专利名称：一种鼠尾草酸的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种化学提取方法,特别涉及迷迭香抗氧化剂有效成分鼠尾草酸(英文名Camosicacid，分子式C2。H2804，结构式式(a))的提取方法。迷迭香(RosmarinusoffoconalisL.)别名艾菊，属于唇形科亚灌木或多年 生草本植物。含有单萜类、倍半萜类、二萜酚和二萜琨类、黄酮类、三萜类、 脂肪酸、多支链垸烃、鞣质及氨基酸等化学成分。其中二萜酚类主要包括鼠尾 草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、异迷迭香酚、7—乙氧基迷迭香酚、7—甲氧基迷 迭香酚等，具有明显的抗氧化性能，对人体无公害，逐渐取代人工合成的2 — 或3 —叔丁基一4一羟基茴香醚(BHA)、 2—叔丁基对苯二酚(TBHQ)、 2， 6 一二叔丁基对甲酚(BHT)等抗氧化剂被应用于鱼类、油炸食品和食物油的长 期储存中。除此之外还大量用于医药，化妆品领域(屠鹏飞，徐占辉，等.新 型资源植物迷迭香的化学成分及其应用[J].天然产物研究与开发，1997， 10(3): 62)。而鼠尾草酸又是二萜酚类的典型代表，可有效的抑制油脂的过氧化物形 成和多烯脂肪酸的分解。另外，在抑制HIV—1蛋白酶的活性试验中，鼠尾草 酸的活性最强(Inhibitory effect of carnosic acid on HIV-l protease in cell-free assays. Journal of Natural Products. 1993(56): 1426-1430)。CN1600303A报道了鼠尾草酸能够抑制柯萨奇病毒的活性，特别是柯萨奇 B3型病毒活性，是制备治疗柯萨奇病毒感染疾病的药物。目前，鼠尾草酸的背景技术用途主要用其含量来评价迷迭香抗氧化剂抗氧化性能的高低和药理5开究两大 方面。在鼠尾草酸的提纯上，U.S.Pat.No.5，859，293利用调节溶液PH值来提取鼠 尾草酸，碱化PH值范围是7 10，最优为8.6 9.0，酸化最佳范围PH为2.0 2.5，但是该专利申请规定的碱化范围太大，会引起大量其他物质参与反应； 酸化时，在其规定的最佳酸化范围PH二2.0时会有大量其他成分出现，鼠尾草 酸的含量低；而超过PH-2.5时仍会有大量鼠尾草酸被提取。所以该专利申请 得到的是鼠尾草酸粗品，需结晶后才能得到高纯度的产品。U.S. Pat.No.5，256,700采用非极性溶剂提取迷迭香干叶，蒸干溶剂得到提 取物，再用少量极性溶剂溶解过滤，滤液经吸附剂吸附使鼠尾草酸与其他非极 性提取物分离，接着用大量极性溶剂解吸附，最后蒸干溶剂得到鼠尾草酸。但 是迷迭香中除了鼠尾草酸还含有其他极性化合物例如迷迭香酸、迷迭香二醛 等，导致得到的鼠尾草酸平均含量为73%左右。CN1600303A报道了迷迭香干叶用乙醇提取，氯仿萃取后进行硅胶柱层析 分离，经薄层检测，将其中含有鼠尾草酸的流份进行葡聚糖柱的分离，最后得 到鼠尾草酸部分。此法虽然能得到纯的鼠尾草酸，但是需要两次过柱分离，程 序复杂，操作烦琐。除此之外，还有利用化学反应合成鼠尾草酸的方^^。例如W. L. Meyer, J. Org. Chem., 1976(41): 1005.及A Concise Approach to the Synthesis of Carnosic Acid Type Diterpenes. Yu Xin Cui, Qiang Xiao， ect. Chinese Chemical Letters. 2001,12:203-204等。但是不仅化学合成步骤多，而且反应复杂，副产物多， 不易工业化。发明内容为了解决上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种鼠尾草酸 的提取方法。该方法无需结晶，最高可达纯度为99.42%,且提取程序简单易 操作，耗时短。本发明的目的通过下述技术方案实现 一种鼠尾草酸的提取方法，包括如 下步骤将迷迭香干叶浸泡在有机溶剂中，在20 55。