吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物的制作方法

专利名称：吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物或其药剂学所允许的盐。该吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物是医药、特别是具有脂肪酸酰胺水解酶(下面称为FAAH)抑制活性的尿频.尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或是疼痛治疗剂。另外，本发明涉及一种作为抑制FAAH活性的物质的尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的筛选方法、以及本发明的筛选方法得到的物质或含有抑制脂肪酸酰胺水解酶活性的物质的用于尿频·尿失禁治疗用、膀胱过度活动症治疗及/或疼痛治疗的医药组合物。

背景技术：
已知脂肪酸酰胺水解酶(Fatty acid amide hydrolase；FAAH)因水解内源性大麻素而失去活性(参照非专利文献1-4)。内源性大麻素(endocannabinoid)是作用于大麻素受体而发挥生理作用的生物体内物质的总称。代表性的内源性大麻素有花生四烯乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺、2-花生四烯酸甘油酯，这些物质在FAAH作用下水解、失去活性。另外，已知认为是大麻(大麻)活性成分的Δ9-四氢大麻酚，活化大麻素受体(参照非专利文献5)。
迄今为止，哺乳动物中已知的有2种大麻素受体CB1、CB2。CB1发现于中枢及末梢神经系统，通过其活化，产生精神作用及镇痛作用等。CB2发现于免疫系统组织，通过其活化，产生消炎作用及镇痛(炎症性)作用等。
另一方面，在大白鼠膀胱炎标本中，大麻素受体激动剂使膀胱容量及排尿阈值增大(非专利文献6及非专利文献7)，另外，将大麻素受体激动剂给药于动物时，可以观察到幻觉、妄想、心动过速、直立性低血压等副作用，而在给药FAAH抑制剂时观察不到所述副作用(非专利文献8)，故期待FAAH抑制剂作为尿频·尿失禁治疗药、膀胱过度活动症治疗药及/或疼痛治疗药。
作为具有FAAH抑制活性的化合物，已知有能成为镇痛剂、抗焦虑药、抗癫痫药、抗忧郁症剂、止吐剂、心血管疾病治疗剂或青光眼治疗剂的化合物[芳香环或苯基取代脂肪族烃氨基甲酸C1-4烷基或多环式芳香环酯衍生物(专利文献1)及环己基氨基甲酸苯酯(专利文献2)]。另外，具有FAAH抑制活性的化合物二噁烷-2-烷基氨基甲酸酯衍生物作为已罗列疾病的一种方案记载有尿失禁的治疗药(专利文献3)。但是，在专利文献3中，没有证实尿频·尿失禁治疗药及/或膀胱过度活动症治疗效果的临床效果，连启示也没有。另外，在吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯中4-氨基吡啶基-哌啶-1-羧酸酯作为乙酰胆碱酯酶抑制剂(非专利文献9)所记载，但该化合物作为FAAH抑制剂及尿频·尿失禁治疗药及/或膀胱过度活动症治疗药，没有记载。
专利文献1国际公开小册子WO2003/065989号
专利文献2国际公开小册子WO2004/033422号
专利文献3特开2003-192659号
非专利文献1“前列腺素、白细胞三烯和必需脂肪酸(Prostaglandins Leukotrienes and Essential Fatty Acid)”、(英国)、2002年、第66卷、p.143-160
非专利文献2“英国药理学杂志(British Journal ofPharmacology)”、(英国)、2004年、第141卷、p.253-262
非专利文献3“自然(Nature)”、(英国)、1996年、第384卷、p.83-87
非专利文献4“生化药理学(Biochemical Pharmacology)”、(美国)、2001年、第62卷、p.517-526
非专利文献5“现代药物化学(Current Medicinal Chemistry)”、(美国)、1999年、第6卷、p.635-664
非专利文献6“神经科学杂志(The Journal of Neuroscience)”、2002年、第22卷、p.7147-7153
非专利文献7“疼痛(Pain)”、1998年、第76卷、p.189-199
非专利文献8“自然医学(Nature Medicine)”、(英国)、2003年、第9卷、p.76-81
非专利文献9“药物科学杂志(Journal of Pharmaceutical Science)”、1992年、第81卷、p.380-385

发明内容
本发明的课题是提供一种没有大麻那样的副作用及常用性的担心或减轻了这种副作用或担心的尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。另外提供一种作为抑制FAAH活性的物质的尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的筛选方法、及由本发明的筛选方法得到的物质或含有抑制脂肪酸酰胺水解酶活性作用的物质的，用于尿频·尿失禁治疗、膀胱过度活动症治疗及/或疼痛治疗的医药组合物。
本发明者为了研制具有FAAH抑制活性的化合物，进行了潜心研究，结果发现一种新型吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物。
另外，本发明者初次发现，当对由环磷酰胺(Cyclophosphamide)引起尿频的大白鼠给药具有FAAH抑制活性的化合物时，其有效膀胱容量增加，而且还发现，具有FAAH抑制活性的化合物对疼痛标本大白鼠也表现出优良的改善作用，因此，提供一种通过FAAH抑制剂选择性形成的尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的筛选方法，完成了本发明。
即，本发明涉及 [1]一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上所允许的盐，如通式(I)。
[化1]
[式(I)中的符号表示以下含意 HET15～7元非芳香族含氮杂环； R1、R2及R3相同或不同，表示 (1)H， (2)OH， (3)可以被酯化的羧基， (4)氰基， (5)低级烷基-CO-， (6)氧代(＝O)， (7)式[R101-(O)m1]m2-[可以用HO取代的ALK1]-(O)n1-， (m1及n1相同或不同，表示0或1；m2表示1～5； ALK1低级亚烷基、低级亚链烯基或低级亚炔基； R101(i)H， (ii)可以用由(a)H2N-，(b)卤基，(c)氰基，(d)可以被酯化的羧基，(e)基团R1011aR1012aN-CO-，(f)HET2，(g)可以用卤基、氰基、OH、低级烷基-O-或低级烷基取代的Ar1a，其中， Ar1a芳基， (h)低级烷基，(j)OH，(k)可以用Ar1a或卤基-Ar1a取代的低级烷基-O-，(1)可以用卤基、Ar1a或HETAr1a取代的HET2-CO-，其中， HET2含氮杂环， HETAr1a含氮杂芳基， (s)HET2-CONR1011a-，(t)H2NCONH-，及(u)可以被酯化的羧基-ALK2a构成的族中选择的可用一个以上的取代基取代的Ar1a， ALK2a低级烷基或低级链烯基， (iii)可以用基团R1011aR1012aN或Ar1a取代的ALK2a，其中，R1011a或R1012a相同或不同，表示， (a)H，(b)cALK，其中， cALK环烷基， (c)可以用卤基、cALK、OH、低级烷基-O-或Ar1a取代的ALK2a或 (d)可以用卤基取代的Ar1a-SO2-， (iv)可以用由(a)可以用Ar1a或卤基-Ar1a取代的ALK2a，(b)Ar1a，(c)可以用低级烷基取代的HETAr1a，(d)Ar1a-CO-或卤基-Ar1a-CO-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的HET2， (v)可以用ALK2a取代的cALK，或 (vi)可以被酯化的羧基， (在此，m2为2～5时，[R101-(O)m1]可以相同，也可以不同) (8)基团R102-ALK1-N(R103)-CO-， (R102(i)H， (ii)cALK， (iii)HETAr1a，或 (iv)可以用由(a)HO，(b)ALK2a-O-，(c)cALK-ALK1-O-，(d)cALK-Ar1a-ALK1-O-及(e)Ar1a-ALK1-O-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a， R103(i)H， (ii)cALK， (iii)可以用由(a)HET2，(b)Ar1a及(c)卤基-Ar1a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的ALK2a， (iv)HETAr1a，或 (v)可以用由(a)cALK，(b)H2N，(c)基团R1011aR1012aN-CO-或(d)ALK2a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a-[CO]m1)， (9)基团R104aR105aN-[CO]m1-ALK1-， (R104a及R105a相同或不同，表示基团R103) (10)基团R106-ALK3-L1-， (R106(i)基团R101-(O)m1-， (ii)基团R104及R105N-， (iii)基团ALK2a-CONH-，或 (iv)基团Ar1a-CONH-， ALK3低级亚烷基，低级亚链烯基或环亚烷基， L1-C(＝O)-或-SO2-) (11)可以用Ar1a取代的ALK2a-CONH-， (12)可以用卤基取代的Ar1a， (13)基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-， (Ar2亚芳基， R107(i)H， (ii)卤基， (iii)可以用由(a)HO，(b)cALK，(c)HET2，(d)可以用卤基、低级烷基、低级烷基-O-、基团R1011aR1012aN-0[CO]p-、氰基或可以被酯化的羧基取代的Ar1a，(e)可以被酯化的羧基，(f)可以用基团R1011aR1012aN-[CO]p-取代的HET2-[CO]p-，及(g)基团R1011aR1012aN-[CO]p-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的ALK2a， p为O或1， (iv)基团R1011aR1012aN-[CO]p-，或 (v)基团R1011aR1012aN-[CO]p-Ar1a， 另外，在此，m2为2～5时，[R107-(O)m1]可以相同，也可以不同，而且，基团[R107-(O)m1]m2是指亚甲二氧基，可以形成环。) (14)基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO-， (在此，m2为2～5时，[R107-(O)m1]可以相同，也可以不同。) (15)基团[R1011aR1012aN-[CO]m1]m2-Ar2-(O)n1-， (在此，m2为2～5时，[R1011aR1012aN-[CO]m1]可以相同，也可以不同。) (16)基团[R108]m2-Ar2-L2-， [R108(i)H， (ii)卤基， (iii)HO， (iv)cALK-O-， (v)基团R109-ALK1-(O)m1-， (R109(a)H，(b)cALK，(c)可以用由(1’)卤基、(2，)氰基、(3，)N2O、(4’)可以用卤基取代的ALK2a、(5’)HO、(6’)可以用卤基取代的ALK2a-O-、(7’)可以被酯化的羧基或(8’)基团R104R105N构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a，(d)HET Ar1a或(e)基团R104R105N-[CO]m1-，) (vi)基团R1013R1014N- R1013、R1014相同或不同，表示(i)H，(ii)ALK2a，(iii)cALK-ALK1-，或(iv)可以用由(1’)卤基、(2’)氰基、(3’)可以用卤基取代的ALK2a、(4’)可以用卤基取代的ALK2a-O-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a-ALK1a-， (vii)可以用低级烷基取代的HET2-(O)m1-， L2-CO-或-S(O)q-， q0、1或2， 另外，在此，m2为2～5时，[R108]可以相同，也可以不同。] (17)基团[R101]m2-Ar2-CONH-， (在此，m2为2～5时，[R101]可以相同，也可以不同。) (18)基团[R111]m2-HETAr2-(O)m1-， (R111(i)H，(ii)卤基，(iii)氧代(＝O)，或(vi)基团R103a-(O)n1-， R103a(i)H， (ii)cALK， (iii)可以用由(a)HET2或(b)Ar1a，(c)cALK及(d)卤基-Ar1a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的ALK2a， (iv)HETAr1a，或 (v)可以用由(a)cALK，(b)H2N及(c)基团R1011aR1012aN-CO-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a， HETAr2含氮杂亚芳基， 另外，在此，m2为2～5时，[R111]可以相同，也可以不同。) (19)式[R112]m2-HETAr2-N(R103)-CO-， (R112(i)H， (ii)cALK， (iii)ALK2a，或 (iv)可以用由(a)卤基，(b)HO，(c)ALK2a-O-及(d)Ar1a-ALK1-O-构成的族中的一个以上的取代基取代的Ar1a，另外，在此，m2为2～5时，[R112]可以相同，也可以不同。) (20)式[R108]m2-HETAr2-L2-， (在此，m2为2～5时，[R108]可以相同，也可以不同。) 其中，R1、R2及R3的任意一个基团在基团[R111]m2-HETAr2-(O)m1-中的m1为0时，剩下的R1、R2及R3的基团为H； R4、R5、R6及R7相同或不同，表示 (1)H， (2)卤基， (3)可以被酯化的羧基， (4)HO， (5)基团R113-ALK4-(O)m3-， (ALK4低级亚烷基、低级亚链烯基或低级亚炔基； m30或1； R113(i)H， (ii)HO， (iii)可以用可以被酯化的羧基取代的低级烷基-O-， (iv)可以被酯化的羧基， (v)低级烷基-CO-O-，或 (vi)基团R104bR105bN-[CO]m3-(R104b及R105b相同或不同，为基团R103) (6)R114R115N(R114及R115相同或不同，表示(i)H或(ii)可以用基团R104bR105bN取代的ALK2b， ALK2b低级烷基或低级链烯基， (7)基团R116-(ALK4)n2-N(R117)-CO-， (n20或1， R116(i)H， (ii)HO， (iii)低级烷基-O-， (iv)可以被酯化的羧基， (v)基团R104bR105bN-[CO]m3-， (vi)可以用(a)HO或(b)ALK2b-O-取代的Ar1b，Ar1b芳基， (vii)可以用基团R104bR105bN-[CO]m3-或可以被酯化的羧基取代的HET3， HET3含氮杂环， (viii)可以用基团R104R105N-[CO]m3-取代的Ar1b，或 (ix)SO3H)， R117(i)H或(ii)可以用Ar1b取代的ALK2b) (8)可以用由可以被酯化的羧基及基团R1011bR1012bN-[(CO)]m3-构成的族中的一个以上的取代基取代的Ar1b， R1011b及R1012b相同或不同，表示 (i)H， (ii)cALK， (iii)可以用卤基、cALK、OH、低级烷基-O-或Ar1b取代的ALK2b，或 (iv)可以用卤基取代的Ar1b-SO2-， (9)可以用可以被酯化的羧基取代的HET3， (10)可以用由ALK2b及基团R104bR105bN-[CO]m3-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的HET3-CO-，或 (11)氰基。其中，不包括4-氨基吡啶-3-基哌啶-1-羧酸酯。以下同样。] [2]如[1]所述的化合物，其用通式(II)表示。
[化2]
[式(II)中，R1～R7与权利要求1所述的含意相同，T表示CH2、NH、NHCH2或O。在此，也包含用R1～R3取代T的氢的情况。以下同样。] [3]如[2]所述的化合物，其中，R1～R3相同或不同，为基团[R101-(O)m1]m2-[可以用HO取代的ALK1]-(O)n1-、基团R102-ALK1-N(R103)-CO-、基团R106-ALK3-L1-、基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-、基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO-或基团[R108]m2-Ar2-L2-。
[4]一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其用通式(III)表示。
[化3]
[式(III)中的符号表示以下含意。
A环苯环、环戊环、环己环、环庚环或5～7元含氮杂环； L单键、低级亚烷基、低级亚链烯基、-N(R15)-C(＝O)-、-C(＝O)-N(R15)-、-(低级亚链烯基)-C(＝O)-、-O-或-C(＝O)-； R15H或低级烷基； XCH或N； R8～R10相同或不同，表示 选自下述G族中的基团、 选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的芳基、 选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的含氮杂芳基、 R16-(低级亚烷基)-O-、R16-(低级亚烷基)-N(R15)-、 或R17R18N-C(＝O)-， R16可以用选自下述G族中的相同或不同的基团取代的芳基、 可以用选自下述G族中的相同或不同的基团取代的含氮杂芳基或3～8元环烷基； R17及R18相同或不同，表示H、低级烷基或3～8元环烷基； (而且，R17及R18与键合的N原子成为一体，可以形成3～8元含氮杂环。) G族H、卤基、-CN、-CF3、低级烷基或-O-低级烷基， R11H、低级烷基或氧代(＝O)； R12～R14相同或不同，表示H、低级烷基、-C(＝O)-O-(低级烷基)、-CO2H， 或-CONH2] [5]如[4]所述的化合物，其A环为苯环、环己环、哌啶环或哌嗪环。
[6]如[5]所述的化合物，其中，R9、R10、R11、R12、R13为氢。
[7]一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其用通式(IV)表示。
[化4]
[式(IV)中的符号表示以下含意。
A1环苯环、哌啶环或哌嗪环； L1低级亚烷基、低级亚链烯基、-N(R15)-C(＝O)-或-O-； R15H或低级烷基； R19选自下述G族的基团、 可以用选自下述G族中的相同或不同的基团取代的含氮杂芳基、 R16-(低级亚烷基)-O-或R17R18N-C(＝O)-； R16可以用选自下述G族中的相同或不同的基团取代的芳基、 可以用选自下述G族中的相同或不同的基团取代的含氮杂芳基或3～8元环烷基； R17及R18相同或不同，表示H或低级烷基； (而且，R17、R18与键合的N原子成为一体，可以形成5或6元含氮杂环。) G族H、卤基、-CN、-CF3、低级烷基或-O-低级烷基， R20H、-C(＝O)-O-(低级烷基)、-CO2H或-CONH2] [8]一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其用通式(V)表示。
[化5]
[式(V)中的符号表示以下含意。
L2低级亚烷基、低级亚链烯基或-(低级亚链烯基)-C(＝O)-； R21H、卤基、-CN、-CF3、低级烷基或-O-低级烷基； R22H、-C(＝O)-O-(低级烷基)、-CO2H或-CONH2] [9]如[1]所述的化合物，其选自 吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯、 5-{[(4-4[(3-氟苄基)氧基]苯氧基)哌啶-1-基]羰基}氧基}烟酸、 5-({[4-(2-苯乙基)哌啶-1-基]羰基}氧基)烟酸、 5-[({4-[4-(2-环己基乙氧基)苯氧基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸、 5-[({4-[(E)-2-苯基乙烯基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸、 5-{[(4-{3-[1-(6-甲基吡啶)-2-基]哌啶-4-基]丙基}哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-{2-[3-(氨基羰基)苯基]乙基}哌啶-1-羧酸酯、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-{3-[(二甲基氨基)羰基]苯基}乙基)哌啶-1-羧酸酯、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-{2-[3-哌啶-1-基羰基]苯基)乙基)哌啶-1-羧酸酯、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-[3-吡咯烷-1-基羰基]苯基)乙基)哌啶-1-羧酸酯、 吡啶-3-基4-[(2E)-3-苯基丙-2-烯酰基]哌嗪-1-羧酸酯、 吡啶-3-基4-(苯胺羰基)哌啶-1-羧酸酯、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-苯乙基)哌啶-1-羧酸酯、 吡啶-3-基4-(2-苯乙基)哌嗪-1-羧酸酯、 5-(甲氧基羰基)吡啶-3-基4-(2-苯乙基)哌嗪-1-羧酸酯、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-[2-(3-氟苯基)乙基]哌啶-1-羧酸酯、 5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-[2-(3-氰基苯基)乙基]哌啶-1-羧酸酯。
[10]一种医药组合物，其以[1]所述的化合物为有效成分。
[11]如[10]所述的医药组合物，其是FAAH抑制剂。
[12]如[10]所述的医药组合物，其是治疗尿频·尿失禁及/或膀胱过度活动症的药物。
[13]如[10]所述的医药组合物，其是治疗疼痛的药物。
[14]如[1]所述化合物的使用，以制造FAAH抑制剂、治疗尿频·尿失禁及/或膀胱过度活动症的药物。
[15]如[1]所述化合物的使用，以制造FAAH抑制剂、治疗疼痛的药物。
[16]一种治疗尿频·尿失禁及/或膀胱过度活动症的方法，其包含将[1]所述的化合物以治疗的有效量给药于患者。
[17]一种治疗疼痛的方法，其包含将[1]所述的化合物以治疗的有效量给药于患者。
[18]一种筛选尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的方法，其包含如下工序 (1)使下述多肽与试验物质接触的工序，所述多肽含有如下所述的氨基酸序列，并且可以将基质水解；所述氨基酸序列包括 (a)序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列； (b)在序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列中缺失、取代及/或插入1～10个氨基酸的氨基酸序列； (c)与序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列的相同性为70％以上的氨基酸序列；或 (d)由序列号1、序列号3、序列号5或序列号7表示的多核苷酸或者与其互补序列在严格的条件下杂交的多核苷酸进行编码的氨基酸序列中，除去全部或至少含有膜贯通区域的氨基末端区域而成的氨基酸序列； (2)将前述多肽的活性变化进行分析的工序；以及 (3)选择抑制前述多肽的活性的物质的工序。
(在此，使FAAH或与功能性FAAH接触的“基质”，只要是利用FAAH或功能性FAAH进行水解的内源性大麻素，任何物质都可以使用。具体来讲，可以使用花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、2-花生四烯酸甘油酯、油酸酰胺等作为基质。另外，可以使用将这些基质用3H或14C等标记过的物质或标记过的物质和未标记过的物质的混合物。以下同样) [19]一种筛选尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的方法，其包含如下工序 (1)使下述多肽与试验物质在所述多肽的基质存在下接触的工序，所述多肽含有如下所述的氨基酸序列，并且可以将基质水解；所述氨基酸序列包括 (a)序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列； (b)在序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列中缺失、取代及/或插入1～10个氨基酸的氨基酸序列； (c)与序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列的相同性为70％以上的氨基酸序列；或 (d)由序列号1、序列号3、序列号5或序列号7表示的多核苷酸或其互补序列在严格的条件下进行杂交的多核苷酸进行编码的氨基酸序列中，除去编码后的全部或至少含有膜贯通区域的氨基酸末端区域的氨基酸序列。
(2)测定从该基质向水解产物变换的量的工序；以及 (3)选择抑制该基质水解的物质的工序。
[20]一种筛选尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的方法，其包含如下工序 (1)使表达下述多肽的细胞或组织、或者该细胞或该组织的溶解液或破碎液与试验物质在所述多肽的基质存在下接触的工序，所述多肽含有如下所述的氨基酸序列，并且可以将基质水解；所述氨基酸序列包括 (a)序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列； (b)在序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列中缺失、取代及/或插入1～10个氨基酸的氨基酸序列； (c)与序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列的相同性为70％以上的氨基酸序列；或 (d)除去用序列号1、序列号3、序列号5或序列号7表示的多核苷酸或与其互补序列在严格的条件下进行杂交的多核苷酸进行编码的氨基酸序列中，除去全部或至少含有膜贯通区域的氨基酸末端区域的氨基酸序列。
(2)测定从该基质向水解产物变换的量的工序； (3)选择抑制该基质水解的物质的工序。
[21]一种筛选尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂的方法，其包含如下工序(1)使脂肪酸酰胺水解酶接触试验物质的工序；(2)对前述酶的活性变化进行分析的工序；及(3)选择抑制前述酶的活性的物质的工序。
对本发明的化合物而言，在实施例438至实施例442的药理试验中，已确认的效果有例如，表64表示的代表化合物具有优良的FAAH抑制作用；实施例441表示的代表化合物作为尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗药是有用的；实施例442表示的代表化合物作为疼痛治疗药是有用的。另外，本发明化合物在水溶液中的稳定性高，具有作为药品的优良的性质。
研究发现，专利文献2所述的发明对镇痛剂、抗焦虑药、抗癫痫药、抗抑郁症剂、止吐剂、心血管病治疗剂或青光眼治疗剂是有用的，与此相比，本发明发现了对与专利文献2不同的尿频·尿失禁治疗剂及/或膀胱过度活动症治疗剂是有用的。而且，本发明化合物由于具有优良的FAAH抑制作用，故作为如下治疗剂是有用的(1)精神神经疾患(焦虑、抑郁症、癫痫等)；(2)脑损伤，神经退化性疾病(头部外伤、脑缺血、失智症(痴呆)等)；(3)免疫、炎症性疾患；(4)呕吐；(5)厌食；(6)肠易激综合征、溃疡性大肠炎；(7)高血压；(8)青光眼；或(9)失眠。另外，本发明是没有大麻那样的副作用及常用性担心或减轻了这种副作用或担心的化合物。
而且，依据本发明的筛选方法，可以以控制FAAH的活性为基础，筛选没有大麻那样的副作用及常用性担心或减轻了这种副作用或担心的尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。利用上述筛选方法得到的物质及抑制FAAH活性的物质可以作为有用的尿频·尿失禁治疗用、膀胱过度活动症治疗用及/或疼痛治疗用医药组合物。

