专利名称：一种具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽及其制备方法
技术领域：
本发明属于食品工程技术功能性食品领域，特别是具有降血压功能的深海 鱼皮胶原蛋白寡肽及其制备方法。
背景技术：
近年来随着生物科学技术的发展，人们发现蛋白质除提供人体多种氨基酸 和能量外，从蛋白质原有序列中释放出的一些小肽(寡肽)还有多种生理功能， 这些小肽(寡肽)不被肠道多种酶系降解可直接被人体吸收，目前从天然蛋白
质分离的功能肽有多种多样，按照功能分有促进钙吸收肽；降血压肽；免疫 调节肽等，特别是降血压肽的研究更是活性肽研究的热点，研究表明降血压肽 (寡肽)是一种血管紧张素转化酶(angiotension I cemverting enzyme ACE)
的抑制剤。
降血压肽(寡肽)主要有降低高血压患者的血压作用，其降压作用是通过 抑制人体内血管紧张素转化酶(ACE)的活性而实现的，正常人体内的血压受多 种因素调节，其中最重要的调节系统是肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激 肽系统，其前者是升高调节系统，后者是降压调节系统，(ACE)肾素-血管紧张 素系统中起重要作用的酶，它通过作用于该系统中血管紧张素I使其脱去C末 端两氨基酸(His-Len)而转变成为血管紧张素II，而血管紧张素II是肾素-血 管紧张素调节系统中活性最强的收縮剤，它能作用于小动脉使血管平滑肌收縮 迅速引起升压效应。降血压肽(寡肽)降压作用是通过对ACE的竞争性抑制作 用实现的，但在正常情况下对ACE的作用很小。
目前制备降压肽原料有利用带鱼脊骨用发酵方法制得；利用大米分离蛋 白经蛋白酶酶解制得；利用蛋黄蛋白用碱性蛋白酶酶解制得；还有利用动物皮 胶原蛋白经蛋白酶酶解制得等，制得的产品统称为降压肽，其产品中都含有多 肽，寡肽和游离氨基酸，实质上是多肽、寡肽以及游离氨基酸混合物，分子量 大小不等。这些降压肽产品中真正起降压作用的主要成分是寡肽，分子量范围 在200~1000D之间，可在这些产品中寡肽的含量较低。寡肽的制备方法有酶解法、提取法、自溶法，最常见的是酶解法，选用 的原料有植物蛋白、动物蛋白，其中动物蛋白以陆生动物为主，如果制取胶原 蛋白寡肽一般也选用陆生动物畜类的皮为多，因这些原料价廉易得，但是这些 原料存在安全隐患，如疯牛病、口蹄疫，并且这些畜类动物的饲养易受环境因 素的影响，因此人们对其安全性引起了担忧。我们之所以选择了深海鱼皮为原 料制备胶原蛋白寡肽，这是因为这些鱼类生长于深海之中，不会受到环境因素 的影响，可以彻底消除安全性的担忧。
目前市场上所见的胶原蛋白类产品实质上是蛋白质、多肽、寡肽、氨基酸 的混合物，以蛋白质、多肽为主，分子量大小不等，主要应用于食品行业作为 食品、保健食品的原料，少部分用于化妆品行业，作为生产美容护肤类化妆品 的原料，在这些原料中起活性作用的寡肽的含量并不高，且无寡肽含量的指标， 唯有蛋白质含量，平均分子量这些指标，不能体现产品的质量档次。蛋白质的 酶解是个复杂的生物化学反应过程，受多种条件因素的影响，我们根据其各种 条件因素的作用机制，选择合适的酶以及酶解条件，可获得寡肽含量较高的酶 解液，再通过纳滤膜分离手段可进一步的提高寡肽的含量。
发明内容
本发明的目的是采用深海鱼皮为原料，选择合适的酶解条件，获得寡肽含 量较高的酶解液，然后通过纳滤膜截留分离手段进一步提高酶解液中的寡肽含 量，再经真空浓縮、喷雾干燥制得具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽产
