专利名称：一种富集纯化松树皮中原花青素的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种原花青素的纯化方法，特别是涉及一种 利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法。
背景技术：
松树皮提取物是从松树皮中提取的一类物质。从树上剥下的松树皮被收集，摊平 和提取。其中含有大量称作OPCs (原花青素低聚体)的化合物。在对其大量的研究中证明， OPCs为有效的抗氧化剂，且无毒，无突变性，无致癌性并无副作用。使用十分安全。松树皮 已被证实是OPCs的新来源，从松树皮提取的OPCs不论在品质和功能上都没有任何不同，只 是外观上有一些微小的差异。原花青素英文名是Oligomeric Proantho Cyanidins (OPC)，是一种有着特殊分子 结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般 为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。主要功效有改善血液循环、治疗糖尿病 性视网膜病、减轻水肿和抑制静脉曲张等。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种 利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其 步骤如下(1)将干松树皮粉碎后用乙醇加热回流提取；(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入纯化水萃取，用酸调其PH值为2. O 2. 5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减压浓缩得原花青素粗提物；(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原 花青素各阶段洗脱液；(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得原花青素半成品，其含量为50% 以上；(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗 脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得原花青素， 其含量在95%以上。所述的步骤(1)中，松树皮粉碎后过10 80目筛在进行有机溶剂提取。所述的步骤(1)中，乙醇为10 100%乙醇中的一种或一种以上，提取时间为4
348小时。所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取 法中的一种或一种以上。所述的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为松树皮粉碎体积的10 20倍。所述的步骤(3)中，加入纯化水的量按体积计算为提取物醇溶液的10 20倍，调 节PH值所用的酸为盐酸。所述的步骤中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动 态吸附。所述的步骤(5)中所述的洗脱为用10 95%的乙醇进行洗脱。所述的在步骤( 和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1 7 1。本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化原花青素，对原花青素的吸附 选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低 廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量50%以上的原花青素半成品和含量95%以 上的原花青素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力 强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机 盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附原花青 素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施例方式实施例1 一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素 的方法，其步骤如下(1)将干松树皮碎后过60目筛，用松树皮粉体积10倍的丙酮加热回流提取3次， 每次2小时；(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积20倍的纯化水 进行萃取，然后用酸调其PH值为2. 0，静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物；(4)将所得原花青素提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为 天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95% 的乙醇在大孔吸
附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为52%原花青素半成品；(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花 青素各阶段洗脱液；(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 95%原花青素。
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实施案例2 —种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青 素的方法，其步骤如下(1)将干松树皮粉碎后过10目筛，用松树皮粉体积20倍的丙酮加热回流提取4小 时；(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积10倍的纯化水 进行萃取，然后用酸调其PH值为2. 3，静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物；(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南 开大学所生产的D4006型树脂；(5)用10%、30%、50%、70%、90%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱
法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量原花青素半成品；(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花 青素各阶段洗脱液；(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 97%原花青素。实施案例3 —种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青 素的方法，其步骤如下(1)将干松树皮粉碎后过80目筛，用松树皮粉体积15倍的75%乙醇加热回流提 取6小时；(2)将经步骤(1)处理的松树皮提取液抽滤，得提取液并减压回收溶剂的初提物；(3)将所获初提物用乙醇加热溶解，加入体积为提取物醇溶液体积15倍的纯化水 进行萃取，然后用酸调其PH值为2. 5，静置、抽滤、减压回收溶剂得原花青素粗提物；(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树 脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用20^30^^60^^80%的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗 脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集原花青素各阶段洗脱液；(6)将原花青素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量56%以上原花青素半成
P
m ；(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集原花 青素各阶段洗脱液；(8)将所收集的原花青素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 98%原花青素。
权利要求
1.一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花青素的方法，其特 征在于，其步骤如下(1)将干松树皮粉碎后用75%乙醇加热回流提取；(2)将经(1)处理的松树皮提取液过滤，得流浸膏状初提物，回收乙醇；(3)将所收获流浸膏状初提物用水充分洗涤后干燥得到干浸膏，用乙醇溶解后脱色，脱 色液经回收乙醇后加水析出大量沉淀，调PH值至2-2. 5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至 中性，得到原花青素的粗提物。(4)将所得原花青素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集原花青素各阶段洗脱液；(6)将原花青素洗脱液浓缩回收洗脱剂，得原花青素半成品；(7)将所得原花青素半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收 集原花青素各阶段洗脱液；(8)将所收集到得原花青素洗脱液进行精制的原花青素。
2.根据权利要求1或2所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合富集纯化松树皮中原 花青素的方法其特质是所述的步骤(1)中，松树皮粉后过10 80目筛再进行乙醇加热回 流提取。
3.根据权利要求1或2所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树耦合法脂富集纯松树皮中原 花青素的方法，其特征是在所属的步骤(1)中，乙醇为10 100%中的一种或一种以上， 提取时间为4 8小时。
4.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花 青素的方法，其特征是所述的步骤(1)中，有机溶剂提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗 漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
5.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原 花青素的方法，其特征是；所属的步骤(1)中，加入有机溶剂的体积为松树皮粉体积的10 20倍。
6.根据权利要求5所述的利用大间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原 花青素的方法，其特征是在所述的步骤(3)中，加入纯化水的量按体积计为提取物醇溶液 的10 20倍，调节PH值所用的酸为盐酸
7.根据权利要求6所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花 青素的方法，其特征是步骤中所述吸附为静态吸附或动态吸附步骤(5)中所述的洗 脱为用10 95%的乙醇水溶液进行洗脱。
8.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花 青素的方法，其特征是在步骤( 和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
9.根据权利要求8所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原花 青素的方法，其特征是步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1 7 1。
10.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化松树皮中原 花青素的方法，其特征是在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂富集纯化松树皮中原花青素的方法。其特点是应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化原花青素，对原花青素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量50％以上的原花青素半成品和含量95％以上的原花青素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附原花青素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
文档编号C07D311/62GK102093328SQ20101062312
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 郑君, 闫峰, 黄运生 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司