一种乳酸链球菌素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种乳酸链球菌素的制备方法，属于乳酸链球菌素制备技术领域。
【背景技术】
[0002]乳酸链球菌素是由一些乳酸乳球菌在代谢过程中合成和分泌的具有很强抑菌作用的多肽，分子量约为3510Da。由于它对许多革兰氏阳性菌，尤其对引起食品腐败的芽孢杆菌、梭菌、葡萄球菌、李斯特氏菌等有强烈抑制作用，加之其可被消化道中酶降解，是一种对人体无毒的天然食品防腐剂，已被广泛应用于乳制品、罐装食品、肉制品和饮料的防腐保鲜剂。
[0003]自二十世纪六十年代以来，从发酵液中提取乳酸链球菌素的方法和手段陆续建立，其回收过程主要包括如下步骤:发酵液酸化、加热、浓缩、盐析(或喷雾干燥)、真空干燥。浓缩方法主要有:低温真空浓缩法、超滤浓缩法、泡沫浓缩、吸附浓缩。吸附法在发酵液中加入固体颗粒吸附剂吸附乳酸链球菌素，解吸后将解吸液盐析或喷雾干燥，制成粉末状乳酸链球菌素产品;膜过滤法首先采用板框过滤对发酵液进行预处理，去除菌体等固形物，滤液用超滤膜浓缩后，浓缩液盐析或喷雾干燥，制成乳酸链球菌素粉末。市场上的产品为乳酸链球菌素与氯化钠的复配品，效价2 90011]/11^，纯度为2.5%左右。
[0004]发明专利“从乳酸乳球菌发酵液中分离乳酸链球菌素的方法”(申请号:200510066481.7)采用膜过滤方法，用无机膜或管式膜从发酵液中去除菌体和固体等分子量比乳酸链球菌素分子量大的物质；用卷式膜超滤从发酵液中去除分子量比乳酸链球菌素分子量小的物质，得到的发酵液浓缩物，加入固体食盐，喷雾干燥后食盐含量为10?50 %。
[0005]发明专利“一种乳酸链球菌素的提取方法”(申请号:CN201110230940.6)，采用将乳酸链球菌素发酵浓缩液，与水微溶性有机溶剂或水不溶性有机溶剂混合，搅拌静置，固相分离，得乳酸链球菌素湿饼，真空减压干燥，即得乳酸链球菌素产品，该方法虽然克服了工艺盐含量高、产品纯度低的缺陷，但是采用了有机溶剂沉淀乳酸链球菌素。
[0006]发明专利“一种制备乳酸链球菌素的提取工艺”(申请号:CN101906153A)，采用发酵液打入酸化罐进行酸化解析，得酸化液;随后将酸化液打入曝气罐，曝气后经过滤进入接收器，浓缩发酵液;之后浓缩发酵液栗入有机膜过滤，得到高纯浓缩发酵液;最后高纯浓缩发酵液稀释后添加食用盐，干燥后即得乳酸链球菌素产品，该方法解决了现有乳酸链球菌素提取工艺存在收得率低，单位成本高，并且普遍采用有机溶剂萃取或洗脱，影响了产品质量且对人体有毒害的问题，但是采用曝气装置，操作繁琐。
【发明内容】
[0007]本发明主要解决的技术问题:针对目前常用方法在制备乳酸链球菌素的过程中，普遍采用有机溶剂萃取或者脱洗，影响了产品质量且对人体有毒害，另外制成的产品工艺盐含量高、产品纯度低、提取率低的现状，提供了一种不添加有机溶剂淋洗，纯天然制备乳酸链球菌素的方法。该方法以白萝卜和鳅鱼为原料，首先通过沸煮成浆后，冷却发酵，随后将发酵固体物进行发霉，收集发酵渣霉菌，发酵液则浸泡发酵渣霉菌，从而得到悬浮菌丝液，之后将得到的悬浮菌丝液静置分层，减压得滤液后向其中加入硅胶并再次过滤，最后将滤液真空干燥，从而得到一种乳酸链球菌素的制备方法。该方法操作简便，步骤简练，原料易得，单位成本低，在制备的过程中不采用有机溶剂萃取或洗脱，不会影响产品质量且对人体无害，最终使得制得的乳酸链球菌素工艺盐含量低、产品纯度高于75%，且产品收率高于85%，适合大规模生产应用。
[0008]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(I)取8?10条个体重量在35?45g的鳅鱼，经宰杀、去尾、去头、去内脏后，用清水反复清洗，去除残留的污物，随后将洗后的鳅鱼均匀切成长2?5cm的鱼块，再用无菌水淋洗干净，放入菠萝筛中于无菌通风环境下自然风干；
(2 )挑选600?800g无霉斑、无病虫害的冬至时节白萝卜，洗净泥沙，用刀削去表皮后，均匀切成长I?2cm，宽2?3cm的萝卜块，在开水中烫3?5min后取出放入煮锅中，并向其中加入上述步骤得到的鳅鱼块以及白萝卜质量2?3倍的清水，混合均匀，在90?110°C下沸煮，其中在沸煮过程中每隔20min用筷子搅拌混合物I?2min，直至混合物完全熟烂成浆为止，随后将煮后的混合物取出，待其自然冷却后，倒入5L的发酵罐中，在温度为38?58°C，空气相对湿度为65?68%下，密封发酵；
(3)密封发酵2?3个月后，将上述发酵物放入卧式离心机中，以1200?1250r/min转速下离心分离10?15min，去渣，取上层液体放入2L陶瓷罐中，备用；
(4)同时将离心分离所得离心物敞开放置于空气中，放在温度为28?32°C，空气相对湿度为65?68%处，任其自然长菌，待发酵渣变质发霉长出青褐色菌丝时，用消毒后的棉签刮下菌丝放入盛有300mL无水乙醇的烧杯中，收集发酵渣霉菌；
(5)选取上述步骤(3)得到的备用发酵液，用质量浓度为10%醋酸调节pH值为5.3?
