专利名称：苯并氮-苯并氧氮-和苯并硫氮-n-乙酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的苯并氮-、苯并氧氮-和苯并硫氮-N-乙酸衍生物，它们的盐和生物不稳定酯，及含这些化合物的药物制剂，以及制备这些化合物的方法，这些衍生物在氮原子的α-位含氧代基团，在3-位被1-(羧烷基)-环戊基羰基氨基取代。
本
发明内容
是基于发展具有有价值的药理性质的新型苯并氮-、苯并氧氮-和苯并硫氮化合物，本发明内容还基于发展用于治疗心脏功能不全的药物有效物质。
现已发现，本发明新的、在3-位载有任选酯化的1-(羧基烷基)-环戊甲酰胺基的苯并氮、苯并氧氮-和苯并硫氮-N-乙酸衍生物具有有价值的心脏药理性质，对于有优良作用样式的中性肽链内切酶有独特的抑制作用，因而可降低因心肌功能不全而出现的高心脏充盈压力，并能减轻心脏负担和增强利尿作用。
本发明涉及通式I的新化合物及式I酸的药用盐。 式中，R1为低碳烷氧基-低碳烷基，在低碳烷氧基上可被低碳烷氧基取代，苯基低碳烷基-，或苯氧基低碳烷基，在苯环上可任选地被低碳烷基、低碳烷氧基或卤素取代，或是萘基低碳烷基；A为CH2、O或S；R2为氢或卤素；R3为氢或卤素；R4为氢或形成生物不稳性酯的基团；R5为氢或形成生物不稳性酯的基团。
如果在式I化合物中取代基表示或包含低碳烷基或低碳烷氧基，可为直链或支链、含有尤其是1-4个碳原子、优选为1-2个碳原子，并优选为甲基或甲氧基。取代基为卤素或含卤素取代基时，尤其可考虑为氟、氯或溴，优选氟或氯。
式I化合物中A代表亚甲基、氧或硫，尤其是亚甲基。
式I化合物中的苯环上可带有取代基R2和R3，优选的是这两个取代基R2和R3、或至少一个取代基为氢。
R1优选为含有芳环的基团，例如是任选取代的苯基低碳烷基或苯氧低碳烷基，其中该低碳烷基链含1-4个碳原子，优选为1-2个碳原子。R1尤其可为任选取代的苯乙基，苯环上可任选被卤素、低碳烷氧基或低碳烷基单或多取代，或是萘乙基。若R1是被低碳烷氧基取代的低碳烷氧基低碳烷基，则优选为低碳烷氧甲基，该低碳烷氧基为1-4个碳原子，优选为1-2个碳原子，并被低碳烷氧基取代，尤其是甲氧基。
式I化合物可为任选酯化的二羧酸衍生物，根据使用的方式可以是生物不稳性单酯，尤其是R4为形成了生物不稳性酯的基团和R5为氢的化合物，或者是二羧酸，后者尤其用于静脉注射。
形成生物不稳性酯的基团R4和R5宜于为低碳烷基，任选于苯环上被低碳烷基取代，或被一个在两个邻位碳原子上相连的低碳亚烷链取代的苯基或苯基低碳烷基，在二氧烷环上任选被低碳烷基取代的二氧烷基甲基，或任选地为在氧甲基上被低碳烷基取代的C2-C6链酰氧甲基。若形成生物不稳性酯的基团R4或R5为低碳烷基，可为非支链1-4个碳原子的烷基，优选为2个碳原子。若形成生物不稳性酯的基团为任选取代的苯基低碳烷基，亚烷基可含有1-3个碳原子，优选为1个碳原子。若苯环被低碳亚烷基取代，可含3-4个碳原子，尤其是3个碳原子。含苯基的取代基R4和/或R5尤其宜为苯基、苄基或茚基。若R4和/或R5为任选取代的链酰氧甲基，该链酰氧基含2-6个碳原子，优选3-5个，并且最好是支链，例如新戊酰氧甲基(叔丁基羰氧甲基)。
本发明式I新的化合物及其盐的制备是按皆知的方法由式II的酸或其有反应活性的酸衍生物与通式III的胺反应，生成通式IV的酰胺。
式中R1、R2、R3和A的含义同上，R4a和R5a为酸保护基， 式中R1、R2、R3、R4a、R5a和A的含义同上。在式IV化合物中的羧酸保护基R4a和R5a若不是所希望的形成生物不稳性酯的基团，可同时或先后裂解掉，并按需要用游离酸与通式V的醇或通式Va的相应的有反应活性的衍生物进行酯化反应R6-OHVR6-X Va式中R6为形成生物不稳性酯的基团，X为可离去的有反应活性的基团。根据需要，所得之式I酸可转变为药用盐，或式I酸的盐转变为游离酸。
式I的二羧酸或单酯的药用盐可考虑为它们的碱金属盐、碱土金属盐或铵盐，例如钠盐、钾盐或药用的、无药理作用的有机胺盐，如二乙胺或叔丁胺。
式I化合物含有二个手性碳原子，即在环的3位带有酰胺侧链的碳原子和在酰胺侧链上带有R1基的碳原子。因此，该化合物可以多种光学活性异构体或消旋体形式存在，本发明包括了式I化合物的消旋体混合物及纯异构体化合物。
式II的酸与式III的胺反应生成式IV的酰胺，可按照经胺酰化形成酰胺的常规方法进行。作为酰化试剂，可用式II的酸或其有反应活性的衍生物。作为有反应活性的衍生物尤其可考虑用混合酸酐或酰卤化合物，例如可用式II酸的酰氯或酰溴，或式II酸与有机磺酸，例如低碳烷基磺酸如甲烷磺酸或芳香族磺酸如苯磺酸形成的混合酯，或被低碳烷基或卤素取代的苯磺酸，如甲苯磺酸或溴苯磺酸。该酰化反应可在反应条件下呈惰性的有机溶剂中进行，温度优选于-20℃到室温之间。作为溶剂尤其适用卤代烷烃如二氯甲烷或芳烃如苯或甲苯，或环醚如四氢呋喃或二氧六环，或这些溶剂的混合物。
酰化反应尤其当酰化试剂是式II的酸与磺酸形成混合酐时，宜在酸结合剂的存在下进行。作为酸结合剂宜用在反应混合物中可溶性碱，尤其是有机碱如低碳叔烷胺和吡啶类如三乙胺，三丙胺，吡啶，4-二甲胺基吡啶，4-二乙胺基吡啶或4-吡咯烷基吡啶。加入过量的有机碱同时也可以作为溶剂。
式II酸与有机磺酸形成的混合酸酐宜于将式II的酸与有机磺酸的酰卤，尤其是磺酰氯反应而就地生成，不必分离而直接与式III的胺化合物反应。
若用式II酸本身作为酰化试剂，可在按肽化学中用作酰胺生成时已知的缩合剂的存在下将式II酸与式III胺反应，缩合剂可这样促进与游离酸形成酰胺，即在形成有反应活性的酸衍生物下就地与酸反应，这样的缩合剂的例子，尤其是所谓的烷基碳二亚胺例如环烷基碳二亚胺，如二环己基碳二亚胺或1-乙基-3-〔3-(二甲胺基)-丙基〕-碳二亚胺，羰基二咪唑和N-低碳烷基-2-卤代吡啶鎓盐，尤其是卤化物或甲苯磺酸盐，优选为碘化N-甲基-2-氯吡啶鎓盐(例如参见MukaijamaAngewandte Chemie 91，789-812)。该反应在缩合剂存在下，宜于-30℃～+50℃之间进行，使用的溶剂如卤代烷烃和/或芳烷，任选地在酸结合剂胺的存在下进行。
由式II化合物与式III化合物反应得到的式IV化合物，其保护基R4a和R5a若不是式I化合物所希望的形成生物不稳性酯的基团，可按已知方法裂解掉。
作为保护基R4a和R5a可选用羧酸官能基常规用的保护基加以保护，然后按已知方法将其裂除。适宜的酸保护基例如已知于McOmie著“有机化学的保护基团”Plenum Press和Greene著“有机合成中的保护基团”Wiley Interscience出版社中叙述。
若制备的式I化合物中R4和R5是相同的，则在选择R4a和R5a保护基时，起始物II和III中也选用相同的。
若制备的式I化合物中R4和R5是不相同的，则在起始化合物II和III中宜选用不同的保护基，在不同的条件下按已知的方法再选择性地裂解掉。
作为实例可有下列三种不同条件的裂解保护基1.甲酯或乙酯，易于碱性情况下裂解，而对酸性或氧解，基本上是稳定的；2.叔丁酯，易于酸性情况下裂解，而对碱性或氢解，基本上是稳定的；3.苄酯，易用氢解裂解，或也可用碱性情况下裂解，而对酸性基本上是稳定的。
若制备的是式I的二羧酸化合物，其中R4和R5均是氢，则最好用的保护基R4a和R5a是酸性可裂解的保护基，例如用叔丁基，经式II与式III化合物反应得到的式IV的叔丁酯化合物随后用酸处理裂解。该裂解作用例如用三氟乙酸处理或用三氟乙酸的卤代烷烃(如二氯甲烷)溶液处理，或者用HCl氯体在对反应条件下呈惰性的有机溶剂中(如乙酸乙酯)进行裂解。该反应可在-25℃到室温之间进行。