C超声提取10 60min，过滤 得到迷迭香干叶提取液；在迷迭香干叶提取液中加入活性炭，所述活性炭迷 迭香干叶提取液的质量比是1 : 15 1 :25，在25 45r超声脱色5 20min， 过滤1 2次得到提取液，将提取液蒸干有机溶剂，得到固体；在上述固体中 加入乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)水溶液，使固体分散，再加入碱调节PH 值范围为8.0 9.5使鼠尾草酸成盐进入溶液，过滤得到滤液，然后滴加酸调节 PH值为2.3 3.0至滤液中有沉淀生成，过滤得到沉淀，沉淀干燥即得到鼠尾 草酸；所述有机溶剂可以是丙酮或者乙醇等。为了更好地实现本发明，所述迷迭香干叶质量有机溶剂体积的比为1 :6。所述的超声提取优选条件是温度30 4(TC下超声提取30 45min，如果温 度太高、时间太长，大量植物纤维也会被提取，给之后的脱色操作带来麻烦。所述的活性炭迷迭香干叶提取液的质量比优选是1 : 20，如果活性炭使 用量太少，脱叶绿素不完全；太多，造成浪费且给之后的过滤工作带来不便。所述的超声脱色条件优选是温度30 4(TC下超声脱色10 15min。若脱色 时间太长，活性炭粉碎太细给过滤工作带来麻烦；脱色时间太短，叶绿素脱色 不完全。所述的乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)水溶液的浓度为90g/L，黄褐色固 体质量乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)水溶液体积的比为1 : 20。所述的碱可以是NaHC03或者无水Na2C03。所述碱的物质的量约是鼠尾 草酸的物质的量的2.5倍(鼠尾草酸的质量含量按迷迭香干叶的3.32%计算)。所述的酸可以是磷酸或者盐酸。所述加入碱调节PH值范围优选是8.3 8.5，最大选择性的只让鼠尾草酸 成为盐进入溶液。若PH值过大，会导致迷迭香中的部分酸性成分和二萜酚类 化合物成盐与鼠尾草酸盐同时进入水溶液；PH值过小，会使鼠尾草酸反应不 完全，降低转化率。所述滴加酸调节PH值范围优选是2.4 2.6，只使溶液中的鼠尾草酸盐转 化成鼠尾草酸。若PH值过大，导致部分鼠尾草酸盐未能反应生成鼠尾草酸， 降低产率；PH值过小，会造成进入溶液中的极少量其他盐类也成为相应的酸 或酚类化合物与鼠尾草酸同时成为沉淀析出，影响纯度。鼠尾草酸的表征见图l、图2、图3、图4和图5。本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果本发明通过两歩控制溶液PH值，选择性的先使鼠尾草酸成盐进入水溶液
与迷迭香中的其他有机成分分离，再酸化只让鼠尾草酸成为有机相从水溶液中提取出来，从而达到提纯目的；该方法无需结晶，最高可达纯度为99.42。％， 而且提取程序简单易操作，耗时短。 '
图l(a)是鼠尾草酸的^-NMR (CDCl3溶剂)谱图。图l(b)为图1(a)0.2ppm 3.5ppm"H-NMR (CDCl3溶齐U)谱图的放大图。图2为鼠尾草酸的13C-NMR (CDCl3溶剂)谱图。图3为鼠尾草酸的红外光谱。图4为鼠尾草酸的质谱。图5为鼠尾草酸的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方 式不限于此。试剂与仪器试验中所用试剂为分析纯试剂。水为蒸馏水或相当纯度的水。甲醇，液相 色谱级。乙腈，液相色谱级。乙酸，液相色谱级。高效液相色谱仪，配有紫外检测器，C18B060904型色谱柱，Kromasil ODS， 5um的色谱柱填料。操作条件为a.柱温室温，b.检测波长216nm， c.流动相乙腈0.5%乙酸水溶液=75:25， d.流速1.00ml/min， e.进样量20ul。PHS-3C精密PH计；RE—51旋转蒸发仪；KQ3200DB型数控超声波清洗 器；磁子搅拌器。实施例1称取30克迷迭香干叶(市售，下同)，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干叶质 量有机溶剂体积为1 6)中，35'C下超声提取40min，过滤得到草绿色迷迭 香干叶提取液。向草绿色迷迭香干叶提取液中加入9克活性炭(活性炭迷迭 香干叶提取液的质量比为1 : 20)，在40。C超声脱色10min。过滤2次得到棕 红色透明提取液。