专利名称：：一种白介素17受体mIL-17RE基因的小干扰RNA及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及白介素17受体mlL-17RE基因的小干扰RNA及其编码基因与应用，特别是涉及白介素17受体mlL-17RE基因的小干扰RNA及其编码基因与其在制备与RAS/MAPK信号通路相关疾病的治疗性药物中的应用。
背景技术：
：本发明的发明人经研究获得了一个白介素17受体，名称为mlL-17RE(mlL-17REl)，来源于小鼠属小鼠(#"s/wasc"7m)，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质1)序列表中的SEQIDNq:13;2)将序列表中SEQIDN2:13的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且通过激活RAS/MAPK信号通路而具有促有丝分裂作用的蛋白质。序列表中的SEQIDNa:13由637个氨基酸残基组成，其中自氨基端(N端)第1至25位氨基酸残基为信号肽序列；自N端第26至413位氨基酸残基为胞外区序列；自N端第414至439位氨基酸残基为跨膜区序列；自N端第440至637位氨基酸残基为胞内区序列；自N端第352至366位氨基酸残基为Erkl激酶序列；自N端第297至311位氨基酸残基为PDK1结合位点；自N端第4至18位氨基酸残基为ErkD结构域；自N端第578至599位氨基酸残基为典型的亮氨酸拉链序列；自5，端第832至843位碱基以及5'端第919至930位碱基编码保守的N糖基化位点。编码白介素17受体mlL-17RE的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQIDNa:14的DNA序列；2)编码序列表中SEQIDNs:13的DNA序列；3)在高严谨条件下可与序列表中SEQIDN2:14限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。所述高严谨条件为在O.1XSSPE(或0.IXSSC)、0.1%SDS的溶液中，65。C条件下杂交并洗膜。序列表中的SEQIDNa:14由1914个碱基组成，其编码序列为自5'端第1至1914位碱基，编码具有序列表中SEQIDNq:2的氨基酸残基序列的蛋白质。其中，自5'端第l至75位碱基为mlL-17RE信号肽编码序列；自5'端第76至1239位碱基为mlL-17RE胞外区编码序列；自5'端第1240至1317位碱基为mlL-17RE基因跨膜区编码序列；自5'端第1318至1914位碱基为mlL-17RE胞内区的编码序列；自5'端第1054至1098位碱基编码Erkl激酶，自5'端第889至933位碱基编码PDK1结合位点，自5，端第10至54位碱基编码ErkD结构域；自5，端第1732至1797位碱基编码典型的亮氨酸拉链序列；自5'端第832至843位碱基以及5'端第919至930位碱基编码保守的N糖基化位点。实验证明，历7Z-777^在小鼠的肺、肾、胃、小肠及睾丸中具有较高的表达量，并且在个别的肿瘤细胞系(如前列腺癌细胞系DU145、结肠癌细胞T84、和急性单核细胞白血病U937细胞)内也检测到该基因的表达，因此可用RT-PCR方法检测该基因的表达以用于肿瘤的临床诊断；还可以按常规方法制备mIL-17RE的特异性抗体，并用其作为标记物检测肿瘤的发生。此外，mlL-17RE还是一个新型的增殖型受体样分子，通过激活RAS/MAPK信号通路而发挥促有丝分裂效应。RNA干扰技术(RNAinterference,简称RNAi)是通过小分子双链RNA(dsRNA)特异性互补靶向基因转录本，从而诱导转录后基因沉默的一种方式。将双链RNA降解成长度为21-25nt的小干扰RNA片段(siRNA，smallinterferingRNA)，这些小片段会进一步介导与其同源的单链RNA降解。2002年，Brummelkamp等采用RNA聚合酶III的H1-RNA作为启动子，用pSUPER质粒作为表达载体，在细胞内合成siRNA，取得了满意的抑制特异基因表达的效果，而且在细胞中表达的时间较人工合成的双链siRNA长(BrummelkampTR,BernardsR，AgamiR.AsystemforstableexpressionofshortinterferingRNAsinmammaliancells.Science.2002Apr19:296(5567):550-3.)。ShiYang等利用RNA聚合酶III的U6启动子作为合成siRNA的启动子设计载体，并利用其在细胞内合成siRNAs抑制不同基因的表达，也获得了良好的干扰效果(SuiG，SoohooC，AffarelB，GayF，ShiY，ForresterWC，ShiY.ADNAvector-basedRNAitechnologytosuppressgeneexpressioninmammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA.2002Apr16;99(8):5515-20.)。作为一种新型的治疗学方法，RNA干扰技术已被广泛用于多种人类疾病治疗方法的研发中。
