-C6-烷基、羟基、氨基、单(C1-C6-烷基)氨基或二(C1-C6-烷基)氨基取代；C6-C10-芳基；或被1-3个卤素、羟基、氨基、单(C1-C6-烷基)氨基、二(C1-C6-烷基)氨基或C1-C6-烷基取代的C6-C10-芳基；(d)R1为(X-(Z)-)n[(C3-C10)环烷基]-(Z′)-，其中Z与Z′各自为任选被1-3个硫或非过氧化的氧间隔的(C1-C10)烷基，或不存在，n在1至3取值。
据公开式IX化合物可用在US-A-5,278,150、US-A-5,140,015、US-A-5,877,180、US-A-5,593,975与US-A-4,956,345中公开的合成方法制备。US-B-6,322,771公开了优选的式IX化合物，其中每个R为氢，X为乙基氨基羰基而R1为4-羧基环己基甲基(DWH-146a)，R1为4-甲氧基羰基环己基甲基(DWH-146e)或R1为4-乙酰氧甲基-环己基甲基(JMR-193) 依照US-B-6,322,771，4[3-(6-氨基-9(5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羟基四氢-Z-呋喃-9H-2-嘌呤基)-2-丙炔基]-1-环己烷甲酸甲酯(DWH-146e)的合成是通过使用钯(II)催化剂由碘代腺苷衍生物(N-乙基-1′-脱氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-D-呋喃核糖醛酰胺(ribofuranuoramide)与4-(2-丙炔基)-1-环己烷甲酸甲酯的交叉偶联(cross coupling)完成的。此碘代腺苷衍生物首先由鸟苷制得，用乙酸酐处理鸟苷使其糖基上的羟基乙酰化。所得的化合物再用氯化四甲铵与三氯氧化磷于6位氯化。2位碘化通过改良的Sandmeyer反应完成，此后用氨置换6-Cl与糖基上的乙酯基。2′与3′-羟基保护成丙酮化合物(acetonide)，5′-羟基用高锰酸钾氧化成酸。将2′与3′位的丙酮化合物脱保护，用乙醇使5′位的酸发生Fisher酯化，并将所得乙酯用乙胺转换成-乙基酰胺即得N-乙基-1′-脱氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-D-呋喃核糖醛酰胺。乙炔[4-(2-丙炔基)-1-环己烷甲酸甲酯]由反式-1，4-环己烷二甲醇(cyclohexanedimethanol)起始合成。首先，反式-二醇单甲苯磺酰化，此后用乙炔负离子置换甲苯磺酰基。所制得的羟基乙炔类型的羟基用Jones试剂氧化成酸，接着用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷使之甲基化制得4-(2-丙炔基)-1-环己烷甲酸甲酯。接着进行N-乙基-1′-脱氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-D-呋喃核糖醛酰胺与4-(2-丙炔基)-1-环己烷甲酸甲酯间的交叉偶联反应。在N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)、乙腈(1mL)、三乙胺(0.25mL)及N-乙基-1′-脱氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-D-呋喃核糖醛酰胺(25mg，0.06mmol)的溶液中，加入二氯双(三苯基膦)钯(1mg，2mol％)与碘化亚铜(0.06mg，0.5mol％)。向所得混合物中加入4-(2-丙炔基)-1-环己烷甲酸甲酯(54mg，0.3mmol)，反应在氮气保护下搅拌16小时。减压除去溶剂，所得残留物在20％甲醇的氯仿液中进行快速色谱分离(Rf＝0.45)，制得19mg(白色固体，熔点125℃(分解))4[3-(6-氨基-9(5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羟基四氢-Z-呋喃基)-9H-2-嘌呤基)-2-丙炔基]-1-环己烷甲酸甲酯(DWH-146e)。这些上述制备2-炔基腺苷衍生物，包括DWH-146e的合成方法，产率低于所需产率，要求反应时间长与广泛的(extensive)色谱纯化。例如在US-A-5,593,975中，丙酮化合物保护(上述方案中III的第一步)要求用柱色谱法纯化。此外，氧化步骤(上述方案III中的第二步)要求长的反应时间，而且因2-碘代位的竞争氧化而被指出存在问题。Homma等，J.Med.Chem.，1992，35，2881-2890。在US-B-6,322,771中，含环己烷的乙炔(cyclohexane-containing acetylene)合成的第一步要求用柱色谱纯化将所需的单甲苯磺酰基产物与起始原料二醇及双甲苯磺酰基产物分离。含环己烷的乙炔-合成的第二步中，需长反应时间，大量过量的乙炔负离子与柱色谱纯化。而且，含环己烷的乙炔与2-碘代NECA间的交叉偶联反应在色谱纯化后产率低。因而，有必要改进制备2-炔基腺苷衍生物的合成方法，以获得较先有技术方法高的产率，并需要较少的纯化。通过使用替代的试剂与步骤，我们发现一种制备2-炔基腺苷衍生物的改良方法，此法具较高产率且需要较少的色谱纯化。
发明概述在一个实施方案中，本发明涉及式A化合物或其立体异构体、药学可接受的盐、水合物、溶剂合物、酸式盐水合物(acid salthydrates)或同形晶形(isomorphic crystalline form)的制备方法 所述方法包括如下步骤使2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺与式B化合物接触 其中Z为-C(＝O)OR或-CH2OC(＝O)R，其中R为C1至C5的烷基，优选甲基。本发明还涉及制备2-炔基腺苷衍生物的改良合成方法，此改良方法应用替代的试剂与步骤，获得较先有技术方法高的产率并需要较少的色谱纯化。在另一个实施方案中，本发明涉及制备2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺的方法，所述方法包括如下步骤提供2-碘代腺苷；用丙酮化合物基团保护所述2-碘代腺苷的羟基；将所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷中的伯醇氧化成所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷的酸衍生物；将所述酸衍生物转化成所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷的N-乙基酰胺衍生物；并将所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷的所述N-乙基酰胺脱保护生成所述2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺。在其他实施方案中，本发明涉及制备式B化合物的方法 其中Z为-CH2OC(＝O)R，R为C1至C5的烷基，所述方法包括如下步骤提供1，4-环己烷甲醇(1，4-methanol cyclohexane)；制备所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物；由所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物制备下式的炔化物取代(acetylide-substituted)化合物