6.2，再与上述无水乙醇浸泡的发酵渣霉菌混合，得到菌丝悬浮液，随后将得到的菌丝悬浮液静置过夜，待分层后分离，得上层液，经减压过滤，收集过滤液；
(6)在上述得到的过滤液中加入过滤液质量3%的硅胶，搅拌均匀，静置15?20min，过滤得滤液，将滤液真空干燥，即可得到一种乳酸链球菌素。
[0009]本发明的应用方法是:将本发明制得的乳酸链球菌素加入到pH值为3.8?4.2的酸奶、果奶中，其中加入量为每I?2kg酸奶、果奶中添加0.08?0.12g，待添加完毕，混合均匀，在温度为90?95°C的紫光灯下灭菌15?20min后，灌装即可。经检测，酸奶、果奶的保质期从原来的10?12天，延长至22?28天，灌装产品变败率从5?8 %降低到了 I?2 %，适合大规模推广应用。
[0010]本发明的有益效果是:
(1)本发明操作简便，原料易得，单位成本低，是绿色环保工艺；
(2)本发明在制备过程中不采用有机溶剂萃取或洗脱，不会影响产品质量且对人体无害;
(3)本发明最终制得的乳酸链球菌素工艺盐含量低、产品纯度高，使用后可以延长产品的保质期，适合大规模生产应用。
【具体实施方式】
[0011]首先取8?10条个体重量在35?45g的鳅鱼，经宰杀、去尾、去头、去内脏后，用清水反复清洗，去除残留的污物，随后将洗后的鳅鱼均匀切成长2?5cm的鱼块，再用无菌水淋洗干净，放入菠萝筛中于无菌通风环境下自然风干;然后挑选600?SOOg无霉斑、无病虫害的冬至时节白萝卜，洗净泥沙，用刀削去表皮后，均匀切成长I?2cm，宽2?3cm的萝卜块，在开水中烫3?5min后取出放入煮锅中，并向其中加入上述步骤得到的鳅鱼块以及白萝卜质量2?3倍的清水，混合均匀，在90?110Γ下沸煮，其中在沸煮过程中每隔20min用筷子搅拌混合物I?2min，直至混合物完全熟烂成浆为止，随后将煮后的混合物取出，待其自然冷却后，倒入5L的发酵罐中，在温度为38?58°C，空气相对湿度为65?68%下，密封发酵;密封发酵2?3个月后，将上述发酵物放入卧式离心机中，以1200?1250r/min转速下离心分离10?15min，去渣，取上层液体放入2L陶瓷罐中，备用；同时将离心分离所得离心物敞开放置于空气中，放在温度为28?32°C，空气相对湿度为65?68 %处，任其自然长菌，待发酵渣变质发霉长出青褐色菌丝时，用消毒后的棉签刮下菌丝放入盛有300mL无水乙醇的烧杯中，收集发酵渣霉菌;接下来选取上述得到的备用发酵液，用质量浓度为10%醋酸调节pH值为5.3?
6.2，再与上述无水乙醇浸泡的发酵渣霉菌混合，得到菌丝悬浮液，随后将得到的菌丝悬浮液静置过夜，待分层后分离，得上层液，经减压过滤，收集过滤液;最后在上述得到的过滤液中加入过滤液质量3 %的硅胶，搅拌均匀，静置15?20min，过滤得滤液，将滤液真空干燥，即可得到一种乳酸链球菌素。
[0012]实例I
首先取8条个体重量在35g的嫩鱼，经宰杀、去尾、去头、去内脏后，用清水反复清洗，去除残留的污物，随后将洗后的鳅鱼均匀切成长2cm的鱼块，再用无菌水淋洗干净，放入菠萝筛中于无菌通风环境下自然风干;然后挑选600g无霉斑、无病虫害的冬至时节白萝卜，洗净泥沙，用刀削去表皮后，均匀切成长I cm，宽2cm的萝卜块，在开水中