发明内容本发明的目的是提供白介素17受体基因历7Z-7"W的小干扰RNA。本发明所提供的白介素17受体基因历iZ-7;7^的小干扰RNA，可为下述双链RNA序列之一1)正义链具有序列表中SEQIDNa:1的核苷酸序列，反义链具有序列表中SEQIDNa:2的双链RNA序列；2)正义链具有序列表中SEQIDN2:3的核苷酸序列，反义链具有序列表中SEQIDNs:4的双链RNA序列；3)正义链具有序列表中SEQIDN2:5的核苷酸序列，反义链具有序列表中SEQIDNa:6的双链RNA序列。将上述三对双链RNA序列依次命名为历iZ-7Z依siRNAl、siRNA2、siRNA3。历iZ-77v^siRNAl的反义链与历iZ-7;T^mRNA的158-175位置序列互补，序列表中SEQIDNa:1由18个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端，序列表中SEQIDN"2由18个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端；历/Z^7T^siRNA2的反义链与历iZ-77T^mRNA的248-265位置序列互补，序列表中SEQIDNa:3由18个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端，序列表中SEQIDNs:4由18个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端；历7Z-siRNA3的反义链与/z7iZ-mRNA的1777-1794位置序列互补，序列表中SEQIDn2:5由18个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端，序列表中SEQIDNa:6由18个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端。上述白介素17受体基因历7Z4"W小干扰RNA的编码基因也属于本发明的保护范围。它可具有下述双链核苷酸序列之一1)正义链(不做模板的DNA链)具有序列表SEQIDN2:7的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDNa:7限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；反义链(做模板的DNA链)具有序列表中SEQIDN2:8的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDNs:8限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；2)正义链具有序列表SEQIDN2:9的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDNa:9限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；反义链具有序列表中SEQIDNa:10的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDN2:10限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；3)正义链具有序列表SEQIDN2:11的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQID11限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；反义链具有序列表中SEQIDNs:12的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDNq:12限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。所述高严谨条件为在O.1XSSPE(或0.IXSSC)、0.1%SDS的溶液中，65。C条件下杂交并洗膜。序列表中SEQIDNa:7由49个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端，序列表中SEQIDNa:8由53个碱基组成，序列的方向从左至右为3'端一5'端；序列表中SEQIDNs:9由49个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端，序列表中SEQIDNa:10由53个碱基组成，序列的方向从左至右为3'端一5'端；序列表中SEQIDNq:11由49个碱基组成，序列的方向从左至右为5'端一3'端，序列表中SEQIDNa:12由53个碱基组成，序列的方向从左至右为3'端一5'端。