品，产品中寡肽含量在50 80%，分子量范围在200D 1300D，这种深海鱼皮胶 原蛋白寡肽产品无污染、安全性好，具有降血压的作用。
本产品的制造材料是深海鱼皮，用复合蛋白酶进行酶解，酶解的鱼皮浓度 为10 20%，利用酶(复合酶)解技术将鱼皮酶解成分子量大小不等的多肽、寡 肽、以及含有游离氨基酸的混合液，然后采用膜分离技术，分别用不同规格的 纳滤膜截留除去游离氨基酸和分子量大于1300D的多肽，得到寡肽含量50 80% 的深海鱼皮胶原蛋白寡肽产品。
本发明深海鱼皮胶原蛋白寡肽的制备方法，是将冰冻的深海鱼皮进行解冻， 使鱼皮分散成散片状或散条状，投入酶解锅内加入5-IO倍量的水，加入O. 1-0. 5% 复合蛋白酶，调整PH，搅拌加温，温度控制在45'C 65t:，时间2 8小时，酶 解结束后升温至85。C维持15分钟，进行灭酶，灭酶后加入1~2%的活性碳缓慢 搅拌维持30 60分钟，进行脱腥、脱色，然后加入4% 8%硅藻土边搅拌边加入，进行粗滤、精滤，得到的精滤液通过纳滤膜截留，得到寡肽含量50 80%的截留 液，将截留液进行真空浓縮，在固形物含量达15 20%时，进行喷雾干燥，得到 粉末状的具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽，制得的成品进行包装。
本发明得到的酶解液采用活性碳脱色、硅藻土助滤，其用量为1 3(单位)。
本发明得到的酶解液采用纳滤膜截留分离，去除分子量大于1300D的多肽 和分子量小于200D游离氨基酸，得到的截留液寡肽含量50~80%。
本发明分离后的寡肽液进行真空浓縮，真空度0. 08~0. 1兆帕，温度5(TC 65°C，固形物含量达15~20%时进行喷雾干燥或冷冻干燥。
本发明制备的深海鱼皮胶原蛋白寡肽产品，寡肽含量达50~80%，具有降 低血压功能。
本发明所采用的深海鱼皮原料，因深海鱼皮胶原蛋白的可溶性好，相对于 哺乳动物胶原蛋白，鱼皮胶原蛋白其胶原纤维束更粗，对酶、热等反应更容易， 易被动物蛋白酶酶解成小分子肽(寡肽)，可以提高产品中的寡肽含量。
深海鱼皮的酶解采用复合动物蛋白酶，酶解ra5.0-9.0;酶解温度45-6(TC， 时间2-8小时，经酶解获得的酶解液升温至85'C维持半小时进行灭酶，同时加 入活性碳、硅藻土，搅拌脱腥、脱色，经过滤取得澄清滤液。取得的澄清滤液 采用纳滤膜分段截留分离，先用截留分子量为1300D的纳滤膜截留去除分子量 大于1300D的多肽和蛋白质，留取滤过液，然后选用截留分子量为200D以上的 纳滤膜截留，除去通过纳滤膜的游离氨基酸，通过两种截留分子量不同纳滤膜 截留，使截留液中的寡肽比例得到提高，含量达到50 80%。
通过纳滤膜截留分离后的滤液采用真空浓縮，使固形物含量达到15-20%时 进行喷雾干燥或冷冻干燥，进口温度190-22CTC;出口温度90-105°C;制得深 海鱼皮胶原蛋白寡肽。
深海鱼皮胶原蛋白寡肽制备方法包括如下步骤
1) 将出冷库的冰冻深海鱼皮进行融冰解冻，使分散成条状或片状，投入 酶解锅内，加入4 8倍量的水，缓慢搅拌融化。
2) 加入鱼皮量0. 1 0.3%复合蛋白酶，调节PH6. 0 8. 0，温度在45 65 °C，缓慢搅拌酶解，时间4 8小时。
3) 酶解时间到达后升温至80 9(TC，维持10 30分钟，进行灭酶
4) 经灭酶后的酶解液加入1 3%的活性碳，搅拌20 40分钟，再加入l
3%硅藻土缓慢搅拌15分钟，放入离心机进行粗滤，得到的粗滤液再 进行板框过滤机精滤，得到澄清透明精滤液；5) 得到的精滤液用截留分子量〉1300D的纳滤膜进行截留，留取通过的滤液。