并将所述炔化物取代-化合物转化成式B化合物 再在另外的实施方案中，本发明涉及制备式B化合物的方法 其中Z为-C(＝O)OR，R为C1至C5的烷基，所述方法包括如下步骤提供1，4-环己烷甲醇；制备所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物；由所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物制备下式的炔化物取代-化合物 用自由基氧化法(radical oxidation)氧化所述炔化物取代-化合物；并将所述氧化反应的产物酯化成式B的化合物
在一个优选的实施方案中，2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺由2-碘代腺苷制备。在另一个优选的实施方案中，式B化合物由1，4-环己烷甲醇制备。本文所用的术语“立体异构体”是指具有相同化学组成但其原子或基团的空间排列不同的化合物。已知式A化合物可包括一个或多个不对称碳原子，而且化学式A包括所有可能的立体异构体及其混合物，以及外消旋体，尤其是那些具有本文中所讨论的活性的化合物。本方法制备的化合物可以以旋光的或外消旋的形式而被分离。因而，除非专门指出特定的立体化学或异构形式，某一结构所有的手性、非对映、外消旋形式与所有几何异构形式均涵盖在本发明中。式A化合物的立体异构体可被选择性地合成或用有机合成领域熟练技术人员已知的常规方法分离得到纯的旋光形式。例如，立体异构体混合物可用标准技术包括但不限于外消旋体拆分，正相、反相与手性色谱法，优选成盐，重结晶等进行分离，或者由具手性的起始原料或用完备的目标手性中心的合成通过手性合成分离。本文所用的关于本发明中所述化合物的“药学可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中式A的母体化合物通过制成其酸或碱的盐而被修饰。药学可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱或有机盐等。药学可接受的盐包括例如由无毒的无机或有机酸制得的母体化合物的常规无毒盐类或季铵盐。例如，这类常规无毒盐类包括那些由无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等衍生而来的盐；与由有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸(丁二酸)、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸(pamoic)、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙磺酸等制备的盐。这些生理学上可接受的盐通过本领域已知的方法如在醇的水溶液中用过量的酸溶解游离胺类碱，或者用碱金属碱如氢氧化物或用胺中和游离羧酸来制备。本文所用的“C1-C5烷基”是指含1至5个碳原子的任选取代的、饱和直链，支链或环状烃基(与所有范围及此范围内指定碳原子数的组合及次级组合(subcombinations)，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、环戊基、异戊基与新戊基。
方案A2-碘代NECA的合成本发明的方法的必要条件之一包括提供化合物2-碘代NECA。此化合物可按方案A中所描述的4个步骤制备。
方案A
2-碘代腺苷 2-碘代NECAG.Cristalla等描述了另一种制备2-碘代NECA的方法，G.Cristalla等，J.Med.Chem.，1992，352363-68。方案A中的起始原料2-碘代腺苷(1)从如Toronto ResearchChemicals这样的来源购得。2-碘代腺苷可由Matsuda等和Nair等描述的方法合成，Matsuda等，J.Med.Chem.，1992，35241-252和Nair等，Synthesis，1982，670-672。在步骤A1中，通过保护核糖环上2′与3′碳位上羟基，将2-碘代腺苷(1)转化成其保护形式(2)，优选其丙酮化合物保护形式。这一保护反应可用例如70％高氯酸、甲磺酸、对甲苯磺酸或其它磺酸在过量的丙酮溶剂或含丙酮溶剂的混合物中完成。这一步可在室温下进行1至5小时。酸可用例如碳酸钠水溶液中和。产物(2)可萃取到二氯甲烷中，例如通过浓缩二氯甲烷得固体，并在例如40℃下真空干燥。这一步代表性地产生高达90至93％的产率。这一快速将2-碘代腺苷(1)转化成其丙酮化合物形式(2)的改良方法简洁、产率高且不需进一步纯化。以前报道的方法需进行色谱分离(WO 99/61054，Homma等，J.Med.Chem.1992，35，2881-2890)。在步骤A2中，伯醇(2)被氧化成酸(3)。此步可在约8至24小时内完成，用简单分离获得高产率。这一步可通过自由基氧化法完成，例如使用双-乙酰氧基碘代苯与2，2，6，6-四甲基哌啶氧自由基(tetramethyl piperidinyloxy free radical)(TEMPO)(Epp，J.G.与Widlanski，T.S.，J.Org Chem.1999，64，293)，高价碘类自由基，TEMPO衍生物包括TEMPO的4-苄氧基衍生物等。此反应可在如乙腈这种溶剂中进行，在室温下将反应组份混合约3小时，冷却至约0℃，过滤所得固体并用冷溶剂洗涤，然后升温在例如50℃下真空干燥约8至18小时。典型的产率(Typical yields)高达80％。常规用高锰酸盐的氧化方法要求长的反应时间(US-A-5,593,975)或存在2-碘代位竞争氧化的问题(Homma等，J.Med.Chem.，1992，35，2881-2890)。常规使用钌(III)催化剂的氧化方法导致产率较低并需色谱纯化(Homma等，J.Med.Chem.