具体实施例方式 下面，详细地说明本发明。
下面，对本发明化合物详细地进行说明。
[定义等] 在本说明书的结构式的定义中，只要没有特别说明，“低级”是指碳数为1～6个的直链或支链状的碳链。
“低级烷基”例如有甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、异己基等，优选为甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基。
“低级链烯基”是指至少具有1个双键的脂肪族烃基，例如有乙烯基、丙烯基、烯丙基、异丙烯基、1，3-丁间二烯基、己烯基等。
“环烷基”是指碳数为3～14个1～3环系脂肪族饱和烃环基，例如有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环庚基、双环辛基、三环十二醇基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.2]辛基等，优选环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基。
“芳基”是指碳数为6～14个1～3环系芳香族烃环基，而且，可以在苯基上缩聚环烷基。例如有苯基、茚基、萘基、蒽基、菲基、茚满基、四氢萘基等，优选苯基、萘基。
“杂环”是指含有1～4个选自N、S及O中的杂原子的4～16元单环式、2环式或3环式的饱和或不饱和环。该杂环可以具有交联或螺环。不饱和环包括芳香族的环(杂芳基)及非芳香族的环。单环式例如有氮杂环丁烷基、氧杂环丁基、吡咯烷基、1，3-二氧杂环戊基、吡唑烷基、哌嗪基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、呃唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三唑基、噻二唑基、哒嗪基、噁二唑基、四唑基；二环式例如有吲哚基、异氮杂茚基、3，4-亚甲基二氧苯基、3，4-乙烯基二氧苯基、苯并呋喃基、苯并噻嗯基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲哚基、异氮杂茚基、喹啉基、异喹啉基、1，2，3，4-四氢喹啉基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、十氢异喹啉基、喹喔啉基等；3环式例如有咔唑基、吖啶基、吩噻嗪基。交联杂环基例如有奎宁环基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、7-氮杂双环[2.2.1]庚基等。螺环式杂环基例如有1，4-二噁-8-氮杂螺环[4.5]癸基等。
“含氮杂芳基”是指上述杂环基中具有1～3个氮原子的4元～10元芳香族的1～2环系含氮杂芳基，例如有吡咯基、咪唑基、噻唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、异氮杂茚基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基等，优选咪唑基、噻唑基、吡啶基、苯并咪唑基、喹啉基。
“含氮饱和杂环基”是指上述杂环基中具有1～3个氮原子的3元～10元的1或2环系含氮环烷基，例如有氮丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、六氢吖庚因基(ヘキサヒドロァゼピニル)、1，4-二吖庚因基、1，4-噁吖庚因基(ォキサゼピニル)、奎宁环基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、氮杂双环辛基(例如，氮杂双环[3.2.1]辛基)、二氮杂双环辛基、氮杂双环壬基、氮杂双环癸基、1，4-二噁-8-氮杂螺环[4.5]癸基等，优选吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、六氢吖庚因基、1，4-二吖庚因基、1，4-噁吖庚因基、奎宁环基、2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、氮杂双环[3.2.1]辛基。
“含氮杂环”是指上述含氮杂芳基、上述含氮饱和杂环基、或含氮杂芳基和含氮杂环烷基缩聚而成的基团，优选吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、六氢吖庚因基、氮杂双环[3.2.1]辛基、1，4-二噁-8-氮杂螺环[4.5]癸基、咪唑基、吡啶基、喹啉基。
“非芳香族含氮杂环”是指从上述含氮杂环基中除去含氮杂芳基的含氮饱和杂环基及不饱和含氮杂环基。优选5～7元的非芳香族含氮杂环基。
“低级亚烷基”、“低级亚链烯基”、“环亚烷基”、“亚芳基”及“含氮杂亚芳基”是指从上述低级烷基、低级链烯基、环烷基、芳基及含氮杂芳基中除去任意1个氢原子而成的2价基团。“酯化的羧基”是指低级烷基-O-CO-、芳基-低级烷基-O-CO-或H2N-CO-芳基-低级烷基-O-CO-。
“卤代”是指卤基，具体有氟、氯、溴、碘，优选氟、氯。
另外，“可以取代”是指“不取代”或“用相同或不同的1～5个取代基取代”。
对本发明化合物(I)而言，根据取代基的种类不同而存在光学异构体(光学活性体、非对映异构体等)或几何异构体。因此，在本发明化合物(I)中，也包含这些光学异构体或几何异构体的混合物或离析而成的物质。
另外，本发明化合物(I)可以形成酸加成盐或与碱形成的盐之类的药剂学上允许的盐。例如，可以列举与盐酸、溴化氢、碘化氢、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸及蚁酸、醋酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、谷氨酸等有机酸的酸加成盐；与钠、钾、镁、钙、铝等无机碱及甲胺、乙胺、一乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、赖氨酸、鸟氨酸等有机碱的盐。而且，本发明化合物(I)或其药剂学上允许的其盐可以形成水合物、乙醇等溶剂合物及多形性晶体。
而且，本发明化合物(I)也完全包含在生物体内进行代谢而变换成本发明化合物(I)或其药剂学上允许的盐的化合物和所谓的前体药物。作为形成本发明化合物(I)的前体药物的基团，可以例举Prog.Med.52157-2161(1985)所述的基团及広川書店1990年刊“医药品的开发”第7卷高分子设计163～198页所述的基团。具体来讲，是利用水解、溶剂分解或在生理学的条件下可以变换成本发明中的伯胺或仲胺、HO-、HO-CO-等的基团，HO-的前体药物例如有可以取代的低级烷基-CO-O-、可以取代的芳基-CO-O-、可以取代的杂芳基-CO-O-、RO-CO-可以取代的低级亚烷基-CO-O-(R表示H-或低级烷基。以下同样)、RO-CO-可以取代的低级亚链烯基-CO-O-、RO-CO-低级亚烷基-O-低级亚烷基-CO-O-、RO-CO-CO-O-、ROS(＝O)2可以取代的低级亚链烯基-CO-O-、酞基-O-、5-甲基-1，3-二氧戊环-2-酮-4-基-甲氧基等。
本说明书中的“尿频”，是指排尿次数超过正常范围而增加的状态。另外，前述“尿失禁”是指作为社会、卫生问题的不自主的排尿状态。
本说明书中的“膀胱过度活动症”是指根据尿频及尿意急迫性之类的自觉症状进行诊断的症候群[“神经泌尿学与尿动力学(Neurourologyand Urodynamics)”、(美国)、2002年、第21卷、p.167-178]。其发病原因有神经障碍(例如由神经原性膀胱、脑梗塞引起的障碍)、下部尿路闭塞(例如前列腺肥大)、年龄增大等，通常认为，这些发病原因中共同的发病机制是辣椒素感受性传入神经活动亢进。
通过改善尿频·尿失禁、尿意急迫性等症状，可以治疗膀胱过度活动症。这也可以由下述得知，例如，通过将作为抗胆碱药的盐酸奥昔布宁(日本标准商品分类号码87259；ァベンティスファ一マ株式会社)给药于膀胱过度活动症患者，1日3次，一次2～3mg，改善尿频·尿失禁、尿意急迫性等症状，可以治疗膀胱过度活动症。
有尿频·尿失禁治疗效果及/或膀胱过度活动症治疗效果的确认，可以由从业者通过使用公知的方法或将其改良过的方法来实施。例如，通过将50～200mg环磷酰胺(CPA)给药于大白鼠、豚鼠、狗等引起的病态标本在该领域可以非常好地使用(Ozawa等、The Journal of Urology、第162卷、第2211-2216页、1999年；Boucher等、The Journal of Urology、第164卷、第203-208页、2000年)。该标本是伴有出血性膀胱炎的病态标本，但由于辣椒素感受性传入神经参与该尿频发病机制，故通常认为本标本是根据含有神经原性膀胱的各种膀胱过度活动症的病态标本(Carlo Alberto Maggi等、Journal of the Autonomic Nervous System、第38卷、第201-208页、1992年)。尿频状态可以通过有效膀胱容量的减少来确认。通过对该病态标本动物以口服、腹腔内或静脉内给药一次或反复给药有效量的医药组合物，可以根据有效膀胱容量的增加，确认尿频·尿失禁治疗效果及/或膀胱过度活动症治疗效果。
另外，本说明书中的“疼痛”是神经原性疼痛、伤害感受性疼痛、炎症性疼痛等的总称，其中，“神经原性疼痛”是指由末梢或中枢神经功能异常引起的疼痛，例如有糖尿病性神经障碍的疼痛、癌性疼痛、三叉神经痛、幻肢痛、带状疱疹后疼痛或丘脑痛等。神经原性疼痛的临床主要症状为揪心那样的疼痛、灼烧那样的疼痛、痛觉过敏及异常疼痛症(痛觉异常)等。
众所周知，作为普通的镇痛剂的非类固醇抗炎症药及吗啡等麻醉性镇痛药，对神经原性疼痛的治疗效果差。在临床治疗中，加巴喷丁等抗癫痫药及美西律等抗心律不整药可以用于缓解疼痛，但其镇痛效果还不充分。
有神经原性疼痛治疗效果的确认，可以由从业者通过使用公知的方法或将其改良过的方法来实施。例如，在将Kim and Chung的方法(Pain、第50卷、第50卷、第355-365页、1992年)的一部分进行改变制作成的L5/L6脊髓神经结扎大白鼠中，可以根据对由相对触碰刺激的显著的反应阈值降低(痛觉异常)的化合物引起的改善作用的评价来确认神经原性疼痛治疗效果。
需要说明的是，本发明化合物包含对尿频·尿失禁、膀胱过度活动症有效的化合物、对疼痛、特别是神经原性疼痛有效的化合物及对这两种都有效的化合物。
[制造法] 对本发明化合物及其药剂学上允许的盐而言，可以利用以其基本骨架或取代基的种类为基础的特征，应用各种公知的合成法而制造。
此时，根据官能团的种类，在原料至中间体阶段将该官能团用适当的保护基取代(可以容易地转化为该官能团的基团)，有时在制造技术上是有效的。这种官能团例如有氨基、羟基或羧基等，作为这些保护基，例如，可以列举格林(Greene)及伍兹(Wute)著“Protective Groupsin Organic Synthesis(第2版)”所述的保护基，可以根据反应条件适当选择使用这些保护基。
在这种方法中，引入该保护基进行反应后，根据需要除去保护基，由此可以得到所希望的化合物。
下面，对本发明化合物或其中间体的代表性制造法进行说明。
(下面的文章中的符号如下所述。
DMFN，N-二甲基甲酰胺；DMSO二甲基亚砜；THF四氢呋喃；TFA三氟醋酸；Tol甲苯；EtOAc醋酸乙酯；DCE1，2-二氯乙烷；TEA三乙胺) 下面，对本发明化合物的代表的制造法进行说明，但并不限定于这些制造法。
另外，在本发明化合物中，同样的取代基存在于该制造法的反应式中以外的位置时，利用取代基修饰反应，可以容易地制造本发明中所含的化合物。
第1制造法(氨基甲酸酯化反应) [化6]
(式中，X在本反应中是指有利的离去基团。以下同样。) 本反应可以利用下述方法进行，在相对反应惰性的溶剂中、冷却下或室温下乃至加温下，将通式(VI)所示的酮衍生物和该反应对应量的通式(VII)所示的羟基吡啶衍生物进行搅拌、酯化。离去基X包含卤原子、低级烷氧基、苯氧基、咪唑基等。惰性溶剂例如有DMF、二甲基乙酰胺、THF、二噁烷、二甲氧基乙烷、二乙氧基乙烷、苯、Tol或二甲苯等及它们的混合溶剂。为了促进本反应，优选添加碱(例如钠、氢化钠、甲醇钠、乙醇钠等)。
第2制造法(氨基甲酸酯化反应) [化7]
本反应可以如下进行在对前述反应惰性的溶剂中、冷却下或室温下乃至加温下，将通式(VIII)所示的含氮杂环化合物和该反应对应量的通式(IX)所示的吡啶衍生物进行搅拌。为了促进本反应，优选添加碱(例如钠、氢化钠、甲醇钠、乙醇钠、TEA、吡啶等)。
第3制造法(水解反应) 具有羧基的本发明化合物(1-3)可以通过水解反应，使酯化好的具有羧基的化合物按照例如格林(Greene)及伍兹(Wute)著“Protective Groupin Organic Synthesis(第2版)”所述的脱保护反应进行。
[化8]
(式中，基团ROCO-是指酯化好的羧基。以下同样) 第4制造法(酰胺化反应) [化9]
当化合物(1-3)或R1为羧酸时，可以制造胺，当R1为胺时，可以制造羧酸和各种酰胺化合物。当含氮杂环为呱啶时，通过使用羧酸或磺酸化合物或它们的反应性衍生物，可以制造各种酰胺化合物。可以在缩聚剂(例如二环己基碳二酰亚胺(DCC)、二异丙基碳二酰亚胺(DIPC)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二酰亚胺(WSC)、1，1′-羰基二-1H-咪唑(CDI)等)、根据情况还有添加剂(例如N-羟基琥珀酰亚胺(HONSu)、1-羟基苯并三唑(HOBt)、二甲氨基吡啶(DMAP)等)的存在下进行反应。作为羧酸或磺酸化合物的反应性衍生物，可以使用酰卤、酸酐、活性酯等。也可以通过例如日本化学会编“实验化学讲座(第4版)”22卷(1992年)(丸善)等所述的方法进行反应。
第5制造法(偶合反应) [化10]
(式中的符号表示以下含意。X是指卤素或-O-SO2-CF3，Y是指-B(OH)2、二烷基硼、二烷氧基硼或三烷基锡。另外，也可以是指X为-B(OH)2、二烷基硼、二烷氧基硼或三烷基锡，Y为卤素或-O-SO2-CF3。) 优选使由化合物(I-6)和化合物(I-7)的组合构成的2个芳香环在过渡金属催化剂及适当的添加剂的存在下反应，合成二芳基化合物(I-8)的反应。代表的方法可以列举丸善1991年刊“实验科学讲座”第25卷有机合成VII353～366项、396～427项所述的方法。过渡金属催化剂可以适当使用四肌醇(三苯基膦)钯等各种钯络合物、二溴二(三苯基膦)镍等各种镍络合物等。添加剂可以适当使用三苯基膦、碳酸钠、锌等，优选根据应用的方法适当选择。通常情况下，前述反应在溶剂中、在室温～加热下进行。另外，除在此所述的反应之外，也可以适当使用形成二芳基结构的反应，例如，在适当的过渡金属催化剂存在下的卤代芳基化合物和芳基格氏试剂的反应等。
(原料化合物的制造法) 由于要求用于制造本发明化合物的原料化合物为已知化合物，可以通过前述制造法所述的反应或对从业者来说自明的反应(J.March著，ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY(John WILEY & SONS(1992))(例如，酰基化、烷基化、脲化、氧化、还原(优选COMPREHENSIVEORGANIC SYNTHESIS 8 REDUCTION(Pergamon Press)(1991))、卤化反应等)制造。
制法(i) 光延反应 原料化合物(X)可以通过使通式(XI)及(XII)表示的醇付之光延反应来合成。在等量至过量的三苯基膦及偶氮二羧酸二乙酯存在下，在第一制造法所述的惰性的溶剂中、冷却下乃至加热下，将化合物(XI)和(XII)边搅拌边进行本反应。
[化11] (式中的符号如下所述。

