专利名称：一种何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法
技术领域：
本发明主要涉及到天然植物中物质提取的技术领域，特指一种何首乌提取物二苯乙 烯苷的提取方法。
背景技术：
随着人类社会文明的进步和现代科技的飞速发展，人类的生活条件和生存环境正不 断发生改变，人类健康观念和追求生存质量意识的增强，使得健康内涵不断扩展。在人 类回归自然的国际潮流中，世界各国均已意识到天然植物巨大的市场潜力，国际天然植 物的市场正迅速扩大。世界银行的报告中认为2008年世界天然药物产业将达到2000亿 美元。
何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、壮筋骨、解毒、消痛、润肠通便的作用。何 首乌中所含有的二苯乙烯苷类成分，被鉴定为一种植物抗毒素,是由植物在真菌感染、紫 外线照射、机械损伤等不利条件下产生的。研究发现,二苯乙烯苷具有多种生理活性与药 用价值，已在降血脂、抗衰老、抑制肿瘤等方面显示出功能性,这在当今日趋老龄化的社 会中凸现其重要的研究和开发价值，引起人们的广泛关注，从而对何首乌的研究也更趋 活跃。
发明内容
本发明要解决的问题就在于针对现有技术存在的技术问题，本发明提供一种操作 简便、提取纯度高、稳定性好、提取效率高的何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法。
为解决上述技术问题，本发明提出的解决方案为 一种何首乌提取物二苯乙烯苷的 提取方法，其特征在于步骤为
(1) 、何首乌醇提物的制备对何首乌粗粉末采用60%的乙醇微波提取3次，旋转薄 膜回收乙醇，得到何首乌提取浓縮液；
(2) 、采用高速逆流色谱法去除脂溶性杂质将上述何首乌提取浓縮液加水稀释，装 于逆流色谱仪中，用乙醚连续萃取，至乙醚色浅，将乙醚萃取过的水溶液集中，进一步 挥散乙醚液；
(3) 、利用大孔吸附树脂纯化二苯乙烯苷将所得粗品将加入适量的水混悬后，过大 孔吸附树脂，先用少量水洗脱至洗脱液不浑浊，弃去，再用70%浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓縮，冷冻干燥，得二苯乙烯苷粗品；
(4)、得到二苯乙烯苷精品将上述二苯乙烯苷粗品混悬于水溶液中，再次装于逆流 色谱仪中，用乙酸乙脂连续萃取，监测直至乙酸乙脂提取液中无二苯乙烯苷为止，回收 乙酸乙脂至小体积，通过低温结晶处理得到二苯乙烯苷精品。
在上述步骤中，利用HPLC法及红外/近红外成像系统对产品进行色谱和光谱质量监控。
在上述步骤(4)中，利用HPLC监测乙酸乙脂提取液中的二苯乙烯苷。 与现有技术相比，本发明的优点就在于
1. 本发明何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，避免了高温长时间的处理，采用高 速逆流萃取法进行制备，与传统的液相色谱法比较，HSCCC对样品的预处理要求非常低， 仅需要简单的提取，甚至不用前处理就可得到很好的分离效果。然而，由于二苯乙烯苷 含量低，性质又不很稳定，因此对样品的制备通过大孔吸附树脂前处理，使目标成分得 到适当的富集。两次HSCCC的应用能保证二苯乙烯苷的高纯度；
2. 本发明何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，采用红外/近红外图像系统，对产 品进行快速的质量控制。红外图像蕴含极具价值的化学、物理信息，较HPLC能更快、更 准确对样品定性，可縮短时间。
具体实施例方式
以下将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。 本发明何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，其步骤为-
(1) 、何首乌醇提物的制备何首乌粗粉末，采用60%的乙醇微波提取3次，旋转薄 膜回收乙醇，得到何首乌提取浓縮液。
(2) 、采用高速逆流色谱法(HSCCC)去除脂溶性杂质将上述浓縮液加水稀释，装 于逆流色谱仪中，乙醚连续萃取，至乙醚色浅，将乙醚萃取过的水溶液集中，进一步挥 散乙醚液。
(3) 、利用大孔吸附树脂纯化二苯乙烯苷将所得粗品将加入适量的水混悬后，过大 孔吸附树脂，先用少量水洗脱至洗脱液不浑浊，弃去，再用70%浓度乙醇洗脱，收集洗脱 液，减压浓縮，冷冻干燥，得二苯乙烯苷粗品。