，1992，35，288l-2890).在步骤A3中，酸(3)转化成N-乙基酰胺(4)，优选在一个反应罐中完成反应。常规活化方法使用酰氯。在某些实施方案中，酸可用碳化二亚胺如N-乙基-二甲基氨基丙基碳化二亚胺(EDC)活化成琥珀酰亚胺衍生物。接着活化的酸可用过量的乙胺处理以高产率与合理的纯度生成酰胺。在一个优选的实施方案中，步骤A3可通过用2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)使酸活化而完成，例如将反应组份于约35℃混合约3小时后冷却至约5至10℃。接着此反应液可直接用乙醇处理并用乙胺饱和，在重结晶后获得高纯度与产率的N-乙基酰胺产物(4)。重结晶可通过例如-先将粗产物(4)蒸发至最小体积，再将残留物溶于二氯甲烷，用酸与碱洗，用乙醇置换二氯甲烷，冷却至0℃2至5小时，过滤产物并在约40℃真空干燥12至24小时完成。典型的产率(Typical yields)在65至70％的范围。优选地，乙胺以4至8M的乙醇溶液加入反应混合物并搅拌例如约16小时。或者，反应混合物可用乙胺气体饱和。在步骤A4中，产物(4)可用合适的酸例如三氟乙酸/水或甲酸/水脱保护，生成关键中间体2-碘代NECA(5)的纯品粉末，此粉末可直接用于后续步骤。这一脱保护反应可通过将反应物混合反应约3至5小时完成。化合物5可通过例如将反应混合物冷却至约10℃，加入到例如甲基叔丁基醚(MTBE)的溶剂中，并在加完溶剂后搅拌约2小时，过滤、用溶剂洗涤并在约40℃真空干燥的步骤提取。合适的酸包括例如无机与有机酸，优选有机酸。合适的酸包括例如盐酸、三氟乙酸和甲酸，优选三氟乙酸。使化合物4脱保护所用的酸用量可依据例如所用的具体的酸及所需脱保护的化合物4的种类而变化。一般而言，因为酸用作此反应的溶剂，所以需使用大大过量的酸。用常规方法，化合物4的脱保护可在较宽的温度范围内进行。优选地，反应在足以生成式5化合物的温度与时间下进行。具体的反应温度与时间可依据例如所用的具体的化合物4与酸的种类及具体的溶剂种类而变化。在优选的形式中，化合物4的脱保护可在约10至35℃的温度下及在此温度范围内的所有温度组合或次级温度组合下进行。更优选地，化合物4的脱保护可在室温下进行。这一步的产率代表性地在90至95％的范围内。与报道的以前方法的30％的产率相比，式5化合物以62％的总产率由化合物1不经色谱纯化制得(WO 00/44763)。
方案B1含环己烷的乙炔的合成，其中Z为-CH2OC(＝O)R(R为C1-C5烷基)方案B1
反式-1，4-环己烷二甲酸二甲酯 (B其中Z为CH2OC(＝O)R)方案B2含环己烷的乙炔的合成，其中Z为-C(＝O)OR(其中R为C1-C5烷基)方案B2 反式-1，4-环己烷二甲酸二甲酯 (B其中Z为-C(＝O)OR)其它关键中间体炔酯(10)与(12)的合成也在常规方法上进行了改良。方案B1与B2中的起始原料，反式-环己烷二甲酸二甲酯(6)纯品，优选顺式异构体含量低于约0.2％(重量)者，可由如Aldrich这样的来源购得。反式二醇(7)纯品可容易地通过用如氢化铝锂(步骤B1-1或B2-1)的还原剂将二酯(6)还原成二醇而获得。一般以保持溶液温度在-10℃与25℃之间的速度将二酯(6)加入还原剂溶液，优选低于10℃。其它合适的制备反式-二醇纯品的还原剂包括例如可将酯还原成醇的甲硼烷和铝烷试剂。在某些优选的实施方案中，购得的含98％反式异构体的二醇(7)可从乙酸2-乙氧基乙酯中重结晶得到含量高于99.5％的反式异构体纯品。在步骤B1-2与B2-2中，不需额外的色谱纯化即可制备分离得到单甲苯磺酰基衍生物(8)的纯品。剩余的起始原料二醇(7)可用水处理除去，二甲苯磺酰基产物可用甲醇选择性沉淀除去，将单甲苯磺酰基衍生物(8)纯品留在溶液中。简单蒸发即得到所需产物(8)的纯品，产率为53％。这与所报道的在两次色谱纯化后以51％的产率(Rieger，J.M.，Brown，M.L.，Sullivan，G.W.，Linden，J.，andMacDonald，T.L.，J.Med.Chem.，2000，44，531-539)或在使用一步法后以35％的产率(WO 00/44763)生成被保护的单甲苯磺酰基衍生物的两步法形成对照。据报道用炔化物取代甲苯磺酰基是有问题的，需要大量过量的试剂且反应时间长，或需在加热条件下使用被保护的中间体(Rieger，J.M.，Brown，M.L.，Sullivan，G.W.，Linden，J.，andMacDonald，T.L.，J.Med.Chem.，2000，44，531-539)。本发明的步骤B1-3与B2-3使用乙炔基锂-乙二胺配合物与二甲亚砜(DMSO)，反应迅速，产率高(90％)，不需加热、进一步纯化或脱保护以生成产物醇(9)。对于含环己烷的乙炔化合物，其中Z为-C(＝O)OR(R为C1-C5烷基)(方案B2)，在步骤B2-4中化合物9用标准Jones氧化条件氧化。据报道，用标准Jones氧化条件进行羟基乙炔类化合物羟基的氧化可得70-75％的产率(Rieger，J.M.，Brown，M.L.，Sullivan，G.W.，Linden，J.，and MacDonald，T.L.，J.Med.Chem.，2000，44，531-539；WO00/44763)。在步骤B2-4中使用TEMPO/双乙酰氧基碘代苯(BAIB)为快速(约3小时)简洁地以高分离产率(95％)完成这一转化反应提供了温和的条件。在步骤B2-5中，使用合适的醇(甲醇用于制备化合物(12)或乙醇或1-丙醇)与催化剂如浓硫酸、盐酸、无水氯化氢、对-甲苯磺酸及阳离子交换树脂的酸形式，通过简单的Fisher酯化反应，可将所述羧酸(11)转化成所需的酯(12)，之后蒸馏，在不使用昂贵试剂如三甲基甲硅烷基重氮甲烷的情况下制得高产率及纯度的产物(12)。这一改良的合成在四步反应中不需色谱纯化以40％的总产率制得所需酯-炔。这与在四步反应中经三次柱色谱纯化后获得22％的产率(Rieger，J.M.，Brown，M.L.，Sullivan，G.W.，Linden，J.，and MacDonald，T.L.，J.Med.Chem.，2000，44，531-539)或在六步反应中经四次色谱纯化获得28％的总产率(WO 00/44763)的先有合成技术形成对照。在步骤B1-4中，反式-4-(2-丙炔基)-环己基甲醇9转化成其乙酰氧基甲基衍生物10。用4，4-二甲基氨基吡啶催化，以乙酸酐/三乙胺使化合物9乙酰化生成所需的乙酰氧基甲基衍生物10。
方案C1方案B1的产物与方案A的产物发生交叉偶联生成式A化合物，其中Z为-CH2OC(＝O)R(R为C1-C5烷基)方案C1 (B其中Z为CH2OC(＝O)R) 其中Z为-CH2OC(＝O)R