6) 将通过的滤液再用截留分子量为> 200的纳滤膜进行截留，留取被截 留液。
7) 得到的截留液进行真空浓縮，真空度0. 08~0. lMPa，温度50 70°C， 浓縮至固形物含量达15 20%时停止；
8) 将得到的浓縮液进行喷雾干燥，(进口温度190 215°C，出口温度95 105°C)，得到粉末状的深海鱼皮胶原蛋白寡肽。
本发明制得的深海鱼皮胶原蛋白寡肽产品无污染、安全性好，其分子量范 围在200 1300D;寡肽含量其产品具有降低高血压患者血压的作用。
图1为具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽制备工艺流程图。
具体实施例方式
实施例1
1) 将出冷库的冰冻深海鱼皮进行融冰解冻，使分散成条状或片状，投入 酶解锅内，加入6倍量的水，缓慢搅拌，升温至56'C。
2) 调节PH至6. 0，加入鱼皮量0. 15%复合蛋白酶，控制温度在53 56。C， 维持时间6小时。
3) 酶解时间到达后升温至85X:，维持15分钟，进行灭酶；
4) 经灭酶后的酶解液加入2%的活性碳，搅拌30分钟，再加入2%硅藻土 缓慢搅拌20分钟，酶解液放入离心机进行粗滤，得到的粗滤液再进 行板框过滤机精滤，得到澄清透明精滤液；
5) 得到的精滤液用截留分子量1300的纳滤膜进行截留，留取通过的滤 液。
6) 将通过的滤液再用截留分子量为200的纳滤膜进行截留，留取截留液。
7) 得到的截留液进行真空浓縮，真空度0.08MPa，温度65°C,浓縮至固 形物含量达15 20%时终止；
8) 将得到的浓縮液进行喷雾干燥，进口温度20(TC，出口温度95。C，得 到粉末状的深海鱼皮胶原蛋白寡肽。实施例2
1) 将出冷库的冰冻深海鱼皮进行融冰解冻，用绞肉机绞打浆，投入酶解
锅内，加入6倍量的水，搅拌混合，加热升温至58-C。
2) 调节PH至6.0 7.0，加入鱼皮量0. 1%复合蛋白酶，控制温度在55 58°C， 3小时后再加0. 5%复合蛋白酶，继续维持2小时。
3) 酶解结束后，加入2%的活性碳，边搅拌边升温至85r，维持20分钟， 进行灭酶，再加入2%硅藻土缓慢搅拌20分钟，酶解液放入离心机进行 粗滤，得到的粗滤液再进行板框过滤机精滤，得到澄清透明精滤液。
4) 得到的精滤液用截留分子量1300的纳滤膜进行截留，留取通过的滤 液。
5) 将通过的滤液再用截留分子量为200的纳滤膜进行截留，留取截留滤 液。
6) 得到的截留液进行真空浓縮，真空度0. lMPa，温度60°C ，浓縮至固形 物含量达15 20%时终止；
7) 将得到的浓縮液进行喷雾干燥，进口温度205。C，出口温度95。C，得 到粉末状的深海鱼皮胶原蛋白寡肽。
实施例3
1) 将出冷库的冰冻深海鱼皮进行融冰解冻，使分散成条状或片状，投入 酶解锅内，加入8倍量的水，缓慢搅拌，升温至56X:。
2) 调节PH至6.8，加入鱼皮量0.2y。复合蛋白酶，控制温度在53 56r， 维持时间5小时。
3) 酶解终止后升温至85'C，维持20分钟，进行灭酶；
4) 经灭酶后的酶解液降温至28 35'C加入0. 1%的脱腥剂，搅拌30分钟， 再加入2%硅藻土缓慢搅拌20分钟，酶解液放入离心机进行粗滤，得 到的粗滤液再进行板框过滤机精滤，得到澄清透明精滤液；
5) 得到的精滤液用截留分子量1300的纳滤膜进行截留，留取通过的滤 液。
6) 将通过的滤液再用截留分子量为200的纳滤膜进行截留，留取截留滤 液。