(4) 、得到二苯乙烯苷精品上述粗品混悬于水溶液中，再次装于逆流色谱仪中，乙 酸乙脂连续萃取，HPLC监测至乙酸乙脂提取液中无二苯乙烯苷为止，回收乙酸乙脂至 小体积，低温结晶处理，得到二苯乙烯苷精品。
4在上述步骤中，采用HPLC法及红外/近红外成像系统对产品进行色谱和光谱质量监控。
天然的二苯乙烯苷主要以二苯乙烯苷元侧链结合一个单糖基的形式存在。其化学名 为2， 3， 5, 4'四羟基-二苯乙烯-2-0~e-D-葡萄糖苷。二苯乙烯苷的水溶液在高温条件 (8CTC)下不稳定，其含量与温度呈负变关系。二苯乙烯苷在酸性溶液中很不稳定。在4% 硫酸溶液中，室温放置12 h后含量降为原来的31.67% ，而在8(TC下放置4h则检测不 到二苯乙烯苷。其降解产物为二苯乙烯苷苷元，并进一步降解为酚类化合物。而本发明中 避免了高温长时间的处理，采用高速逆流萃取法进行制备，与传统的液相色谱法比较， HSCCC对样品的预处理要求非常低，仅需要简单的提取，甚至不用前处理就可得到很好的 分离效果。然而，由于二苯乙烯苷含量低，性质又不很稳定，因此我们对样品的制备通 过大孔吸附树脂前处理，使目标成分得到适当的富集。两次HSCCC的应用能保证二苯乙 烯苷的高纯度。其中，高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography, HSCCC) 是近十年迅速发展起来的新型液一液分配色谱技术。它依靠聚四氟乙烯(PTFE)蛇形管 的方向性及特定的高速行星式旋转产生的离心场作用，使无载体支持的固定相稳定的保 留在蛇形管中。并使流动相单向、低速通过固定相。在短时间内实现样品在互不相溶的 两相溶剂系统中高速分配，继而达到连续逆流萃取分离物质的目的。与其他分离手段相 比，HSCCC不用固相载体作固定相，并具有分离纯度高、样品回收率高、适用范围广、 可一步制备纯品的优点，既适用于小量分析，也可用于规模纯化，在生物、医药、天然 产物化学、环境分析、食品等领域有广泛的应用。特别是在天然产物有效成分的分离、 纯化、制备方面显示出强大的优势。
权利要求
1、一种何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，其特征在于步骤为(1)、何首乌醇提物的制备对何首乌粗粉末采用60％的乙醇微波提取3次，旋转薄膜回收乙醇，得到何首乌提取浓缩液；(2)、采用高速逆流色谱法去除脂溶性杂质将上述何首乌提取浓缩液加水稀释，装于逆流色谱仪中，用乙醚连续萃取，至乙醚色浅，将乙醚萃取过的水溶液集中，进一步挥散乙醚液；(3)、利用大孔吸附树脂纯化二苯乙烯苷将所得粗品将加入适量的水混悬后，过大孔吸附树脂，先用少量水洗脱至洗脱液不浑浊，弃去，再用70％浓度乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得二苯乙烯苷粗品；(4)、得到二苯乙烯苷精品将上述二苯乙烯苷粗品混悬于水溶液中，再次装于逆流色谱仪中，用乙酸乙脂连续萃取，监测直至乙酸乙脂提取液中无二苯乙烯苷为止，回收乙酸乙脂至小体积，通过低温结晶处理得到二苯乙烯苷精品。
2、 根据权利要求1所述的何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，其特征在于在上 述步骤中，利用HPLC法及红外/近红外成像系统对产品进行色谱和光谱质量监控。
3、 根据权利要求1或2所述的何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，其特征在于 在上述步骤(4)中，利用HPLC监测乙酸乙脂提取液中的二苯乙烯苷。
全文摘要
一种何首乌提取物二苯乙烯苷的提取方法，其步骤为(1)何首乌醇提物的制备对何首乌粗粉末采用60％的乙醇微波提取3次，旋转薄膜回收乙醇，得到何首乌提取浓缩液；(2)采用高速逆流色谱法去除脂溶性杂质；(3)利用大孔吸附树脂纯化二苯乙烯苷；(4)得到二苯乙烯苷精品将上述二苯乙烯苷粗品混悬于水溶液中，再次装于逆流色谱仪中，用乙酸乙酯连续萃取，监测直至乙酸乙酯提取液中无二苯乙烯苷为止，回收乙酸乙酯至小体积，通过低温结晶处理得到二苯乙烯苷精品。本发明具有操作简便、提取纯度高、稳定性好、提取效率高等优点。
文档编号C07H15/18GK101560229SQ20081003109
公开日2009年10月21日 申请日期2008年4月17日 优先权日2008年4月17日
发明者万保春, 万玉华, 沈小笛, 陈启源, 睿 麻 申请人:霸王(广州)有限公司