含有白介素17受体基因/z;7Z-77A^小干扰RNA的编码基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌以及扩增白介素17受体基因//7iZ-7;7E小干扰RNA的编码基因中任一片段的引物也属于本发明的保护范围。本发明的另一个目的是提供一种抑制机体RAS/MAPK信号通路激活的方法。本发明所提供的抑制机体RAS/MAPK信号通路激活的方法，是将上述白介素17受体基因/HiZ-77i^小干扰RNA的编码基因导入宿主中，RAS/MAPK信号通路的激活得到抑制。所述白介素17受体基因/7l^-27/W小干扰RNA的编码基因可通过含有所述白介素17受体基因/z;iZ-77v^小干扰RNA的编码基因的sRNAi干扰载体导入宿主；用于构建所述RNAi干扰载体的出发载体可为任意一种可在宿主中表达外源基因的载体，如pBS/U6(SuiG，SoohooC，AffarelB，GayF，ShiY,ForresterWC，ShiY.ADNAvector-basedRNAi"technologytosuppressgeneexpressioninraammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA.2002Apr16;99(8):5515-20.)、腺病毒载体(FEBSLett.2003.539,111-114.)、反转录病毒载体(Nat.Genet.2003.33，401-406.)、哺乳细胞稳定表达系统(Science2002.296,550—553.)、RNA聚合酶II表达系统(Mol.Cell2002.9，1327-1333.)或可调控的RNA干扰系统(NucleicAcidsRes.2003.31，e127.)等。以pBS/U6为出发载体，构建的sRNAi干扰载体为pBS/U6-siRNAl，pBS/U6-siRNA2和pBS/U6-siRNA3。本发明提供了白介素17受体基因历7Z-7T7^的小干扰RNA及其编码基因。实验证明，将编码本发明历7Z-77A^的小干扰RNA的编码基因导入宿主，使宿主细胞内历7Z-7;T^沉默，进而可抑制RAS/MAPK信号通路的激活。因此可以历7Z-77v^干扰RNA的编码基因作为活性成分制备成药物，用于治疗与RAS/MAPK信号通路相关的疾病，如前列腺肿瘤、白血病、及甲状腺肿瘤等疾病。本发明在医学和生物制药领域具有较大的实际意义和广阔的应用前景。下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。图1为三种历iZ-/;T^siRNA表达质粒对历7Z-7TK^表达抑制作用的实验结果图2为利用荧光酶报告系统检测三种siRNA对mlL-17RE介导的RAS/MAPK信号通路激活的抑制作用的实验结果图3为检测三种历7Z-/7v￡siRNA对mlL-17RE介导的RAS/MAPK信号通路激活的抑制作用剂量效应的实验结果具体实施例方式下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所用引物由上海生工生物技术有限公司合成。实施例1、白介素17受体基因历iZ-777^特异性siRNA干扰载体的构建根据白介素17受体基因/ziZ-j;7^的mRNA序列设计其siRNA序列，得到三条双链RNA序歹!j，分别命名为/ffiZ-siRNAl、siRNA2、siRNA3，序列如下siRNAl正义链:5'-ggggcugguucccucucu--3，(序列表中SEQIDNa:1)反义链:5，-agagagggaaccagcccc--3，(序列表中SEQIDN2:2)2)siRNA2正义链:5'-ggaagcugcuaggcagcc--3，(序列表中SEQIDN2:3)反义链:5'-ggcugccuagcagcuucc--3，(序列表中SEQIDN2:4)3)siRNA3正义链:5'-gccuccagcuggagucac--3，(序列表中SEQIDN2:5)反义链:5，—gugacuccagcugg3ggc--3，(序列表中SEQIDNa:6)再根据上述三对siRNA序列合成构建/ziZ-7;7^特异性siRNA干扰载体所需的互补DNA序列，序列如下1)针对siRNAl合成的两对互补序列la-5'-ggggctggttccctctcta-3'lb:5'-agcttagagagggaaccagcccc-3';lc:5'-agcttagagagggaaccagccccctttttg-3'Id:5'—aattcaaaaagggggctggttccctctcta-3';2)针对siRNA2合成的两对互补序列2a:5'-ggaagctgctaggcagcca-3'2b:5'-agcttggctgcctagcagcttcc-3';2c:5'-agcttggctgcctagcagcttccctttttg-3'2d:5'-aattcaaaaagggaagctgctaggcagcca-3';3)针对siRNA3合成的两对互补序列3a:5'-gcctccagctggagtcaca-3'3b:5'-agcttgtgactccagctggaggc-3';3c:5'-agcttgtgactccagctggaggcctttttg-3'3d:5'-aattcaaaaaggcctccagctggagtcaca-3'。