专利名称：虎杖中二苯乙烯苷的制备方法
技术领域：
本发明属于中药中有效成分提取与分离技术领域，具体涉及从虎杖中制备ニ苯こ烯苷的方法。
背景技术：
虎杖为寥科多年生草本植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc)的根及根茎，是使用悠久且常用中药之一。其性寒味苦，具有祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰等功效。现代药理学研究发现，虎杖具有多种药理活性，主要包括显著的抗菌、抗真菌作用樊小容.虎杖对致病菌株药敏试验.时珍国医国药，2000，11 (2) :108与较好的抗病毒活性蒋岩，王红霞，鲍作义，等.用鼠艾滋病模型评价虎杖水提液的抗病毒作用.中国病毒学，1998，13⑷306；对心血管系统亦有强心、降脂作用金春华，赵克森，刘杰等.虎杖甙对 正常大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.中国病理生理杂志，1998，14(2) :195;陈晓莉，肖华，薛克昌.虎杖片与辛伐他汀治疗高脂血症的比较.医药导报，2002，21 (I) 25 ；王怀亮.虎杖提取物对冠心病患者血小板释放功能的影响.深圳中西医结合杂志，1997，7(2) :19;还具有清除自由基孟洁，杭瑚.虎杖提取物的抗氧化活性及稳定性研究.化学世界，2000，(8) :417、降血糖沈忠明，殷建伟，袁海波.虎杖鞣质的降血糖作用研究.天然产物研究与开发，2004,16 (3) :220、抗肿瘤，抗炎，止血，止咳，平喘，镇静等活性孔晓华，周玲芝.中药虎杖的研究进展.中医药导报，2009，15 (5) :107。虎杖中含有较多的羟基蒽醌类、ニ苯こ烯类、黄酮类和多糖类成分孔晓华，周玲芝.中药虎杖的研究进展.中医药导报.2009，15(5) :107，其中大黄素、大黄素甲醚、虎杖苷等含量较高。为了进一步阐明虎杖的药效基础，我们对虎杖的化学成分研究发现不同产地的虎杖中均含有2，3，5，4’-四羟基ニ苯こ烯-2-0-β -D-葡萄糖苷(简称ニ苯こ烯苷)，最闻含量可达5. I %。ニ苯こ烯苷也是何首乌中的主要水溶性成分，为白色无定形粉末，易溶于水、甲醇、こ醇。其含量常作为何首乌药材及制剂质量控制的指标。ニ苯こ烯苷有多种药理作用对老年性痴呆等神经退行性疾病有治疗作用张兰，邢颖，赵玲，等.不同时程APP转基因小鼠学习记忆改变及參乌胶囊、ニ苯こ烯苷的干预作用.中国行为医学科学，2006，15(3) :193_196;清除自由基,延缓衰老的作用Lv LS, Gu XH, Tang J, et al. Antioxidantactivity of stilbeneglycosides irom poygonum mumflorum. Food しhemistry，2007,104(4) :1678-1681；降血脂及抗动脉粥样硬化作用Yang PY, Almofti MR, Lu L，et al. Reduction ofatheroscierosis in cholesterol-fed rabbits and decrease oiexpressions of intracellular adhesion molecule—I and vascular endothelialgrowth factor in foam cells by a water-solution fraction of polygonummultiflorum. J Pharmacol Sci，2005，99 (3) :294_300;抗肿瘤作用谢歲.何首乌及ニ苯乙烯苷的研究进展.天津药学，2010，22 (3) :70-73等；具有重要的药用价值和开发前景。虎杖主要分布于江苏、浙江、江西、福建、山东、河南等中南部地区，资源丰富。以虎杖作为ニ苯こ烯苷的新来源，从中提取ニ苯こ烯苷，可产生更大的经济效益。
发明内容
本发明提供ー种エ艺稳定、纯度和收率高的虎杖中制备ニ苯こ烯苷的方法，该方法包括以下步骤(I)提取将虎杖粉碎成粗粉，用50 90%こ醇浸泡12 24h，浸溃或渗漉提取，减压回收こ醇，得到提取浓缩液；(2)萃取法除去杂质将提取浓缩液用低极性有机溶剂萃取，集中有机溶剂萃取过的水溶液；(3)大孔吸附树脂纯化将水溶液稀释后，过大孔吸附树脂，先用少量水洗脱至洗脱液不浑浊，弃去，用30%浓度こ醇洗脱杂质，弃去，再用40 60%浓度こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至小体积，冷冻干燥，得ニ苯こ烯苷粗品。(4)重結晶将ニ苯こ烯苷粗品混悬于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，慢慢降低温度，析出結晶，抽滤后得ニ苯こ烯苷晶体。上述⑴步骤中采用50 90%こ醇浸泡12 24h，最好采用60 80%こ醇；提取方法包括浸溃或渗漉提取，最好为渗漉提取。上述(2)步骤中所述低极性有机溶剂可以是苯、甲苯、ニ甲苯、こ醚、石油醚等低极性有机溶剂中的ー种。上述(3)步骤中用40 60%浓度こ醇洗脱，最好采用40%こ醇；用量为树脂重量的5 10倍。