U氨基的保护基、 ALK3可以用HO取代的ALK1，以下同样。) 制法(ii) 置换反应 本反应是烷基化反应。使伯胺、仲胺、乙醇、硫醇、伯酰胺及仲酰胺等和具有该反应对应量的离去基的化合物，在对反应惰性的溶剂中、等量或过量使用一种、冷却下乃至加热下，边搅拌边进行本反应。在碱(例如碳酸钾、碳酸钠及碳酸铯等无机碱或TEA及二异丙基乙胺等有机碱、叔丁醇钾及叔丁醇钠等金属醇盐或氢化钠或氢化钾等)、添加剂(碘代四-正丁基铵、碘化钾或碘化钠等)的存在下使其反应，有时对反应的顺利进行这一点上是有利的。
对上述反应惰性的溶剂，例如有二氯甲烷、DCE、氯仿、苯、Tol、二甲苯、醚、THF、二噁烷、EtOAc、乙醇、甲醇、2-丙醇、乙腈、DMF、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基咪唑啉酮、DMSO、丙酮、丁酮或水等及它们的均匀系及不均匀系混合溶剂，可以根据各种反应条件适当选择。
[化12]
[上述式中的符号如下所述。
QO、S或NH Z离去基(例如CI、Br、I或OMs等)] 制法(iii) 本制造法是通过使通式(X VI)表示的醛或酮及通式(X VII)表示的Wittig试剂或Horner-Emmons试剂反应而制造化合物(X VIII)的方法。
在等量至过量的碱(例如TEA及二异丙基乙胺等有机碱或碳酸钾、碳酸钠及碳酸铯等无机碱)存在下、在前述惰性溶剂中、等量或使任一种过量使用、在冷却下乃至加热下，将化合物(X VI)及化合物(X VII)边搅拌边进行本反应。在添加剂(碘代四-正丁基铵或碘化钾等)的存在下使其反应，有时在使反应顺利进行这一点上是有利的。
[化13]
Z1用于Wittig试剂或Horner-Emmons试剂的基团(磷盐或亚磷酸二酯等 n0或1) [1]本发明的筛选方法 在脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase；下面称为FAAH)中，包含具有将花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯进行水解的活性酶，只要是作为相同的分子种类所鉴定的酶，就可以是来自任何种类的酶，例如，包含来自人(GenBank登陆号NM_001441)、小鼠(GenBank登陆号NM_010173)、大白鼠(GenBank登陆号NM_024132)、猪(GenBank登陆号AB027132)、兔、绵羊、鸡、狗、猫、仓鼠、松鼠、狗熊、鹿、猿猴等哺乳动物的酶。另外，不限定于天然的多肽，也包含人工制造的变种。
对于(a)、(b)、(c)、(d)，总称(a)～(d)，下面称为“功能性FAAH”。其中， (a)包含序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列中的除去全部或至少含有膜贯通区域的氨基酸末端区域的氨基酸序列，并且，可以将花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯水解的多肽； (b)包含序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列中，1～10个、优选1～7个、进一步优选1～5个氨基酸缺失、取代及/或插入形成的氨基酸序列中的除去全部或至少含有膜贯通区域的氨基酸末端区域的氨基酸序列，并且，可以将花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯水解的多肽； (c)包含与序列号2、序列号4、序列号6或序列号8表示的氨基酸序列具有相同性为70％以上、优选80％以上、进一步优选90％以上、最优选95％以上的相同性的氨基酸序列中，除去全部或至少含有膜贯通区域的氨基酸末端区域的氨基酸序列，并且，可以将花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯水解的多肽； (d)包含用序列号1、序列号3、序列号5或序列号7表示的多核苷酸或其互补序列在严格的条件下进行杂交的多核苷酸进行编码的氨基酸序列中，除去全部或至少含有膜贯通区域的氨基酸末端区域的氨基酸序列，并且，可以将花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯水解的多肽； 需要说明的是，本说明书中的前述“含有膜贯通区域的氨基酸末端区域”，是指包含位于氨基酸末端的装填于被细胞外区域与细胞内区域夹持的细胞膜的膜贯通区域的氨基酸末端区域。膜贯通区域存在何处，可以使用膜蛋白结构预测程序TMpred、PSORT、SOSUI等，根据氨基酸序列进行预测。对“含有膜贯通区域的氨基酸末端区域”而言，具体来讲，例如，序列号2的第1号至第30号、序列号6的第1号至第29号表示的区域。已知除去序列号6的第1号至第29号表示的区域而成的用序列号6的第30号至579号的氨基酸表示的多肽，与不除去前述区域的多肽具有同等的酶活性(Matthew等、Biochemistry、第37卷、第15177-15187页、1998年)。
本说明书中的前述“相同性”，是指利用Clustal V program(Higgins和Sharp、Gene、第73卷、第237-244页、1998年；Thompson等、NucleicAcid Res.、第22卷、第4673-7680页、1994年)检索，使用由省略准备的参数得到的值Identities。所述参数如下所述。
Pairwise Alignment Parameters中 K tuple 1 Gap Penalty 3 Window 5 Diagonals Saved 5 本说明书中的前述在“严格的条件”下的杂交作用，是指不引起非特异结合的条件，具体来讲，是指如下杂交作用例如，在由50％甲酰胺、5×SSC(0.75M NaCl、0.075M柠檬酸钠、pH7)、5×denhardt溶液(0.1％聚蔗糖(Ficoll)400、0.1％聚乙烯基吡咯烷酮、0.1％BSA)、变性鲑鱼精子DNA(50g/ml)、0.1％SDS及10％硫酸葡聚糖构成的溶液中，在37～42℃的温度条件下，进行杂交作用约12～18小时，根据需要用洗涤溶液(0.2×SSC、0.1％SDS)进行预洗涤后，在50～60℃的温度条件下进行洗涤。
本说明书中的前述“将花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯水解”，具体来讲，是指如下反应利用实施例1～4所述的方法，在pH7～9的缓冲液中，在4℃～37℃下，通过30分钟～90分钟的水解反应，将花生四烯酸乙醇胺(N-arachidonoylethanolamine)分解成花生四烯酸(arachidonic acid)和乙醇胺(ethanolamine)，将棕榈酰乙醇胺(N-palmitoyl ethanolamine)分解成棕榈酸(palmitic acid)和乙醇胺，将油酸酰胺(Cis-9，10-octadecenoamide)分解成油酸(Oleic acid)和氨，将2-花生四烯酸甘油酯(2-arachidonoyl glycerol)分解成花生四烯酸和甘油(glycerol)。
在本发明的筛选方法中，包含通过如下工序对尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂进行筛选的方法。所述工序为(1)使FAAH或功能性FAAH接触试验物质的工序；(2)分析FAAH或功能性FAAH的活性变化的工序；(3)抑制FAAH或功能性FAAH活性的物质的选择工序。
(1)使FAAH或功能性FAAH接触试验物质的工序 为了使FAAH或功能性FAAH接触试验物质，可以在如下a)、b)、c)、d)任一种物质中添加试验物质，恒温一定时间，或者也可以使用e)给药试验物质的实验动物的组织破碎液或血液。其中，a)、b)、c)、d)如下所述 a)表达FAAH或功能性FAAH的细胞或组织 b)利用含有对FAAH或功能性FAAH进行编码的多核苷酸的表达载体进行转染而成的转化体 c)a)或b)的溶解液或破碎液 d)由c)提纯成的FAAH或功能性FAAH的提纯物 a)表达FAAH或功能性FAAH的细胞或组织 作为表达FAAH或功能性FAAH的細胞，具体例如有神经细胞、神经胶质细胞、上皮细胞、内皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、血小板、肥大细胞、单核细胞、树状细胞、肝细胞、肾细胞、肠细胞、胰细胞、子宫细胞、胎盘细胞、膀胱细胞、前列腺细胞、角质化细胞及肌细胞。只要这些细胞表达FAAH或功能性FAAH，可以来自任何种类，例如，可以使用来自人、小鼠、大白鼠、猪、兔、绵羊、鸡、狗、猫、仓鼠、松鼠、狗熊、鹿、猿猴等哺乳动物的细胞。
在细胞中可以使用已树立的细胞株，也可以使用从动物组织剥离、或离析的细胞。作为已树立的细胞株，可以使用来自人膀胱上皮癌的细胞株5637细胞、来自人前列腺癌的细胞株PC-3细胞、大白鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞、大白鼠神经母细胞瘤株N18TG2细胞、大白鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞、大白鼠巨噬细胞细胞株J774细胞、来自大白鼠副肾髓质嗜铬性细胞瘤株PC-12细胞、人单核细胞样细胞株U937细胞、人乳腺癌细胞株MCF-7细胞、人乳腺癌细胞株EFM-19细胞、来自人大肠癌细胞株CaCo-2细胞(以上的细胞株都可以从American Type Culture Collection(ATCC)得到)、人表皮角质化细胞株HaCaT细胞及人神经母细胞瘤株CHP100细胞。可以优选使用来自人膀胱上皮癌的细胞株5637细胞及大白鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞。
作为表达FAAH或功能性FAAH的组织，具体例如有脑、膀胱、前列腺、肾脏、肝脏、精巢、肌肉、血管、胰脏、消化道、肺、子宫、胎盘、皮肤、淋巴细胞、血小板、巨噬细胞、单核细胞、肥大细胞及前列腺。可以优选使用脑、肝脏、单核细胞。只要这些细胞表达FAAH或功能性FAAH，可以来自任何种类，例如，可以使用来自人、小鼠、大白鼠、猪、兔、绵羊、鸡、狗、猫、仓鼠、松鼠、狗熊、鹿、猿猴等哺乳动物的组织。
为了研究在细胞及组织中是否表达有FAAH或功能性FAAH，可以使用细胞或组织的萃取液，通过使用有可以检测研究对象的多肽的抗体的蛋白质印迹法或使用有特别检测编码有研究对象的多肽的多核苷酸的引物PCR(Polymerase Chain Reaction)等确认。或者，可以通过如下方法确认，在pH为7～9的缓冲液中，在4℃～37℃下，使细胞或组织的溶解液或破碎液与花生四烯酸乙醇胺、棕榈酰乙醇胺、油酸酰胺及/或2-花生四烯酸甘油酯等基质反应30分钟～90分钟，研究这些基质是否水解。
b)利用含有对FAAH或功能性FAAH进行编码的多核苷酸的表达载体进行转染而成的转化体 将FAAH或功能性FAAH进行编码的多核苷酸，使用以已知的氨基酸序列及碱基序列的信息等为基础设计合成的引物及探针，通过利用PCR法及杂交作用的筛选，可以从cDNA库离析。
含有离析好的多核苷酸的片断，通过编入适当的表达载体，可以转染到真核生物和原核生物的宿主细胞中，在宿主细胞中可以表达利用转染的多核苷酸进行编码的多肽。在表达载体中，除了可以使用根据宿主细胞适当选择的公知的表达载体之外，可以使用在根据宿主细胞适当选择的质粒载体中引入适当的启动子及有关特征的序列的表达载体。另外，在表达利用编入的多核苷酸进行编码的多肽时，也可以使用引入了特定序列的表达载体，以使在融合有谷胱甘肽-s-转移酶(GST)及Flag、His等辅助信息的状态下表达。在用多种多核苷酸同时转染一个细胞时，可以以多种多核苷酸包含于一个表达载体的方式构成，或者也可以以分别包含于各自的表达载体的方式构成。或者，可以使用取得这种构成编入到染色体DNA的细胞而使用它。
对引入了所希望的多核苷酸的表达载体而言，可以利用DEAE-葡聚糖法(Luthman等、Nucleic Acids Res.、第11卷、第1295-1308页、1983年)、磷酸钙-DNA共沉淀法(Graham等、Virology、第52卷、第456-457页、1973年)、使用有作为市售的转染试剂的Lipofectamine2000(Invitrogen社)及FuGENE 6(Roche Molecular Biochemicals社)的方法、及电脉冲穿孔法(Neumann等、EMBO J.、第1卷、第841-845页、1982年)，放入宿主细胞，使其进行转染。使用大肠杆菌作为宿主细胞时，根据Hanahan的方法(Hanahan等、Mol.Biol.、第166卷、第557-580页、1983年)，使CaCl2、MgCl2或RbCl共存，将大肠杆菌配制成感受态细胞，加入引入了所希望的多核苷酸的表达载体，由此可以使其进行转染。
c)前述a)或b)的溶解液或破碎液 细胞的破碎液可以如下制作用缓冲液将细胞洗涤数次，然后在缓冲液中使用磨碎型均化器等进行破碎至均匀。组织破碎液可以如下制作加入组织重量的5～10倍容量的冰水浴过的缓冲液，在冰中利用磨碎型均化器磨碎至成为均匀的溶液，进一步进行超声波破碎数秒。前述缓冲液可以使用Tris缓冲液(50mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA)或Hepes缓冲液(1mM EDTA、100mM NaCl、12.5mM Hepes、pH8.0)等。例如，可以例举实施例265及实施例266的试验法。利用含有编码有FAAH或功能性FAAH的多核苷酸的表达载体进行转染的大肠杆菌的溶解液可以如下制作，即，通过离心分离回收大肠杆菌，在溶菌缓冲液(例如20mM Tris-HCl(pH8.0)、500mM NaCl、10％Glycerol、0.2mM EDTA、0.5mM DTT、10mM Imidazole、1％n-Octyl-β-D-glucopyranoside)中进行溶解。
d)由前述c)提纯成的FAAH或功能性FAAH的提纯物 FAAH或功能性FAAH的提纯物可以由a)表达FAAH或功能性FAAH的细胞或组织、或b)由含有对FAAH或功能性FAAH进行编码的多核苷酸的表达载体转染成的转化体的溶解液或破碎液，利用使用有亲合色谱法、电色谱法、凝胶过滤色谱法、离子交换色谱法及分配色谱法等一般的方法来提纯。
具体来讲，可以通过如下方法进行提纯在含有蔗糖的溶剂中将表达FAAH或功能性FAAH的细胞或组织进行均浆后，通过离心分离、超高速离心分离取得微粒体组分，且在含有Triton-X的溶剂中进行溶解后，通过进一步进行离心分离，将除去沉淀物后的蛋白质溶解液用高速蛋白液相色谱法(FPLC)系统(Pharmacia社)进行处理(Ueda等、J.Biol.Chem.、第270卷、第23823-23827页、1995年)。
或者，可以通过如下方法进行提纯在溶菌缓冲液中溶解以表达融合有Hig标记的FAAH或功能性FAAH的方式转染的大肠杆菌，进行超声波处理后，进行离心分离(例如，以10000×g计20分钟)，将得到的上清液与对用溶菌缓冲液预先进行过平衡化的His标记具有高的结合力的赖氨酸在低温下混合12小时以上，且对赖氨酸进行洗涤，然后，从赖氨酸洗提融合在Hig标记的FAAH或功能性FAAH。
为了使上述的细胞或组织、如上所述制作好的细胞或组织的溶解液或破碎液、或FAAH或功能性FAAH的提纯物接触试验物质，有在它们中添加或不添加试验物质、恒温一定时间的方法。具体来讲，使用根据其试验物质的溶解性而适当选择的蒸馏水、二甲基亚砜(DMSO)等溶解液溶解试验物质，并添加到前述的细胞或组织、它们的溶解液或破碎液、或FAAH或功能性FAAH的提纯物中，以使其为0.003nM～10μm，细胞或组织的情况在CO2恒温箱内、在37℃下恒温30～60分钟，其以外的情况在4℃～37℃下恒温30～90分钟，由此可以使其与试验物质接触。
e)给药有试验物质的实验动物的组织破碎液或血液 通过对实验动物给药试验物质，也可以使位于该实验动物的组织或血液的FAAH或功能性FAAH接触试验物质。实验动物可以使用例如小鼠、大白鼠、狗等哺乳动物。为了对这些实验动物给药试验物质，可以根据其试验物质的性质，将试验物质悬浊、溶解于作为通常使用的载体的生理盐水及二甲基甲酰胺溶液、10％甲基纤维素溶液等，进行例如口服给药、皮下给药、腹腔给药、静脉给药。给药后摘除组织，将这些组织利用上述c)所述的方法进行破碎，可以制作组织破碎液。具体来讲，例如，对9周龄大白鼠以1～3mg/kg的量口服给药试验物质，利用30分钟后摘除的脑、肝脏、单核细胞等组织，可以制作组织破碎液。或者，可以对13～18个月龄的狗以0.3～3mg/kg的量静脉给药试验物质，利用30分钟后摘除的脑、肝脏、单核细胞等组织，可以制作组织破碎液。更具体地来讲，例如，可以利用实施例267所述的方法制作组织破碎液。另外，可以从给药上述试验物质的实验动物的心脏及下肢大动脉等抽取血液。
(2)分析FAAH或功能性FAAH的活性变化的工序 为了分析FAAH或功能性FAAH的活性变化，有利用试验物质的接触的有无测定FAAH或功能性FAAH的酶活性变化的方法。FAAH或功能性FAAH的酶活性可以如下测定使FAAH或功能性FAAH接触基质一定时间，测量该基质的分解产物的量。或者可以如下测定测量实验动物的组织或血液中所含的FAAH的作为生物体内基质的内源性大麻素的量。
为了分析试验物质依存的酶活性的变化，可以如下进行分析在试验物质存在下、不存在下，使FAAH或功能性FAAH与基质接触一定时间，求出试验物质存在下的基质的分解产物的量相对于试验物质不存在下的基质的分解产物的量之比。
或者，预先使其与试验物质接触的FAAH或功能性FAAH及没有使其与试验物质接触的FAAH或功能性FAAH接触基质一定时间，求出依据预先使其与试验物质接触的FAAH或功能性FAAH的基质的分解产物的量相对于依据没有使其与试验物质接触的FAAH或功能性FAAH的基质的分解产物的量之比，由此，也可以测定试验物质依存的酶活性的变化。
而且，测定对实验动物给药试验物质的前后的组织或血液中的内源性大麻素的量，求出试验物质给药后的内源性大麻素量相对于试验物质给药前的内源性大麻素量之比；或测定给药、非给药试验物质的实验动物的组织或血液中的内源性大麻素的量，求出给药有试验物质的实验动物的组织或血液中的内源性大麻素的量相对于非给药试验物质的实验动物的组织或血液中的内源性大麻素的量之比，由此，可以测定试验物质依存的酶活性的变化。
对FAAH或功能性FAAH和基质而言，可以根据FAAH或功能性FAAH的状态、在下面的条件下使其接触。
为了使前述(1)a)、b)的细胞、组织中表达的FAAH或功能性FAAH与基质接触，有如下方法将前述基质添加到pH7～9的缓冲液中的培养细胞或组织中，在CO2恒温箱内，在37℃或室温下，优选使其反应30～60分钟。反应的停止可以通过如下方法进行通过将该细胞或该组织移到冰上且进行骤冷，使其以充分的浓度接触FAAH抑制剂，或加入氯仿和甲醇的1∶1(容量比)溶液。利用前述(1)c)所述的方法，可以将这些细胞、组织溶解、破碎，制作溶解液或破碎液。
为了使前述(1)c)、e)的细胞、组织的溶解液或破碎液中的FAAH或功能性FAAH和基质接触，有如下方法利用pH7～9的缓冲液，在优选将蛋白质浓度稀释为10～100μg/ml的溶解液、破碎液中，添加前述基质，在4℃～37℃的温度条件下使其反应。反应时间可以根据添加的酶量、基质量及反应温度等条件适当设定。例如，在室温下使其反应时，可以将反应时间设定为30～90分钟。
为了使前述(1)d)的FAAH或功能性FAAH的提纯物与基质接触，有如下方法在使用pH7～9的缓冲液稀释而成的溶解液或破碎液中，添加前述基质，在4℃～37℃的温度条件下使其反应。反应时间可以根据添加的酶量、基质量及反应温度等条件适当设定。例如，在室温下使其反应时，可以将反应时间设定为30～90分钟。
为了测定基质的分解产物的量，只要将上述的酶反应液中的未反应的基质和分解产物进行分离，测定分解产物的量即可。为了将未反应基质和分解产物进行分离，可以利用作为分解产物的乙醇胺等为水溶性的特点，例如，在酶反应液中加入2倍量的氯仿和甲醇的1∶1(容量比)溶液，进行搅拌后，进行离心分离，由此可以分离为上层的水/乙醇层所含的分解产物和下层的氯仿层所含的未反应基质。或者，通过与没有吸水性的液体闪烁剂混合，将脂溶性的未反应放射性基质放入cocktails(カクテル剤)中，可以将分解产物和未反应基质进行分离。或者，利用薄层色谱法及高速液相色谱法等，可以将分解产物和未反应基质进行分离。
在基质中使用由3H及14C等标记过的物质或标记过的物质和未标记过的物质的混合物时，可以使用液体闪烁计数器测定分解产物的量或未反应基质的量，或使其作为X射线潜影记录在成像板上，利用成像板读取装置进行测定。
在基质中使用未标记的物质时，通过用高速液相色谱法监控205nm的吸光度，可以测定分解产物或未反应基质的量(Lang等、Anal.Biochem、第238卷、第40-45页、1996年)。
在测定未反应基质的量时，通过从反应前添加的基质的量中减去未反应基质的量，可以求出分解产物的量。另外，通过从FAAH或功能性FAAH的基质的分解产物量中减去仅添加不含有FAAH或功能性FAAH的缓冲液而测定的基质的分解产物量作为调节，可以求出利用FAAH或功能性FAAH的纯净的基质的分解产物量。
对组织破碎液中的内源性大麻素的量而言，例如，将采样的组织在氯仿和甲醇和50mM Tris(pH8.0)的2∶1∶1(容量比)溶液中破碎，利用液相色谱-同位素稀释质谱法(isotope dilution mass spectrometry)，可以测定有机层(氯仿层)所含的内源性大麻素(Cravatt等、Proc.Natl.Acad.Sci.USA、第98卷、第9371-9376页、2001年)。
血液中的内源性大麻素的量例如可以如下进行测定。从采样的血液中分离血浆，通过加入等量的丙酮(-20℃)，且进行离心分离，除去血浆中所含的蛋白质。通过吹入氮气使丙酮蒸发后，加入氯仿和甲醇的1∶2(容量比)溶液，利用液相色谱-同位素稀释质谱法，可以测定有机层(氯仿层)所含的内源性大麻素(Giuffrida等、Eur.J.Pharmacol、第408卷、第161-168页、2000年)。
(3)选择抑制FAAH或功能性FAAH的活性的物质的工序 为了选择抑制FAAH或功能性FAAH的活性的物质，通过使FAAH或功能性FAAH接触试验物质，与不接触试验物质的情况相比，只要选择的物质能使基质的分解产物量减少即可。
具体来讲，在使FAAH或功能性FAAH接触试验物质时，与不接触试验物质时相比，可以筛选基质的分解产物量优选减少为1/2倍以下的物质，即尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。
另外，使FAAH或功能性FAAH接触各种浓度的试验物质，将不使其接触试验物质时的基质的分解产物量设定为100％时，求出使其接触各种浓度的试验物质时的基质的分解产物量的相对值(％)；或将不使其接触试验物质时的基质的分解产物量设定为100％，将使已存的FAAH抑制物质以充分的浓度、时间使FAAH或功能性FAAH接触时的基质的分解产物量设定为0％时，求出使其接触各种浓度的试验物质时的基质的分解产物量的相对值(％)，通过以基质的分解产物量的相对值(％)为纵轴、以试验物质的浓度为横轴表示的抑制曲线，算出分解产物量的相对值为50％时的试验物质的浓度(IC50值)，可以筛选IC50值优选为1μM以下、更优选为100nM以下的物质、即尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。例如，可以例举实施例438～实施例440的试验。
或者，通过对实验动物给药，将组织或血液中的内源性大麻素的量与给药前相比或与非给药的实验动物相比，通过选择优选使其增加至1.5倍那样的试验物质，也可以筛选抑制FAAH或功能性FAAH的活性的物质，即尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。
[2]试验物质 在本发明的筛选方法中使用的试验物质，没有特别限定，例如，可以列举市售的化合物(包含肽)、登陆于化学文件的各种公知的化合物(包含肽)、利用组合化学技术(Terrett等、J.Steele.Tetrahedron、第51卷、第8135-8173页、1995年)得到的化合物群、微生物的培养上清液、来自植物或海洋生物的天然成分、动物组织萃取物或将利用本发明的筛选法选择的化合物(包含肽)化学或生物学修饰过的化合物(包含肽)。
[3]尿频·尿失禁治疗用、膀胱过度活动症治疗用及/或疼痛治疗用医药组合物 作为本发明的医药组合物中的有效成分，可以使用抑制FAAH或功能性FAAH的活性的物质，前述抑制物质可以利用例如本发明的筛选方法来选择。
对本发明的医药组合物而言，并不限定于以用本发明的筛选方法得到的物质为有效成分的医药组合物，只要是以抑制FAAH或功能性FAAH的活性的物质为有效成分的尿频·尿失禁治疗用、膀胱过度活动症治疗用及/或疼痛治疗用医药组合物，就全部包含在其中，优选尿频·尿失禁治疗用、膀胱过度活动症治疗用及/或疼痛治疗用医药组合物。
需要说明的是，确认其有尿频·尿失禁治疗效果，膀胱过度活动症治疗效果及/或神经原性疼痛治疗效果的方法，如前所述。
作为抑制FAAH或功能性FAAH的活性的物质的、例如以DNA、蛋白质(含有抗体或抗体片断)、肽或其以外的化合物为有效成分的制剂，根据前述有效成分的类型，可以使用通常用于其制剂化的药剂学上允许的载体、赋形剂及/或其它添加剂作为医药组合物来进行配制。
作为给药，例如，可以列举利用锭剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂或口服用液剂等的口服给药、或利用静脉注射、肌肉注射或关节注射等的注射剂、栓剂、经皮给药剂或粘膜给药剂等的非口服给药。特别是在胃内被消化的肽，优选静脉注射等非口服给药。
在用于口服给药的固体组合物中，可以混合1种或1种以上的活性物质和至少1种惰性的稀释剂，例如乳糖、甘露醇、葡萄糖、微结晶纤维素、羟丙基纤维素、淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或硅酸铝酸镁等。根据常规方法，前述组合物可以含有惰性的稀释剂以外的添加剂，例如润滑剂、崩解剂、稳定化剂、或者溶解或溶解辅助剂等。对锭剂或丸剂而言，根据需要可以用糖衣或胃溶性或肠溶性物质等的薄膜进行包覆。
用于口服的液体组合物可以包含例如乳浊剂、溶液剂、悬浊剂、糖浆剂或酏剂，通常使用的惰性的稀释剂，可以含有例如蒸馏水或乙醇等。对前述组合物而言，可以含有惰性的稀释剂以外的添加物，例如湿润剂、悬浊剂、甜味剂、芳香剂或防腐剂。
作为用于非口服的注射剂，可以含有无菌的水性或非水性的溶液剂、悬浊剂或乳浊剂。在水溶性的溶液剂或悬浊剂中，作为稀释剂，可以含有例如注射用蒸馏水或生理盐水等。作为非水溶性的溶液剂或悬浊剂的稀释剂，例如可以含有丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)、醇类(例如乙醇)或聚山梨酸酯80等。前述组合物还可以含有润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定化剂、溶解或溶解辅助剂或防腐剂等。对前述组合物而言，利用通过细菌过滤器的过滤、杀菌剂的配合或照射可以进行无菌化。另外，也可以制造无菌的固体组合物，在使用时，溶解于无菌水或其它的无菌用注射用介质来使用。
对给药量而言，可以考虑有效成分、即利用本发明的筛选方法得到的物质的活性的强度、症状、给药对象的年龄或性别等而适当确定。
例如，口服给药时，其给药量通常为成人(体重为60kg)为每日约0.1～100mg，优选为0.1～50mg。非口服给药时，以注射剂的形式，为每日约0.01～50mg，优选为0.01～10mg。
实施例 下面，基于实施例更详细地说明本发明。本发明化合物不限定于下述实施例所述的化合物。另外，将原料化合物的制造方法示于参考例。有时本发明化合物的一部分是原料化合物，为了方便，也作为参考例表示制法。另外，将由参考例得到的化合物的化学结构式及物理化学性质示于表1～15。将由实施例得到的化合物的化学结构式示于表16～34，将其物理化学性质示于表35～63。而且，将本发明的其它化合物的结构示于表65～73。这些物质可以通过使用上述的制造法及下述的参考例·实施例所述的方法或作为本行业人员自知的方法、或这些方法的变更方法容易地制造。
另外，在使用市售的试剂盒时，也可以根据市售品的说明书实施。
需要说明的是，说明书中的省略号如下所述。
Rex参考例；Ex实施例；Str结构式；DAT物理化学性质；1H-NMRδ(ppm)，solvent核磁共振谱；实施例化合物的物理化学数据中的DMSODMSO-d6；MS m/z质量分析值；Com化合物；NC氰基；Ph苯基；Me甲基；diMe二甲基；Et乙基；Pr丙基；iPr异丙基；Bu丁基；tBu叔丁基；iBu异丁基；Pen戊基；Hex己基；Hep庚基；Oct辛基；cPr环丙基；cPen环戊基；cHex环己基；cHep环庚基、cOct环辛基；Ac乙酰基、Cl氯；diCl二氯；CN氰基；F氟；diF二氟；FPh氟苯基；NCPh氰苯基；di FPh二氟苯基；O2N硝基；MeO甲氧基；di MeO二甲氧基；Br溴di Br二溴；BrPh溴苯基；F3C三氟甲基；AcO乙酸基；MeOCO或COOMe甲氧羰基；tBuOCO或COOtBu叔丁氧羰基；HO羟基；HOPh羟苯基；H2N氨基；PhCONH苯酰胺基；EtCONH乙基羰基氨基；Me2N二甲基氨基；Et2N二乙基氨基；BIP22-联苯；BIP33-联苯；BIP44-联苯；BIP55-联苯；BIP66-联苯；Thiop2噻吩-2-基；Thiop3噻吩-3-基；Thiop4噻吩-4-基；Thiop5噻吩-5-基；PYRR1吡咯烷-1-基；PYRR2吡咯烷-2-基；PYRR3吡咯烷-3-基；PYRR4吡咯烷-4-基；PYRR5吡咯烷-5-基；Py2吡啶-2-基；Py3吡啶-3-基；Py4吡啶-4-基；Py5吡啶-5-基；IM1咪唑-1-基；IM2咪唑-2-基；IM3咪唑-3-基；IM4咪唑-4-基；BenzIM1苯并咪唑-1-基；BenzIM2苯并咪唑-2-基；BenzIM3苯并咪唑-3-基；BenzIM4苯并咪唑-4-基；BenzIM5苯并咪唑-5-基；BenzIM6苯并咪唑-6-基；Pyrazi1吡嗪-1-基；Pyrazi2吡嗪-2-基；Pyrazi3吡嗪-3-基；Pyrazi4吡嗪-4-基；Pyrazi5吡嗪-5-基；Pyrazi6吡嗪-6-基；PIPE1哌啶-1-基；PIPE2哌啶-2-基；PIPE3哌啶-3-基；PIPE4哌啶-4-基；PIPE5哌啶-5-基；PIPE6哌啶-6-基；PIPERA哌嗪；PIPERA1哌嗪-1-基；PIPERA2哌嗪-2-基；PIPERA3哌嗪-3-基；PIPERA4哌嗪-4-基；PIPERA5哌嗪-5-基；Pyrazol吡唑-1-基；Pyrazo2吡唑-2-基；Pyrazo3吡唑-3-基；Pyrazo4吡唑-4-基；Pyrazo5吡唑-5-基；Mo钼；Mo2钼-2-基；Mo3钼-3-基；Mo4钼-4-基；Mo5钼-5-基；Azep吖庚因；Azep1吖庚因-1-基；Azep2吖庚因-2-基；Azep3吖庚因-3-基；Azep4吖庚因-4-基；Thiaz2噻唑-2-基；Thiaz3噻唑-3-基；Thiaz4噻唑-4-基；Thiaz5噻唑-5-基；QUI1喹啉-1-基；QUI2喹啉-2-基；QUI3喹啉-3-基；QUI4喹啉-4-基；QUI5喹啉-5-基；QUI6喹啉-6-基；QUI7喹啉-7-基；QUI8喹啉-8-基；ISOQUI2异喹啉-2-基；ISOQUI3异喹啉-3-基；ISOQUI4异喹啉-4-基；ISOQUI5异喹啉-5-基；ISOQUI7异喹啉-7-基；ISOQUI8异喹啉-8-基；NAPH1萘-1-基；NAPH2萘-2-基；NAPH3萘-3-基；NAPH4萘-4-基；NAPH5萘-5-基；TEA三乙胺；Sal附加盐；HCl盐酸盐；oxal草酸盐；fum富马酸盐；p-tol对甲苯磺酸盐 参考例1 在含有4-(羟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.57g)和三苯基膦(1.70g)的THF(15ml)溶液中，在0℃下滴入含有苯酚(471mg)和偶氮二羧酸二乙酯(2.83g、40％Tol溶液)的THF(10ml)溶液，在室温下搅拌24小时。在反应溶液中加入水(40ml)，用EtOAc萃取，将有机层依次用1M氢氧化钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝4∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(1.14g)。使得到的化合物溶解于EtOAc，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(9.6ml)，在室温下搅拌5小时，得到无色粉末状4-(苯氧甲基)哌啶盐酸盐(680mg)。
与参考例1同样地操作，得到参考例2～27的化合物。
参考例28 在含有3-溴苯酰胺(3.0g)和(3-羟苯基)硼酸(2.27g)的二甲氧基乙烷(50ml)溶液中，依次添加水(10ml)、碳酸钠(4.76g)、四三苯基膦钯(866mg)后，在60℃下加热24小时。将反应溶液冷却后，用EtOAc进行稀释，将有机层水洗后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；EtOAc)提纯，得到淡黄色粉末(2.74g)。使用得到的化合物，与参考例1同样地操作，得到参考例28的化合物。