以pBS/U6(参考文献SuiG，SoohooC,AffarelB，GayF，ShiY，ForresterWC，ShiY.ADNAvector-basedRNAitechnologytosuppressgeneexpressioninmammaliancells.ProcNatlAcadSciUSA.2002Apr16;99(8):5515-20.)为构建/z7Z-7WA特异性siRNA干扰质粒的出发载体，将质粒pBS/U6经限制性内切酶j/^l酶切后，用Klenow酶(购自TaKaRa)处理使其平端化，然后再用限制性内切酶历V^III进行酶切，用胶回收试剂盒(购自博大公司)回收3.2kbp的酶切片段，备用。将等量的la和lb，2a和2b，3a和3b分别两两混合于95。C进行退火，然后将三组退火的寡聚核苷酸混合物分别亚克隆到经上述酶切处理后回收的pBS/U6线性质粒中，形成三种重组质粒，分别命名为pBS/U6-lalb，pBS/U6-2a2b和pBS/U6-3a3b。将上述三种质粒用限制性内切酶^o;I和^z'/^ni进行双酶切，用胶回收试剂盒回收三条大片段，备用。再将等量的lc和ld，2c和2d，3c和3d分别两两混合于95"C进行退火，然后将三种退火的寡聚核苷酸混合物分别亚克隆到经上述酶切处理后回收的线性质粒pBS/U6-lalb，pBS/U6-2a2b和pBS/U6-3a3b中，得到三种/ziZ-7;T^siRNA表达质粒，分别命名为pBS/U6-siRNAl，pBS/U6-siRNA2和pBS/U6-siRNA3。实施例2、检测三种历iZ-777^siRNA表达质粒对历iZ-7^7^表达的抑制作用一、/nil-JZ^的克隆按常规方法提取小鼠结肠组织的总RNA并以此为模板，在引物P1(上游引物)5'-cagacaggaaagacatggtctc-3'禾口P2(下游弓l物)5'-agacagctgaaaccacagggac-3'的引导下用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒并参照试剂盒说明书进行RT-PCR扩增。反应结束后，对PCR扩增产物进行1X琼脂糖凝胶电泳检测，回收并纯化1914bp的目的片段。由于经Taq聚合酶扩增后产物的5'末端被加有一个A碱基，因此，将目的片段直接亚克隆到载体pGEM-T(购自Promega公司)中，将重组产物转化大肠杆菌DH5ci感受态细胞，经蓝白斑筛选得到阳性克隆，挑选阳性克隆摇菌提质粒，将含有目的片段的质粒载体命名为pGEM-T-mlL-17RE，用限制性内切酶《p;I和^s/zWI对其进行酶切鉴定，将酶切产物进行1%琼脂糖凝胶电泳检测，经酶切获得了5493bp和1914bp的酶切片段，表明扩增片段正确插入到载体中。对经酶切鉴定正确的阳性克隆质粒用测序的方法做进一步的鉴定，测序的结果表明所克隆到了序列正确的威-n二、检测三种/7Z-/7欣siRNA表达质粒对yz7Z-777^表达的抑制作用将步骤一克隆的全长历iZ-cDNA用限制性内切酶勤/I和5<3^I酶切后，与经相同酶双酶切的载体pcDNA3.l-Myc/his(购自Invitrogen)连接，将连接产物转化大肠杆菌DH5ct感受态细胞，经蓝白斑筛选得到阳性克隆，挑选阳性克隆摇菌提质粒，经鉴定后得到带有Myc标签的历il-7T7i^的重组表达质粒，命名为pcDNA3.1(mIL-17RE)。将约l|ig的质粒pcDNA3.1(mIL-17RE)分别与0pg，0.5jig，1.Opg和2.0|ig的pBS/U6-siRNAl(或pBS/U6-siRNA2，或pBS/U6-siRNA3)混合，用磷酸辛丐试剂(购自Clontech)分别转染293T细胞。将转染细胞的细胞裂解液经10%SDS-PAGE分离后转到硝酸纤维素膜(AmershamBiosciences)上，然后以鼠源抗Myc标签单克隆抗体(购自SantaCruz公司)为一抗进行杂交，以荧光素标记的羊源抗鼠抗体(AmershamBiosciencesUKLimited)为二抗，最后用ECL化学发光的底物(AmershamBiosciences)进行杂交信号放大，结果如图1所示(anti:Myc表示鼠源抗Myc标签的单克隆抗体；"+""-"分别表示转染时添加或不添加相应的质粒；渐进符号代表siRNA的转染剂量从O.5|ig，1.0ng递增到2.0pg)，结果表明siRNAl，siRNA2和siRNA3对mIL-17RE蛋白的表达均有显著抑制作用，并且这种抑制效应具有剂量依赖性的特点，此外，siRNAl的抑制效应略高于siRNA2和siRNA3。