具体实施例方式下面列举典型实施例，对本发明进ー步说明，但不以任何形式构成对本发明的限制。实施例I取虎杖药材1kg，粉碎成粗粉，用2L 60%こ醇润湿；装入渗漉器中，浸溃放置24h，便溶剂充分渗透扩散；用IOL 60%こ醇渗滤，收集渗漉液；减压回收こ醇，浓缩至1200ml，毎次2倍体积こ醚萃取，共萃取3次，除脂溶性杂质；取水层，加3倍药材重量的去离子水稀释，离心(3000转/分)，上清液以ILAkg^h)流速过D-101大孔吸附树脂(柱径-柱高=
I 10，树脂重量为药材重量的2倍)，用3倍于树脂体积的去离子水以ILAkg^h)流速除杂，然后用5倍于树脂体积的30%こ醇以O. 8L/(kg · h)流速除杂，最后用6倍于树脂体积的40%こ醇以O. 8L/(kg · h)流速解吸，收集解吸液，减压回收こ醇，减压浓缩至小体积，冷冻干燥；将得到的粗品11. 9g混悬于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室温，再置于-4°C，析出结晶，抽滤后得ニ苯こ烯苷晶体5. lg。实施例2取虎杖药材2kg，粉碎成粗粉，用5L 70%こ醇润湿；装入渗漉器中，浸溃放置24h，使溶剂充分渗透扩散；用15L 70%こ醇渗滤，收集渗漉液；减压回收こ醇，浓缩至2200ml，毎次3倍体积石油醚萃取，共萃取3次；取水层，加3倍药材重量的去离子水稀释，离心(3000转/分)，上清液以l!V(kg -h)流速过D-101大孔吸附树脂(柱径-柱高=I 10，、树脂重量为药材重量的2倍)，用2倍于树脂体积的去离子水以IL/(kg -h)流速除杂，然后用8倍于树脂体积的30%こ醇以O. 8L/(kg -h)流速除杂，最后用10倍于树脂体积的40%こ醇以O. 8L/(kg -h)流速解吸，收集解吸液，减压回收こ醇，减压浓缩至小体积，冷冻干燥；将得到的粗品20. 2g混悬于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室温，再置于-4°C，析出结晶，抽滤后得ニ苯こ烯苷晶体9. 9g。实施例3取虎杖药材10kg，粉碎成粗粉，用15L 60%こ醇润湿；装入渗漉器中，浸溃放置24h，使溶剂充分渗透扩散；用50L 60%こ醇渗滤，收集渗漉液；减压回收こ醇，浓缩至2L，毎次2倍体积こ醚萃取，共萃取2次；取水层，加2倍药材重量的去离子水稀释，离心(3000转/分)，上清液以ILAkg^h)流速过D-101大孔吸附树脂(柱径-柱高=I 10，树脂重量为药材重量的I. 5倍)，用2倍于树脂体积的去离子水以ILAkg · h)流速除杂，然后用5倍于树脂体积的30%こ醇以O. 8L/(kg · h)流速除杂，最后用6倍于树脂体积的40% こ醇以O. 8L/(kg -h)流速解吸，收集解吸液，减压回收こ醇，减压浓缩至小体积，冷冻干燥；将得到的粗品83. 6g混悬于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室温，再置于-4°C，析出结晶，抽滤后得ニ苯こ烯苷晶体32. 9g。
权利要求
1.ー种虎杖中制备ニ苯こ烯苷的方法，其方法特征在干 (1)提取将虎杖粉碎成粗粉，用50-90%こ醇浸泡12-24h，浸溃或渗漉提取，减压回收こ醇，得到提取浓缩液； (2)萃取法除去杂质将提取浓缩液用低极性有机溶剂萃取，集中有机溶剂萃取过的水溶液； (3)大孔吸附树脂纯化将水溶液稀释后，过大孔吸附树脂，先用少量水洗脱至洗脱液不浑浊,弃去,用30%浓度こ醇洗脱杂质，弃去，再用40-60%浓度こ醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得ニ苯こ烯苷粗品； (4)重結晶将ニ苯こ烯苷粗品混悬于I: 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，慢慢降低温度，析出結晶，抽滤后得ニ苯こ烯苷晶体。
2.根据权利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制备方法，其提取特征在于所述(I)步骤中采用50-90%こ醇浸泡12-24h，最好采用60-80%こ醇；提取方法包括浸溃或渗漉提取，最好为渗漉提取。·
3.根据权利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制备方法，其萃取特征在于所述(2)步骤中低极性有机溶剂可以是苯、甲苯、ニ甲苯、こ醚、石油醚等低极性有机溶剂中的ー种。
4.根据权利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制备方法，其纯化特征在于所述(3)步骤中用40-60%浓度こ醇洗脱，最好采用40%こ醇；用量为树脂重量的5-10倍。
全文摘要
本发明涉及一种虎杖中二苯乙烯苷的制备方法，属于中药中有效成分提取与分离技术领域。该制备方法的步骤为是将虎杖粉碎成粗粉，用50～90％乙醇浸泡，浸渍或渗漉提取，减压浓缩；用低极性有机溶剂萃取浓缩液，除去杂质；将萃取过的水溶液稀释后，经大孔吸附树脂纯化得二苯乙烯苷粗品；将粗品用1∶5的丙酮-水溶液重结晶，低温处理，得到二苯乙烯苷晶体；本发明提供的虎杖中二苯乙烯苷的制备方法具有工艺稳定、经济实用、提取效率高等特点。
文档编号C07H15/203GK102718811SQ20121016048
公开日2012年10月10日 申请日期2012年5月22日 优先权日2012年5月22日
发明者孙纪元, 曹蔚, 杨倩, 毕琳琳, 王四旺, 谢艳华 申请人:中国人民解放军第四军医大学