参考例29 在含有4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(12g)和三苯基膦(16g)的THF(80ml)溶液中，在0℃下滴入含有4-(苄氧基)苯酚(8.0g)和偶氮二羧酸二乙酯(26mg、40％Tol溶液)的THF(80ml)溶液，在室温下搅拌24小时。在反应溶液中加入水(40ml)，用EtOAc萃取，将有机层依次用1M氢氧化钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝8∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(12.4g)。
在含有得到的化合物(5.18g)的乙醇(100ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌16小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，得到淡褐色固体(4.0g)。
在含有得到的化合物(4.0g)的乙腈(100ml)溶液中，添加1-(溴甲基)-3-氟苯(2.5ml)和碳酸钾(2.8g)，在80℃下加热22小时。滤去固体物质后，将得到的滤液进行减压浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝8∶1(V/V))提纯，得到无色固体(5.15g)。
使得到的化合物(5.15g)溶解于EtOAc(20ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(20ml)，在室温下搅拌5小时后，减压蒸馏脱去溶剂。使残留物溶解于水，用1M氢氧化钠水溶液进行中和，将得到的固体进行干燥，得到4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶(3.70g)。
与参考例29同样地操作，得到参考例30～36的化合物。
参考例37 在含有4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.6g)、三苯基膦(6.1g)、6-氯-2-吡啶醇(2.0g)的THF(30ml)溶液中，在0℃下滴入偶氮二羧酸二乙酯(11ml、40％Tol溶液)，在室温下搅拌24小时。在反应溶液中加入水，用EtOAc萃取，将有机层用1M氢氧化钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝10∶1(V/V))提纯，得到4-[(6-氯-2-吡啶基)氧基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(3.8g)。
在含有4-[(6-氯-2-吡啶基)氧基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(500mg)的DMF(5ml)溶液中，添加(3-氟苯基)甲醇(220mg)和叔丁醇钾(200mg)，在100℃下加热30分钟后，进一步加入(3-氟苯基)甲醇(220mg)和叔丁醇钾(200mg)，在110℃下加热30分钟。在反应溶液中加入水，用EtOAc萃取，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝10∶1(V/V))提纯，得到白色固体(420mg)。
使得到的化合物(400mg)溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(3ml)，在室温下搅拌一整夜，滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到2-[(3-氟苄基)氧基]-6-(4-哌啶氧基)吡啶盐酸盐(310mg)。
与参考例37同样地操作，得到参考例38的化合物。
参考例39 在含有4-[(6-氯-2-吡啶基)氧基]-1-哌啶羧酸叔丁基酯(500mg)和[3-(氨基羰基)苯基]硼酸(320mg)的Tol(10ml)溶液中，依次添加水(4ml)、碳酸钠(610ml)、四三苯基膦钯(110mg)后，在100℃下加热一整夜。将反应溶液冷却后，用EtOAc进行稀释，将有机层用无水碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶2(V/V))提纯，得到淡黄色粉末(590mg)。
使得到的化合物(590mg)溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(5ml)，在室温下搅拌一整夜，滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到3-[(6-(4-哌啶氧基)-2-吡啶基]苯酰胺盐酸盐(440mg)。
参考例40 在含有4-(2-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.0g)的二氯甲烷(80ml)溶液中，在0℃下滴入TEA(4.6ml)和甲基磺酰氯(2.0ml)，在室温下搅拌3小时。在反应溶液中加入碳酸氢钠水溶液和甲醇，在室温下搅拌30分钟。用氯仿萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯，得到无色固体(6.1g)。
在含有得到的化合物(2.0g)和苯丙醇(1.3g)的DMF(80ml)溶液中，在0℃下添加氢氧化钠(541mg、60％in oil)，在100℃下加热20小时。将反应溶液冷却后，加入水，用EtOAc萃取。依次用1M盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝20∶1(V/V))提纯，得到黄色油状物(1.96g)。
使得到的化合物(1.96g)溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(10ml)，在室温下搅拌2小时，滤取得到的固体，进行干燥，得到4-[2-(3-苯基丙氧基)乙基]哌啶盐酸盐(1.55g)。
参考例41 在含有4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.02g)的THF(40ml)溶液中，在0℃下滴入TEA(2.30ml)和甲基磺酰氯(1.22ml)，在室温下搅拌1小时。在反应溶液中加入EtOAc(50ml)和水(50ml)，将有机层依次用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，得到淡橙色油状物。使得到的油状物溶解于DMA(25ml)，添加碳酸铯(5.38g)和4-磺胺苯酚(1.89g)，在50℃下加热2小时。将反应溶液冷却后，加入水，用EtOAc萃取。将有机层依次用1M盐酸水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝4∶1(V/V))提纯，得到无色粉末状4-[(4-羟苯基)磺胺基]哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3.40g)。
在含有4-[(4-羟苯基)磺胺基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.00g)的乙腈(15ml)溶液中，添加1-(溴甲基)-3-氟苯(0.436ml)和碳酸钾(670mg)，在80℃下加热2小时。将反应溶液冷却后，加入饱和食盐水，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂而得到的残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝8∶1(V/V))提纯，得到无色粉末状4-((4-[(3-氟苄基)氧基]苯基)磺胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.50g)。
使4-((4-[(3-氟苄基)氧基]苯基)磺胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(501mg)溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(3ml)，在室温下搅拌3小时后，减压蒸馏脱去溶剂。使残留物溶解于水，用1M氢氧化钠水溶液进行中和，用氯仿萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，得到4-((4-[(3-氟苄基)氧基]苯基)磺胺基)哌啶(328mg)。
与参考例41同样地操作，得到参考例42的化合物。
参考例43 在含有用参考例41的方法得到的4-((4-[(3-氟苄基)氧基]苯基)磺胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.50g)的溶液中，在0℃下添加mCPBA(1.64g)，在室温下搅拌17小时。将固体物质过滤后，在溶液中加入10％硫酸钠水溶液，用氯仿萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝2∶1(V/V))提纯，得到无色粉末(1.58g)。使得到的粉末(1.56g)溶解于EtOAc(10ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(8ml)，在室温下搅拌2小时后，滤取固体物质，用EtOAc洗涤，得到无色粉末的4-({4-[(3-氟苄基)氧基]苯基}磺胺基)哌啶盐酸盐(1.13g)。
与参考例43同样地操作，得到参考例44～46的化合物。
参考例47 在含有环己甲醇和三苯基膦(629mg)的THF(5ml)溶液中，在0℃下滴入用参考例41的方法得到的4-[(4-羟苯基)磺胺基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(495mg)和偶氮二羧酸二乙酯(1.04g、40％Tol溶液)的THF(5ml)溶液，在室温下搅拌24小时。在反应溶液中加入水(40ml)，用EtOAc萃取，将有机层依次用1M氢氧化钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝9∶1(V/V))提纯，得到淡黄色油状物的4-{[4-(环己基甲氧基)苯基]磺胺基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(744mg)。
使得到的4-{[4-(环己基甲氧基)苯基]磺胺基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(635mg)溶解于EtOAc(7ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(3.6ml)，在室温下搅拌6小时后，滤取固体成分，用EtOAc洗涤，得到无色粉末的4-{[4-(环己基甲氧基)苯基]磺胺基}哌啶盐酸盐(485mg)。
与参考例47同样地操作，得到参考例48的化合物。
参考例49 在含有4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g)的THF(40ml)溶液中，添加氢氧化钠(355mg、60％in oil)和苄基溴(1.0ml)，在60℃下加热13小时。将反应溶液冷却后，加入水，用EtOAc萃取。依次用1M盐酸水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝10∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(1.91g)。
使得到的化合物(1.8g)溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(15ml)，在室温下搅拌3小时，将反应溶液用异丙醚进行稀释，滤取得到的固体，进行干燥，得到4-(苄氧基)哌啶盐酸盐(1.32g)。
与参考例49同样地操作，得到参考例50～53的化合物。
参考例54 在含有(3-氟苯基)甲醇(730mg)、三苯基膦(1.5g)、6-氯-3-吡啶醇(500mg)的THF(10ml)溶液中，在0℃下滴入偶氮二羧酸二乙酯(2.6ml、40％Tol溶液)，在室温下搅拌24小时。将反应溶液用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝8∶1(V/V))提纯，得到白色固体(810mg)。
在含有得到的白色固体(800mg)的DMF(10ml)溶液中，加入4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.0g)和叔丁醇钾(570mg)，在130℃下加热1小时后，加入叔丁醇钾(400mg)，进一步在130℃下加热1小时。将反应溶液冷却至室温后，用EtOAc进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝7∶1(V/V))提纯，得到白色固体(350mg)。
使得到的化合物(345mg)溶解于EtOAc(3ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(2ml)，在室温下搅拌一整夜，滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到6-[(3-氟苄基)氧基]-2-(4-哌啶氧基)吡啶盐酸盐(260mg)。
参考例55 使[1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基]醋酸(0.60g)溶解于二甲基甲酰胺(12ml)，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.89g)、1-羟基苯并三唑(0.50g)及苄胺(0.40g)，在室温下搅拌15小时，在反应溶液中加入水，进一步搅拌1小时后，加入EtOAc和碳酸氢钠溶液进行分液，将有机层依次用0.5M盐酸、饱和食盐水洗涤，将有机层用无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶2(V/V))提纯，得到无色粉末(0.69g)。
使得到的化合物(0.69g)溶解于EtOAc(10ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(2.2ml)，在室温下搅拌20小时。将反应溶液浓缩干透，得到N-苄基-2-哌啶-4-基乙酰胺盐酸盐(0.62g)。
参考例56 在将磷酸(7ml)和五氧化二磷(14g)在150℃下加热30分钟的过程中，添加N-甲基苯-1，2-二胺(1.3g)和4-哌啶-4-基丁酸盐酸盐(1.5g)，在120℃下加热3小时。将反应溶液注入水中，用氢氧化钠水溶液中和后，用氯仿萃取。将有机层用无水硫酸镁进行干燥后，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇∶氨水＝10∶1∶0.1(V/V))提纯，得到1-甲基-2-(3-哌啶-4-基丙基)-1H-苯并咪唑(1.61g)。
参考例57及参考例58 在含有[4-(甲氧羰基)苄基](三苯基)鏻溴化物(7.51g)的THF(30ml)溶液中，在0℃下添加叔丁醇钾(1.72g)，搅拌1小时。在反应溶液中，在0℃下滴入含有4-甲酰哌啶-1-甲酸叔丁酯(Beilstein RegistryNo.7704210、2.96g)的THF(20ml)溶液，搅拌14小时。在反应溶液中加入水，用EtOAc萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝9∶1(V/V))提纯，得到黄色油状物(3.77g)。
使得到的化合物(3.75g)溶解于甲醇(20ml)和THF(10ml)，添加1M氢氧化钠水溶液(16.3ml)，在50℃下加热4小时。将反应溶液冷却后，减压蒸馏脱去溶剂，加入1M盐酸盐使其呈酸性，滤取析出的固体物质，用水洗涤，得到淡褐色粉末(2.82g)。
在含有得到的化合物(2.80g)的DMF(30ml)溶液中，添加氯化铵(2.26g)、1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(3.24g)、1-羟基苯并三唑(1.14g)、TEA(5.88ml)，在室温下搅拌32小时。在反应溶液中加入水，滤取析出的固体物质，用水洗涤，得到淡褐色粉末(2.61g)。
使得到的化合物(2.58g)溶解于EtOAc(15ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(15ml)，在室温下搅拌8小时。滤取得到的固体，用EtOAc洗涤后进行干燥，得到4-[(E)-2-哌啶-4-基乙烯基]苯并酰胺盐酸盐(1.92g)(参考例57)。
在含有4-[(E)-2-哌啶-4-基乙烯基]苯并酰胺盐酸盐(800mg)的甲醇(15ml)-水(5ml)溶液中添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌4小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，将得到的固体物质用乙醇-乙腈进行再结晶，得到4-(2-哌啶-4-基乙基)苯并酰胺盐酸盐(451mg)(参考例58)。
参考例59 在含有4-(4-氨基苯氧基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(2.0gBeilsteinRegistry No.9262581)、环己甲醛(770mg)、醋酸1.25g的二氯甲烷(30ml)溶液中，在0℃下加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.2g)，在室温下搅拌2小时。在反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将得到的固体物质用EtOAc己烷进行再结晶，得到淡褐色结晶(2.0g)。
在含有得到的结晶(970mg)、37％甲醛水溶液(0.94ml)、醋酸0.75g的二氯甲烷(20ml)溶液中，在0℃下加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.1g)，在室温下搅拌2小时。在反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，使得到的油状物溶解于EtOAc(15ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(5ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到N-(环己基甲基)-N-甲基-4-(4-哌啶基氧基)苯胺2盐酸盐(820mg)。
参考例60 在含有苄基3-碘苯基醚(1.1g)、1-哌嗪羧酸叔丁酯(640mg)、叔丁醇钠(500mg)、2-联苯基(二环己基)膦(70mg)的Tol(10ml)溶液中，在氩气流下加入三(二苄叉丙酮)二钯(95mg)，在80℃下加热1小时。将反应溶液冷却后，用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝5∶1(V/V))提纯，得到褐色固体物质(950mg)。
使得到的固体(940mg)溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(5ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到1-[3-(苄氧基)苯基]哌嗪2盐酸盐(840mg)。
参考例61 在含有4-(苄氧基)-2-氯苯酚(1.7gBeilstein Registry No.6582932)、三苯基膦(2.8g)、4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.1g)的THF(60ml)溶液中，在0℃下滴入偶氮二羧酸二乙酯(4.8ml、40％Tol溶液)，在室温下搅拌24小时。将反应溶液用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝5∶1(V/V))提纯，得到白色固体(2.3g)。
使得到的化合物(1.0g)溶解于EtOAc(10ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(10ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到4-[4-(苄氧基)-2-氯苯氧基]哌啶盐酸盐(690mg)。
参考例62 在4-羟基苯磺酸钠盐(1.00g)的DMF(5ml)溶液中，滴入亚硫酰氯(10ml)后，在65℃下过热3小时。将反应溶液冷却后，加入Tol(10ml)，减压蒸馏脱去溶剂后，加入水，用氯仿萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。通过减压蒸馏脱去溶剂，得到白色固体(587mg)。
在含有1-叔丁氧羰基哌啶(672mg)和吡啶(0.58ml)的乙腈(10ml)溶液中，在0℃下添加刚才得到的化合物(579mg)的乙腈(10ml)溶液，在室温下搅拌2小时。减压蒸馏脱去溶剂后，加入Tol(10ml)进行共沸后，加入水，用EtOAc萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。通过减压蒸馏脱去溶剂，得到白色固体(0.41g)。
在含有得到的化合物(0.41g)及1-(溴甲基)-3-氟苯(340mg)的乙腈(20ml)溶液中，添加碳酸钾(248mg)，在80℃下过热3小时。将固体物质滤去后，将得到的滤液进行减压浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝5∶1(V/V))提纯，得到无色固体(469mg)。
使得到的化合物(460mg)溶解于EtOAc(5ml)和THF(5ml)的混合溶液，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(20ml)，在70℃下搅拌3小时后，减压蒸馏脱去溶剂，使残留物溶解于水，用1M氢氧化钠水溶液中和，将得到的固体进行干燥，得到4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯磺酰}哌嗪(304mg)。
参考例63 在含有4-(苄氧基)-2-氯苯酚(1.2gBeilstein Registry No.5527577)、三苯基膦(1.9g)、4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.5g)的THF(30ml)溶液中，在0℃下滴入偶氮二羧酸二乙酯(3.3ml、40％Tol溶液)，在室温下搅拌24小时。将反应溶液用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝5∶1(V/V))提纯，得到白色固体(1.7g)。
使得到的化合物(1.6g)溶解于EtOAc(20ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(15ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到4-[4-(苄氧基)-2-氯苯氧基]哌啶盐酸盐(1.3g)。
参考例64 在含有4-(氨基苯氧基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(4.0gBeilstein RegistryNo.9262581)的吡啶(30ml)溶液中，在0℃下加入三氟苯磺酰氯(3.2g)，在室温下搅拌一整夜。减压蒸馏脱去溶剂后，用氯仿进行稀释，将有机层依次用10％柠檬酸水溶液、水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝60∶1(V/V))提纯，得到白色固体物质(5.3g)。
在含有得到的化合物(700mg)的乙腈(10ml)溶液中，加入碳酸钾(280mg)、碘代甲烷(0.28ml)，在50℃下搅拌3小时。将反应溶液用EtOAc进行稀释，将有机层用水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝3∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(700mg)。
使得到的油状物(700mg)溶解于EtOAc(10ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(5ml)，在室温下搅拌一整夜，滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到3-氟-N-甲基-N-[4-(4-哌啶基氧基)苯基]苯磺酰胺盐酸盐(480mg)。
参考例65 在含有1-[(苄氧基)羰基]-4-(叔丁氧羰基)-2-哌啶羧酸(1.0g)的DMF(10ml)溶液中，加入1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(630mg)、1-羟基苯并三唑(440mg)，在室温下搅拌1小时后，加入浓氨水(2ml)，在室温下搅拌3小时。在反应容器中加入水，滤取析出的固体，用水洗涤后，在减压下进行干燥，得到无色固体物质(870mg)。
使得到的固体物质(860mg)溶解于EtOAc(10ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(5ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到2-(氨基羰基)-1-哌啶羧酸苄酯盐酸盐(700mg)。
参考例66 在含有4-(羟甲基)-1-苯甲酸甲酯的乙腈(20ml)溶液中，在0℃下添加吡啶(1.62ml)和4-硝基苯基氯碳酸酯(ニトロフェニルクロリドカルボネ一ト)(2.22g)，在室温下搅拌2小时。在反应溶液中加入5％柠檬酸水溶液，用EtOAc萃取，将有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝4∶1(V/V))提纯，得到淡褐色粉末(2.39g)。
在含有得到的化合物(2.37g)的乙腈(30ml)溶液中，添加哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.47g)，在室温下搅拌8小时。将反应溶液用EtOAc进行稀释，用0.5M氢氧化钠水溶液洗涤。将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝2∶1(V/V))提纯，得到无色固体(3.32g)。
在含有得到的化合物(3.30g)的THF(30ml)溶液中，加入甲醇(0.34ml)和1M氢氧化钠水溶液(8.52ml)，在室温下搅拌26小时。减压蒸馏脱去溶剂后，在残留物中加入1M盐酸水溶液，用氯仿萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂。利用己烷-EtOAc将得到的残留物进行再结晶，得到无色粉末(2.37g)。
在含有得到的化合物(729mg)的DMF(10ml)溶液中，添加氯化铵(321mg)、1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(767mg)、1-羟基苯并三唑(270mg)、TEA(0.83ml)，在室温下搅拌3小时，在反应溶液中加入水，滤取析出的固体物质，用水洗涤，得到淡褐色粉末(722mg)。
使得到的化合物(700mg)溶解于EtOAc(6ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(4.8ml)，在室温下搅拌3小时。滤取得到的固体，用EtOAc洗涤后进行干燥，得到4-(氨基羰基)苄基哌啶-1-甲酸酯盐酸盐(541mg)。
参考例67 在含有环己基甲醇(510mg)和三苯基膦(1.18g)的THF(5ml)溶液中，在0℃下滴入含有4-羟基安息香酸甲酯(460mg)和偶氮二羧酸二乙酯(0.71ml)的THF(5ml)溶液，在室温下搅拌24小时。在反应溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(40ml)，用EtOAc萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将得到的残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝4∶1(V/V))提纯，得到无色固体物质(930mg)。
在含有得到的化合物(920mg)的甲醇(5ml)-THF(3ml)溶液中，加入1M氢氧化钠水溶液(4.4ml)，在50℃下搅拌6小时。冷却至室温后，加入EtOAc(40ml)、水(30ml)，搅拌后，将有机层用1M氢氧化钠水溶液萃取。将水层合并，用浓盐酸使pH为1后，将水层用氯仿萃取，然后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将得到的残留物用己烷-EtOAc进行再结晶，得到4-(环己基甲氧基)安息香酸(600mg)。
在含有得到的化合物(370mg)、1-哌嗪甲酸叔丁酯(350mg)的DMF(10ml)溶液中，加入1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(359mg)、1-羟基苯并三唑(254mg)，在室温下搅拌12小时。在反应溶液中加入水，滤取析出的固体，用水洗涤后，在减压下进行干燥，得到无色固体物质(610mg)。
使得到的化合物(600mg)溶解于EtOAc(6ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(4ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的固体，用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到1-[4-(环己基甲氧基)苯酰基]哌嗪盐酸盐(580mg)。
与参考例67同样地操作，得到参考例68～72的化合物。
参考例73 在2M二甲胺-THF溶液(11.6ml)中，在-70℃下添加1.59M正丁基锂-THF溶液(14.6ml)，搅拌10分钟。升温至0℃，添加3-氯-5-羟基吡啶(1.00g)，在室温下搅拌一晚上。加入乙醇(15ml)后，减压蒸馏脱去溶剂。在残留物中加入水，用氯仿萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯，得到3-二甲基氨基-5-羟基吡啶(176mg)。
参考例74 在含有3-苄氧基-5-溴吡啶(400mg)和吗啉(158mg)的Tol(10ml)溶液中，依次添加三亚苄基丙酮二钯(21mg)、2，2’-二(二苯基膦)-1，1’-联二萘(124mg)、叔丁醇钠(160mg)，在85℃下加热4小时。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝20∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(372mg)。
在含有得到的化合物(370mg)的乙醇(20ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌1.5小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，得到5-羟基-3-吗啉吡啶(248mg)。
与参考例74同样地操作，得到参考例75～76的化合物。
参考例77 在含有5-(苯磺酰氧基)-2-(溴甲基)吡啶(Beilstein RegistryNo.7430370、800mg)的甲醇(20ml)溶液中，添加甲醇钠(393mg)，在室温下搅拌4小时。在反应溶液中加入水，用EtOAc萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；EtOAc)提纯，得到6-(甲氧基甲基)吡啶-3-醇(200mg)。
参考例78 在3-苄氧基-5-氨基吡啶(250mg)的THF(10ml)溶液中，依次添加TEA(0.21ml)、二碳酸二叔丁酯(463mg)后，在60℃下加热3小时。减压蒸馏脱去溶剂后，加入水，用EtOAc萃取，将有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯，得到无色固体(153mg)。
在含有得到的化合物(240mg)的乙醇(20ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌1.5小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，得到(5-羟基吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(167mg)。