方案C2方案B2的产物与方案A的产物发生交叉偶联生成式A化合物，其中Z为-C(＝O)OR(R为C1-C5烷基)方案C2 (B其中Z为-C(＝O)OR) 其中Z为-C(＝O)OR本发明中的式A的化合物可通过化合物10与化合物5(方案C1)的Sonagashira交叉偶联反应制得Z为-CH2OC(＝O)R的式A化合物，或由化合物12与化合物5(方案C2)的Sonagashira交叉偶联反应制得Z为-C(＝O)OR的式A化合物。通常，含卤素的化合物(化合物10或化合物12)与炔(例如过量50％)可在惰性气体保护下，优选氮气或氩气，溶于合适的无水溶剂如二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷中。加入碘化亚铜，再加入钯催化剂，优选二氯双(三苯基膦)钯，保持惰性气体保护环境。反应在室温下搅拌约2至5小时，优选约2小时，监测芳基卤的消失。当芳基卤消耗完，可用二氯甲烷代替溶剂，用EDTA洗反应溶液除去铜，干燥，过滤浓缩。残留物可用快速色谱法(flash chromatography)与/或重结晶纯化。Sonagashira偶联的反应条件可通过使用溶于三乙胺/二甲基甲酰胺中的二氯双(三苯基膦)钯而不加磷化氢或其它共溶剂得以改良。与先有技术方法中加热过夜的反应条件相对，本法允许反应在室温下于2小时内完成。与所报道的24％或60％的产率相对(Rieger，J.M.，Brown，M.L.，Sullivan，G.W.，Linden，J.，and MacDonald，T.L.，J.Med.Chem.，2000，44，531-539；WO 00/44763)，本法在快速色谱法纯化后的产率为76％。即使需要高纯度形式，制备HPLC纯化也仅将产率降低至71％。因而，本发明的方法用十步反应一次色谱纯化以17.6％的总产率制得高纯度的所需终产物，优选顺式异构体杂质含量＜0.2％。本发明中报道的所有步骤均经得起有意义的按比例放大至相应的大生产规模的检验(All of the reported steps are amenable to significantscale-up to relevant manufacturing scales.)。这与用相似数量的反应步骤获得1.6％总产率(Rieger，J.M.，Brown，M.L.，Sullivan，G.W.，Linden，J.，and MacDonald，T.L.，J.Med.Chem.，2000，44，531-539)或以更多的反应步骤获得5％总产率(WO 00/44763)的先有技术方法形成对照。在每种先有技术方法中，均需要较多次数的色谱纯化，这给按比例放大至相应的大生产规模造成显著的问题。关于腺苷衍生物的制备，较先有技术方法，本发明的方法可提高产率、纯度，使中间体与终产物易于合成与/或分离，并提供工业上更有用的反应条件及可使用性。本法特别适用于腺苷衍生物的大规模制备，包括工业规模，例如，从公斤规模到吨规模或更多的腺苷衍生物。具体地说，使用本发明的方法，可方便地基本或完全地避免腺苷衍生物中间体的分离与/或纯化步骤。由于可获得基本纯的腺苷衍生物，因此本法可以是特别有优势的。本文所用的术语“基本纯的形式”是指用本方法制备的腺苷衍生物可优选地基本无有机杂质。本文所用的术语“有机杂质”是指除所需产物以外的有机原料、化合物等，包括例如式A化合物的顺式异构体，与合成的有机化学转化典型地有关的有机原料、化合物等，包括例如未反应的起始试剂、未反应的中间体化合物等。在优选的形式中，本方法可提供以标准分析技术如HPLC测定的纯度至少约75％的腺苷化合物。优选地，用本法制备的腺苷衍生物纯度可至少为约80％，纯度至少约85％为更优选的。甚至更优选地，用本法制备的腺苷衍生物纯度可至少约90％，纯度至少约95％为更优选的。在特定的优选实施方案中，用本法制备的腺苷衍生物纯度可大于约95％，纯度约99.8％为甚至更优选的，纯度为约100％为特别优选的。如果所需的是式A化合物的盐，可加入一种合适的酸，之后再将所得溶液冷却形并加晶种以生成结晶性盐。优选地，所选用的酸可生成所需的盐而不影响目标化合物的完整性。因而，优选的弱酸如磺酸类。特别是甲基磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、羟乙基磺酸、樟脑磺酸与其它磺酸可制得合适的结晶性的盐。特别优选的酸是甲基磺酸。然而，可以领会到当使用酸的无水形式可制得多种其它盐。例如，无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸或硝酸可用来制备合适的结晶性盐。其它有机酸如富马酸、琥珀酸、草酸、柠檬酸等，如酸性足以使式A化合物的碱性部分质子化，可用来制备合适的结晶性盐。然而，在合适的条件下，可用其它溶剂制备式A化合物的结晶性盐，如酯类溶剂，包括但不限于乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸异丁酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、丙酸异丙酯；醚类溶剂，包括但不限于叔丁基甲基醚、四氢呋喃、乙醚、异丙醚、丁基醚；与芳香族溶剂，包括但不限于甲苯与苯甲醚。其它溶剂将为本领域普通技术人员容易理解。过滤洗涤产物得到式A化合物，优选地用额外的结晶溶剂洗涤。本文中所述的化合物可以替代的形式使用或制备。例如，许多含氨基的化合物可以酸加成盐来使用或制备。常常这些盐改善化合物的分离与操作性质。例如，依据试剂、反应条件等，本文所述化合物可以以例如其盐酸或甲苯磺酸盐来使用或制备。同形晶形，所有手性与外消旋形式、水合物、溶剂合物及与酸式盐水合物，都涵盖在本发明范围内。本发明中的某些酸性或碱性化合物可以以两性离子存在。所述化合物的所有形式，包括游离酸、游离碱与两性离子，均涵盖在本发明范围内。同时含有氨基与羧基的化合物常常以与其两性离子形式平衡的状态存在是本领域中所熟知的。因而，本文中所述的任何同时含有，例如氨基与羧基的化合物，也包括其相应的两性离子形式。本文所述的与要求保护的合成方法的反应可在可为有机合成领域熟练技术人员容易选择的合适溶剂中进行。一般而言，合适的溶剂是在反应进行的温度下，也就是在溶剂凝固温度至沸腾温度范围内的温度，基本不与起始原料(反应物)、中间体或产物反应的溶剂。一个给定的反应可在一种溶剂或一种以上溶剂的混合溶剂中进行。依据具体反应，可选择对此反应后续的特殊处理合适的溶剂-。本文所用的合适溶剂可包括，例如而不限于，氯化的溶剂、烃类溶剂、芳香族溶剂、醚类溶剂、质子溶剂、极性非质子溶剂及其混合溶剂。