7) 得到的截留液进行真空浓縮，真空度0.08MPa，温度65°C，浓縮至固 形物含量达15 20%时终止；8)将得到的浓縮液进行喷雾干燥，进口温度200'C，出口温度100'C，得 到粉末状的深海鱼皮胶原蛋白寡肽。
深海鱼皮胶原蛋白寡肽胶囊配方一 深海鱼皮胶原蛋白寡肽粉75-85% 茶多酚5-10% 声荟5-10% 银杏提取物4-6% 混合均匀，干法制粒，灌装胶囊。
深海鱼皮胶原蛋白寡肽颗粒配方二 深海鱼皮胶原蛋白寡肽粉70-80% 脱脂奶粉 15-200/0 破壁花粉10-15% 蜂蜜5-10% 混合均匀、制粒、干燥、铝箔袋装制得。
权利要求
1.一种具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽，其特征在于制备原料是深海鱼皮，用复合蛋白酶进行酶解，利用酶解技术将鱼皮降解成分子量大小不等的多肽、寡肽、以及含有游离氨基酸的混合液，然后采用膜分离技术，分别用不同规格的纳滤膜截留除去游离氨基酸和分子量大于1300D的多肽，得到寡肽含量50～80％的深海鱼皮胶原蛋白寡肽产品。
2. 根据权利要求书l所述的深海鱼皮胶原蛋白寡肽，其特征在于酶解的鱼 皮浓度为10 20°/0。
3. 根据权利要求l所述的鱼皮胶原蛋白寡肽的制备方法，其特征在于将冰 冻的深海鱼皮进行解冻，使鱼皮分散成散片状或散条状投入酶解锅内，加入5-10 倍量的水，0. 1-0.5%复合蛋白酶，调整ra，搅拌加温，温度控制在45。C 65。C， 时间2 8小时，酶解结束后升温至85"C维持15分钟，进行灭酶，灭酶后加入 1~2%的活性碳缓慢搅拌维持30~60分钟，进行脱腥、脱色，然后加入4% 8% 硅藻土边搅拌边加入，然后进行粗滤、精滤，得到的精滤液通过纳滤膜截留， 得到寡肽含量70%以上的截留液，将截留液进行真空浓縮，在固形物含量达15 20%时，进行喷雾干燥，得到粉末状的深海鱼皮胶原蛋白寡肽。
4.根据权利要求3所述的深海鱼皮胶原蛋白寡肽制备方法，其特征在于 得到的酶解液采用活性碳脱色、硅藻土助滤，其用量为1 3(单位)。
5. 根据权利要求4所述的深海鱼皮胶原蛋白寡肽制备方法，其特征在于酶 解液的PH为5.0 9.0。
6. 根据权利要求4所述的深海鱼皮胶原蛋白寡肽制备方法，其特征在于得 到的酶解液采用纳滤膜截留分离，去除分子量大于1300D的多肽和分子量小于 200D的游离氨基酸，得到的截留液寡肽含量50 80%。
7. 根据权利要求3所述的鱼皮胶原蛋白寡肽制备方法，其特征在于分离后 的寡肽液进行真空浓縮，真空度0. 08~0. 1兆帕，温度50°C 65°C，固形物含量 达15~20%时进行喷雾干燥或冷冻干燥。
8. 根据权利要求l所述的深海鱼皮胶原蛋白寡肽，其特征在于制备的深海 鱼皮胶原蛋白寡肽具有降低高血压患者血压的功能。
全文摘要
本发明公开了一种具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽及其制备方法，属于食品工程技术功能性食品领域，特别是具有降血压功能的深海鱼皮胶原蛋白寡肽。它以深海鱼皮为原料，利用复合酶酶解技术将鱼皮降解成含有分子量大小不等的多肽、寡肽、以及游离氨基酸混合液，然后采用膜分离技术，分别用不同规格的纳滤膜截留除去游离氨基酸和多肽，得到寡肽含量50～80％的深海鱼皮胶原蛋白寡肽；这种深海鱼皮胶原蛋白寡肽无污染、安全性好，其分子量范围在200～1300D，其产品具有降低高血压患者血压的功能。
文档编号C07K4/00GK101602790SQ200910099508
公开日2009年12月16日 申请日期2009年6月11日 优先权日2009年6月11日
发明者周彦钢, 贾建萍, 郑高利, 鲁健章 申请人:浙江省医学科学院