参考例79 在二乙基膦酰基乙酸甲酯(メチルジェチルホスフォノァセテ一ト)(732mg)的THF(10ml)溶液中，在0℃下加入氢化钠(60％油混合物、139mg)的THF(10ml)溶液，搅拌15分钟后，添加5-(苄氧基)烟醛(5-(ベンジロキシ)ニコチンァルデヒド)(495mg)，在常温下搅拌4小时。在反应溶液中加入水，用EtOAc萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，得到无色固体(680mg)。
在含有得到的化合物(330mg)的乙醇(20ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌2小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，得到3-(5-羟基吡啶-3-基)丙酸甲酯(150mg)。
参考例80 在氢化锂铝(1.49g)的THF(100ml)中，在-78度下加入5-(苄氧基)烟酸甲酯(3.52g)的THF(30ml)溶液，搅拌15分钟后，在常温下搅拌2小时。将反应溶液冷却至0度后，依次添加水(1.49ml)、15％氢氧化钠水溶液(1.49ml)、水(4.47ml)。滤去固体物质后，将得到的滤液进行减压浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯，得到无色固体(1.41g)。
在含有得到的化合物(450mg)的苯(20ml)溶液中，依次添加溴乙酸叔丁酯(609mg)、四丁基硫酸氢铵(35mg)、50％氢氧化钠水溶液(2ml)，在室温下搅拌一整夜。用1M盐酸水溶液进行中和，用EtOAc萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝6∶4(V/V))提纯，得到无色油状物(576mg)。
在含有得到的化合物(570mg)的乙醇(20ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌1小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝15∶1(V/V))提纯，得到[(5-羟基吡啶-3-基)甲氧基]乙酸叔丁酯(400mg)。
参考例81 在含有(2E)-3-[5-(苄氧基)吡啶-3-基]丙烯酸甲酯(300mg)的TFA(10ml)溶液中，添加五甲基苯(826mg)，在60℃下搅拌一整夜。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯，得到(5-羟基吡啶-3-基)乙酸叔丁酯(180mg)。
参考例82 在3-羟基烟酸甲酯(1.50g)的THF(60ml)溶液中，依次添加二异丙基乙胺(2.05ml)、甲氧基甲基氯化物(メトキシメチルクロラィド)(0.89ml)后，在室温下搅拌一晚上。减压蒸馏脱去溶剂后，加入水，用氯仿萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，得到无色油状物(2.01g)。
在氢化锂铝(838mg)的THF(50ml)中，在-78度下加入得到的化合物(1.98g)的THF(20ml)溶液，搅拌30分钟后，在常温下搅拌2小时。将反应溶液冷却至0度后，依次添加水(0.84ml)、15％氢氧化钠水溶液(0.84ml)、水(2.52ml)。滤去固体物质后，将得到的滤液进行减压浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；EtOAc)提纯，得到无色油状物(838g)。
在含有得到的化合物(828mg)的吡啶(10ml)溶液中，添加醋酸酐(1.39ml)，在室温下搅拌1.5小时。减压蒸馏脱去溶剂后，加入Tol(10ml)进行共沸，得到无色油状物(1.01g)。
在含有得到的化合物(1.01g)的二噁烷(10ml)溶液中，加入4M氯化氢-二噁烷溶液(3.58ml)，在常温下搅拌1小时。减压蒸馏脱去溶剂后，得到(5-羟基吡啶-3-基)甲基乙酸酯盐酸盐(973mg)。
参考例95 在3-氰基苄基溴(2.0g)的Tol(50ml)溶液中加入三苯基膦(2.8g)，在80℃下搅拌5小时。冷却至室温后，过滤析出的结晶，用Tol洗涤。在减压下使其干燥，得到(3-氰基苄基)(三苯基)鏻溴化物(3.4g)。
在(3-氰基苄基)(三苯基)鏻溴化物(1.6g)、4-甲酰-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.75g)的DMF(20ml)溶液中，在冰水浴下加入氢化钠(60％油状物、141mg)，在室温下搅拌一晚上。将反应液用EtOAc进行稀释，用水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝6∶1(V/V))提纯，得到油状物。在得到的油状物的(30ml)溶液中加入10％钯-碳(100mg)，在氢气流下搅拌2小时。使用氟镁石除去催化剂，将溶剂进行浓缩，得到油状物。使得到的油状物溶解于EtOAc(10ml)，加入4M盐酸-EtOAc溶液(5ml)，在室温下搅拌6小时。将得到的固体用乙醚洗涤后，在减压下使其干燥，得到3-[2-(4-哌啶基)乙基]苯甲腈盐酸盐(506mg)。
与参考例95同样地操作，得到参考例96～101的化合物。
参考例102 在3-溴甲基安息香酸甲酯(50.0g)的Tol(400ml)溶液中加入三苯基膦(85.8g)，在80℃下搅拌10小时。冷却至室温后，过滤析出的结晶，用Tol洗涤。在减压下使其干燥，得到(3-甲氧羰基苄基)(三苯基)鏻溴化物(107.6g)。
在(3-甲氧羰基苄基)(三苯基)溴化鏻(84.6g)的DMF(250ml)溶液中，在冰水浴下加入叔丁醇钾(22.5g)，在室温下搅拌30分钟后，在冰水浴下加入4-甲酰-1-哌啶甲酸叔丁酯(30.6g)的DMF(50ml)溶液，在室温下搅拌一晚上。在反应液中加入醋酸(11.5ml)，在室温下搅拌1小时后，用EtOAc进行稀释，用水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝7∶1(V/V))提纯。将残渣溶于EtOAc，加入活性炭，在室温下搅拌2小时。使用氟镁石除去活性炭，减压蒸馏脱去溶剂，得到无色油状物。
在得到的油状物的EtOAc(400ml)溶液中加入10％钯-碳(4.58g)，在氢气流下搅拌2小时。使用氟镁石除去催化剂，将溶剂进行浓缩，得到叔丁基4-{2-[3-(甲氧羰基)苯基]乙基}-1-哌啶(45.4g)。
与参考例102同样地操作，得到参考例103的化合物。
参考例104 在叔丁基4-{2-[3-(甲氧羰基)苯基]乙基}-1-哌啶(45.4g)的THF(200ml)、甲醇(50ml)混合溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(196ml)，在60℃下搅拌2小时。将有机溶剂进行减压蒸馏，在冰水浴下、在残渣中加入0.5M盐酸(400ml)。将反应液用EtOAc进行稀释，用水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。蒸馏脱去溶剂，得到3-{2-[1-(叔丁氧羰基)-4-哌啶基]乙基}安息香酸(43.5g)。
与参考例104同样地操作，得到参考例105的化合物。
参考例106 使3-{2-[1-(叔丁氧羰基)-4-哌啶基]乙基}安息香酸(17.8g)溶解于DMF(200ml)中，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳酰二亚胺盐酸盐(15.4g)、1-羟基苯并三唑(10.8mg)，在室温下搅拌2小时。在反应液中加入氯化铵(8.57g)、TEA(22.3ml)，在室温下搅拌一整夜。在反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，过滤析出的结晶，使其干燥，得到叔丁基4-{2-[3-(氨基羰基)苯基]乙基}-1-哌啶(10.8g)。
与参考例106同样地操作，得到参考例107～118的化合物。
参考例119 将4-[2-(4-{[(2-羟乙基)氨基]羰基}苯基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(280g)、四溴化碳(247mg)、2，6-卢剔啶(103≡1)溶解于二氯甲烷(5.6ml)，在冰水浴下加入三苯基膦(195mg)，在室温下搅拌3小时。减压蒸馏脱去溶剂，将残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝3∶7(V/V))提纯，得到无色油状物4-{2-[4-(1-氮丙啶基羰基)苯基]乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(136mg)。
参考例120 使叔丁基4-{2-[3-(氨基羰基)苯基]乙基}-1-哌啶(13.8g)溶解于EtOAc(200ml)中，加入4M盐酸-EtOAc溶液(130ml)，在室温下搅拌4小时后进行浓缩。在得到的残渣中加入乙腈，进行加热，滤取析出的结晶，用EtOAc洗涤后，在减压下使其干燥，得到3-[2-(4-哌啶基)乙基]苯酰胺盐酸盐(11.2g)。
与参考例120同样地操作，得到参考例121～139的化合物。
参考例140 在氩气流下、在4-[2-(3-溴苯基)乙基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.50g)和苯基硼酸(0.20g)的Tol(6ml)-水(2ml)溶液中，加入碳酸钠(0.43g)、四(三苯基膦)钯(80mg)，在100℃下进行加热搅拌7小时。返回至室温，用EtOAc进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用无水硫酸镁进行干燥后，蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝10∶1(V/V))提纯，得到4-[2-(3-联苯基)乙基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.41g)。
在4-[2-(3-联苯基)乙基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.41g)的EtOAc(4ml)溶液中加入4M盐酸/EtOAc(1.5ml)，在室温下搅拌一整夜。滤取析出的结晶，用EtOAc己烷洗涤后，在减压下进行干燥，得到4-[2-(3-联苯基)乙基]哌啶盐酸盐(0.31g)。
与参考例140同样地操作，得到参考例141～142的化合物。
参考例143 在4，4’-(1，3-丙烷二基)二哌啶(5.0g)的二氯甲烷(50ml)溶液中，在冰水浴下加入二碳酸二叔丁酯(2.6g)，在室温下搅拌一整夜。将反应液用氯仿进行稀释，用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇∶浓氨水＝4∶1∶0.1(V/V))提纯，得到4-[3-(4-哌啶基)丙基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(2.2g)。
在氩气环境下、在2-氯-6-甲基吡啶(0.56g)和4-[3-(4-哌啶基)丙基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(1.1g)的Tol(22ml)溶液中，加入叔丁醇钠(0.52g)、三(二亚苄基丙酮)二钯(100mg)、2-(二环己基膦)联苯基(76mg)，在100℃下进行加热搅拌1小时。返回至室温，用EtOAc进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用无水硫酸镁进行干燥后，蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝10∶1(V/V))提纯，得到4-{3-[1-(6-甲基-2-吡啶基)-4-哌啶基]丙基}-1-哌啶二羧酸叔丁酯(1.3g)。
在4-{3-[1-(6-甲基-2-吡啶基)-4-哌啶基]丙基}-1-哌啶二羧酸叔丁酯(1.3g)的EtOAc(25ml)溶液中加入4M盐酸/EtOAc(10ml)，在室温下搅拌一整夜。将反应液进行浓缩，加入2-丙醇-乙醚进行搅拌。滤取析出的固体后，在减压下进行干燥，得到2-甲基-6-{4-[3-(4-哌啶基)丙基]-1-哌啶基}吡啶2盐酸盐(1.1g)。
与参考例143同样地操作，得到参考例144～145的化合物。
参考例146 在4-(3-羟丙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(8.00g)及TEA(4.8mL)的二氯甲烷(200mL)溶液中，在0℃下滴入甲基磺酰氯(2.7mL)，在室温下搅拌一整夜。将反应液用饱和小苏打水及饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁进行干燥后，蒸馏脱去溶剂，将残渣利用硅胶柱色谱法(洗提液；EtOAc∶己烷＝1∶3(V/V))提纯，得到4-{3-[(甲基磺酰)氧基]丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(10.1g)。
将4-{3-[(甲基磺酰)氧基]丙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.00g)、1-哌嗪-1-基异喹啉2盐酸盐(980mg)、碳酸铯(1.02g)及碘化钠(476mg)的DMI(20mL)悬浊液在140℃下搅拌1小时。在反应液中加入EtOAc，依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥，蒸馏脱去溶剂。将残渣利用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯，得到淡黄色油状物质4-[3-(4-异喹啉-1-基哌嗪-1-基)丙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.07g)。
在4-[3-(4-异喹啉-1-基哌嗪-1-基)丙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.44g)的EtOAc(15mL)溶液中滴入4M盐酸-EtOAc溶液(5.0mL)，搅拌一整夜。将溶剂蒸馏后，将固体用EtOAc洗涤、滤取，得到白色固体1-[4-(3-哌啶-4-基丙基)哌嗪-1-基]异喹啉2盐酸盐(1.32g)。
与参考例146同样地操作，得到参考例154的化合物。
参考例147 在5-羟基-烟酸甲酯(5.3g)、二异丙基乙胺(6.1ml)的二氯甲烷(100ml)溶液中，加入氯蚁酸4-硝基苯酯(7.0g)，在室温下搅拌1小时。将反应液用水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂。将得到的固体用EtOAc己烷洗涤后，在减压下使其干燥，得到5-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}烟酸甲酯(8.4g)。
与参考例147同样地操作，得到参考例148的化合物。
参考例151 将3-{2-[1-(叔丁氧羰基)-4-哌啶基]乙基}安息香酸(12.5g)、1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(863mg)、1-羟基苯并三唑(608mg)的DMF(15mL)在室温下搅拌1小时后，加入2-溴乙胺氢溴酸盐(2.30g)的TEA(1.6mL)溶液，进一步搅拌一整夜。在反应液中加入EtOAc及饱和小苏打水，进行萃取，用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁进行干燥后，蒸馏脱去溶剂，得到4-[2-(3-{[(2-溴乙基)氨基]羰基}苯基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的粗产物。
在4-[2-(3-{[(2-溴乙基)氨基]羰基}苯基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的粗产物的EtOAc溶液(15mL)溶液中，在室温下加入4M盐酸-EtOAc(5mL)，搅拌一整夜。通过减压蒸馏脱去溶剂，得到白色固体N-(2-溴乙基)-3-(2-哌啶-4-基乙基)苯酰胺盐酸盐(1.27g)。
在N-(2-溴乙基)-3-(2-哌啶-4-基乙基)苯酰胺盐酸盐(1.20g)、5-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}烟酸甲酯(1.02g)的乙腈(30mL)悬浊液中滴入TEA(0.90mL)，在室温下搅拌一整夜。减压蒸馏脱去反应溶剂后，加入饱和小苏打水，用EtOAc萃取，用无水硫酸镁进行干燥。将其过滤，蒸馏脱去溶剂，将残渣利用2次硅胶柱色谱法(碱性二氧化硅；洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶2(V/V)。然后，中性二氧化硅；洗提液；氯仿∶甲醇＝19∶1(V/V))提纯，得到白色粉末5-[({4-[2-(3-{[(2-溴乙基)氨基]羰基}苯基)乙基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸甲酯(762mg)。
将5-[({4-[2-(3-{[(2-溴乙基)氨基]羰基}苯基)乙基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸甲酯(750mg)、碳酸钾(300mg)、碘化钾(361mg)的DMF(10mL)悬浊液在80℃下搅拌1小时。将反应液放置冷却后，加入EtOAc，依次用饱和小苏打水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂。将残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝20∶1(V/V))提纯，得到无色油状物质5-{[(4-[2-(3-(氮丙啶-1-基羰基)苯基)乙基]哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸甲酯(630mg)。
参考例152 在3-{2-[1-(叔丁氧羰基)-4-哌啶基]乙基}安息香酸(600mg)、TEA(0.3ml)的Tol溶液(10ml)中，在冰水浴下加入叠氮化磷酸二苯酯(540mg)，在室温下搅拌2小时。在反应液中加入EtOAc，用饱和小苏打水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，得到无色油状物(630mg)。将该无色油状物(400ml)的Tol溶液(10ml)在110℃下搅拌1小时。返回至室温，加入30％氨水溶液(0.2ml)，在室温下搅拌15小时。在反应液中加入EtOAc，依次用1当量盐酸水溶液、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝95∶5(V/V))提纯，得到4-{2-[3-(氨基羰基)氨基]苯基}乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(227mg)。
在4-{2-[3-(氨基羰基)氨基]苯基}乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(227mg)的EtOAc溶液(9ml)溶液中，加入4M盐酸-EtOAc(4ml)，在室温下搅拌3小时。减压蒸馏脱去溶剂，得到1-{3-[2-(4-哌啶)乙基]苯基}脲盐酸盐(185mg)。
在1-{3-[2-(4-哌啶)乙基]苯基}脲盐酸盐(185mg)、TEA(0.2ml)的乙腈(5ml)溶液中，加入5-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}烟酸甲酯(228mg)，在室温下搅拌一整夜。将反应液用EtOAc进行稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯，得到5-{[(4-[2-(3-[(氨基羰基)氨基]苯基)乙基]-1-哌啶)羰基]氧基}烟酸甲酯(183mg)。
与参考例152同样地操作，得到参考例153的化合物。
参考例155 将4-乙炔哌啶-1-甲酸叔丁酯(12.5g)、碘苯(12.8g)溶解于THF∶TEA＝1∶1(V/V)的混合溶剂(125ml)，在室温下依次加入碘化铜(455mg)、四三苯基膦钯络合物(1.38g)，在室温下搅拌一整夜。蒸馏脱去溶剂，加入EtOAc，依次用1M盐酸水溶液、水、饱和食盐水洗涤。用无水硫酸镁进行干燥后，蒸馏脱去溶剂，得到茶褐色油状物。将其用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝19∶1(V/V))提纯，得到淡褐色油状物4-(苯基乙炔基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(15.5g)。
在4-(苯基乙炔基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.0g)中加入4M氯化氢-EtOAc溶液(70ml)，在室温下搅拌30分钟。蒸馏脱去溶剂，得到白色粉末4-(苯基乙炔基)哌啶盐酸盐(5.4g)。
实施例1 在含有1-羰基氯哌啶(745mg)的THF(10ml)溶液中，依次添加3-羟基吡啶(400mg)、TEA(1.17ml)、DMAP(催化剂量)后，在60℃下加热5小时。将反应溶液冷却后，加入水(3ml)，用EtOAc萃取。将萃取液进行水洗后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯，得到无色油状物。使得到的油状物质溶解于乙醇，加入草酸(378mg)的乙醇溶液进行处理，得到无色粉末。将其用己烷-乙醇进行再结晶，得到(吡啶-3-基)哌啶-1-羧酸酯草酸盐(761mg)。
实施例2 在含有三碳酰氯(590mg)的二氯甲烷(25ml)溶液中，滴入含有3-羟基吡啶(568mg)、吡啶(724μl)的二氯甲烷(20ml)溶液，在室温下搅拌1小时。减压蒸馏脱去溶剂，使残留物溶解于吡啶(30ml)中，加入由参考例22得到的化合物(1.2g)，在70℃下加热4小时。在减压下将反应溶液进行浓缩，加入氯仿及碳酸氢钠水溶液，将有机层用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶2(V/V))提纯，得到无色粉末。将其用己烷-EtOAc进行再结晶，得到(吡啶-3-基)-4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯(861mg)。
与实施例2同样地操作，得到实施例3～118、389～391、416、417和参考例83～93的化合物。
实施例119 在含有三碳酰氯(1.48g)的二氯甲烷(30ml)溶液中，滴入含有3-羟基吡啶(1.43g)、吡啶(1.46ml)的二氯甲烷(20ml)溶液，在室温下搅拌1小时。在反应溶液中滴入含有1-哌嗪羧酸叔丁酯(2.0g)、吡啶(0.97ml)的二氯甲烷(5ml)溶液后，加入吡啶(20ml)，在70℃下加热4小时。在减压下将反应溶液进行浓缩后，用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝4∶1(V/V))提纯，得到无色固体(3.0g)。
使得到的化合物(3.0g)溶解于EtOAc(20ml)-2-丙醇(10ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(10ml)，在室温下搅拌一整夜。在减压下将反应溶液进行浓缩，将得到的固体用EtOAc洗涤后，在减压下进行干燥，得到3吡啶基1-哌啶甲酸酯2盐酸盐(2.66g)。
在含有得到的化合物(190mg)及参考参考例70由环辛基甲醇合成的4-(环辛基甲氧基)安息香酸(176mg)的DMF(5ml)溶液中，加入1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐(150mg)、1-羟基苯并三唑(110mg)、二异丙基乙胺(0.23ml)，在室温下搅拌一整夜。将反应溶液用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸钠进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用EtOAc己烷再结晶，得到3-吡啶4-[4-(环辛基甲氧基)苯酰基]-1-哌嗪羧酸酯(240mg)。
与实施例119同样地操作，得到实施例120～136的化合物。
实施例137 在含有6-氯烟腈(1.0g)、3-氯苄醇(1.0g)的DMF(10ml)溶液中加入叔丁醇钾(810mg)，在室温下搅拌一整夜。在反应溶液中加入水，滤取析出的固体，用水、己烷依次洗涤后，进行减压干燥，得到褐色固体(1.3g)。
在含有得到的化合物(1.3g)的乙醇(10ml)溶液中，加入5M氢氧化钠水溶液(10ml)，在100℃下搅拌4小时。冷却至室温后，加入1当量盐酸(56ml)，滤取析出的固体，用水洗涤后，在减压下进行干燥，得到无色固体(0.82g)。
在含有得到的化合物(176mg)、3-吡啶基1-哌嗪甲酸酯2盐酸盐(166mg)的DMF(5ml)溶液中，加入1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二酰亚胺盐酸盐(150mg)、1-羟基苯并三唑(110mg)、二异丙基乙胺(0.23ml)，在室温下搅拌一整夜。将反应溶液用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用碱性硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶2(V/V))提纯，得到无色油状物(140mg)。
在含有得到的化合物(140mg)的2-丙醇溶液中，加入草酸(35mg)，搅拌30分钟。滤取析出的固体，用2丙醇-己烷洗涤后，在减压下进行干燥，得到3-吡啶基4-({6-[(3-氯苄基)氧基]-3-吡啶}羰基)-1-哌嗪甲酸酯0.5草酸盐(120mg)。
与实施例137同样地操作，得到实施例138的化合物。
实施例139 在含有4-羟基苯酰胺(686mg)的乙腈(15ml)溶液中加入碳酸钾(1.04g)、溴EtOAc(0.610ml)，在80℃下加热2小时，将反应溶液冷却后加入水(45ml)，滤取析出的固体物质，用水洗涤后进行干燥，得到淡褐色粉末的[4-(氨基羰基)苯氧基]乙酸乙酯(893mg)。
使得到的化合物(870mg)溶解于THF(10ml)，添加乙醇(0.274ml)和1M氢氧化钠水溶液(4.68ml)，在室温下搅拌4小时。将反应溶液进行减压浓缩后，用1M盐酸水溶液做成酸性，滤取析出的固体物质进行干燥，得到淡褐色粉末的[4-(氨基羰基)苯氧基]醋酸酯(714mg)。
在含有用实施例121的方法得到的3-吡啶基1-哌啶甲酸酯(3-ピリジル1-ピペリジンカルボキシレ一ト)2盐酸盐(252mg)的DMF(5ml)溶液中，加入TEA(0.251ml)、1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(259mg)、1-羟基苯并三唑(122mg)及上述合成化合物[4-(氨基羰基)苯氧基]醋酸酯(184mg)，在室温下搅拌5小时。在反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，用氯仿萃取，将有机层用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝95∶5(V/V))提纯，将得到的固体用EtOAc乙腈进行再结晶，得到吡啶-3-基-4-{[4-(氨基羰基)苯氧基]乙酰基}哌啶-1-羧酸酯(274mg)。
与实施例139同样地操作，得到实施例140～141的化合物。
实施例142 在含有3吡啶基1-哌嗪羧酸酯2盐酸盐(150mg)的二氯甲烷(5ml)溶液中，加入TEA(0.23ml)、苯磺酰氯(0.075ml)，在室温下搅拌一整夜。将反应溶液用氯仿进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿)提纯，将得到的固体用2-丙醇进行再结晶，得到3-吡啶基4-(苯基磺酰基)-1-哌嗪羧酸酯(130mg)。
与实施例142同样地操作，得到实施例143的化合物。
实施例144 在含有3-吡啶基1-哌嗪甲酸酯(3-ピリジル1-ピペラジンカルボキシレ一ト)2盐酸盐(150mg)的吡啶(3ml)溶液中，加入氯蚁酸苄酯(91mg)，在室温下搅拌12小时。在减压下将反应溶液进行浓缩，用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，用2-丙醇(3ml)稀释后，加入甲苯磺酸水合物(100mg)，进行搅拌。滤取析出的结晶，用2-丙醇进行再结晶，得到3-吡啶1，4-哌嗪二羧酸苄酯甲苯磺酸盐(98mg)。
与实施例144同样地操作，得到实施例145～146的化合物。
实施例147 在含有3-吡啶基4-[(4-苄氧基)苯酰基]-1-哌嗪羧酸酯(1.3g)的THF(20ml)-2-丙醇(20ml)中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌12小时。滤去催化剂，将得到的固体物质用EtOAc己烷进行再结晶，得到3-吡啶基4-(4-羟基苯酰基)-1-哌嗪羧酸酯(950mg)。
在含有3-氯苄醇(200mg)和三苯基膦(360mg)的THF(5ml)溶液中，在0℃下滴入含有3-吡啶基4-(4-羟基苯酰基)-1-哌嗪羧酸酯(300mg)和二乙基偶氮二羧酸酯(0.62ml、40％Tol溶液)的THF(5ml)溶液，在室温下搅拌3天。将反应溶液用氯仿进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝95∶5(V/V))提纯，将得到的固体用2-丙醇进行再结晶，得到3-吡啶基4-(4-[(3-氯苯酰基)氧基]苄基)-1-哌嗪羧酸酯(260mg)。
与实施例147同样地操作，得到实施例148～166的化合物。
实施例167 在含有3-吡啶基4-(4-羟基苯酰基)-1-哌嗪羧酸酯(530mg)、3-(溴甲基)苯酸甲酯(450mg)的乙腈(10ml)溶液中，加入碳酸钾(270mg)，在80℃下搅拌1小时，在反应溶液中加入水，用EtOAc萃取，将有机层用水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶4(V/V))提纯，得到无色固体物质(470mg)。
将得到的固体物质(100mg)用EtOAc己烷进行再结晶，得到3-吡啶基4(4-{[3-(甲氧羰基)苄基]氧基}苯酰基)-1-哌嗪羧酸酯(88mg)。
实施例168 使1-吡啶-3-基哌嗪-1，4-二羧酸-4-乙酯(0.732g)溶解于THF(15ml)、乙醇(8.0ml)，在冰水浴下滴入1M氢氧化钠水溶液(3.9ml)。在室温下搅拌2小时后，用1M盐酸(0.5ml)进行中和。将反应液进行减压浓缩，在残留物中加入甲醇，用抽滤除去析出的盐。将滤液进行浓缩，得到无色固体1-[(吡啶-3-基氧基)羰基]哌啶-4-羧酸(0.727g)。
使得到的化合物(0.60g)溶解于二甲基甲酰胺(10ml)，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(0.93g)、1-羟基苯并三唑(0.51g)及环己烷甲胺(0.43g)，在室温下搅拌15小时。在反应溶液中加入水，进一步搅拌1小时后，加入EtOAc和碳酸氢钠溶液进行分液，将有机层依次用0.5M盐酸、饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶4(V/V))提纯，得到无色粉末(0.69g)。将其用乙醇、己烷进行再结晶，得到(吡啶-3-基)-4-{[(环己基甲基)氨基]羰基}哌啶-1-羧酸酯(261mg)。
与实施例168同样地操作，得到实施例169～192、383～388和参考例94的化合物。
实施例193 在含有1-苄基2-甲基1，2-哌嗪二羧酸酯(660mg；Beilstein RegistryNo.4236331)的吡啶(10ml)溶液中，加入3-氯吡啶碳酸酯(330mg)，在80℃下搅拌7小时。将反应溶液在减压下浓缩后，用氯仿进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用碱性硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(700mg)。