合适的卤化溶剂包括，但不限于四氯化碳、一溴二氯甲烷、二溴一氯甲烷、溴仿、氯仿、溴氯甲烷、二溴甲烷、丁基氯、二氯甲烷、四氯乙烯、三氯乙烯、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1-二氯乙烷、2-氯丙烷、六氟代苯、1，2，4-三氯代苯、邻-二氯代苯、氯代苯、氟代苯、一氟三氯甲烷、一氯三氟甲烷、一溴三氟甲烷、四氟化碳、二氯一氟甲烷、一氯二氟甲烷、三氟甲烷、1，2-二氯四氟乙烷和六氟乙烷。合适的烃类溶剂包括，但不限于烷烃或芳香族溶剂如环己烷、戊烷、己烷、甲苯、环庚烷、甲基环己烷、庚烷、乙苯、间、邻或对-二甲苯、辛烷、1，2-二氢化茚、壬烷、苯、乙苯和间、邻或对-二甲苯。合适的醚类溶剂包括，但不限于二甲氧基甲烷、四氢呋喃、1，3-二氧杂环己烷、1，4-二氧杂环己烷、呋喃、乙醚、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二甘醇二甲醚、二甘醇二乙醚、三甘醇二异丙醚、苯甲醚或叔丁基甲基醚。合适的质子溶剂包括，但不限于水、甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟代乙醇、2，2，2-三氟代乙醇、乙二醇、1-丙醇、2-丙醇、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-乙氧基乙醇、二甘醇、1-，2-或3-戊醇、新戊醇、叔戊醇、二甘醇单甲基醚、二甘醇单乙基醚、环己醇、苯甲醇、苯酚与甘油。合适的非质子溶剂包括，但不限于二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMAC)、1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)、1，3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、甲酰胺、N-甲基乙酰胺、N-甲基甲酰胺、乙腈(ACN)、二甲亚砜(DMSO)、丙腈、甲酸乙酯、乙酸甲酯、六氯代丙酮、丙酮、甲乙酮、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸叔丁酯、环丁砜(四氢噻吩砜)、N，N-二甲基丙酰胺、硝基甲烷、硝基苯和六甲基磷酰胺。本发明在以下的实施例中被进一步描述。所有的实施例均为真实的例子。这些实施例仅用作例证性目的，不得解释为对所附权利要求书的限制。
实施例实施例1[(1R，2R，4R，5R)-4-(6-氨基-2-碘代嘌呤-9-基)-7，7-二甲基-3，6，8-三氧杂二环[3.3.0]辛-2-基]甲-1-醇(methan-1-ol)(化合物2)的合成向冷却至0℃的2-碘代腺苷1(10.0g，25.4mmol)的丙酮(200ml)混悬液中逐滴加入70％高氯酸(4.0mL)，导致约5℃的放热曲线。所得无色溶液在30分钟内加温至室温，接着继续搅拌45分钟。加入1M Na2CO3(50mL)，生成固体沉淀。此后于搅拌下逐份小心加入水(300mL)直至所有固体溶解。混合物用三份CH2Cl2萃取。合并的有机物用盐水洗、干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发得到化合物2(10.26g，93％)的无色固体。
1H-NMR(600MHz，DMSO d6)1.32(s，3H)，1.54(s，3H)，3.54(m，2H)，4.19(m，1H)，4.93(dd，1H)，5.05(t，1H)，5.27(dd，1H)，6.05(d，1H)，7.74(bs，2H)，8.28(s，1H)；13C-NMR(150MHz，DMSOd6)25.45，27.08，85.69，86.09，88.44，92.59，114.92，120.39，142.47，151.08，157.20，173.14.
LRMS(ES)m/z＝434.0(M+H，100％).
实施例21′-脱氧-1′-(6-氨基-2-碘代-9H-嘌呤-9-基)-2′，3′-O-亚异丙基-β-D-呋喃核糖醛酸(化合物3)的合成在冷却至0℃的化合物2(10.0g，23.1mmol)的乙腈(200mL)与水(50mL)的溶液中加入双乙酰氧基碘代苯(16.4g，50.8mmol)与TEMPO(0.72g，20mmol)。混合物于0℃搅拌30分钟，再将其加温至室温并搅拌22小时。蒸去溶剂并将所得残留物用正庚烷(400mL)研磨过夜。将固体过滤，用正庚烷洗并真空干燥得到化合物3(9.80g，95％)的白色固体。
1H-NMR(600MHz，CD3OD)1.45(s，3H)，1.65(s，3H)，4.78(d，1H)，5.50(d，1H)，5.67(dd，1H)，6.31(s，1H)，8.14(s，1H)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)25.45，27.08，85.69，86.09，88.44，92.59，114.92，120.39，142.47，151.08，157.20，173.14.LRMS(ES)448.0(M+H，100％).
实施例3N-乙基-1′脱氧-1′-(6-氨基-2-碘代-9H-嘌呤-9-基)-2′，3′-O-亚异丙基-β-D-呋喃核糖醛酰胺(化合物4)的合成向化合物3(8.0g，17.9mmol)的50％乙醇/二氯甲烷(160mL)溶液中一次性加入2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)(4.65g，18.8mmol)。混合物于室温下搅拌24小时。加入乙醇(80mL)并在反应溶液中通乙胺气体(～45g)4小时以上。反应在室温下搅拌20小时，然后蒸去溶剂。所得固体用二氯甲烷溶解，依次用0.1M HCl与1M Na2CO3洗涤。将所得有机物干燥(Na2SO4)、过滤并蒸去溶剂得化合物4的淡黄色固体，将其用二氯甲烷/己烷重结晶得化合物4的白色固体(6.0g，71％)，熔点204-206℃；
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)0.68(t，3H)，1.32(s，3H)，1.52(s，3H)，2.81(m，1H)，2.91(m，1H)，4.53(s，1H)，5.33(m，1H)，5.36(m，1H)，6.27(s，1H)，7.43(t，1H)，7.6g(s，2H)，g.16(s，1H)；13C-NMR(150MHz，DMSO-d6)14.07，25.06，26.61，33.07，83.15，83.35，112.77，118.71，120.68，139.99，149.31，155.81，167.92.LRMS(ES)m/z＝475.0(M+H，100％).
