烫3min后取出放入煮锅中，并向其中加入上述步骤得到的鳅鱼块以及白萝卜质量2倍的清水，混合均匀，在90°C下沸煮，其中在沸煮过程中每隔20min用筷子搅拌混合物lmin，直至混合物完全熟烂成浆为止，随后将煮后的混合物取出，待其自然冷却后，倒入5L的发酵罐中，在温度为38°C，空气相对湿度为65%下，密封发酵;密封发酵2个月后，将上述发酵物放入卧式离心机中，以1200r/min转速下离心分离lOmin，去渣，取上层液体放入2L陶瓷罐中，备用；同时将离心分离所得离心物敞开放置于空气中，放在温度为28°C，空气相对湿度为65%处，任其自然长菌，待发酵渣变质发霉长出青褐色菌丝时，用消毒后的棉签刮下菌丝放入盛有300mL无水乙醇的烧杯中，收集发酵渣霉菌;接下来选取上述得到的备用发酵液，用质量浓度为10%醋酸调节pH值为5.3，再与上述无水乙醇浸泡的发酵渣霉菌混合，得到菌丝悬浮液，随后将得到的菌丝悬浮液静置过夜，待分层后分离，得上层液，经减压过滤，收集过滤液;最后在上述得到的过滤液中加入过滤液质量3%的硅胶，搅拌均匀，静置15min，过滤得滤液，将滤液真空干燥，即可得到一种乳酸链球菌素。
[0013]本实例操作简单易行，使用时，将本发明制得的乳酸链球菌素加入到pH值为3.8的酸奶、果奶中，其中加入量为每Ikg酸奶、果奶中添加0.08g，待添加完毕，混合均匀，在温度为90°C的紫光灯下灭菌15min后，灌装即可。经检测，酸奶、果奶的保质期从原来的10天，延长至22天，灌装产品变败率从5 %降低到了 I %，适合大规模推广应用。
实例2 首先取9条个体重量在40g的鳅鱼，经宰杀、去尾、去头、去内脏后，用清水反复清洗，去除残留的污物，随后将洗后的鳅鱼均匀切成长4m的鱼块，再用无菌水淋洗干净，放入菠萝筛中于无菌通风环境下自然风干;然后挑选700g无霉斑、无病虫害的冬至时节白萝卜，洗净泥沙，用刀削去表皮后，均匀切成长1.5cm，宽2.5cm的萝卜块，在开水中烫4min后取出放入煮锅中，并向其中加入上述步骤得到的鳅鱼块以及白萝卜质量2.5倍的清水，混合均匀，在100°C下沸煮，其中在沸煮过程中每隔20min用锲子搅拌混合物1.5min，直至混合物完全熟烂成楽为止，随后将煮后的混合物取出，待其自然冷却后，倒入5L的发酵罐中，在温度为45°C，空气相对湿度为67 %下，密封发酵;密封发酵2.5个月后，将上述发酵物放入卧式离心机中，以1230r/min转速下离心分离13min，去渣，取上层液体放入2L陶瓷罐中，备用；同时将离心分离所得离心物敞开放置于空气中，放在温度为30°C，空气相对湿度为67%处，任其自然长菌，待发酵渣变质发霉长出青褐色菌丝时，用消毒后的棉签刮下菌丝放入盛有300mL无水乙醇的烧杯中，收集发酵渣霉菌;接下来选取上述得到的备用发酵液，用质量浓度为10%醋酸调节PH值为5.8，再与上述无水乙醇浸泡的发酵渣霉菌混合，得到菌丝悬浮液，随后将得到的菌丝悬浮液静置过夜，待分层后分离，得上层液，经减压过滤，收集过滤液;最后在上述得到的过滤液中加入过滤液质量3%的硅胶，搅拌均匀，静置18min，过滤得滤液，将滤液真空干燥，即可得到一种乳酸链球菌素。
[0014]本实例操作简单易行，使用时，将本发明制得的乳酸链球菌素加入到pH值为4.0的酸奶、果奶中，其中加入量为每I.5kg酸奶、果奶中添加0.1Og,待添加完毕，混合均匀，在温度为93°C的紫光灯下灭菌ISmin后，灌装即可。经检测，酸奶、果奶的保质期从原来的11天，延长至25天，灌装产品变败率从7%降低到了 1.5%，适合大规模推广应用。
[0015]实例3