实施例3、检测三种/z7Z-777^siRNA对mIL-17RE介导的RAS/MAPK信号通路激活的抑制作用利用荧光酶(Luciferase)报告系统检测三种siRNA对mIL-17RE介导的RAS/MAPK信号通路激活的抑制作用。转录因子Elkl是RAS/MAPK信号通路激活的靶基因。若IL-17RE可以激活RAS/MAPK信号通路，则Elkl-Luciferase的表达水平就会上调。具体方法为将每孔4X105个293T细胞铺于6孔板，使其密度长到80%。用磷酸钙转染试剂(购自Clontech)将1.5pg的pcDNA3.1空载体，pcDNA3.1(mIL-17RE)，pcDNA3.1(mlL-17RE)力口pBS/U6，pcDNA3.1(mIL—17RE)力口pBS/U—siRNAl，pcDNA3.l(mIL-17RE)加pBS/U-siRNA2，pcDNA3.1(mIL-17RE)加pBS/U-siRNA3分别转染到不同孔的293细胞中，外加荧光酶报告系统质粒PFA-Elk-l、PFR-luciferase(参考文献JBiolChem.2001S印28:276(39):36804-8)。与此同时，用海肾(Renilla)萤光素酶质粒(购自Promega)为内参照来进行定量标准化，荧光素酶活性检测结果如图2所示(p3表示:pcDNA3.1空载体组，mlL17RE表示:pcDNA3.1(mIL-17RE)组，mlL17RE+U6表示pcDNA3.1(mIL-17RE)力口pBS/U6组，mlL17RE+RNAiI表示:pcDNA3.1(mIL-17RE)加pBS/U-siRNAl组，mlL17RE+RNAiII表示pcDNA3.1(mIL-17RE)加pBS/U-siRNA2组，mlL17RE+RNAilII表示pcDNA3.1(mlL-17RE)力卩pBS/U-siRNA3组；"+""—"分别表示转染时添加或不添加相应的质粒)，表明三种siRNA对mlL-17RE介导的Elkl-荧光素酶基因表达的激活具有明显的抑制作用。实施例4、检测三种历iZ-7;V^siRNA对mIL-17RE介导的RAS/MAPK信号通路激活抑制的剂量效应以siRNAl为例，检测三种/BiZ-77T^siRNA对mlL-17RE介导的RAS/MAPK信号通路激活的抑制作用的剂量效应。具体方法为将等量的分别转染有pBS/U6空载体或pcDNA3.l(raIL-17RE)与不同剂量的pBS/U-siRNAl混合质粒(分别为0.5|ig，1.0pg，或2.0pg)的293细胞裂解液，经10%SDS-PAGE分离后转到硝酸纤维素膜(AraershamBiosciences)上，然后分别以鼠源抗Myc标签、抗ERK、抗磷酸化ERK的单克隆抗体为一抗(购自SantaCruz公司)进行杂交，以荧光素标记的羊源抗鼠抗体(AmershamBiosciencesUKLimited)为二抗，最后用ECL化学发光的底物(AmershamBiosciences)进行杂交信号方文大，结果如图3所示(anti:p-ERK、anti:ERK、anti:Myc分别表示抗磷酸化ERK、抗ERK、鼠源抗Myc标签的单克隆抗体的实验组，pBS/U6、mlL17RE-myc，mIL-17RE-siRNAl分别表示转染有pBS/U6空载体、pcDNA3.1(ralL-17RE)和pBS/U6-siRNAl的293细胞；"+""-"分别表示转染时添加或不添加的质粒；渐进符号代表siRNA的转染剂量从0.5|ig，1.0|ag到2.0|ag)，表明siRNAl可显著抑制mlL-17RE对胞内RAS/MAPK信号通路激活，证明本发明的三种/z/iZ-777^siRNA可特异性抑制与mIL-17RE相关的生物学作用及功能。序列表<160〉14<210>1〈211〉18〈212>薩〈213〉人工序列<220>〈223〉〈400>1ggggcugguucccucucu18〈210〉2〈211〉18<212〉鹏〈213〉人工序列<220〉〈223〉〈400〉2agagagggaaccagcccc18〈210>3<211>18〈212〉RNA<213>人工序列〈220〉<223><400>3ggaagcugcuaggcagcc18〈210〉4<211>18〈212〉RNA<213〉人工序列<220〉〈223>〈400>4ggcugccuagcagcuucc18<210>5<211〉18〈212>RNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉〈400〉5gCCUCC3gCUgg3gUC8C18<210〉6<211〉18〈212〉RNA<213>人工序列<220><223〉〈400〉6guga_cucca_gcuggsggc18<210>7〈211〉49<212>DNA<213>人工序列〈220〉〈223〉〈400〉7ggggctggttccctctctaagcttagagagggaaccagccccctttttg49<210>8<211〉53〈212〉DNA〈213〉人工序列<220><223>〈400>8ccccgaccaagggagagattcgaatctctcccttggtcgggggaaaaacttaa53〈210〉9<211>49〈212〉腿〈213〉人工序列<220><223><400〉9ggaagctgctaggcagccaagcttggctgcctagcagcttccctttttg49<210>10〈211〉53<212>■<213〉人工序列<220><223>〈400〉10ccttcgacgatccgtcggttcgaaccgacggatcgtcgaagggaaaaacttaa53<210>11〈211〉49〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉<223〉<400>11gcctcc邓ctggagtcacaagcttgtgactccagctggaggcctttttg49<210>12<211〉53<212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉<400〉12cggaggtcgacctcagtgttcgaacactgaggtcgacctccggaaaaacttaa53〈210〉13<211〉637<212〉PRT〈213〉zj人^員^hil(j1//751历i/SCi/J〃50<400〉13MetGlySerProArgLeuAlaAlaLeuLeuLeuSerLeuProLeuLeu151015LeulieGlyLeuAlaVaJSerAlaArgValAlaCysProCysLeuArg202530SerTrpThrSerHisCysLeuLeuAlaTyrArgValAspLysArgPhe354045AlaGlyLeuGinTrpGlyTrpPheProLeuLeuValArgLysSerLys505560SerProProLysPheGluAspTyrTrpArgHisArgThrProAlaSer65707580SerGinArgLysLeuLeuGlySerProSerLeuSerGluGluSerHis859095Ala115Serlie100GinProSerAlaArglieSerlieProSerSerAlalieSerHisArgGlyGinArgThrLysArgAlaGly130ProGluValGin145SerValGinLysCysArgSerProPheLeuProTyr195GluLeuLysAlaCys165ThrGly135ArgAla120Glylie105GluProGlyGluVal150TyrGinTrpAlaGinAsp180GluPheLeuLysLeuValThrlieTrplieGinLeuGinGluAsp210ProGluAlaTyrGly225TyrSerGinHisThrValSer230GinArg215AspPro200ArgVal185CysLeu170SerLysPheTrpMetValMetLeuLysCysGlulieLeu290PheGlu305ProSerLeuAsn245AlaSerLeuCysGlu260LeuProAsnAlaMetLysGinAla250Thr275GluAsnValAspAsnSerSerTrpThrHisPheSerVal325ArgHis310SerThrLeu295ValMetArgPhePro155GluGlyCysCysArgGluSer140AlaCysGlylieHis125PheGlyGluHisGlu205PheGin110LeuAspProAspThr190AlaGinPro220lieArgPheSer235LeuThrLeuArgTrp265AlaGinGluGinAspProThr280HisProGinLeuAspSerHis315AlaCys300GinGlu285PheLeu270GlyGluCysProAspThrGin330AlaThrPheSerAlaAlaLysSerGlyGinGinLeuProGluLeuLeuLysAla160LeuSer175ValAspSerTyrSerTrpThrAsp240CysPro255ThrProTrpTyrPheSerSerLeu320ThrLeu335SerAspSerArgThrTyrAlaThrPheSerAlaAlaTrp340345350ProGlyLeuGlyProAspThrProMetProProValTyrSerlieSer355GinThrGin370LeuArgGin385AlaTrpLysLeuLeulieLeuValLeu435LeuGlySerValGlu360ValThrLeuAspHisLeu420LeuLeuAsnVal405AlaGlyLeuProVal450ValGlyAlaLeuAla465AspVallieValProLeuProTrp500LeuAsp485LeuGlyThrVal515AspProSerGly530ProArgProLeu545AsplieProArgAspLeuAlaSerLeuGlu610ArgLeuPro565LeuCys390LeuLeuArgHisGlu470LeuPro375lieLeuValTrpCysProAspLeuThrArgAla455LeuTrpTrpAlaLeuLeuTrpAlaLeu550LeuLeuAla535AlaArgArgProArg580TrpSerHisLeuSer595GinCysHisLeuLeu615Leu440AlaLeuGluAlaAsn520SerTyrAlaAlaGly600GluLeu425LeuAspArgGlyArg505CysLeuPheLeuLeu585AlaLeuVal410ThrProSerThrThr490GluAlaArgSerPro570AspLysGluArg395SerLeu380Ser365lielieProPheAspHisArgAlaLeuValGlyGluAla475HisSerAla460LeuValGly445GinGlyAlaArgValAlaGlyProThrArg555ArgAlaArgAlaLeu540LeuTyrGinCysAla620Ser525LeuCysArgProLeu605LysValHisGly430ArgArgGlyArgArg510ThrCysAlaLeuAla590LysAspHisPhe400LeuGly415ValValThrArgArgLeuGlyArg480lieGly495GluGinAlaCysAlaAlaLysGly560LeuArg575ThrLeuAsnArgAspTyrGinGlySerThrAsnSerProCysGlyPheSerCysLeu625630635<210>14<211〉1914〈212>醒<213〉小鼠属小鼠/zwsci^iAsO<400>143tgggg3gCCccagactggcagccttgctcctgtctctcccgctactgctcatcggcctc60gctgtgtctgctcgggttgcctgcccctgcctgcggagttgg3CC3gCC8ctgtctcctg120gcctaccgtgtggat犯acgttttgctggccttcagtggggctggttccctctcttggtg180aaagtcctccgsct3ttgga_ggc3C3gga_caccagcatcc240tcccagaggaagctgct鄉cagcccttccctgtctg郷aaagccatcgaatttccatc300ccctcctcagccatctcccacagaggccaacgC3cca^肌gggcccagccttcagctgca360g肌gg犯gagaacatctccctgaagcagggtcac3犯8gtgtggsggacctgaattctcc420tttgatttgctgcccgaggtgcaggctgttcgggtgactattcctgcaggccccaaggcc■agtgtgcgcctttgttatcagtgggcactgg犯tgtg肌g3Cttg3gt3gcccttttgat540ttgtgtctggaggccacactgtagacctgccttatgaattccttctgccc600tgcatgtgcatagaggcctcctacctgcsagaggacactgtgaggcgcaaaaagtgtccc660ttccagagctggcctgaagcttatggctcagacttctggcagtcaatacgcttcactgac720tacagccagcac肪tcag3tggtca_tggctctgacactccgctgcccactg肪ax:tgggig780gcctccctctgctggaggcgLggacccactcacaccctgcgaaacccttcccaacgccaca840gcac郷3gtc卿aggatggtatatcctgg卿stgtggacttgcacccccagctct.gc900tttaagttctcatttgaaaeicagca_gcc￡icgttgaatgtccccaccagagtggctctctc960ccatcctggactgtga_gc3tggatacccaggccca_gcsgctgacgcttcacttttcttcg1020a.ggacatatgccaccttcagtgctgcctgg站tgacccaggtttggggccggataccccc1080atgcctcctgtgtacagcatcagccagacccagggctcagtcccagtgacgctagacctc1140atcatccccttCCtg8ggC3ggagaattgcatcctggtgtggaggtc卿tgtccatttt1200gcctgg肪gca_cgtcttgtgtcctgatgtctcccatagacacctcgggctcttgatcctg1260gcsctgctgactctcaccgctctagtgggtgtagttctggtcctcctcggccggcgccta1320ctgccaggctccggtcgaacaaggccagttttactcctacatgcagcggactcagaggca1380cagcgacgcctggtgggsgctttggccgasctgctgcggacggcgctggg3ggtgg3CgC1440gacgtgatcgtggatctctggg鄉gg3Cgcacgtagcacgcattggaccactgccgtgg1500CtttgggC3gcgcgggagcgcgtggcgcgggaigca_gggca_cagtgctgctcctgtggaac1560tgtgcgggtcccagcaccgcctgcagcggtgacccgcgggctgcgtcccttcgcaccttg1620ttgtgcgctgctccacgtccgctgctgctcgcctacttcagtcgcctctgcgccaaaggc1680gacatcccccggccgctgcgcgctctgccacgctaccgcctgcttcgtgacctgccgcgc1740ctgctg卿gcactggatgctcagcctgccaccctagcctccagctggagtcaccttggg1800gct犯gcggtgcttgaaaaaccgtctggagcagtgtcacctgctggaacttgaggctgccI8603CC8aggctcaaccaatagtccctgtggtttcagctgtct191权利要求1、白介素17受体mIL-17RE基因的小干扰RNA，由正义链和反义链组成，其正义链的碱基序列如SEQIDNO5所示，反义链的碱基序列如SEQIDNO6所示。2、权利要求1所述的白介素17受体mlL-17RE基因的小干扰RNA的编码基因。3、根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述基因的正义链为序列表SEQIDNO:11的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDNO:11限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；反义链为序列表中SEQIDNO:12的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQIDNO:12限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。4、含有权利要求2所述白介素17受体mIL-17RE基因小干扰RNA编码基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。5、一种抑制机体RAS/MAPK信号通路激活的方法，是将权利要求2所述的白介素17受体mlL-17RE基因小干扰RNA的编码基因导入宿主中，RAS/MAPK信号通路的激活得到抑制。6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述白介素17受体ralL-17RE基因小干扰RNA的编码基因通过含有所述白介素17受体mlL-17RE基因小干扰RNA的编码基因的sRNAi干扰载体导入宿主；用于构建所述sRNAi干扰载体的出发载体为pBS/U6、腺病毒载体、反转录病毒载体或哺乳细胞稳定表达系统。7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于用于构建所述sRNAi干扰载体的出发载体为pBS/U6。8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述sRNAi干扰载体为pBS/U6-siRNAl，pBS/U6-siRNA2和pBS/U6-siRNA3。9、权利要求1所述的白介素17受体mlL-17RE基因的小干扰RNA在制备与RAS/MAPK信号通路相关疾病的治疗性药物中的应用。10、权利要求2或3所述的白介素17受体mlL-17RE基因的小干扰RNA的编码基因在制备与RAS/MAPK信号通路相关疾病的治疗性药物中的应用。全文摘要本发明公开了白介素17受体基因mIL-17RE的小干扰RNA及其编码基因与应用。其目的是提供白介素17受体基因mIL-17RE的小干扰RNA及其编码基因与其在制备与RAS/MAPK信号通路相关疾病的治疗性药物中的应用。该小干扰RNA由正义链和反义链组成，其正义链的碱基序列如SEQIDNO5所示，反义链的碱基序列如SEQIDNO6所示。本发明在医学和生物制药领域具有较大的实际意义和广阔的应用前景。文档编号C07H21/02GK101172994SQ20071016369公开日2008年5月7日申请日期2005年11月15日优先权日2005年11月15日发明者傅新元,力刘,常智杰,张淑平,李铁石,李雪妮申请人:清华大学