专利名称：一种梯级分子量鳕鱼鱼皮胶原肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用复合酶水解鳕鱼皮胶原蛋白并利用超滤技术获取不同分子量段的生物 活性寡聚肽的方法。所得产品寡聚肽含量高，固态为白色粉末，无异味，易溶于水，可用于 医疗保健、食品、化妆品等领域。
背景技术：
近来，国内外有研究发现鱼皮中胶原蛋白含量较高，胶原蛋白中含有丰富的甘氨酸、脯 氨酸和羟脯氨酸，其水解产物中含有大量生理活性肽。这些特性使胶原蛋白及其水解产物在 医疗、保健及美容方面具有良好的应用前景。鳕鱼的产量丰富，废弃物中有价值的成分利用不充分。鳕鱼皮胶原蛋白具有低抗原性、 低过敏性、分子结构较脆弱，酶解比较容易等特点。目前，水解蛋白质制备活性肽的常用方法有化学法或酶法。化学法常采用加热和酸碱处 理的方法，通过酸碱水解制备活性肽虽然工艺简单、成本低廉，但是在生产过程中酸水解会 生成有毒物质，碱水解产物有异味，并且水解程度难于控制，所以，在制备具有明确活性指 向的活性肽时，酸碱法无法到达到目的。而酶法水解条件温和，水解过程容易控制，最重要 的一点是能对蛋白质进行定向水解而产生具有特定活性的肽类。蛋白酶水解通常有单酶水解 和复合酶水解两种类型。单酶水解只能切断有限的位点，不仅水解程度有限，而且水解产生 的肽片段的端基氨基酸也是单一的，复合酶解则可以利用酶水解位点的互补作用来提高底物 的水解程度和改变端基氨基酸的类型，更有可能水解出具有某种活性的肽片段。因此，复合 酶解技术是蛋白质水解技术的发展趋势。目前，尚未见用复合酶水解鳕鱼皮胶原蛋白制备梯级生物活性肽的报道。 发明内容本发明目的是提供一种用复合酶水解鳕鱼皮胶原蛋白制备梯级分子量生物活性寡聚肽 的方法，特别针对获取较多的低分子量寡聚肽。一种复合酶水解鳕鱼皮胶原蛋白制备梯级分子量寡聚肽的方法，其特征是将鳕鱼皮胶原蛋白溶于pH8 9磷酸盐缓冲液中，配制成4 5% (w/v)的浓度，在45 50'C条件下，加入1% ([E]/[S])的胰蛋白酶和碱性蛋白酶，恒温搅拌，水解6 8h，在85 10(TC下灭酶5 10min， 冷却至常温，离心，利用超率技术分别收集不同分子量段的滤液，冷冻干燥获得活性肽制品。 有益效果本发明利用鳕鱼皮胶原蛋白为原料生产梯级分子量的生物活性肽，蛋白质回收率95%以上，所得产品寡聚肽(<3000)含量可达到76%以上，固态为白色粉末，无异味， 易溶于水。
具体实施方式
将鳕鱼皮胶原蛋白溶于0.02mol/L，pH为9.0的磷酸盐缓冲液中，配制成浓度为5% (w/v) 的溶液，在45'C水浴条件下，加入1% ([E]/[S])胰蛋白酶和碱性蛋白酶，恒温搅拌，酶解6h 后，在10(TC下灭酶5min，冷却至常温，离心(4000r/min)，利用超滤技术分别收集分子量 段为6000 10000， 3000 6000， 250 3000的滤液，冷冻干燥获得活性肽制品。本产品为固态为白色粉末，无异味，易溶于水，在干燥环境下可长期保存。
权利要求
1. 一种用复合酶水解鳕鱼皮胶原蛋白制备梯级分子量生物活性寡聚肽的方法，其特征是将鳕鱼皮胶原蛋白溶于0.02mol/L，pH为9.0的磷酸盐缓冲液中，配制成浓度为5％(w/v)的溶液，在45℃水浴条件下，加入1％([E]/[S])胰蛋白酶和碱性蛋白酶，恒温搅拌，酶解6h后，在100℃下灭酶5min，冷却至常温，离心(4000r/min)，利用超滤技术分别收集分子量段为6000～10000，3000～6000，250～3000的滤液，冷冻干燥获得活性肽制品。
2. 根据权利要求l所述的制备方法，其特征在于水解原料为鳕鱼皮胶原蛋白。
3. 根据权利要求l所述的制备方法，其特征在于水解过程中同时加入胰蛋白酶和碱性蛋白酶 进行水解。
4. 根据权利要求l所述的制备方法，其特征在于复合酶的水解条件为pH值9.0，加酶量1%([幻/[S])，底物浓度为5%，酶解温度45。C，酶解时间6h。
5. 根据权利要求l所述的制备方法，其特征在于制备过程中以水解度为评价指标，实施定向 酶解和纯化。
6. 根据权利要求l所述的制备方法，其特征在于利用超滤技术分别收集分子量为6000 10000; 300Q 6000; 250 3000的滤液。
全文摘要
一种用复合酶水解鳕鱼鱼皮胶原蛋白制备梯级分子量生物活性寡聚肽的方法，其特征是将鳕鱼皮胶原蛋白溶于pH8～9磷酸盐缓冲液中，配制成4～5％(w/v)的浓度，在45～50℃条件下，加入1％([E]/[S])的胰蛋白酶和碱性蛋白酶，恒温搅拌，水解6～8h，在85～100℃下灭酶5～10min，冷却至常温，离心，利用超率技术分别收集不同分子量段的滤液，冷冻干燥获得活性肽制品。本发明利用鳕鱼皮胶原蛋白生产梯级分子量活性肽，蛋白质回收率为95％以上，所得产品寡聚肽(＜3000)含量可以达到76％以上，固态为白色粉末，无异味，易溶于水。
文档编号C12P21/02GK101250574SQ200710014030
公开日2008年8月27日 申请日期2007年3月22日 优先权日2007年3月22日
发明者庄永亮, 李八方, 琳 林, 雪 赵 申请人:中国海洋大学