棕红色透明提取液用旋转蒸发仪蒸干丙酮，得到黄褐色固体。 黄褐色固体中加入EDTA水溶液(EDTA水溶液浓度为90g/L;黄褐色固体质 量EDTA水溶液的体积-1 : 20)，使固体分散，加入无水Na2C03 (90g/L)调节PH值为8.5(NaC03的物质的量约是鼠尾草酸的物质的量的2.5倍，鼠尾 草酸的质量含量按迷迭香干叶的3.32%计算)过滤得到透明棕红色滤液。滴加 浓磷酸(H3P04含量不低于85X)至透明棕红色滤液中，调节PH值为2.5有 沉淀生成，过滤沉淀，干燥，即为鼠尾草酸。经高效液相色谱分析纯度为99.42 %，产率为98.53%。实施例2称取30克迷迭香干叶，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干叶质量丙酮体积 为1 : 6)中，4(TC超声提取30min，过滤得到草绿色迷迭香干叶提取液。向草 绿色迷迭香干叶提取液中加入9克活性炭(活性炭迷迭香干叶提取液的质量 比为1 : 20)，在45r超声脱色5min。过滤2次得到棕红色透明提取液。棕红 色透明提取液用旋转蒸发仪蒸干丙酮，得到黄褐色固体。黄褐色固体中加入 EDTA水溶液(EDTA水溶液浓度为90g/L;黄褐色固体质量EDTA水溶液 的体积二l :20)，使固体分散，加入无水Na2CCb (90g/L)调节PH值为 8.3(NaC03的物质的量约是鼠尾草酸的物质的量的2.5倍，鼠尾草酸的质量含 量按迷迭香干叶的3.32%计算)过滤得到透明棕红色滤液。滴加浓磷酸(H3P04 含量不低于85。X)至透明棕红色滤液中调节PH值为3.0，有沉淀生成，过滤 沉淀，晾干，即为鼠尾草酸。经高效液相色谱分析纯度为93.93%,产率为98.36实施例3称取30克迷迭香干叶，浸泡在180ml乙醇(迷迭香干叶质量乙醇体积 的比为1 : 6)中，3(TC下超声提取45min，过滤得到草绿色迷迭香干叶提取液。 向草绿色迷迭香干叶提取液中加入9克活性炭(活性炭迷迭香干叶提取液的 质量比为l :20),在3(TC超声脱色15min。过滤2次得到棕红色透明提取液。 棕红色透明提取液用旋转蒸发仪蒸干乙醇，得到黄褐色固体。黄褐色固休中加 入EDTA水溶液(EDTA水溶液浓度为90g/L;黄褐色固体质量EDTA水溶 液的体积二l :20)，使固体分散，加入无水Na2C03 (90g/L)调节PH值为 8.5(NaC03的物质的量约是鼠尾草酸的物质的量的2.5倍，鼠尾草酸的质量含 量按迷迭香干叶的3.32%计算)过滤得到透明棕红色滤液。滴加盐酸至透明棕 红色滤液中调节PH值为2.3，有沉淀生成，过滤沉淀，晾干，即为鼠尾草酸。
经高效液相色谱分析纯度为94.13%，产率为96.20%。 实施例4称取30克迷迭香干叶，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干叶质量有机溶剂 体积为1:6)中，55t:超声提取10min，过滤得到草绿色迷迭香干叶提取液。 向草绿色迷迭香干叶提取液中加入6克活性炭(活性炭迷迭香干叶提取液的 质量比为l : 15)，在25r超声脱色20min。过滤1次得到棕红色透明提取液。 棕红色透明提取液用旋转蒸发仪蒸干丙酮，得到黄褐色固体。黄褐色固体中加 入EDTA水溶液(EDTA水溶液浓度为90g/L;黄褐色固体质量EDTA水溶 液的体积二1:20)，使固体分散，滴加NaHC03碱化，调节PH值到8.0，过 滤得到透明棕红色滤液。再滴加浓磷酸(H3P04含量不低于85%)至透明棕红 色滤液中调节PH值为2.4，有沉淀生成，过滤沉淀，晾干，即为鼠尾草酸。 经高效液相色谱分析纯度为89.96%，产率为90.32%。实施例5称取30克迷迭香干叶，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干叶质量有机溶剂 体积为1 : 6)中，2(TC下超声提取60min，过滤得到草绿色迷迭香干叶提取液。 向草绿色迷迭香干叶提取液中加入12克活性炭(活性炭迷迭香干叶提取液 的质量比为1:25)，在35r超声脱色12min。过滤2次得到棕红色透明提取 液。棕红色透明提取液用旋转蒸发仪蒸干丙酮，得到黄褐色固体。黄褐色固体 中加入EDTA水溶液(EDTA水溶液浓度为90g/L;黄褐色固体质量EDTA 水溶液的体积二l :20)，使固体分散，滴加NaHC03碱化，调节PH值为9.5， 过滤得到透明棕红色滤液。再滴加盐酸至透明棕红色滤液中调节PH值为2.9， 有沉淀生成，过滤沉淀，晾干，得到大量不溶于甲醇的白色粉末和极少量鼠尾 草酸。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实 施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、 替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1、一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于包括如下步骤将迷迭香干叶浸泡在有机溶剂中，在20～55℃超声提取10～60min，过滤得到迷迭香干叶提取液；在迷迭香干叶提取液中加入活性炭，所述活性炭∶迷迭香干叶提取液的质量比是1∶15～1∶25，在25～45℃超声脱色5～20min，过滤1～2次得到提取液，将提取液蒸干有机溶剂，得到固体；在上述固体中加入乙二胺四乙酸二钠盐水溶液，使固体分散，再加入碱调节PH值范围为8.0～9.5，过滤得到滤液，然后滴加酸调节PH值为2.3～3.0至滤液中有沉淀生成，过滤得到沉淀，沉淀干燥得到鼠尾草酸；所述有机溶剂是丙酮或者乙醇。
2、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于'所述迷 迭香干叶质量有机溶剂体积的比为1 : 6。
3、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述超 声提取条件是温度30 4(TC下超声提取30 45min。
4、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述活 性炭迷迭香干叶提取液的质量比是1 : 20。
5、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述超声脱色条件是温度30 40。C下超声脱色10 15min。
6、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法， 二胺四乙酸二钠盐水溶液的浓度为90g/L，黄褐色固体质〗 盐水溶液的体积的比为1 : 20。
7、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述的 碱是NaHC03或者无水Na2C03。
8、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述的酸是磷酸或者盐酸。
9、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述加入碱调节PH值范围是8.3 8.5。
10、 根据权利要求l所述的一种鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述 滴加酸调节PH值范围是2.4 2.6。其特征在于所述乙 ::乙二胺四乙酸二钠
全文摘要
本发明公开了一种鼠尾草酸的提取方法，该方法如下将迷迭香干叶浸泡在有机溶剂中，在20～55℃超声提取10～60min，过滤得到迷迭香干叶提取液；在迷迭香干叶提取液中加入活性炭，所述活性炭∶迷迭香干叶提取液的质量比是1∶15～1∶25，在25～45℃超声脱色5～20min，过滤1～2次得到提取液，将提取液蒸干有机溶剂，得到固体；在上述固体中加入乙二胺四乙酸二钠盐水溶液，使固体分散，再加入碱调节pH值范围为8.0～9.5，过滤得到滤液，然后滴加酸调节pH值为2.3～3.0至滤液中有沉淀生成，过滤得到沉淀，沉淀干燥即得到鼠尾草酸；本发明无需结晶，最高可达纯度为99.42％，而且提取程序简单易操作，耗时短。
文档编号C07C62/00GK101113133SQ20071002752
公开日2008年1月30日 申请日期2007年4月12日 优先权日2007年4月12日
发明者哈成勇, 沈丹丹, 沈敏敏 申请人:中国科学院广州化学研究所