实施例4[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘代嘌呤-9-基)-3，4-二羟基氧杂环戊烷-2-基]-N-乙基酰胺(化合物5)的合成边搅拌边向10％三氟乙酸(1100mL)水溶液中于5分钟内加入化合物4(80g，168mmol)。将溶液于室温下搅拌1小时，之后减压浓缩。将所得棕色油状物用甲基叔丁基醚(MTBE)研磨得到固体，将此固体过滤、用MTBE冲洗并真空干燥制得化合物5(72.7g，99％)的白色粉末。
1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)1.05(t，3H)，3.24(m，2H)，4.17(dd，1H)，4.31(d，1H)，4.58(dd，1H)，5.91(d，1H)，7.74(bs，2H)，8.10(t，1H)，8.38(s，1H)；13C-NMR(150MHz，DMSO-d6)14.78，26.77，33.47，72.65，72.94，84.20，119.16，120.91，149.84，155.90，169.00；LRMS(Es)m/z＝435.1(M+H，100％)实施例5反式-[(4-羟甲基)环己基]-甲-1-醇(methan-1-ol)(化合物7)的合成向冷却至4℃正压氮气保护下的氢化铝锂(7.6g，0.2mol)的无水四氢呋喃(600mL)混悬液中，于30分钟内，以维持加入过程中温度＜10℃的速度逐滴加入反式1，4-环己烷二甲酸二甲酯(dimethyl-cyclohexane dicarboxylate)6(20g，0.1mol)的无水四氢呋喃(400mL)溶液。反应于冷却下继续搅拌30分钟，接着加温至室温并搅拌70小时。将反应冷却至4℃，小心加入水(7.6mL)，再加入15％NaOH(7.6mL)与水(22.8mL)。反应混合物逐渐加温至室温，接着于室温下搅拌5小时。所得无色混悬液过滤，并将滤液浓缩得到化合物7(13.0g，90％)的类白色固体。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)0.83(m，4H)，1.26(m，2H)，1.72(d，4H)，3.19(t，4H)，4.34(t，2H)；13C-NMR(100MHz，CDCl3)29.05，40.63，66.79.
实施例64-甲基苯磺酸反式-[{(4-羟甲基)环己基}甲酯](化合物8)的合成在于室温下搅拌的化合物7(100g，0.69mol)的无水吡啶(1L)溶液中逐份加入对-甲苯磺酰氯(132g，0.69mol)。反应搅拌1小时，随后观察到无色沉淀生成。将反应温度冷却至-10℃，小心加入水(共4L)，保持温度＜20℃。反应混合物用二氯甲烷萃取，用3M HCl洗，干燥(MgSO4)、过滤并蒸发。粗品残留物用无水甲醇研磨并将所得固体过滤除去。蒸发滤液得到化合物8(110g，53％)的淡黄色油状物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)0.91(m，4H)，1.37(m，1H)，1.58(m，1H)，1.75(m，4H)，1.84，(s，1H)，2.42(s，3H)，3.39(d，2H)，3.80(d，2H)，7.34(d，2H)，7.75(d，2H)；13C-NMR(100MHz，CDCl3)21.53，28.32，28.34，37.22，39.99，68.07，75.16，127.73，129.72，132.85，144.62.
实施例7(4-丙-2-炔基环己基)-甲-1-醇(化合物9)的合成在化合物8(110g，0.37mol)的DMSO(1.46L)溶液中一次性加入乙炔基锂/乙二胺配合物(纯度＞90％，101.4g，1.10mol)。反应在室温下搅拌2小时。于35分钟以上小心加入水(3.8L)，维持溶液温度＜37℃。再加入甲基叔丁基醚(MTBE)(3L)并将此两相混合物剧烈搅拌10分钟。分离有机相，将水相用MTBE再次萃取。合并的提取液用水洗、干燥(MgSO4)、过滤并蒸去溶剂得到化合物9(50.3g，90％)的淡黄色油状物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)0.96(m，4H)，1.41(m，2H)，1.82(m，4H)，1.94，(t，1H)，2.07(d of d，2H)，2.16(s，1H)，3.39(d，2H)；13C-NMR(100MHz，CDCl3)25.91，29.04，31.71，37.04，40.07，68.23，69.01，83.24.
实施例8乙酸反式-4-(2-丙炔基)-环己基甲酯(化合物10)的合成在氮气保护下，边搅拌边将反式-4-(2-丙炔基)-环己基甲醇(化合物9)(15g，98mmol)、三乙胺(TEA)(15.1mL，108mmol)与4-(N，N-二甲基-氨基)吡啶(DMAP)(0.6g，5mmol)的二氯甲烷(300mL)溶液冷却至2℃。逐滴加入乙酸酐(Ac2O，10.2mL，108mmol)，保持温度低于10℃。在冰浴温度下搅拌30分钟后，用10％碳酸钾溶液(300mL)结束反应。反应混合液分层，有机层依次用1N HCl、水与盐水洗，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩得到20g黄色油状产物，将其在串连蒸馏瓶装置中减压蒸馏(0.5torr，70℃)(distilled bulb to bulb)，得到无色油状产物(化合物10)(17g，89％)。
1H-NMR(600MHz，CDCl3)1.03(m，4H)，1.46(m，1H)，1.59(m，1H)，1.85(dd，4H)，1.89(t，1H)，2.05(t，3H)，2.11(dd，2H)，3.89(d，2H).
实施例94-丙-2-炔基环己烷甲酸(化合物11)的合成向冷却至0℃的化合物9(2.45g，16mmol)的50％乙腈/水(35mL)混悬液中加入双乙酰氧基-碘代苯(BAIB)(11.4g，35mmol)与TEMPO(502mg，3.2mmol)。反应混合物于0℃搅拌1小时，再在室温下搅拌90分钟。蒸去溶剂，将残留物溶于1/1的CH3CN/H2O(100mL)。再次蒸去溶剂，并重复此步骤以其共沸混合物除去碘代苯。所得化合物11(2.53g，95％)为棕色粘性固体，将其不经进一步纯化而直接用于下一步反应。
1H-NMR(600MHz，CD3OD)1.13(dq，2H)，1.45(dq，2H)，1.48(m，1H)，1.93(dd，2H)，2.03(dd，2H)，2.12(dd，2H)，2.2-2.3(m，2H).