若制备的是式I单羧酸化合物，即R4为形成生物不稳性酯的基团和R5是氢，则用作式II起始化合物的R4a是所需的形成生物不稳性酯的基团，如乙基，而在式III中的保护基R5a在裂解时不会将R4-OCO-基裂解。若R4-OCO-基是对酸比较稳定的乙酯基，则R5a保护基例如为酸裂解的叔丁基或可氢解裂解的基团如苄基。
若式II化合物的R4a酸敏感性的形成生物不稳性酯的基团，则式III化合物的保护基R5a宜选用可氢解掉的基团，如苄基，由式II化合物与式III化合物反应生成的式IV化合物可将此氢解裂解。氢解是用氢化方法，在催化剂存在下、优选用Pd/C催化剂在对该反应呈惰性的有机溶剂中例如低碳醇，如乙醇或低碳烷酯，如乙酸乙酯中进行。催化氢化宜于在4-5正氢压下室温下进行。
为了制备式I中R4为形成生物不稳性酯的基团、R5为氢的化合物，还可选用的式II和式III的起始化合物为具有不同反应活性的不同的保护基R4a和R5a，由式II的化合物与式III化合物反应得到的式IV化合物，首先裂解掉保护基R4a，而保留保护基R5a得到式IV’反应产物， 式中R1，R2，R3，R4，R5aA的含义同前。所需的形成生物不稳性酯的基团R4通过将式IV’化合物的游离羧基用式V或Va化合物反应引入，最后由得到的式IV化合物裂解掉保护基R5a。
这样，例如由式IV中R4a为酸可裂解的保护基尤其是叔丁基、R5a为酸稳定的保护基例如苄基的化合物，开始只将R4a酸性裂解掉。得到的式IV’的单羧酸按照常规的酯化方法与式V醇或与式Va的相应化合物进行酯化。在式Va化合物中可裂解的有反应活性的基团X宜于为卤素，尤为氯或溴，或是有机磺酸基，例如低碳烷基磺酸基，如甲烷磺酸基，或芳香磺酸如苯磺酸，或苯环上被低碳烷基或卤素取代的苯磺酸，如甲苯磺酸。为进行酯化，可将式V的醇与例如式IV’的酸或该酸的有反应活性的衍生物按已知的醇酰化方法进行反应。该反应可按照上述式II与式III化合物反应的条件进行。
用类似的方法选择不同的保护基也可制备式I中R5为形成生物不稳性酯的基团、R4为氢或与R5不同的形成生物不稳性酯的化合物。
在上述的反应中，式II和III的起始化合物的手性中心未发生改变，所以根据起始化合物的类型可得到式I化合物的纯异构体化合物或异构体的混合物。为了制备式I化合物的纯异构体和光活单一的化合物，宜将式II的纯对映体化合物与式III的纯对映体化合物反应。若式II的纯对映体化合物与式III的消旋化合物反应，或式II的消旋化合物与式III的纯对映体化合物反应，则往往得到两个差向异构体的混合物，并可按需要用已知方法加以分离。式II的消旋化合物与式III的消旋化合物反应，得到4种相应的异构体混合物，并可根据需要用已知方法加以分离。
式II的起始化合物可按已知方法得到。
例如式IIa的化合物可由通式VI的丙烯酸衍生物与式VII的环戊羧酸反应得到， 式中R4a含义同上，R1a与R1的含义相同，但低碳烷氧低碳烷氧甲基除外。该反应可按已知方法、于麦克尔加成反应的条件、于惰性有机溶剂中将环戊羧酸与能将环戊羧酸形成二价阴离子的强碱反应，然后与式VI的丙烯酸酯衍生物反应。溶剂宜用醚，尤为环醚，例如四氢呋喃。强碱宜用非亲核性的有机氨基碱金属，例如二并丙基锂氨。环戊羧酸于四氢呋喃中宜与二当量的二异丙基锂氨反应，然后再与式VI的化合物反应。该反应温度可于-70℃～0℃间进行。
式IIb化合物可由式VIII的卤代羧酯酯与式VII的环戊羧酸反应，得到的式IX反应产物与通式Xb化合物反应而得到。 式中R4a的含义同前，R1b为低碳烷氧低碳烷氧甲基，Y是卤素； 式中R4a、R1b、和X的含义同前，式VIII的卤代羧酸酯与式VII的环戊羧酸反应，可按已知方法于对此反应条件下呈惰性的溶剂中、在可使环戊羧酸形成二价阴离子的强碱存在下进行。例如该反应可按环戊羧酸与式VI化合物反应所述的条件下进行。接下的式IX的酸与式Xb的化合物的反应可按已知方法在对羧酸酯进行α-烷基化的适宜条件下、于对该反应条件呈惰性的有机溶剂中、在强碱存在下进行。所用的式Xb化合物优选为X是氯或溴。溶剂宜用醚，尤为环醚，例如四氢呋喃或二氧六环。强碱用碱金属氢化物或氨化物，如二异丙氨锂。