在含有得到的化合物(430mg)的THF(5ml)溶液中，加入1M氢氧化钠水溶液(1.2ml)，在50℃下搅拌3小时。加入1M氢氧化钠水溶液(0.8ml)，在50℃下进一步搅拌1小时后，冷却至室温，加入1当量盐酸(2ml)，将反应溶液用EtOAc萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将析出的固体用EtOAc己烷洗涤后，在减压下进行干燥，得到1-[(苄氧基)羰基]-4-[(3-吡啶氧基)羰基]-2-哌嗪羧酸(140mg)。
与实施例193同样地操作，得到实施例194～195的化合物。
实施例196 使吡啶-3-基4({[2-(甲胺)苯基]氨基}羰基)哌啶-1-羧酸酯(0.41g)溶解于醋酸(10ml)，回流加热2小时。蒸馏脱去溶剂后，用甲醇和乙醚进行再结晶，得到(吡啶-3-基)-4-(1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯(307mg)。
实施例197 使吡啶-3-基4[(叔丁氧羰基)氨基]哌啶-1-羧酸酯(0.249g)溶解于THF(5ml)，在冰水浴下加入4M氯化氢-EtOAc溶液(2.10ml)，在室温下搅拌24小时。将反应溶液进行浓缩干透，得到吡啶-3-基4氨基哌啶-1-羧酸酯2盐酸盐(0.280g)。
使得到的化合物(0.28g)溶解于二甲基甲酰胺(10ml)，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(0.28g)、1-羟基苯并三唑(0.16g)TEA(0.54ml)及6-苯基己酸(0.18g)，在室温下搅拌15小时。在反应溶液中加入水，进一步搅拌1小时后，加入EtOAc和碳酸氢钠溶液进行分液，将有机层用饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷)提纯，得到无色粉末。将其用甲醇、二乙醚进行再结晶，得到(吡啶-3-基)-4-[(6-苯基己酰基)氨基]哌啶-1-羧酸酯(108mg)。
实施例198 在含有3-吡啶4-[3-(苄氧基)苯氧基]-1-哌啶羧酸酯(4.0g)的THF(75ml)-2-丙醇(75ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌24小时。滤去催化剂后，将滤液进行减压浓缩，将得到的固体物质用EtOAc己烷洗涤后，在减压下进行干燥，得到3-吡啶4-(3-羟基苯氧基)-1-哌啶羧酸酯(2.2g)。
实施例199 在含有3-吡啶4-[4-(苄氧基)苯氧基]-1-哌啶羧酸酯(3.7g)的THF(75ml)-2-丙醇(75ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌24小时。滤去催化剂后，将滤液进行减压浓缩，将得到的固体物质用EtOAc己烷洗涤后，在减压下进行干燥，得到3-吡啶4-(4-羟基苯氧基)-1-哌啶羧酸酯(2.4g)。
实施例200 在含有3-吡啶4-(3-羟基苯氧基)-1-哌啶羧酸酯(160mg)、环己基甲醇(87mg)、三苯基膦(200mg)的THF(5ml)溶液中，在0℃下滴入偶氮二羧酸二乙酯(0.35ml、40％Tol溶液)，在室温下搅拌24小时。将反应溶液用氯仿进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯。使得到的油状物溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(1ml)，在室温下进行搅拌。减压蒸馏脱去溶剂，将析出的固体用EtOAc2-丙醇洗净后减压干燥，得到3-吡啶基4-[3-(环己基甲氧基)苯氧基]-1-哌啶羧酸酯盐酸盐(94mg)。
与实施例200同样地操作，得到实施例201～205的化合物。
实施例206 在含有3-吡啶4-(4-羟基苯氧基)-1-哌啶羧酸酯(160mg)、三氯苄醇(110mg)、三苯基膦(200mg)的THF(5ml)溶液中，在0℃下滴入偶氮二羧酸二乙酯(0.35ml、40％Tol溶液)，在室温下搅拌24小时。将反应溶液用氯仿进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶3(V/V))提纯。使得到的油状物溶解于EtOAc(5ml)，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(1ml)，在室温下进行搅拌。减压蒸馏脱去溶剂，将析出的固体用EtOAc2-丙醇进行再结晶，得到3-吡啶4{4-[(3-氯苄基)氧基]苯氧基}-1-哌啶羧酸酯(45mg)。
与实施例206同样地操作，得到实施例207～212的化合物。
实施例213 在含有5-[({4-[4-(苄氧基)苯氧基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸甲酯的乙醇(100ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌一整夜。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝15∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(1.08g)。
在含有得到的化合物(450mg)及3-环己基-1-丙醇(315mg)的THF(20ml)溶液中，添加2.2M偶氮二羧酸二乙酯(1.01ml)、三苯基膦(581mg)，在50℃下加热22小时。在反应溶液中加入水，用氯仿萃取，将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝2∶1(V/V))提纯，得到5-[({4-[4-(3-环己基丙氧基)苯氧基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸甲酯(242mg)。
与实施例213同样地操作，得到实施例214～216的化合物。
实施例217 在含有5-[({4-[4-(苄氧基)苯氧基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸(200mg)的THF(10ml)溶液中，添加10％钯-碳(催化剂量)，在氢气环境下、在常温常压下搅拌3小时。滤去催化剂，将得到的滤液进行减压浓缩，得到5-[({4-[4-(羟基)苯氧基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸草酸盐(55mg)。
实施例218 将用与实施例2同样的方法得到的实施例29的化合物(4.0g)溶解于THF(30ml)、甲醇(15ml)，在冰水浴下滴入1M氢氧化钠水溶液(12ml)。在室温下搅拌30分钟后，在冰水浴下用1M盐酸(12ml)进行中和。滤取析出的无色固体，得到5-{[(4-[4-(3-氟苄基)氧基]苯氧基)哌啶-1-基]羰基}氧基}烟酸(3.52g)。
与实施例218同样地操作，得到实施例219～224及实施例226～243的化合物。
实施例225 在含有三碳酰氯(1.56g)的二氯甲烷(50ml)溶液中，滴入含有5-羟基烟酸甲酯(2.20g)和吡啶(4ml)的二氯甲烷(30ml)溶液，在室温下搅拌1小时。减压蒸馏脱去溶剂，使残留物溶解于吡啶(50ml)中，加入4-(2-苯乙基)哌啶盐酸盐(2.70g)，在80℃下加热一整夜。将反应溶液进行减压浓缩，加入EtOAc及碳酸氢钠水溶液，将有机层用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯，得到无色粉末。将其用己烷-EtOAc进行再结晶，得到5-({[4-(2-苯乙基)哌啶-1-基]羰基}氧基)烟酸甲酯(3.95g)。
使5-({[4-(2-苯乙基)哌啶-1-基]羰基}氧基)烟酸甲酯(3.95g)溶解于THF(32ml)、甲醇(16ml)，在冰水浴下滴入1M氢氧化钠水溶液(16ml)。在室温下搅拌30分钟后，在冰水浴下用1M盐酸(16ml)进行中和。滤取析出的无色固体，将其用甲醇-水进行再结晶，得到5-({[4-(2-苯乙基)哌啶-1-基]羰基}氧基)烟酸(3.70g)。
实施例244 使实施例219的化合物5-{[(4-[4-(3-氟苄基)氧基]苯氧基)哌啶-1-基]羰基}氧基}烟酸(0.50g)溶解于DMF(8.0ml)，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(0.38mg)、1-羟基苯并三唑(0.22g)及甘氨酸叔丁酯(0.21g)，在室温下搅拌15小时。在反应溶液中加入水，进一步搅拌1小时后，加入EtOAc和碳酸氢钠溶液进行分液，将有机层用饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))提纯，得到无色油状物(0.444g)。
使得到的化合物(0.444g)溶解于二氯甲烷(5.0ml)，在冰水浴下加入TFA(1.15ml)。在同温度下搅拌24小时后，浓缩反应液，得到黄色固体。将其用乙醇和二甲醚进行再结晶，得到{[(5-{[(4-[4-(3-氟苄基)氧基]苯氧基)哌啶-1-基]羰基}氧基)吡啶-3-基]羰基}氨基}醋酸(348mg)。
利用与实施例244同样的酰胺化反应，得到实施例245～257的化合物。
实施例258 在含有实施例54的化合物(400mg)和[(3-氨基羰基)苯基]硼酸(176mg)的二甲氧基乙烷(12ml)溶液中，依次添加水(4ml)、碳酸钠(337mg)、四三苯基膦钯(115mg)后，在80℃下加热5小时。将反应溶液冷却后，用EtOAc进行稀释，将有机层水洗后，用无水硫酸镁进行干燥，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶5(V/V))提纯，得到5-[3-(氨基羰基)苯基]吡啶-3-基-4-苄基哌啶-1-羧酸酯(205mg)。
与实施例258同样地操作，得到实施例259、265、266、399的化合物。
实施例260 在含有5-[(叔丁氧羰基)氨基]吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯(174mg)的THF(10ml)溶液中，加入4M氯化氢-二噁烷溶液(1.8ml)，在60℃下搅拌4小时。减压蒸馏脱去溶剂，得到5-氨基哌啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}吡啶-1-羧酸酯盐酸盐(74mg)。
实施例261 在含有5-[4-(乙氧羰基)哌啶-1-基]吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯草酸盐(240mg)的THF(10ml)溶液中，添加1M氢氧化钠水溶液(3.24ml)，在60℃下搅拌5小时。在反应溶液中加入1M盐酸水(3.24ml)后，减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯。使得到的油状物溶解于乙醇水，加入草酸(24mg)，使其结晶化，得到1-5-{[(4-[4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基]哌啶-1-基)羰基]氧基}吡啶-3-基)哌啶-4-羧酸草酸盐(93mg)。
实施例262 在含有5-[(2-叔丁氧基-2-氧代乙氧基)甲基]吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯(333mg)的二氯甲烷(10ml)溶液中，添加TFA(1.0ml)，在室温下搅拌一晚上。减压蒸馏脱去溶剂，得到[(5-{[(4-[4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基]哌啶-1-基)羰基]氧基}吡啶-3-基)甲氧基醋酸(232mg)。
实施例263 在含有5-[(乙酰氧基)甲基]吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯草酸盐(1.10g)的THF(20ml)溶液中，添加1M氢氧化钠水溶液(7.65ml)，在65℃下搅拌3小时。将反应液用1M盐酸水进行中和，用氯仿萃取后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝12∶1(V/V))提纯，得到5-(羟甲基)吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯(770mg)。
实施例264 在含有5-[(1E)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯(158mg)的THF(5ml)溶液中，添加1M氢氧化钠水溶液(1.11ml)，在60℃下搅拌3小时。减压蒸馏脱去溶剂，将残留物用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝10∶1(V/V))提纯，得到(2E)-3-(5-{[(4-[4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基]哌啶-1-基)羰基]氧基}吡啶-3-基)丙烯酸(88mg)。
实施例267 (a)在含有3-[2-(4-哌啶基)乙基]苯甲腈盐酸盐(475mg)、TEA(0.58ml)的乙腈(10ml)溶液中，加入5-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}烟酸甲酯(723mg)，在室温下搅拌一整夜。将反应液用EtOAc进行稀释，将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用于碱性硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶1(V/V))，除去副产物硝基苯酚后，用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝3∶2(V/V))提纯，得到5-[({4-[2-(3-氰基苯基)乙基]-1-哌啶基}羰基)氧基]烟酸甲酯(284mg)。
(b)在5-[({4-[2-(3-氰基苯基)乙基]-1-哌啶基}羰基)氧基]烟酸甲酯(272mg)的THF(5ml)-水(4ml)溶液中，加入1M氢氧化钠水溶液(0.69ml)，在室温下搅拌一整夜。在反应液中加入1M盐酸(0.69ml)，滤取析出的结晶。将结晶用热甲醇水溶液洗涤后，使其干燥，得到5-[({4-[2-(3-氰基苯基)乙基]-1-哌啶基}羰基)氧基]烟酸酯(240mg)。
与实施例267的工序(a)同样地操作，得到参考例149～150及实施例268～272、392、396、400、402、413、419、421、422的化合物。
与在实施例267的工序(a)之后进行的工序(b)的方法同样地操作，得到实施例273～317、393～395、401、403、405、406、414、418的化合物。
实施例318 在5-[({4-[2-(3-氰基苯基)乙基]-1-哌啶基}羰基)氧基]烟酸酯(102mg)DMF(3.0ml)溶液中，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(62mg)、1-羟基苯并三唑(43mg)、氯化铵(43mg)、TEA(0.038ml)，在室温下搅拌一整夜。在反应溶液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，将析出的结晶进行过滤，使其干燥。将得到的结晶用EtOAc己烷进行再结晶，得到5-(氨基羰基)-3-吡啶4-[2-(3-氰基苯基)乙基]-1-哌啶羧酸酯(81mg)。
利用同样的方法，得到实施例319～382、397、398、404、408～412、415、420、423的化合物。
实施例407 在三苯基(吡啶-4-基甲基)氯化鏻盐酸盐(4.75g)和4-甲酰哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.91g)的DMF(50ml)溶液中，在冰水浴下加入叔丁醇钾(2.73g)，在室温下搅拌一整夜。将反应液用EtOAc稀释，依次用水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂，用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝1∶2(V/V))提纯，得到白色固体(2.05g)。
使得到的固体(2.04g)溶解于EtOAc(30ml)，加入10％钯碳(200mg)，在氢存在下、在室温下搅拌3小时。滤去催化剂后，将溶剂进行浓缩，将残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶醋酸乙酯＝1∶1(V/V))提纯，得到白色固体4-[(E)-2-吡啶-4-基乙烯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.70g)。
在4-[(E)-2-吡啶-4-基乙烯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.02g)的乙醇(25ml)溶液中，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(0.88ml)、氧化铂(100mg)，在氢存在下(3.5atm)搅拌24小时。进行氩气置换后，用甲醇稀释，使用氟镁石进行过滤、减压浓缩。将析出来的固体用EtOAc-己烷洗涤后，在减压下使其干燥，得到白色固体4-(2-哌啶-4-基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(850mg)。
在4-(2-哌啶-4-基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯盐酸盐(1.13g)、2-氯-6-甲基吡啶(431mg)及叔丁醇钠(487mg)的甲苯(10ml)溶液中，加入2-(二环己基膦酰基)联苯(71mg)及(1E，4E)-1，5-二苯基-1，4-戊二烯-3-酮-钯(93mg)，在120℃下搅拌1小时。将反应液放置冷却后，加入饱和碳酸钠水溶液，用EtOAc萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥，蒸馏脱去溶剂。将残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；己烷∶EtOAc＝10∶1(V/V))提纯，得到红色油状物质4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(650mg)。
在4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(650mg)的EtOAc(10ml)溶液中，加入4M氯化氢-EtOAc溶液(2ml)，在室温下搅拌2天。将反应液进行浓缩，得到黄色无定形物2-甲基-6-[4-(2-哌啶-4-基乙基)哌啶-1-基]吡啶2盐酸盐(644mg)。
在2-甲基-6-[4-(2-哌啶-4-基乙基)哌啶-1-基]吡啶2盐酸盐(520mg)、TEA(0.50ml)的乙腈(10ml)溶液中，加入5-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氧基}烟酸甲酯(505mg)，在室温下搅拌3小时。将反应液用EtOAc进行稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用硅胶柱色谱法(洗提液；氯仿∶甲醇＝98∶2(V/V))提纯，得到5-{[(4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸甲酯(424mg)。
在5-{[(4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸甲酯(208mg)的THF(5ml)溶液中，加入1M氢氧化钠水溶液(0.45ml)，在室温下搅拌一整夜。将反应液进行浓缩，得到5-{[(4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸钠盐(158mg)。
在5-{[(4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸钠盐(210mg)的DMF(10ml)溶液中，加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(103mg)、1-羟基苯并三唑(90mg)、氯化铵(119mg)，在室温下搅拌一整夜。将反应液用EtOAc进行稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁进行干燥。减压蒸馏脱去溶剂，将得到的残渣用EtOAc-己烷进行再结晶，得到5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-{2-[1-(6-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基]乙基}哌啶-1-羧酸酯(150mg)。
实施例438 使用有大白鼠脑破碎液的抑制FAAH活性的物质的筛选 (1)大白鼠脑破碎液的配制 将10周龄的SD系雄性大白鼠(日本SLC社)在乙醚麻醉下断头，摘除大脑，测定重量。加入重量的5倍容量的冰冻过的缓冲液(50mMTris-HCl(pH7.4)、0.32M Sucrose)，在冰中利用匀浆器磨碎至成为均匀的悬浊液。离心分离(1500×g，4℃，15分钟)后，将其上清液进一步进行离心分离(15000×g，4℃，20分钟)，得到沉淀，利用超声波发生器(UR-20P；トミ一精工社)进一步进行超声波破碎(Power dial 4)5秒。利用色素结合法(蛋白质含量分析CBB溶液；ナカラィテスク社)测定得到的破碎液的蛋白质浓度。使用缓冲液(50mM Tris-HCl(pH8.0)、1mMEDTA、0.1mg/ml BSA、100mM NaCl)稀释大白鼠脑破碎液，以使其蛋白质浓度为60μg/ml，配制酶液。
(2)抑制FAAH活性的物质的筛选 配制由2μCi/ml放射标记花生四烯酸乙醇胺(Anandamide[ethanolamine 1-3H](American Radiolabeled Chemical社))、8μM花生四烯酸乙醇胺(フナコシ社)、50mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、0.1mg/ml BSA及100mM NaCl构成的基质液。按照使其为1nM～100μM的方法配制溶解于DMSO的试验物质溶液。在50μl的酶液中加入50μl的上述基质液、1μl的试验物质溶液，放置1小时。另外，作为对比样，添加DMSO替代试验物质溶液。对其加入200μl的氯仿和甲醇的1∶1(容量比)溶液进行搅拌。通过离心分离(15000转/分钟、2分钟)，分离成上层(水/甲醇层)为分解产物乙醇胺(ethanolamine 1-3H)、下层(氯仿层)为未反应的放射标记花生四烯酸乙醇胺(Anandamide[ethanolamine 1-3H])。将上层的30μl移到96孔耐有机溶剂性微量白盘(PicoPlate-96；PerkinElmer社)，加入150μl的微闪烁液(マィクロシンチ)20(PerkinElmer社)，用微板闪烁计数器(TopCountTM；Beckman社)进行测定。与对比样比较，选择使测定值减少的物质作为抑制FAAH活性的物质。
(3)FAAH活性抑制物质的IC50值的测定 将化合物溶解于DMSO，以使其为1nM～100μM，配制试验物质溶液，用前述所述的方法研究给FAAH活性带来的影响。使用DMSO作为对比样。根据各测定值，减去取代酶液而使用缓冲液(50mMTris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、0.1mg/ml BSA及100mM NaCl)使其反应时的测定值。以对比样的测定值为100％，求出IC50值。例如，在实施例2、151、225、228、273、324、325及359的化合物中，IC50值分别为0.14nM、27nM、0.37nM、0.19nM、0.65nM、0.54nM、2.5nM及1.3nM。
由以上结果显示，通过使表达FAAH或功能FAH的组织破碎液接触试验物质，测定试验物质依赖的FAAH活性的变化，可以筛选抑制FAAH活性的物质，即尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。
实施例439 使用有来自人膀胱上皮癌的细胞的抑制FAAH活性的物质的筛选 (1)抑制FAAH活性的物质的筛选 在48孔细胞培养板上，使用每1孔含有1×105个、10％牛胎儿血清(HyClone社)的RPM11640培养基(Invitrogen社)，播种来自人膀胱上皮癌的细胞株5637细胞(HTB-9；ATCC)。在37℃下培养12小时以上后，将细胞用每1孔400μl的缓冲液(Hank’s Balanced Salt Solution、20mM Hepes-NaOH(pH7.4))洗涤。在基质液(3μCi/ml放射标记花生四烯酸乙醇胺(Anandamide[ethanolamine 1-3H])、含有10μM花生四烯酸乙醇胺的前述缓冲液)中添加溶解于DMSO的试验物质，以使其为0.003nM～30nM。仅添加DMSO作为对比样。在上述细胞中加入每1孔100μl的基质液，在CO2恒温箱内、在37℃下恒温30分钟。然后，将细胞培养板移到冰上，将基质液吸引除去，加入每1孔75μl的冰冻过的细胞溶解用溶液(含有0.5％.TritonX-100、具有10μM的FAAH抑制活性的化合物cyclohexylcarbamic acid 3’-carbamoylbiphenyl-3-ylester(URB 597；Cayman chemical社；Kathurla等、Nature Med、第9卷、第76-81页、2003年)的前述缓冲液)进行搅拌。将得到的细胞溶解液移入每个池1.5ml容量的样品管，加入150μl的氯仿和甲醇1∶1(容量比)溶液进行搅拌。当进行离心分离(15000转/分钟、2分钟)时，分离成上层(水/甲醇层)为分解产物的乙醇胺(ethanolamine 1-3H)、下层(氯仿层)为未反应的放射标记花生四烯酸乙醇胺。将上层的25μl移到96孔的耐有机溶剂性微量白盘(PicoPlate-96；PerkinElmer社)，加入150μl的微闪烁液(マィクロシンチ)20(PerkinElmer社)，用微板闪烁计数器(TopCountTM；Beckman社)进行测定。与对比样比较，选择使测定值减少的物质作为抑制FAAH活性的物质。
(2)FAAH活性抑制物质的IC50值的测定 在基质液中加入溶于DMSO以使其为10mM的化合物，以使其为0.003nm～30nM，用前述所述的方法研究给FAAH活性带来的影响。在基质液中添加DMSO作为负对照、添加URB597作为正对照，以使其为10μM，将正对照的测定值设定为0％，将负对照的测定值设定为100％，求出C50值。将试验结果示于表64。
由以上的结果可以确认，在代表的本发明的化合物中，具有优良的FAAH抑制活性，另外，还显示通过使表达FAAH或功能FAAH的细胞接触试验物质，测定试验物质依赖的FAAH活性的变化，可以筛选抑制FAAH活性的物质，即尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。
实施例440 使用给药有试验物质的大白鼠的组织破碎液的抑制FAAH活性的物质的筛选 (1)对大白鼠的给药及组织破碎液的配制 对2只9周龄的Wistar系雄性大白鼠(日本SLC社)以1～3mg/kg口服给药悬浊于0.5％甲基纤维素(MC)溶液的试验物质，对2只大白鼠口服给药0.5％MC溶液作为对照。30分钟后，在乙醚麻醉下从大动脉采取血液。然后，断头、摘取大脑。
用等量的生理盐水稀释采取的血液3ml，轻轻地层叠在离心管内的3ml血球分离剂(Nycoplep；AXIS-SHIELD社)的上面。进行离心分离(400×g、20分钟)，采取单核细胞层。将得到的单核细胞用生理食盐水洗涤2次，在测定前冻结保存在-20℃下。
在摘取的大白鼠的大脑中，加入重量的5倍容量的冰水浴的缓冲液(50mM、Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA)，在冰中利用匀浆器磨碎至成为均匀的溶液。利用超声波发生器(UR-20P(Power dial4)；トミ一精工社)进一步进行超声波破碎5秒钟。在前述冻结保存的单核细胞中，加入冰冻过的缓冲液(50mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA)100μl，利用超声波发生器(UR-20P(Power dial4)；トミ一精工社)进行超声波处理5秒钟。对脑、单核细胞的破碎液，利用色素结合法(蛋白质定量CBB溶液；ナカラィテスク社)测定蛋白质浓度。使用缓冲液(50mMTris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、0.1mg/ml BSA、100mM NaCl)稀释大白鼠脑、单核细胞的破碎液，以使其蛋白质浓度分别为80μg/ml、400μg/ml，做成酶液。
(2)FAAH活性的测定 在50μl的酶液中加入50μl的基质液(2μCi/ml放射标记花生四烯酸乙醇胺(Anandamide[ethanolamine 1-3H])(American RadiolabeledChemical社))、8μm花生四烯酸乙醇胺(フナコシ社)、50mMTris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA)，在室温下使其反应1小时。加入200μl的氯仿和甲醇1∶1(容量比)溶液进行搅拌。利用离心分离(12000×g、2分钟)，分离成上层(水/甲醇层)为分解产物的乙醇胺(ethanolamine1-3H)、下层(氯仿层)为未反应的放射标记花生四烯酸乙醇胺(Anandamide[ethanolamine 1-3H])。将上层的25μl移到96池的耐有机溶剂性微量白盘(PicoPlate-96；PerkinElmer社)，加入150μl的微闪烁(マィクロシンチ)20(PerkinElmer社)，用微板闪烁计数器(TopCountTM；Beckman社)进行测定。
将不给药试验物质的对照大白鼠的脑、单核细胞的破碎液中的FAAH活性设定为100％，将不含有组织破碎液的缓冲液(50mMTris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、0.1mg/ml BSA及100mM NaCl)的FAAH活性设定为0％，求出给药有试验物质的大白鼠组织破碎液的FAAH活性的相对值(％)。选择使FAAH活性的相对值降低的物质作为抑制FAAH活性的物质。
由以上结果显示，在对实验动物给药试验物质后，通过测定摘取的组织的破碎液中的试验物质依赖的FAAH活性的变化，可以筛选抑制FAAH活性的物质，即尿频·尿失禁治疗剂、膀胱过度活动症治疗剂及/或疼痛治疗剂。
实施例441 相对环磷酰胺(CPA)诱发尿频大白鼠的化合物的作用 使用病态标本研究化合物的膀胱刺激症状改善作用。已知有，环磷酰胺(CPA)通过全身给药，变换成作为代谢物的丙烯醛，由尿中伤害膀胱粘膜。在大白鼠中，由于通过CPA给药可以诱发伴有出血性膀胱炎的膀胱疼痛或尿频状态，因此可以进行对这些症状的药效评价。在实验中，使用9周龄的Wistar系雌性大白鼠(チャ一ルスリパ一社)。将CPA(100mg/kg)进行腹腔内给药，在2天后进行实验。口服给药(p.o.)化合物15分钟后，强制性地口服给药蒸馏水(30ml/kg)。将大白鼠放入代谢笼，连续测定排尿重量1小时。通过总排尿量除以总排尿次数，算出有效膀胱容量。其结果，在作为溶剂的0.5％甲基纤维素(MC)给药组中，有效膀胱容量减少，确认尿频状态。其有效口服给药量为实施例2、218及261的化合物为3mg/kg，实施例225、228、273、313、324、325及359的化合物为1mg/kg。这些化合物使减少的有效膀胱容量增加，改善了尿频状态。
实施例442 L5/L6脊髓神经结扎大白鼠(神经原性疼痛标本)中的化合物的抗触摸痛效果 在戊巴比妥麻醉下，施行用绢丝结扎雄性5-6周龄SD大白鼠的左侧的L5及L6脊髓神经的手术。镇痛作用的评价法采用von Frey hairtest。即，用毛发(hair)捅动物的后腿背面，将引起抬腿反应的最小的毛发的强度设定为对机械刺激的反应阈值(log gram)。由于通过前期研究可以确认，动物的手术侧腿的反应阈值在手术后第7天～第14天之间显著降低(位于触摸痛状态)，故试验化合物的抗触摸痛效果在手术后第7天～第14天之间的任意一天进行评价。在试验化合物评价前一天，测定试验化合物给药前反应阈值。以试验化合物给药前反应阈值的组间平均值之差及组内的偏差变小的方式将动物分组。在试验化合物评价试验中，测定试验化合物给药后反应阈值。试验化合物在反应阈值测定的60分钟前进行口服给药。分别将溶剂给药组的手术侧腿及非手术侧腿的反应阈值定义为0％及100％算出试验化合物的抗触摸痛作用的效力。其结果，实施例126的化合物在10mg/kg口服给药中显示74％的效力。
[表1]
[表2]
[表3]
[表4]
[表5]
[表6]
[表7]
[表8]
[表9]
[表10]
[表11]
[表12]
[表13]
[表14]
[表15]
[表16]