实施例104-丙-2-炔基环己烷甲酸甲酯(化合物12)的合成向化合物11(0.88g，5.29mmol)的甲醇溶液中加入浓HCl(0.5mL)，将此混合物于室温下搅拌2小时。蒸去溶剂，将残留物溶于二氯甲烷，干燥(Na2SO4)、过滤并蒸去溶剂得到淡黄色油状物。将此油状物在串连蒸馏瓶装置中蒸馏纯化(140℃，500mTorr)，得到淡粉红色油状化合物12(0.80g，84％)。
1H-NMR(600MHz，CD3OD)1.13(dq，2H)，1.45(dq，2H)，1.48(m，1H)，1.94(dd，2H)，2.01(dd，2H)，2.12(dd，2H)，2.24(t，1H)，2.28(m，1H)，3.68(s，3H)；13C-NMR(150MHz，CD3OD)26.55，29.96，32.48，37.79，44.31，52.08，70.57，83.44；FTIR (KBr)1743(C＝O)，2117(C≡C)，2872，2953(C-H)，3314cm-1(C≡C-H)实施例111-[2-[3-[反式-4-[(乙酰氧基)甲基]环己基]-1-丙炔基]-6-氨基-9H-嘌呤-9-基]-1-脱氧-N-乙基-β-D-呋喃核糖醛酰胺(化合物A，其中Z为-CH2OC(＝O)CH3)在搅拌下的1-(6-氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-1-脱氧-N-乙基-β-D-呋喃核糖醛酰胺5(75mg，0.17mmol)的干燥二氧杂环己烷(2mL)混悬液中加入乙酸反式-4-(2-丙炔基)-环己基甲酯10(54mg，0.28mmol)、三乙胺(78μL，0.56mmol)、碘化亚铜(11.3mg，59μmol)、二氯双乙腈钯(bis-acetonitrile palladium dichloride)(11.8mg，45mol)与三叔丁基膦(10％己烷溶液，93μL，30μmol)。此反应混合物于室温下搅拌20小时，再加入三乙胺(1mL)并将此溶液加热至50℃5小时。与额外等分部分(additional aliquots)的乙酸环己基甲酯(100mg)、CuI(5mg)、Pd(MeCN)2Cl2(10mg)及三叔丁基膦(200μL)一起加入二甲基甲酰胺(2mL)，并继续加热26小时。减压除去溶剂，残留物溶于氯仿，用0.01M Na2EDTA溶液(2×50mL)与盐水洗，用硫酸钠干燥、过滤并蒸发。残留物用快速色谱法(95∶5二氯甲烷/甲醇)纯化得到棕色固体产物(化合物A，其中Z为-CH2OC(＝O)CH3)(40mg，47％)1H-NMR(600MHz，DMSO-d6)1.01(m，4H)，1.06(t，3H)，1.48(m，2H)，1.8(dd，4H)，2.00(s，3H)，2.32(d，2H)，3.25(m，1H)，3.30(m，1H)，3.83(d，2H)，4.11(t，1H)，4.30(d，1H)，4.57(m，1H)，5.53(d，1H)，5.73(d，1H)，5.92(d，1H)，7.52(bs，2H)8.41(s，1H)，8.73(t，1H)；13C-NMR(150MHz，CD3OD)14.94，25.67，28.21，31.30，33.28，36.38，36.50，68.52，71.80，73.11，81.93，84.38，84.65，87.64，119.06，141.45，145.63，148.95，155.96，169.17，170.38；LRMS(ES)501.2(M+H，100％).
实施例121-[2-[3-[反式-4-[(乙酰氧基)甲基]环己基]-1-丙炔基]-6-氨基-9H-嘌呤-9-基]-1-脱氧-N-乙基-β-D-呋喃核糖醛酰胺(化合物A，其中Z为-CH2OC(＝O)CH3)或者，化合物A，其中Z为-CH2OC(＝O)CH3，可由以下步骤获得在氮气保护下将化合物5(33g，76mmol)、化合物10(22.3g，115mmol)、干燥的二甲基甲酰胺(330mL)与三乙胺(115mL)装入一个烧瓶。向此搅拌的溶液中通干燥氮气15分钟，接着加入碘化亚铜(2.21g，11.6mmol)与二氯双(三苯基膦)钯(4g，5.7mmol)，持续通氮气。反应在室温下搅拌1.5小时，减压浓缩生成棕色油状物。将此油状物重新溶于二氯甲烷，用四份0.1N EDTA溶液洗。所得有机物干燥(Na2SO4)、过滤并减压浓缩。粗产物用快速色谱法纯化(1-7％甲醇的二氯甲烷溶液梯度)得到化合物A的淡黄色固体，其中Z为-CH2OC(＝O)CH3。
实施例134-{3-[6-氨基-9-(5-乙基氨基甲酰基-3，4-二羟基四氢呋喃-2-基)-9H-嘌呤-2-]丙-2-炔基}环己烷甲酸甲酯(化合物A，其中Z为-C(＝O)OCH3)的合成在氮气保护下将化合物5(33g，76mmol)、化合物12(20.7g，115mmol)、干燥二甲基甲酰胺(330mL)与三乙胺(115mL)装入一个烧瓶。向此搅拌的溶液中通干燥氮气15分钟，接着加入碘化亚铜(2.21g，11.6mmol)与二氯双(三苯基膦)钯(4g，5.7mmol)，持续通氮气。反应在室温下搅拌1.5小时，减压浓缩得棕色油状物。将此油状物重新溶于二氯甲烷，用四份0.1N EDTA溶液洗。所得有机物干燥(Na2SO4)、过滤并减压浓缩。粗产物用快速色谱法纯化(1-7％甲醇的二氯甲烷溶液梯度)得到化合物A的淡黄色固体(28.1g，76％)，其中Z为-C(＝O)OCH3。
实施例144-{3-[6-氨基-9-(5-乙基氨基甲酰基-3，4-二羟基四氢呋喃-2基)-9H-嘌呤-2-基]丙-2-炔基}环己烷甲酸甲酯(化合物A，其中Z为-C(＝O)OCH3)的纯化化合物A，其中Z为-C(＝O)OCH3，的纯化用两种方法完成制备HPLC与重结晶。制备HPLC在Dynamax C-18(8μm，60A，15×30cm)柱上用25％-40％ B梯度(A＝0.05N乙酸铵，pH＝5.0；B＝乙腈)在60分钟洗脱，进样22.8g化合物A的溶液，其中Z为-C(＝O)OCH3，溶于6L 25％乙腈的0.05N乙酸铵溶液。于270nM检测洗脱液，分离产物流分。合并产物流分，用等体积的水稀释。它们于同一色谱柱上进样，用20％-80％ B梯度(A＝水；B＝乙腈)在30分钟内洗脱除去盐。合并产物流分，冷冻并冻干得到化合物A的白色絮状粉末，其中Z为-C(＝O)OCH3(21.4g，94％)。在10∶1的2-丙醇(2-PrOH)/甲基叔丁基醚(MTBE)中进行结晶。化合物A，其中Z为-C(＝O)OCH3，溶于最小体积的热2-丙醇，趁热加入MTBE。将此溶液置于0℃水浴中边搅拌边冷却。将其于-8℃放置过夜，然后过滤，用1∶1的2-PrOH/MTBE、MTBE依次洗，再真空干燥得到化合物A的白色易流动性粉末，其中Z为-C(＝O)OCH3。