首先取10条个体重量在45g的鳅鱼，经宰杀、去尾、去头、去内脏后，用清水反复清洗，去除残留的污物，随后将洗后的鳅鱼均匀切成长5cm的鱼块，再用无菌水淋洗干净，放入菠萝筛中于无菌通风环境下自然风干;然后挑选SOOg无霉斑、无病虫害的冬至时节白萝卜，洗净泥沙，用刀削去表皮后，均匀切成长2cm，宽3cm的萝卜块，在开水中烫5min后取出放入煮锅中，并向其中加入上述步骤得到的鳅鱼块以及白萝卜质量3倍的清水，混合均匀，在110°C下沸煮，其中在沸煮过程中每隔20min用筷子搅拌混合物2min，直至混合物完全熟烂成浆为止，随后将煮后的混合物取出，待其自然冷却后，倒入5L的发酵罐中，在温度为58°C，空气相对湿度为68 %下，密封发酵;密封发酵3个月后，将上述发酵物放入卧式离心机中，以1250r/min转速下离心分离15min，去渣，取上层液体放入2L陶瓷罐中，备用；同时将离心分离所得离心物敞开放置于空气中，放在温度为32°C，空气相对湿度为68%处，任其自然长菌，待发酵渣变质发霉长出青褐色菌丝时，用消毒后的棉签刮下菌丝放入盛有300mL无水乙醇的烧杯中，收集发酵渣霉菌;接下来选取上述得到的备用发酵液，用质量浓度为10%醋酸调节pH值为6.2，再与上述无水乙醇浸泡的发酵渣霉菌混合，得到菌丝悬浮液，随后将得到的菌丝悬浮液静置过夜，待分层后分离，得上层液，经减压过滤，收集过滤液;最后在上述得到的过滤液中加入过滤液质量3 %的硅胶，搅拌均匀，静置20min，过滤得滤液，将滤液真空干燥，即可得到一种乳酸链球菌素。
[0016]本实例操作简单易行，使用时，将本发明制得的乳酸链球菌素加入到pH值为4.2的酸奶、果奶中，其中加入量为每2kg酸奶、果奶中添加0.12g，待添加完毕，混合均匀，在温度为95°C的紫光灯下灭菌20min后，灌装即可。经检测，酸奶、果奶的保质期从原来的12天，延长至28天，灌装产品变败率从8%降低到了2%，适合大规模推广应用。
【主权项】
1.一种乳酸链球菌素的制备方法，其特征在于具体操作步骤为: (1)取8?10条个体重量在35?45g的鳅鱼，经宰杀、去尾、去头、去内脏后，用清水反复清洗，去除残留的污物，随后将洗后的鳅鱼均匀切成长2?5cm的鱼块，再用无菌水淋洗干净，放入菠萝筛中于无菌通风环境下自然风干； (2)挑选600?800g无霉斑、无病虫害的冬至时节白萝卜，洗净泥沙，用刀削去表皮后，均匀切成长I?2cm，宽2?3cm的萝卜块，在开水中烫3?5min后取出放入煮锅中，并向其中加入上述步骤得到的鳅鱼块以及白萝卜质量2?3倍的清水，混合均匀，在90?110°C下沸煮，其中在沸煮过程中每隔20min用筷子搅拌混合物I?2min，直至混合物完全熟烂成浆为止，随后将煮后的混合物取出，待其自然冷却后，倒入5L的发酵罐中，在温度为38?58°C，空气相对湿度为65?68%下，密封发酵； (3)密封发酵2?3个月后，将上述发酵物放入卧式离心机中，以1200?1250r/min转速下离心分离10?15min，去渣，取上层液体放入2L陶瓷罐中，备用； (4)同时将离心分离所得离心物敞开放置于空气中，放在温度为28?32°C，空气相对湿度为65?68%处，任其自然长菌，待发酵渣变质发霉长出青褐色菌丝时，用消毒后的棉签刮下菌丝放入盛有300mL无水乙醇的烧杯中，收集发酵渣霉菌； (5)选取上述步骤(3)得到的备用发酵液，用质量浓度为10%醋酸调节pH值为5.3?.6.2，再与上述无水乙醇浸泡的发酵渣霉菌混合，得到菌丝悬浮液，随后将得到的菌丝悬浮液静置过夜，待分层后分离，得上层液，经减压过滤，收集过滤液； (6)在上述得到的过滤液中加入过滤液质量3%的硅胶，搅拌均匀，静置15?20min，过滤得滤液，将滤液真空干燥，即可得到一种乳酸链球菌素。
【专利摘要】本发明公开了一种乳酸链球菌素的制备方法，属于乳酸链球菌素制备技术领域。本发明以白萝卜和鳅鱼为原料，首先通过沸煮成浆后，冷却发酵，随后将发酵固体物进行发霉，收集发酵渣霉菌，发酵液则浸泡发酵渣霉菌，从而得到悬浮菌丝液，之后将得到的悬浮菌丝液静置分层，减压得滤液后向其中加入硅胶并再次过滤，最后将滤液真空干燥，从而得到一种乳酸链球菌素的制备方法。实例证明，本发明方法操作简便，步骤简练，原料易得，单位成本低，在制备的过程中不采用有机溶剂萃取或洗脱，不会影响产品质量且对人体无害，最终使得制得的乳酸链球菌素工艺盐含量低、产品纯度高于75％，且产品收率高于85％，适合大规模生产应用。
【IPC分类】C12P21/02
【公开号】CN105567770
【申请号】CN201610075941
【发明人】王力威, 张帆
【申请人】常州达奥新材料科技有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年2月3日