[表17]

[表18]

[表19]

[表20]

[表21]

[表22]
[表23]

[表24]
[表25]

[表26]

[表27]

[表28]

[表29]

[表30]

[表31]

[表32]
[表33]
[表34]

[表35]
[表36]
[表37]
[表38]
[表39]
[表40]
[表41]
[表42]
[表43]
[表44]
[表45]
[表46]
[表47]
[表48]
[表49]
[表50]
[表51]
[表52]
[表53]
[表54]
[表55]
[表56]
[表57]
[表58]
[表59]
[表60]
[表61]
[表62]
[表63]
[表64]
[表65]

[表66]


[表67]


[表68]

[表69]


[表70]


[表71]

[表72]
[表73]
工业应用的可能性 由于本发明化合物具有优良的FAAH控制活性，因此，对FAAH参与的疾患、特别是尿频·尿失禁、膀胱过度活动症及/或疼痛、特别是神经源性疼痛的治疗是有用的。
序列表之非关键词文字
在下面的序列表的序列号1的数字识别号<223>，揭示发明者。
序列表
<110>安斯泰来制药株式会社(Astellas Pharma Inc.)
<120>吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物
(Pyridyl non aromatic hetero ring including nitrogen-1-carboxylic acid ester derivative)
<130>SCT072607-47
<150>JP2005-40197
<151>2005-02-17
<150>JP2005-303065
<151>2005-10-18
<160>8
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2063
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<220>
<221>CDS
<222>(36)..(1772)
<223>Inventor；Ishii，Takahiro；Sugane，Takashi；Maeda，Jun；Narazaki，Fumie；Kakefuda，Akio；Sato Kentaro；Takahashi，Tatsuhisa；Kanayama，Takatoshi；Saitoh，Chikashi；Suzuki，Jotaro；Kanai Chisato
<400>1
tgccgggcgg taggcagcag caggctgaag ggatc atg gtg cag tac gag ctg53
Met Val Gln Tyr Glu Leu
1 5
tgg gcc gcg ctg cct ggc gcc tcc ggg gtc gcc ctg gcc tgc tgc ttc 101
Trp Ala Ala Leu Pro Gly Ala Ser Gly Val Ala Leu Ala Cys Cys Phe
10 15 20
gtg gcg gcg gcc gtg gcc ctg cgc tgg tcc ggg cgc cgg acg gcg cgg 149
Val Ala Ala Ala Val Ala Leu Arg Trp Ser Gly Arg Arg Thr Ala Arg
25 30 35
ggc gcg gtg gtc cgg gcg cga cag aag cag cga gcg ggc ctg gag aac 197
Gly Ala Val Val Arg Ala Arg Gln Lys Gln Arg Ala Gly Leu Glu Asn
40 45 50
atg gac agg gcg gcg cag cgc ttc cgg ctc cag aac cca gac ctg gac245
Met Asp Arg Ala Ala Gln Arg Phe Arg Leu Gln Asn Pro Asp Leu Asp
55 60 65 70
tca gag gcg ctg cta gcc ctg ccc ctg cct cag ctg gtg cag aag tta293
Ser Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Leu Pro Gln Leu Val Gln Lys Leu
75 80 85
cac agt aga gag ctg gcc cct gag gcc gtg ctc ttc acc tat gtg gga341
His Ser Arg Glu Leu Ala Pro Glu Ala Val Leu Phe Thr Tyr Val Gly
90 95 100
aag gcc tgg gaa gtg aac aaa ggg acc aac tgt gtg acc tcc tat ctg389
Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn Cys Val Thr Ser Tyr Leu
105 110 115
gct gac tgt gag act cag ctg tct cag gcc cca agg cag ggc ctg ctc437
Ala Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala Pro Arg Gln Gly Leu Leu
120 125 130
tat ggc gtc cct gtg agc ctc aag gag tgc ttc acc tac aag ggc cag485
Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys Phe Thr Tyr Lys Gly Gln
135 140 145 150
gac tcc acg ctg ggc ttg agc ctg aat gaa ggg gtg ccg gcg gag tgc533
Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu Gly Val Pro Ala Glu Cys
155 160 165
gac agc gta gtg gtg cat gtg ctg aag ctg cag ggt gcc gtg ccc ttc581
Asp Ser Val Val Val His Val Leu Lys Leu Gln Gly Ala Val Pro Phe
170 175 180
gtg cac acc aat gtt cca cag tcc atg ttc agc tat gac tgc agt aac629
Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Phe Ser Tyr Asp Cys Ser Asn
185 190 195
ccc ctc ttt ggc cag acc gtg aac cca tgg aag tcc tcc aaa agc cca677
Pro Leu Phe Gly Gln Thr Val Asn Pro Trp Lys Ser Ser Lys Ser Pro
200 205 210
ggg ggc tcc tca ggg ggt gaa ggg gcc ctc atc ggg tct gga ggc tcc725
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu Ile Gly Ser Gly Gly Ser
215 220 225 230
ccc ctg ggc tta ggc act gat atc gga ggc agc atc cgc ttc ccc tcc773
Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly Ser Ile Arg Phe Pro Ser
235 240 245
tcc ttc tgc ggc atc tgc ggc ctc aag ccc aca ggg aac cgc ctc agc821
Ser Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro Thr Gly Asn Arg Leu Ser
250 255 260
aag agt ggc ctg aag ggc tgt gtc tat gga cag gag gca gtg cgt ctc869
Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly Gln Glu Ala Val Arg Leu
265 270 275
tcc gtg ggc ccc atg gcc cgg gac gtg gag agc ctg gca ctg tgc ctg917
Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu Ser Leu Ala Leu Cys Leu
280 285 290
cga gcc ctg ctg tgc gag gac atg ttc cgc ttg gac ccc act gtg cct965
Arg Ala Leu Leu Cys Glu Asp Met Phe Arg Leu Asp Pro Thr Val Pro
295 300 305 310
ccc ttg ccc ttc aga gaa gag gtc tac acc agc tct cag ccc ctg cgt1013
Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Thr Ser Ser Gln Pro Leu Arg
315 320 325
gtg ggg tac tat gag act gac aac tat acc atg ccc tcc ccg gcc atg1061
Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr Met Pro Ser Pro Ala Met
330 335 340
agg cgg gcc gtg ctg gag acc aaa cag agc ctt gag gct gcg ggg cac1109
Arg Arg Ala Val Leu Glu Thr Lys Gln Ser Leu Glu Ala Ala Gly His
345 350 355
acg ctg gtt ccc ttc ttg cca agc aac ata ccc cat gct ctg gag acc1157
Thr Leu Val Pro Phe Leu Pro Ser Asn Ile Pro His Ala Leu Glu Thr
360 365 370
ctg tca aca ggt ggg ctc ttc agt gat ggt ggc cac acc ttc cta cag1205
Leu Ser Thr Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly Gly His Thr Phe Leu Gln
375 380 385 390
aac ttc aaa ggt gat ttc gtg gac ccc tgc ctg ggg gac ctg gtc tca1253
Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Prc Cys Leu Gly Asp Leu Val Ser
395 400 405
att ctg aag ctt ccc caa tgg ctt aaa gga ctg ctg gcc ttc ctg gtg1301
Ile Leu Lys Leu Pro Gln Trp Leu Lys Gly Leu Leu Ala Phe Leu Val
410 415 420
aag cct ctg ctg cca agg ctg tca gct ttc ctc agc aac atg aag tct1349
Lys Pro Leu Leu Pro Arg Leu Ser Ala Phe Leu Ser Asn Met Lys Ser
425 430 435
cgt tcg gct gga aaa ctc tgg gaa ctg cag cac gag atc gag gtg tac1397
Arg Ser Ala Gly Lys Leu Trp Glu Leu Gln His Glu Ile Glu Val Tyr
440 445 450
cgc aaa acc gtg att gcc cag tgg agg gcg ctg gac ctg gat gtg gtg1445
Arg Lys Thr Val Ile Ala Gln Trp Arg Ala Leu Asp Leu Asp Val Val
455 460 465 470
ctg acc ccc atg ctg gcc cct gct ctg gac ttg aat gcc cca ggc agg1493
Leu Thr Pro Met Leu Ala Pro Ala Leu Asp Leu Asn Ala Pro Gly Arg
475 480 485
gcc aca ggg gcc gtc agc tac act atg ctg tac aac tgc ctg gac ttc1541
Ala Thr Gly Ala Val Ser Tyr Thr Met Leu Tyr Asn Cys Leu Asp Phe
490 495 500
cct gca ggg gtg gtg cct gtc acc acg gtg act gct gag gac gag gcc1589
Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val Thr Ala Glu Asp Glu Ala
505 510 515
cag atg gaa cat tac agg ggc tac ttt ggg gat atc tgg gac aag atg1637
Gln Met Glu His Tyr Arg Gly Tyr Phe Gly Asp Ile Trp Asp Lys Met
520 525 530
ctg cag aag ggc atg aag aag agt gtg ggg ctg ccg gtg gcc gtg cag1685
Leu Gln Lys Gly Met Lys Lys Ser Val Gly Leu Pro Val Ala Val Gln
535 540 545 550
tgt gtg gct ctg ccc tgg caa gaa gag ttg tgt ctg cgg ttc atg cgg1733
Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu Cys Leu Arg Phe Met Arg
555 560 565
gag gtg gag cga ctg atg acc cct gaa aag cag tca tcc tgatggctct 1782
Glu Val Glu Arg Leu Met Thr Pro Glu Lys Gln Ser Ser
570 575
ggctccagag gacctgagac tcacactctc tgcagcccag cctagtcagg gcacagctgc 1842
cctgctgcca cagcaaggaa atgtcctgca tggggcagag gcttccgtgt cctctccccc 1902
aaccccctgc aagaagcgcc gactccctga gtctggacct ccatccctgc tctggtcccc 1962
tctcttcgtc ctgatccctc cacccccatg tggcagccca tgggtatgac ataggccaag 2022
gcccaactaa cagtcaagaa acaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 2063
<210>2
<211>579
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>2
Met Val Gln Tyr Glu Leu Trp Ala Ala Leu Pro Gly Ala Ser Gly Val
1 5 10 15
Ala Leu Ala Cys Cys Phe Val Ala Ala Ala Val Ala Leu Arg Trp Ser
20 25 30
Gly Arg Arg Thr Ala Arg Gly Ala Val Val Arg Ala Arg Gln Lys Gln
35 40 45
Arg Ala Gly Leu Glu Asn Met Asp Arg Ala Ala Gln Arg Phe Arg Leu
50 55 60
Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Leu Pro
65 70 75 80
Gln Leu Val Gln Lys Leu His Ser Arg Glu Leu Ala Pro Glu Ala Val
85 90 95
Leu Phe Thr Tyr Val Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn
100 105 110
Cys Val Thr Ser Tyr Leu Ala Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala
115 120 125
Pro Arg Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys
130 135 140
Phe Thr Tyr Lys Gly Gln Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu
145 150 155 160
Gly Val Pro Ala Glu Cys Asp Ser Val Val Val His Val Leu Lys Leu
165 170 175
Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Phe
180 185 190
Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Val Asn Pro Trp
195 200 205
Lys Set Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser GlyGly Glu Gly Ala Leu
210 215 220
Ile Gly Ser Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ser Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro
245 250 255
Thr Gly Asn Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly
260 265 270
Gln Glu Ala Val Arg Leu Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu
275 280 285
Ser Leu Ala Leu Cys Leu Arg Ala Leu Leu Cys Glu Asp Met Phe Arg
290 295 300
Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Thr
305 310 315 320
Ser Ser Gln Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr
325 330 335
Met Pro Ser Pro Ala Met Arg Arg Ala Val Leu Glu Thr Lys Gln Ser
340 345 350
Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Val Pro Phe Leu Pro Ser Asn Ile
355 360 365
Pro His Ala Leu Glu Thr Leu Ser Thr Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly
370 375 380
Gly His Thr Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys
385 390 395 400
Leu Gly Asp Leu Val Ser Ile Leu Lys Leu Pro Gln Trp Leu Lys Gly
405 410 415
Leu Leu Ala Phe Leu Val Lys Pro Leu Leu Pro Arg Leu Ser Ala Phe
420 425 430
Leu Ser Asn Met Lys Ser Arg Ser Ala Gly Lys Leu Trp Glu Leu Gln
435 440 445
His Glu Ile Glu Val Tyr Arg Lys Thr Val Ile Ala Gln Trp Arg Ala
450 455 460
Leu Asp Leu Asp Val Val Leu Thr Pro Met Leu Ala Pro Ala Leu Asp
465 470 475 480
Leu Asn Ala Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Val Ser Tyr Thr Met Leu
485 490 495
Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val
500 505 510
Thr Ala Glu Asp Glu Ala Gln Met Glu His Tyr Arg Gly Tyr Phe Gly
515 520 525
Asp Ile Trp Asp Lys Met Leu Gln Lys Gly Met Lys Lys Ser Val Gly
530 535 540
Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu
545 550 555 560
Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu Met Thr Pro Glu Lys
565 570 575
Gln Ser Ser
<210>3
<211>3805
<212>DNA
<213>Mus musculus
<220>
<221>CDS
<222>(247)..(1983)
<223>
<400>3
ggttccgcct gccttaaaac gctggcacgc caggaaccgg gccagaaggg gtctaggctt60
gaccttgacc gttggagctg ctagcttggc tctcgctgcc gggcaacggc gcgctccccg120
cgggcccgcg gctgcgcctg cccctccctc aagcggaatc gcgggcgatc caggccgggt180
tttgcagcgg agctgttggt gtgcgcgtgc cgagtcctct cgggtggcgg tcggctgcag240
gagatc atg gtg ctg agc gaa gtg tgg acc gcg ctg tct gga ctc tcc 288
Met Val Leu Ser Glu Val Trp Thr Ala Leu Ser Gly Leu Ser
1 5 10
ggg gtt tgc cta gcc tgc agc ttg ctg tcg gcg gcg gtg gtc ctg cga 336
Gly Val Cys Leu Ala Cys Ser Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Leu Arg
15 20 25 30
tgg acc agg agc cag acc gcc cgg ggc gcg gtg acc agg gcg cgg cag 384
Trp Thr Arg Ser Gln Thr Ala Arg Gly Ala Val Thr Arg Ala Arg Gln
35 40 45
aag cag cga gcc ggc ctg gag acc atg gac aag gcg gtg cag cgc ttc 432
Lys Gln Arg Ala Gly Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Val Gln Arg Phe
50 55 60
cgg ctg cag aat cct gac ctg gat tca gag gcc ttg ctg gct ctg ccc480
Arg Leu Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro
65 70 75
ctn ctc caa ctg gta cag aag tta cag agt ggg gaa ctg tcc cca gaa528
Leu Leu Gln Leu Val Gln Lys Leu Gln Ser Gly Glu Leu Ser Pro Glu
80 85 90
gct gtg ctc ttt acc tac ctg gga aag gcc tgg gaa gtg aac aaa ggg576
Ala Val Leu Phe Thr Tyr Leu Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly
95 100 105 110
acc aac tgt gtg acc tcc tat ctg act gac tgt gag act cag ctg tcc624
Thr Asn Cys Val Thr Ser Tyr Leu Thr Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser
115 120 125
cag gcc cca cgg cag ggc ctg ctc tat ggc gtc ccc gtg agc ctc aag672
Gln Ala Pro Arg Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys
130 135 140
gaa tgc ttc agc tac aag ggc cat gct tcc aca ctg ggc tta agt ttg720
Glu Cys Phe Ser Tyr Lys Gly His Ala Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu
145 150 155
aac gag ggt gtg aca tcg gag agt gac tgt gtg gtg gtg cag gta ctg768
Asn Glu Gly Val Thr Ser Glu Ser Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu
160 165 170
aag ctg cag gga gct gtg ccc ttt gtg cac acc aac gtc ccc cag tcc816
Lys Leu Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser
175 180 185 190
atg cta agc tat gac tgc agt aac ccc ctc ttt ggc cag acc atg aac864
Met Leu Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Met Asn
195 200 205
ccg tgg aag ccc tcc aag agt cca gga ggt tcc tca ggg ggt gag ggg912
Pro Trp Lys Pro Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly
210 215 220
gct ctc att gga tct gga ggc tcc cct ctg ggt tta ggc act gac atc960
Ala Leu Ile Gly Ser Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile
225 230 235
ggc ggc agc atc cgg ttc cct tct gcc ttc tgt ggc atc tgt ggc ctc1008
Gly Gly Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu
240 245 250
aag cct act ggg aac cgc ctc agc aag agt ggc ctg aag agc tgt gtt1056
Lys Pro Thr Gly Asn Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Ser Cys Val
255 260 265 270
tat gga cag aca gca gtg cag ctt tct gtt ggc ccc atg gca cgg gat1104
Tyr Gly Gln Thr Ala Val Gln Leu Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp
275 280 285
gtg gat agc ctg gca ttg tgc atg aaa gcc cta ctt tgt gag gat ttg1152
Val Asp Ser Leu Ala Leu Cys Met Lys Ala Leu Leu Cys Glu Asp Leu
290 295 300
ttc cgc ttg gac tcc acc atc ccc ccc ttg ccc ttc agg gag gag atc1200
Phe Arg Leu Asp Ser Thr Ile Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Ile
305 310 315
tac aga agt tct cga ccc ctt cgt gtg gga tac tat gaa act gac aac1248
Tyr Arg Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn
320 325 330
tac acc atg ccc act cca gcc atg agg agg gct gtg atg gag acc aag1296
Tyr Thr Met Pro Thr Pro Ala Met Arg Arg Ala Val Met Glu Thr Lys
335 340 345 350
cag agt cfc gag gct gct ggc cac acg ctg gtc ccc ttc tta cca aac1344
Gln Ser Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Val Pro Phe Leu Pro Asn
355 360 365
aac ata cct tat gcc ctg gag gtc ctg tcg gca ggt ggg ctg ttc agt1392
Asn Ile Pro Tyr Ala Leu Glu Val Leu Ser Ala Gly Gly Leu Phe Ser
370 375 380
gat ggt ggc tgc tct ttt ctc caa aac ttc aaa ggc gac ttt gtg gat1440
Asp Gly Gly Cys Ser Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp
385 390 395
ccc tgc ttg ggg gac ctg gtc tta gtg ctg aag ctg ccc agg tgg ttt1488
Pro Cys Leu Gly Asp Leu Val Leu Val Leu Lys Leu Pro Arg Trp Phe
400 405 410
aaa aaa ctg ctg agc ttc ctg ctg aag cct ctg ttt cct cgg ctg gca1536
Lys Lys Leu Leu Ser Phe Leu Leu Lys Pro Leu Phe Pro Arg Leu Ala
415 420 425 430
gcc ttt ctc aac agt atg tgt cct cgg tca gcc gaa aag ctg tgg gaa1584
Ala Phe Leu Asn Ser Met Cys Pro Arg Ser Ala Glu Lys Leu Trp Glu
435 440 445
ctg cag cat gag att gag atg tat cgc cag tcc gtc att gcc cag tgg1632
Leu Gln His Glu Ile Glu Met Tyr Arg Gln Ser Val Ile Ala Gln Trp
450 455 460
aag gca atg aac ttg gac gtg gtg cta acc ccc atg ctg ggt cct gct1680
Lys Ala Met Asn Leu Asp Val Val Leu Thr Pro Met Leu Gly Pro Ala
465 470 475
ctg gat ttg aac gca ccg ggc aga gcc aca ggg gct atc agc tac act1728
Leu Asp Leu Asn Ala Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Ile Ser Tyr Thr
480 485 490
gtt ctc tat aac tgc ctg gac ttc cct gcg ggg gtg gtg cct gtc acc1776
Val Leu Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr
495 500 505 510
act gtg acc gct gag gac gat gcc cag atg gaa cac tac aaa ggc tac1824
Thr Val Thr Ala Glu Asp Asp Ala Gln Met Glu His Tyr Lys Gly Tyr
515 520 525
ttt ggg gat atg tgg gac aac att ctg aag aag ggc atg aaa aag ggt1872
Phe Gly Asp Met Trp Asp Asn Ile Leu Lys Lys Gly Met Lys Lys Gly
530 535 540
ata ggc ctg cct gtg gct gtg cag tgc gtg gct ctg ccc tgg cag gaa1920
Ile Gly Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu
545 550 555
gag ctg tgt ctg cgg ttc atg cgg gag gtg gaa cgg ctg atg acc cct1968
Glu Leu Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu Met Thr Pro
560 565 570
gaa aag cgg cca tct tgagggtcat tcatctgccc agctctggag gacctaaggc2023
Glu Lys Arg Pro Ser
575
ccatgcgctc tgcactgcag ccccatctat tcaggatcct gccacccatg aggagatgcc 2083
cagcacggga agaggcaacc acctgccctc ccctggactc ctacagaaac ccaggacatg 2143
ccctccataa ccaagtctgg accttgctcc cctttctggt ctactttcca tcctgacccc 2203
ctactctatg tgacagccca gcaggaacga cacgggccaa ggaccaccaa cagtcaaaaa 2263
aagcaatgtg tttctgtatt tttctgggta tttttctatt aggaccttgg aaccagagcc 2323
tgctgagagg gctgtgctgt ccctccagag ctggctgtaa tcatgtcact ctcctgctcc 2383
aaagcctccc taggccatca cccacaaggt agacacaggg acatgtcctt ggcacttggc 2443
tcctgccctt ccttccttgt tcagattggc cccagctttg atggacaccg cccgggtctt 2503
cctccctcat tccacctctc tctcttctga cttggccttt ttacttctct agctgttgta 2563
gagaacaagg tttctctgtg tagccctggc tgtccaggat ctcactctgt agatcaggct 2623
ggctttcagc tcacaaggct gcctgcctgg gtgctgggat taaaggcgtg tgttaccaga 2683
gtctggctgg ctgggatatc ttttagggtc atctctgtaa cccattttct acttacatat 2743
ccacaagtca gaacactgga ctgaggaagg actatgtcac cctggatacc tgtcagggaa 2803
cacttacaga gataccagtg tcatcaattt gagcttccca gccaaataag tctcctccag 2863
tctgtgtttg gttagcttgc cagtattgac ctggctcctg acggctcctc catgtaggtt 2923
gtactggcga cctaggatac cccttgtggt gagtgagtga gaccacttgt ggtctgggct 2983
ctgtaaggtt tatcatcaca tgcctagcac ccagcatgtt acctggcact tagtagatag 3043
ccagtcaggc ttgttggagg gatggcagat ttatttctag cgaatccatt ttggcacctc 3103
ccgattactt cctatgccat ccataatagg gaattttcag tttgcctctg acctgctacc 3163
tttatctaat ctacttaatt cactttgatt catgaccaca gggacaaata tctctttgtc 3223
tgtgatcaac gtagagcttc ctcctggtca agaaggctgc atgcatcaac ttctaccaac 3283
cctcagctcc tccatacttc ttccacccag cccacaagca cattgaattc ctcccactat 3343
gctcaggata agcaaacaga aacagcccct gcttgaatgg tttctcattc taccagcaac 3403
tgtgtattta cactgtaggt cacacaaatg ctataaagca gaagtccctg ggtatgatga 3463
catcaagcag gctacctggc ccgcaggtca tgtgtgcaag agtaggagta tcagggagtg 3523
ctctctgtgt gaagtgacat gtaagctgga aagctcacag ttaatgggag ccaaggaaca 3583
agtatttcaa gaagagtgga gtcgacttaa acgctgctga tgtaactgga taaggacaag 3643
tgaagggagg gatggagaac tccacctgcc atcattgaat cgagtgccta ctgtttgcca 3703
gacactttac caaaggctgc caaggtcctt gctcttaggg aactcgtttt ctagagagag 3763
ggcatgcaaa taagatcata aataaaataa tttatgctga tg 3805
<210>4
<211>579
<212>PRT
<213>Mus musculus
<400>4
Met Val Leu Ser Glu Val Trp Thr Ala Leu Ser Gly Leu Ser Gly Val
1 5 10 15
Cys Leu Ala Cys Ser Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Leu Arg Trp Thr
20 25 30
Arg Ser Gln Thr Ala Arg Gly Ala Val Thr Arg Ala Arg Gln Lys Gln
35 40 45
Arg Ala Gly Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Val Gln Arg Phe Arg Leu
50 55 60
Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Ala Leu Pro Leu Leu
65 70 75 80
Gln Leu Val Gln Lys Leu Gln Ser Gly Glu Leu Ser Pro Glu Ala Val
85 90 95
Leu Phe Thr Tyr Leu Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn
100 105 110
Cys Val Thr Ser Tyr Leu Thr Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala
115 120 125
Pro Arg Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys
130 135 140
Phe Ser Tyr Lys Gly His Ala Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu
145 150 155 160
Gly Val Thr Ser Glu Ser Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu Lys Leu
165 170 175
Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Leu
180 185 190
Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Met Asn Pro Trp
195 200 205
Lys Pro Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu
210 215 220
Ile Gly Ser Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro
245 250 255
Thr Gly Asn Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Ser Cys Val Tyr Gly
260 265 270
Gln Thr Ala Val Gln Leu Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Asp
275 280 285
Ser Leu Ala Leu Cys Met Lys Ala Leu Leu Cys Glu Asp Leu Phe Arg
290 295 300
Leu Asp Ser Thr Ile Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Ile Tyr Arg
305 310 315 320
Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr
325 330 335
Met Pro Thr Pro Ala Met Arg Arg Ala Val Met Glu Thr Lys Gln Ser
340 345 350
Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Val Pro Phe Leu Pro Asn Asn Ile
355 360 365
Pro Tyr Ala Leu Glu Val Leu Ser Ala Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly
370 375 380
Gly Cys Ser Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys
385 390 395 400
Leu Gly Asp Leu Val Leu Val Leu Lys Leu Pro Arg Trp Phe Lys Lys
405 410 415
Leu Leu Ser Phe Leu Leu Lys Pro Leu Phe Pro Arg Leu Ala Ala Phe
420 425 430
Leu Asn Ser Met Cys Pro Arg Ser Ala Glu Lys Leu Trp Glu Leu Gln
435 440 445
His Glu Ile Glu Met Tyr Arg Gln Ser Val Ile Ala Gln Trp Lys Ala
450 455 460
Met Asn Leu Asp Val Val Leu Thr Pro Met Leu Gly Pro Ala Leu Asp
465 470 475 480
Leu Asn Ala Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Ile Ser Tyr Thr Val Leu
485 490 495
Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val
500 505 510
Thr Ala Glu Asp Asp Ala Gln Met Glu His Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly
515 520 525
Asp Met Trp Asp Asn Ile Leu Lys Lys Gly Met Lys Lys Gly Ile Gly
530 535 540
Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu
545 550 555 560
Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu Met Thr Pro Glu Lys
565 570 575
Arg Pro Ser
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<223>
<400>5
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Met Val Leu
1
agc gaa gtg tgg acc acg ctg tct ggg gtc tcc ggg gtt tgc cta gcc106
Ser Glu Val Trp Thr Thr Leu Ser Gly Val Ser Gly Val Cys Leu Ala
5 10 15
tgc agc ttg ttg tcg gcg gcg gtg gtc ctg cga tgg acc ggg cgc cag154
Cys Ser Leu Leu Ser Ala Ala Val Val Leu Arg Trp Thr Gly Arg Gln
20 25 30 35
aag gcc cgg ggc gcg gcg acc agg gcg cgg cag aag cag cga gcc agc202
Lys Ala Arg Gly Ala Ala Thr Arg Ala Arg Gln Lys Gln Arg Ala Ser
40 45 50
ctg gag acc atg gac aag gcg gtg cag cgc ttc cgg ctg cag aat cct250
Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Val Gln Arg Phe Arg Leu Gln Asn Pro
55 60 65
gac ctg gac tcg gag gcc ttg ctg acc ctg ccc cta ctc caa ctg gta298
Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Thr Leu Pro Leu Leu Gln Leu Val
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cag aag tta cag agt gga gag ctg tcc cca gag gct gtg ttc ttt act346
Gln Lys Leu Gln Ser Gly Glu Leu Ser Pro Glu Ala Val Phe Phe Thr
85 90 95
tac ctg gga aag gcc tgg gaa gtg aac aaa ggg acc aac tgc gtg acc394
Tyr Leu Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn Cys Val Thr
100 105 110 115
tcc tat ctg acc gac tgt gag act cag ctg tcc cag gcc cca cgg cag442
Ser Tyr Leu Thr Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala Pro Arg Gln
120 125 130
ggc ctg ctc tat ggt gtc cct gtg agc ctc aag gaa tgc ttc agc tac490
Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys Phe Ser Tyr
135 140 145
aag ggc cac gac tcc aca ctg ggc ttg agc ctg aat gag ggc atg cca538
Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu Gly Met Pro
150 155 160
tcg gaa tct gac tgt gtg gtg gtg caa gtg ttg aag ctg cag gga gct586
Ser Glu Ser Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu Lys Leu Gln Gly Ala
165 170 175
gtg ccc ttt gtg cat acc aat gtc ccc cag tcc atg tta agc ttt gac634
Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Leu Ser Phe Asp
180 185 190 195
tgc agt aac cct ctc ttt ggc cag acc atg aac cca tgg aag tcc tcc682
Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Met Asn Pro Trp Lys Ser Ser
200 205 210
aag agc cca gga ggt tcc tca ggg ggt gag ggg gct ctc att gga tct730
Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu Ile Gly Ser
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gga ggt tcc cct ctg ggt tta ggc act gac att ggc ggc agc atc cgg778
Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly Ser Ile Arg
230 235 240
ttc cct tct gcc ttc tgc ggc atc tgt ggc ctc aag cct act ggc aac826
Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro Thr Gly Asn
245 250 255
cgc ctc agc aag agt ggc ctg aag ggc tgt gtc tat gga cag acg gca874
Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly Gln Thr Ala
260 265 270 275
gtg cag ctt tct ctt ggc ccc atg gcc cgg gat gtg gag agc ctg gcg922
Val Gln Leu Ser Leu Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu Ser Leu Ala
280 285 290
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Leu Cys Leu Lys Ala Leu Leu Cys Glu His Leu Phe Thr Leu Asp Pro
295 300 305
acc gtg cct ccc ttg ccc ttc aga gag gag gtc tat aga agt tct aga1018
Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Arg Ser Ser Arg
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ccc ctg cgt gtg ggg tac tat gag act gac aac tat acc atg ccc agc1066
Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr Met Pro Ser
325 330 335
cca gct atg agg agg gct ctg ata gag acc aag cag aga ctt gag gct1114
Pro Ala Met Arg Arg Ala Leu Ile Glu Thr Lys Gln Arg Leu Glu Ala
340 345 350 355
gct ggc cac acg ctg att ccc ttc tta ccc aac aac ata ccc tac gcc1162
Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe Leu Pro Asn Asn Ile Pro Tyr Ala
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ctg gag gtc ctg tct gcg ggc ggc ctg ttc agt gac ggt ggc cgc agt1210
Leu Glu Val Leu Ser Ala Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly Gly Arg Ser
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ttt ctc caa aac gtc aaa ggt gac ttt gtg gat ccc tgc ttg gga gac1258
Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys Leu Gly Asp
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ctg atc tta att ctg agg ctg ccc agc tgg ttt aaa aga ctg ctg agc1306
Leu Ile Leu Ile Leu Arg Leu Pro Ser Trp Phe Lys Arg Leu Leu Ser
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ctc ctg ctg aag cct ctg ttt cot cgg ctg gca gcc ttt ctc aac agt1354
Leu Leu Leu Lys Pro Leu Phe Pro Arg Leu Ala Ala Phe Leu Asn Ser
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atg cgt cct cgg tca gct gaa aag ctg tgg aaa ctg cat cat gag att1402
Met Arg Pro Arg Ser Ala Glu Lys Leu Trp Lys Leu Gln His Glu Ile
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gag atg tat cgc cag tct gtg att gcc cag tgg aaa gcg atg aac ttg1450
Glu Met Tyr Arg Gln Ser Val Ile Ala Gln Trp Lys Ala Met Asn Leu
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gat gtg ctg ctg acc ccc atg ttg ggc cct gct ctg gat ttg aac aca1498
Asp Val Leu Leu Thr Pro Met Leu Gly Pro Ala Leu Asp Leu Asn Thr
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ccg ggc aga gcc aca ggg gct atc agc tac acc gtt ctc tac aac tgc1546
Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Ile Ser Tyr Thr Val Leu Tyr Asn Cys
485 490 495
ctg gac ttc cct gcg ggg gtg gtg cct gtc acc act gtg acc gcc gag1594
Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val Thr Ala Glu
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gac gat gcc cag atg gaa ctc tac aaa ggc tac ttt ggg gat atc tgg1642
Asp Asp Ala Gln Met Glu Leu Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly Asp Ile Trp
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gac atc atc ctg aag aag gcc atg aaa aat agt gtc ggt ctg cct gtg1690
Asp Ile Ile Leu Lys Lys Ala Met Lys Asn Ser Val Gly Leu Pro Val
535 540 545
gct gtg cag tgc gtg gct ctg ccc tgg cag gaa gag ctg tgt ctg agg1738
Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu Cys Leu Arg
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ttc atg cgg gag gtg gaa cag ctg atg acc cct caa aag cag cca tcg1786
Phe Met Arg Glu Val Glu Gln Leu Met Thr Pro Gln Lys Gln Pro Ser
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tgagggtcgt tcatccgcca gctctggagg acctaaggcc catgcgctgt gcactgtagc 1846
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cctgccctcc cctggactcc tgcagccaca accaagtctg gaccttcctc cccgttatgg 1966
tctactttcc atcctgattc cctgcttttt atggcagcca gcaggaatga cgtgggccaa 2026
ggatcaccaa cattcaaaaa caatgcgttt atctattttc tgggtatctc cattagggcc 2086
ctgggaacca gagtgctggg aaggctgtcc agaccctcca gagctggctg taaccacatc 2146
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ccttggcact tgactcctgt ccttcctttc ttattcagat tgaccccagc cttgatggac 2266
cctgcccctg cacttccttc ctcagtccac ctctctgccg acacgccctt tttatggctc 2326
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<213>Rattus norvegicus
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Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Ala Leu Leu Thr Leu Pro Leu Leu
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Gln Leu Val Gln Lys Leu Gln Ser Gly Glu Leu Ser Pro Glu Ala Val
85 90 95
Phe Phe Thr Tyr Leu Gly Lys Ala Trp Glu Val Asn Lys Gly Thr Asn
100 105 110
Cys Val Thr Ser Tyr Leu Thr Asp Cys Glu Thr Gln Leu Ser Gln Ala
115 120 125
Pro Arg Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys
130 135 140
Phe Ser Tyr Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Leu Asn Glu
145 150 155 160
Gly Met Pro Ser Glu Ser Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu Lys Leu
165 170 175
Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Leu
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Ile Gly Ser Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Leu Lys Pro
245 250 255
Thr Gly Asn Arg Leu Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Cys Val Tyr Gly
260 265 270
Gln Thr Ala Val Gln Leu Ser Leu Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu
275 280 285
Ser Leu Ala Leu Cys Leu Lys Ala Leu Leu Cys Glu His Leu Phs Thr
290 295 300
Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Arg Glu Glu Val Tyr Arg
305 310 315 320
Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr
325 330 335
Met Pro Ser Pro Ala Met Arg Arg Ala Leu Ile Glu Thr Lys Gln Arg
340 345 350
Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe Leu Pro Asn Asn Ile
355 360 365
Pro Tyr Ala Leu Glu Val Leu Ser Ala Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly
370 375 380
Gly Arg Ser Phe Leu Gln Asn Phe Lys Gly Asp Phe Val Asp Pro Cys
385 390 395 400
Leu Gly Asp Leu Ile Leu Ile Leu Arg Leu Pro Ser Trp Phe Lys Arg
405 410 415
Leu Leu Ser Leu Leu Leu Lys Pro Leu Phe Pro Arg Leu Ala Ala Phe
420 425 430
Leu Asn Ser Met Arg Pro Arg Ser Ala Glu Lys Leu Trp Lys Leu Gln
435 440 445
His Glu Ile Glu Met Tyr Arg Gln Ser Val Ile Ala Gln Trp Lys Ala
450 455 460
Met Asn Leu Asp Val Leu Leu Thr Pro Met Leu Gly Pro Ala Leu Asp
465 470 475 480
Leu Asn Thr Pro Gly Arg Ala Thr Gly Ala Ile Ser Tyr Thr Val Leu
485 490 495
Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val
500 505 510
Thr Ala Glu Asp Asp Ala Gln Met Glu Leu Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly
515 520 525
Asp Ile Trp Asp Ile Ile Leu Lys Lys Ala Met Lys Asn Ser Val Gly
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Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu
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<213>Sus scrofa
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<223>
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Met Val Gln Glu Glu Leu Trp Ala Ala Phe Ser
1 5 10
ggc ccc tcc ggg gtt gcc ctg gcc tgc tgc ttg gtg gca gcg gcc ttg 100
Gly Pro Ser Gly Val Ala Leu Ala Cys Cys Leu Val Ala Ala Ala Leu
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gcc ctg cgt tgg tcc agt cgc cgg atg gcg cgg ggc gcg gcg gcc cgg 148
Ala Leu Arg Trp Ser Ser Arg Arg Met Ala Arg Gly Ala Ala Ala Arg
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gcg cga cag agg cag caa gcg gcc ctg gag acc atg gac aag gcg gcg 196
Ala Arg Gln Arg Gln Gln Ala Ala Leu Glu Thr Met Asp Lys Ala Ala
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cag cgc ttc cgg ctc cag aac ccc gat ctg gac tcg gag atg ctg ctg 244
Gln Arg Phe Arg Leu Gln Asn Pro Asp Leu Asp Ser Glu Met Leu Leu
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gcc ctg cca ctg cct cag ctg gta cag aag gta cga agt ggg gag ctg 292
Ala Leu Pro Leu Pro Gln Leu Val Gln Lys Val Arg Ser Gly Glu Leu
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tct cca gag gct gtg ctc ttt tcc tac ctg caa aag gcc tgg gaa gtg 340
Ser Pro Glu Ala Val Leu Phe Ser Tyr Leu Gln Lys Ala Trp Glu Val
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aac aga ggg acc aac tgc gtg acc acc tac ctg gca gac tgt gag gct388
Asn Arg Gly Thr Asn Cys Val Thr Thr Tyr Leu Ala Asp Cys Glu Ala
110 115 120
cag ctg tgc cag gcg ccc ggg cag ggc ctg ctc tac ggt gtc ccc gtc436
Gln Leu Cys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val
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agc ctc aag gag tgc ttc agc tgc aag ggc cat gac tcc acg ctg ggc484
Ser Leu Lys Glu Cys Phe Ser Cys Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly
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ttg agc cgg aac cag ggg aca cca gca gaa tgt gac tgc gtg gtg gtg532
Leu Ser Arg Asn Gln Gly Thr Pro Ala Glu Cys Asp Cys Val Val Val
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cag gtg ctg aaa ctg cag ggt gct gtg cct ttc gtg cac acc aac gtc580
Gln Val Leu Lys Leu Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val
175 180 185
ccc cag tcc atg ttc agc tat gac tgc agt aac ccc ctc ttt ggc cag628
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190 195 200
acc acg aac cca tgg atg tcg tcc aag agc ccg ggc ggc tcc tcg gga676
Thr Thr Asn Pro Trp Met Ser Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly
205 210 215
ggt gag ggg gcc ctc att gct gct gga ggc tcc cca ctg ggc tta ggc724
Gly Glu Gly Ala Leu Ile Ala Ala Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly
220 225 230 235
acc gac atc ggg ggc agc atc cgc ttt ccc tcc gcc ttc tgt ggc atc772
Thr Asp Ile Gly Gly Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile
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tgc ggc atc aaa ccc acg ggg aac cgc atc agc aag agt ggt ctg aag820
Cys Gly Ile Lys Pro Thr Gly Asn Arg Ile Ser Lys Ser Gly Leu Lys
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ggc tct gtc tat gga cag gta gca gtg cag ctc tca gtg ggc ccc atg868
Gly Ser Val Tyr Gly Gln Val Ala Val Gln Leu Ser Val Gly Pro Met
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gcg cgg gac gtg gag agc ctg gcc ctg tgc ctg cgt gcg ctg ctg tgc916
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gaa gac atg ttc cgc ctg gac ccc acg gtg cct ccc ctg ccc ttc aac964
Glu Asp Met Phe Arg Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Asn
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gag gag gtc tac gca agc tct cgg ccc ctg cgt gtc ggg tat tat gag1012
Glu Glu Val Tyr Ala Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu
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acc gac aac tac acc atg ccc acg ccg gcc atg agg cgg gcc ctg ctg1060
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gag acc aag cgg agc ctt gag gct gcg ggc cac acg ctg att ccc ttc1108
Glu Thr Lys Arg Ser Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe
350 355 360
ctg ccg gcc aac ata ccc cac gct ctg gag gcc ctg tca acg ggc ggg1156
Leu Pro Ala Asn Ile Pro His Ala Leu Glu Ala Leu Ser Thr Gly Gly
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ctc ttc agt gat ggt ggg aag agg ttg cta cag aac ttc gaa ggc gat1204
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tac gtg gac tcc tgc tta ggg gac ctg atc tca att ctg agg ctg ccc1252
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agg ttg gca ggc ttt ctc agc agc ctg agg cct cgg tcg gct gga aag1348
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Lys Gly Tyr Phe Gly Asp Ile Trp Asp Lys Val Val Gln Lys Ala Met
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sag agg agc gtg ggg ctg cct gtg gcc gtg cag tgt gtg gct ctg ccc1684
Lys Arg Ser Val Gly Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro
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tgg cag gag gag ctg tgt ttg cgg ttc atg cgg gag gtg gag cga ctg1732
Trp Gln Glu Glu Leu Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu
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Met Val Gln Glu Glu Leu Trp Ala Ala Phe Ser Gly Pro Ser Gly Val
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Pro Gly Gln Gly Leu Leu Tyr Gly Val Pro Val Ser Leu Lys Glu Cys
130 135 140
Phe Ser Cys Lys Gly His Asp Ser Thr Leu Gly Leu Ser Arg Asn Gln
145 150 155 160
Gly Thr Pro Ala Glu Cys Asp Cys Val Val Val Gln Val Leu Lys Leu
165 170 175
Gln Gly Ala Val Pro Phe Val His Thr Asn Val Pro Gln Ser Met Phe
180 185 190
Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Pro Leu Phe Gly Gln Thr Thr Asn Pro Trp
195 200 205
Met Ser Ser Lys Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Gly Glu Gly Ala Leu
210 215 220
Ile Ala Ala Gly Gly Ser Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ile Gly Gly
225 230 235 240
Ser Ile Arg Phe Pro Ser Ala Phe Cys Gly Ile Cys Gly Ile Lys Pro
245 250 255
Thr Gly Asn Arg Ile Ser Lys Ser Gly Leu Lys Gly Ser Val Tyr Gly
260 265 270
Gln Val Ala Val Gln Leu Ser Val Gly Pro Met Ala Arg Asp Val Glu
275 280 285
Ser Leu Ala Leu Cys Leu Arg Ala Leu Leu Cys Glu Asp Met Phe Arg
290 295 300
Leu Asp Pro Thr Val Pro Pro Leu Pro Phe Asn Glu Glu Val Tyr Ala
305 310 315 320
Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Gly Tyr Tyr Glu Thr Asp Asn Tyr Thr
325 330 335
Met Pro Thr Pro Ala Met Arg Arg Ala Leu Leu Glu Thr Lys Arg Ser
340 345 350
Leu Glu Ala Ala Gly His Thr Leu Ile Pro Phe Leu Pro Ala Asn Ile
355 360 365
Pro His Ala Leu Glu Ala Leu Ser Thr Gly Gly Leu Phe Ser Asp Gly
370 375 380
Gly Lys Arg Leu Leu Gln Asn Phe Glu Gly Asp Tyr Val Asp Ser Cys
385 390 395 400
Leu Gly Asp Leu Ile Ser Ile Leu Arg Leu Pro Lys Trp Leu Lys Gly
405 410 415
Leu Leu Ala Phe Met Leu Arg Pro Leu Leu Pro Arg Leu Ala Gly Phe
420 425 430
Leu Ser Ser Leu Arg Pro Arg Ser Ala Gly Lys Leu Trp Glu Leu Gln
435 440 445
His Glu Ile Glu Met Tyr Arg His Ser Val Ile Ala Gln Trp Arg Ala
450 455 460
Leu Asp Leu Asp Val Val Leu Thr Pro Met Leu Ser Pro Ala Leu Asp
465 470 475 480
Leu Asn Ala Pro Gly Lys Ala Thr Gly Ala Val Ser Tyr Thr Leu Leu
485 490 495
Tyr Asn Cys Leu Asp Phe Pro Ala Gly Val Val Pro Val Thr Thr Val
500 505 510
Thr Ala Glu Asp Glu Ala Gln Met Glu His Tyr Lys Gly Tyr Phe Gly
515 520 525
Asp Ile Trp Asp Lys Val Val Gln Lys Ala Met Lys Arg Ser Val Gly
530 535 540
Leu Pro Val Ala Val Gln Cys Val Ala Leu Pro Trp Gln Glu Glu Leu
545 550 555 560
Cys Leu Arg Phe Met Arg Glu Val Glu Arg Leu Met Ala Pro Gly Arg
565 570 575
Gln Pro Ser
权利要求
1.一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其示于通式(I)。
[化14]
[式(I)中的符号表示以下含意
HET15～7元非芳香族含氮杂环；
R1、R2及R3相同或不同，表示
(1)H，
(2)OH，
(3)可以被酯化的羧基，
(4)氰基，
(5)低级烷基-CO-，
(6)氧代(＝O)，
(7)式[R101-(O)m1]m2-[可以用HO取代的ALK1]-(O)n1-，
(m1及n1相同或不同，表示0或1；m2表示1～5，
ALK1低级亚烷基、低级亚链烯基或低级亚炔基；
R101(i)H，
(ii)可以用由(a)H2N-，(b)卤基，(c)氰基，(d)可以被酯化的羧基，(e)基团R1011aR1012aN-CO-，(f)HET2，(g)可以用卤基、氰基、OH、低级烷基-O-或低级烷基取代的Ar1a，
Ar1a芳基，
(h)低级烷基，(j)OH，(k)可以用Ar1a或卤基-Ar1a取代的低级烷基-O-，(1)可以用卤基、Ar1a或HETAr1a取代的HET2-CO-，
HET2含氮杂环，
HETAr1a含氮杂芳基，
(s)HET2-CONR1011a-，(t)H2NCONH-，及(u)可以被酯化的羧基-ALK2a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a，
ALK2a低级烷基或低级链烯基，
(iii)可以用基团R1011aR1012aN或Ar1a取代的ALK2a，
R1011a或R1012a相同或不同，表示
(a)H，(b)cALK，
cALK环烷基，
(c)可以用卤基、cALK、OH、低级烷基-O-或Ar1a取代的ALK2a或(d)可以用卤基取代的Ar1a-SO2-，
(iv)可以用由(a)可以用Ar1a或卤基-Ar1a取代的ALK2a，(b)Ar1a，(c)可以用低级烷基取代的HETAr1a，(d)Ar1a-CO-或卤基-Ar1a-CO-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的HET2，
(v)可以用ALK2a取代的cALK，或
(vi)可以被酯化的羧基，
(在此，m2为2～5时，[R101-(O)m1]可以相同，也可以不同)
(8)基团R102-ALK1-N(R103)-CO-，
(R102(i)H，
(ii)cALK，
(iii)HETAr1a，或
(iv)可以用由(a)HO，(b)ALK2a-O-，(c)cALK-ALK1-O-，(d)cALK-Ar1a-ALK1-O-，及(e)Ar1a-ALK1-O-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a，
R103(i)H，
(ii)cALK，
(iii)可以用由(a)HET2，(b)Ar1a，及(c)卤基-Ar1a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的ALK2a，
(iv)HETAr1a，或
(v)可以用由(a)cALK，(b)H2N，(c)基团R1011aR1012aN-CO-或(d)ALK2a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a-[CO]m1)，
(9)基团R104aR105aN-[CO]m1-ALK1-，
(R104a及R105a相同或不同，表示基团R103)
(10)基团R106-ALK3-L1-，
(R106(i)基团R101-(O)m1-，
(ii)基团R104及R105N-，
(iii)基团ALK2a-CONH-，或
(iv)基团Ar1a-CONH-，
ALK3低级亚烷基，低级亚链烯基或环亚烷基，
L1-C(＝O)-或-SO2-)
(11)可以用Ar1a取代的ALK2a-CONH-，
(12)可以用卤基取代的Ar1a，
(13)基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-，
(Ar2亚芳基，
R107(i)H，
(ii)卤基，
(iii)可以用由(a)HO，(b)cALK，(c)HET2，(d)可以用卤基、低级烷基、低级烷基-O-、基团R1011aR1012aN-[CO]p-、氰基或可以被酯化的羧基取代的Ar1a，(e)可以被酯化的羧基，(f)可以用基团R1011aR1012aN-[CO]p-取代的HET2-[CO]p-，及(g)基团R1011aR1012aN-[CO]p-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的ALK2a，
p为0或1，
(iv)基团R1011aR1012aN-[CO]p-，或
(v)基团R1011aR1012aN-[CO]p-Ar1a，
另外，在此，m2为2～5时，[R107-(O)m1]可以相同，也可以不同，而且，基团[R107-(O)m1]m2是指亚甲二氧基，可以形成环)
(14)基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO-，
(在此，m2为2～5时，[R107-(O)m1]可以相同，也可以不同)
(15)基团[R1011aR1012aN-[CO]m1]m2-Ar2-(O)n1-，
(在此，m2为2～5时，[R1011aR1012aN-[CO]m1]可以相同，也可以不同)
(16)基团[R108]m2-Ar2-L2-，
[R108(i)H，
(ii)卤基，
(iii)HO，
(iv)cALK-O-，
(v)基团R109-ALK1-(O)m1-，
(R109(a)H，(b)cALK，(c)可以用由(1’)卤基，(2’)氰基，(3’)N2O，(4’)可以用卤基取代的ALK2a，(5’)HO，(6’)可以用卤基取代的ALK2a-O-，(7’)可以被酯化的羧基或(8’)基团R104R105N构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a，(d)HETAr1a或(e)基团R104R105N-[CO]m1-，)
(vi)基团R1013R1014N-，或
R1013、R1014相同或不同，表示(i)H，(ii)ALK2a，(iii)cALK-ALK1-，或(iv)可以用由(1’)卤基，(2’)氰基，(3’)可以用卤基取代的ALK2a，(4’)可以用卤基取代的ALK2a-O-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a-ALK1-，或
(vii)可以用低级烷基取代的HET2-(O)m1-，
L2-CO-或-S(O)q-，
q0、1或2，
另外，在此，m2为2～5时，[R108]可以相同，也可以不同]
(17)基团[R101]m2-Ar2-CONH-，
(在此，m2为2～5时，[R101]可以相同，也可以不同)
(18)基团[R111]m2-HETAr2-(O)m1-，
(R111(i)H，(ii)卤基，(iii)氧代(＝O)，或(vi)基团R103a-(O)n1-，
R103a(i)H，
(ii)cALK，
(iii)可以用由(a)HET2或(b)Ar1a，(c)cALK及(d)卤基-Ar1a构成的族中选择的一个以上的取代基取代的ALK2a，
(iv)HETAr1a，或
(v)可以用由(a)cALK，(b)H2N及(c)基团R1011aR1012aN-CO-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a，
HETAr2含氮杂亚芳基，
另外，在此，m2为2～5时，[R111]可以相同，也可以不同)
(19)式[R112]m2-HETAr2-N(R103)-CO-，
(R112(i)H，
(ii)cALK，
(iii)ALK2a，或
(iv)可以用由(a)卤基，(b)HO，(c)ALK2a-O-及(d)Ar1a-ALK1-O-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1a，
另外，在此，m2为2～5时，[R112]可以相同，也可以不同)
(20)式[R108]m2-HETAr2-L2-，
(在此，m2为2～5时，[R108]可以相同，也可以不同)
其中，R1、R2及R3的任意一个基团在基团[R111]m2-HETAr2-(O)m1-中的m1为0时，剩下的R1、R2及R3的基团为H，R4、R5、R6及R7相同或不同，表示
(1)H，
(2)卤基，
(3)可以被酯化的羧基，
(4)HO，
(5)基团R113-ALK4-(O)m3-，
(ALK4低级亚烷基、低级亚链烯基或低级亚炔基；
m30或1；
R113(i)H，
(ii)HO，
(iii)可以用可以被酯化的羧基取代的低级烷基-O-，
(iv)可以被酯化的羧基，
(v)低级烷基-CO-O-，或
(vi)基团R104bR105bN-[CO]m3-(R104b及R105b相同或不同，表示基团R103)
(6)R114R115N(R114及R115相同或不同，表示(i)H或(ii)可以用基团R104bR105bN取代的ALK2b，
ALK2b低级烷基或低级链烯基，
(7)基团R116-(ALK4)n2-N(R117)-CO-，
(n20或1，
R116(i)H，
(ii)HO，
(iii)低级烷基-O-，
(iv)可以被酯化的羧基，
(v)基团R104bR105bN-[CO]m3-，
(vi)可以用(a)HO或(b)ALK2b-O-取代的Ar1b，
Ar1b芳基，
(vii)可以用基团R104bR105bN-[CO]m3-或可以被酯化的羧基取代的HET3，
HET3含氮杂环，
(viii)可以用基团R104R105N-[CO]m3-取代的Ar1b，或
(ix)SO3H)，
R117(i)H或(ii)可以用Ar1b取代的ALK2b)
(8)可以由可以被酯化的羧基及基团R1011bR1012bN-[(CO)]m3-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的Ar1b，
R1011b及R1012b相同或不同，表示
(i)H，
(ii)cALK，
(iii)可以用卤基、cALK、OH、低级烷基-O-或Ar1b取代的ALK2b，或
(vi)可以用卤基取代的Ar1b-SO2-，
(9)可以用可以被酯化的羧基取代的HET3，
(10)可以用由ALK2b及基团R104bR105bN-[CO]m3-构成的族中选择的一个以上的取代基取代的HET3-CO-，或
(11)氰基。其中，不包括4-氨基吡啶-3-基哌啶-1-羧酸酯]
2.如权利要求1所述的化合物，其用通式(II)表示。
[化15]
[式(II)中，R1～R7与权利要求1所述的含意相同，T表示CH2、NH、NHCH2或O。在此，也包含用R1～R3取代T的氢的情况]
3.如权利要求2所述的化合物，其中，R1～R3相同或不同，为基团[R101-(O)m1]m2-[可以用HO取代的ALK1]-(O)n1-、基团R102-ALK1-N(R103)-CO-、基团R106-ALK3-L1-、基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-(O)n1-、基团[R107-(O)m1]m2-Ar2-N(R103)-CO-或基团[R108]m2-Ar2-L2-。
4.一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其用通式(III)表示。
[化16]
[式(III)中的符号表示以下含意。
A环苯环、环戊环、环己环、环庚环或5～7元含氮杂环；
L单键、低级亚烷基、低级亚链烯基、-N(R15)-C(＝O)-、-C(＝O)-N(R15)-、-(低级亚链烯基)-C(＝O)-、-O-或-C(＝O)-；
R15H或低级烷基；
XCH或N；
R8～R10相同或不同，表示
选自下述G族中的基团，
选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的芳基、
选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的含氮杂芳基、
R16-(低级亚烷基)-O-、R16-(低级亚烷基)-N(R15)-、
或R17R18N-C(＝O)-，
R16选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的芳基、
选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的含氮杂芳基或3～8元环烷基；
R17及R18相同或不同，表示H、低级烷基或3～8元环烷基；
(而且，R17及R18与键合的N原子成为一体，可以形成3～8元含氮杂环)
G族H、卤基、-CN、-CF3、低级烷基或-O-低级烷基，
R11H、低级烷基或氧代(＝O)；
R12～R14相同或不同，表示H、低级烷基、-C(＝O)-O-(低级烷基)、-CO2H，
或-CONH2]
5.如权利要求4所述的化合物，其A环为苯环、环己环、哌啶环或哌嗪环。
6.如权利要求5所述的化合物，其中，R9、R10、R11、R12、R13为氢。
7.一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其用通式(IV)表示。
[化17]
[式(IV)中的符号表示以下含意。
A1环苯环、哌啶环或哌嗪环；
L1低级亚烷基、低级亚链烯基、-N(R15)-C(＝O)-或-O-；
R15H或低级烷基；
R19选自下述G族的基团，
选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的含氮杂芳基，
R16-(低级亚烷基)-O-或R17R18N-C(＝O)-；
R16选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的芳基，
选自下述G族中的可以用相同或不同的基团取代的含氮杂芳基或3～8元环烷基；
R17及R18相同或不同，表示H或低级烷基；
(而且，R17、R18与键合的N原子成为一体，可以形成5或6元含氮杂环)
G族H、卤基、-CN、-CF3、低级烷基或-O-低级烷基，
R20H、-C(＝O)-O-(低级烷基)、-CO2H或-CONH2]
8.一种吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其用通式(V)表示。
[化18]
[式(V)中的符号表示以下含意。
L2低级亚烷基、低级亚链烯基或-(低级亚链烯基)-C(＝O)-；
R21H、卤基、-CN、-CF3、低级烷基或-O-低级烷基；
R22H、-C(＝O)-O-(低级烷基)、-CO2H或-CONH2]
9.如权利要求1所述的化合物，其选自下述化合物构成的族中
吡啶-3-基4-{4-[(3-氟苄基)氧基]苯氧基}哌啶-1-羧酸酯、
5-{[(4-4[(3-氟苄基)氧基]苯氧基)哌啶-1-基]羰基}氧基}烟酸、
5-({[4-(2-苯乙基)哌啶-1-基]羰基}氧基)烟酸、
5-[({4-[4-(2-环己基乙氧基)苯氧基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸、
5-[({4-[(E)-2-苯基乙烯基]哌啶-1-基}羰基)氧基]烟酸、
5-{[(4-{3-[1-(6-甲基吡啶)-2-基]哌啶-4-基]丙基}哌啶-1-基)羰基]氧基}烟酸、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-{2-[3-(氨基羰基)苯基]乙基}哌啶-1-羧酸酯、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-{3-[(二甲基氨基)羰基]苯基}乙基)哌啶-1-羧酸酯、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-[3-哌啶-1-基羰基]苯基)乙基)哌啶-1-羧酸酯、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-[3-吡咯烷-1-基羰基]苯基)乙基)哌啶-1-羧酸酯、
吡啶-3-基4-[(2E)-3-苯基丙-2-烯酰基]哌嗪-1-羧酸酯、
吡啶-3-基4-(苯胺羰基)哌啶-1-羧酸酯、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-(2-苯乙基)哌啶-1-羧酸酯、
吡啶-3-基4-(2-苯乙基)哌嗪-1-羧酸酯、
5-(甲氧基羰基)吡啶-3-基4-(2-苯乙基)哌嗪-1-羧酸酯、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-[2-(3-氟苯基)乙基]哌啶-1-羧酸酯、
5-(氨基羰基)吡啶-3-基4-[2-(3-氰基苯基)乙基]哌啶-1-羧酸酯。
10.一种医药组合物，其以权利要求1所述的化合物为有效成分。
11.如权利要求10所述的医药组合物，其是FAAH抑制剂。
12.如权利要求10所述的医药组合物，其是治疗尿频·尿失禁及/或膀胱过度活动症的药物。
13.如权利要求10所述的医药组合物，其是治疗疼痛的药物。
14.使用如权利要求1所述的化合物，以制造FAAH抑制剂、治疗尿频·尿失禁及/或膀胱过度活动症的药物。
15.使用如权利要求1所述的化合物，以制造FAAH抑制剂、治疗疼痛的药物。
16.一种治疗尿频·尿失禁及/或膀胱过度活动症的方法，其包含将权利要求1所述的化合物以治疗的有效量给药于患者。
17.一种治疗疼痛的方法，其包含将权利要求1所述的化合物以治疗的有效量给药于患者。
全文摘要
本发明提供一种化合物，其可以用于脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)参与的疾患、特别是尿频·尿失禁、膀胱过度活动症及/或疼痛的治疗。发现一种新型吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物及其药剂学上允许的盐，其具有强力的FAAH抑制活性。而且，由于本发明的吡啶基非芳香族含氮杂环-1-羧酸酯衍生物显示优良的增加有效膀胱容量的作用、改善尿频状态的作用、抗触摸痛作用，因此，可以用于尿频·尿失禁、膀胱过度活动症及/或疼痛的治疗。
文档编号C07D213/65GK101160287SQ20068000421
公开日2008年4月9日 申请日期2006年2月16日 优先权日2005年2月17日
发明者石井孝拓, 菅根隆史, 前田纯, 楢崎史惠, 挂札昭夫, 佐藤健太郎, 高桥龙久, 金山隆俊, 斋藤亲, 鈴木丈太郎, 金井千里 申请人:安斯泰来制药株式会社