1H-NMR(600MHz，CD3OD)1.21(t，3H)，1.22(dq，2H)，1.48(dq，2H)，1.65(m，1H)，2.04(dt，4H)，2.34(dt，1H)，2.45(d，2H)，3.44(dm，2H)，3.69(s，3h)，4.36(dd，1H)，4.50(d，1H)，4.74(dd，1H)，6.07(d，1H，8.48(s，1H)；13C-NMR(150MHz，CD3OD)14.78，26.77，33.47，72.65，72.94，84.20，119.16，120.91，149.84，155.90，169.00；LRMS(ES)487.2(M+H，100％).如范围在本文中用于物理性质如分子量，或化学性质如化学式，则该范围的所有组合与次级组合及那其中的具体实施方案包括于本发明。本文件中所引用或描述的每个专利、专利申请与出版物所公开的内容通过整体引用结合到本文中。本领域的熟练技术人员将领会到对本发明的优选实施方案可进行多种变化与修改，且这些变化与修改可在不偏离本发明精神的情况下进行。因此，本发明的目的是使所附权利要求书涵盖所有这些本发明的真正精神与范围内的等价的变化。
权利要求
1.一种制备式A化合物或其立体异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、酸式盐水合物或同形晶形的方法 所述方法包括如下步骤使2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺与式B化合物接触 其中Z为-C(＝O)OR或-CH2OC(＝O)R，其中R为C1-C5的烷基。
2.权利要求1的方法，其中Z为-C(＝O)OCH3或-CH2OC(＝O)CH3。
3.权利要求1的方法，其中所述2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺由2-碘代腺苷制备。
4.权利要求3的方法，所述方法还包括将所述2-碘代腺苷转化成下式的所述2-碘代腺苷的丙酮化合物保护形式的步骤
5.权利要求4的方法，所述方法还包括将所述2-碘代腺苷的所述丙酮化合物保护形式氧化成下式化合物的步骤
6.权利要求5的方法，其中所述氧化步骤是自由基氧化。
7.权利要求5的方法，其中所述氧化步骤包括包含双乙酰氧基碘代苯与2，2，6，6-四甲基哌啶氧自由基(TEMPO)的混合物的使用。
8.权利要求5的方法，所述方法还包括将下式所述化合物 转化成下式化合物的步骤
9.权利要求8的方法，其中所述转化步骤作为一锅法反应进行。
10.权利要求8的方法，其中所述转化步骤包括琥珀酰亚胺衍生物与过量乙胺的使用。
11.权利要求8的方法，其中所述转化步骤包括包含2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉、乙醇与乙胺的组合物的使用。
12.权利要求8的方法，所述方法还包括将下式所述化合物脱保护生成所述2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺的步骤
13.权利要求1的方法，其中所述式B化合物由1，4-环己烷甲醇制备。
14.权利要求13的方法，其中所述1，4-环己烷甲醇由包含反式1，4-环己烷二甲酸二甲酯的反应混合物制备。
15.权利要求14的方法，其中所述反应混合物包含占1，4-环己烷二甲酸二甲酯的总重量少于约0.2％(重量)的顺式-1，4-环己烷二甲酸二甲酯。
16.权利要求13的方法，其中所述1，4-环己烷甲醇由包括还原1，4-环己烷二甲酸二甲酯的步骤的方法制备。
17.权利要求13的方法，所述方法还包括制备所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物的步骤。
18.权利要求17的方法，所述方法还包括下式的所述甲苯磺酰基衍生物的炔化物取代的步骤 以生成下式炔化物取代化合物
19.权利要求18的方法，所述方法还包括将所述炔化物取代化合物转化成其中Z为-CH2OC(＝O)R的式B化合物的步骤。
20.权利要求18的方法，所述方法还包括将所述炔化物取代化合物氧化并将所述氧化产物酯化成其中Z为-C(＝O)OR的式B化合物的步骤。
21.一种制备2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺的方法，所述方法包括如下步骤提供2-碘代腺苷；用丙酮化合物基团保护所述2-碘代腺苷的羟基；将所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷的伯醇氧化成所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷的酸衍生物；将所述酸衍生物转化成所述丙酮化合物-保护的-2-碘代腺苷的N-乙基酰胺衍生物；并将所述丙酮化合物保护的2-碘代腺苷的所述N-乙基酰胺脱保护生成所述2-碘代腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺。
22.一种制备式B化合物的方法 其中Z为-CH2OC(＝O)R，R为C1至C5的烷基，所述方法包括如下步骤提供1，4-环己烷甲醇；并制备所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物；由所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物制备下式炔化物取代化合物 并将所述炔化物取代化合物转化成式B化合物
23.一种制备式B化合物的方法 其中Z为-C(＝O)OR，R为C1至C5的烷基，所述方法包括如下步骤提供1，4-环己烷甲醇；制备所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物；由所述1，4-环己烷甲醇的单甲苯磺酰基衍生物制备下式炔化物取代化合物 用自由基氧化法氧化所述炔化物取代化合物；并将所述氧化产物酯化成式B化合物
24.权利要求23的方法，其中所述氧化步骤包括包含双乙酰氧基碘代苯与2，2，6，6-四甲基哌啶氧自由基(TEMPO)的混合物的使用。
25.权利要求22或23的方法，其中所述1，4-环己烷甲醇由包含反式1，4-环己烷二甲酸二甲酯的反应混合物制备。
26.权利要求25的方法，其中所述反应混合物包含占1，4-环己烷二甲酸二甲酯的总重量少于约0.2％(重量)的顺式1，4-环己烷二甲酸二甲酯。
27.权利要求22或23的方法，其中所述1，4-环己烷甲醇由包括还原1，4-环己烷二甲酸二甲酯的步骤的方法制备。
全文摘要
本文公开了制备式(A)的2－炔基腺苷衍生物或其立体异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、酸式盐水合物或同形晶形的方法，所述方法包括使2－碘代腺苷－5′－N－乙基糖醛酰胺与式(B)化合物接触的步骤，其中Z为－C(＝O)OR或－CH
文档编号C07H19/16GK1823084SQ200480020486
公开日2006年8月23日 申请日期2004年5月19日 优先权日2003年5月19日
发明者I·F·皮克斯吉尔, E·H·奇斯曼 申请人:布里斯托尔-迈尔斯斯奎布药品公司