式II化合物中带有R1基团的碳原子为手性中心，在合成时可形成其消旋物。该光活化合物可按已知方法自消旋混合物中得到，例如用手性分离材料进行层析分离，或者用适宜的光活性碱反应得到，例如α-甲基苄胺或伪麻黄碱，然后经分步结晶所得盐而分开光学对映体。
式VI的丙烯酸酯衍生物可按已知方法由通式XI(二低碳烷基膦酰基)-乙酸酯衍生物与甲醛反应得到。 式中R4a和R1a含义同前，R7和R8各为低碳烷基，优选为甲基或乙基，该反应是在对此反应条件呈惰性的有机溶剂中于碱性条件下进行。例如式XI化合物与多聚甲醛在醚中、优选为环醚如四氢呋喃中、在碱存在下，优选为非亲核性碱金属醇化物如叔丁醇钾存在下，温度为-20℃-30℃之间进行反应。
式XI化合物是按已知方法将通式XII的膦酰基乙酸衍生物与式Xa化合物反应得到 式中R4a、R7、R8、Ra和X的含义同前所述。该反应可在常规进行烷基化的条件下于该反应条件下呈惰性的非质子性极性有机溶剂中、于碱存在下、温度为0-80℃之间进行。优选加入的式Xa的化合物中X为卤素，尤其是溴、碘或甲苯磺酸酯。溶剂例如宜用酰胺，如二甲基甲酰胺或也可用醚。碱用非亲核性碱金属醇化物如叔丁醇钾。
式VI化合物也可用通式XIII的丙二酸衍生物与甲醛在碱性条件下按已知方法反应， 式中R4a和R1a含义同前。因此式VIII的丙二酸衍生物能与例如甲醛水溶液反应，反应是在有机仲胺存在下，尤其哌啶存在下、温度为0-30℃，优选低于室温进行。式VIII的丙二酸衍生物也可与多聚甲醛在吡啶中于40-60℃下反应。
式XIII的丙二酸单酯可这样得到即把式XIV的丙二酸二酯与式Xa的化合物反应，R4aOOC-CH2-COOR9XIV式中R4a含义同上，R9为低碳烷基，尤其为甲基，或苄基。得到的式XV的丙二酸二酯衍生物经部分水解转化成式XIII的相应丙二酯单酯衍生物， 式中R1a，R4a和R9含义同前。
在式XIV的丙二酸二酯中引入基团R1a是按已知的方法将式XIV酯与式Xa化合物于非质子性极性有机溶剂中，优选为二甲基甲酰胺中、在碱的存在下，如非亲核性碱金属醇化物如叔丁醇钾、温度为0℃-80℃反应。该反应例如于式XI化合物与式Xa化合物反应所述的条件下进行。
得到的式XV取代的丙二酸二酯可按已知方法裂解掉R9基团，转变成相应的式XIII丙二酸单酯。若R4a和R9保护基是两个不同反应活性的基团，则在裂解R9时宜选用这样的条件，即不会攻击R4a基团。若R9是苄基，则按已知方法用氢解法裂解。低碳烷酯R9按照已知方法、根据烷基的性质用酸性或碱性条件下进行水解法裂解。若R9为乙基，优选用碱性水解方法。为此，将式XV的烷基酯于低碳醇或低碳醇与水的混合物中用碱金属氢氧化物如氢氧化钾处理。若R4a与R9相同，则所用的碱金属氢氧化物量要保持小到仅部分进行水解。
式III化合物用已知方法由通式XVI化合物与通式XVII化合 X-CH2-COOR5aXVII式中R2、R3、A、R5a和X的含义同前，R10R11N-为经氨基保护基保护的氨基。在生成的式XVIII化合物中由R10R11N-游离出氨基， 式中R2，R3，R5a，A和R10R11N-的含义同前。式XVI化合物与式XVII化合物的反应按照对酰胺烷化的已知方法进行。优选加入的式XVII的化合物是X为卤素，优选为溴或碘。反应在非质子极性有机溶剂中，例如二甲基甲酰胺或环醚如四氢呋喃中碱存在下进行。碱宜用非亲核性碱例如叔丁醇钾。根据需要该反应也可在碱金属氢氧化物如氢氧化钾存在下，于两相系统和相转移催化剂例如四低碳烷铵卤化物如溴化四丁铵的存在下进行。
在得到的式XVIII化合物中然后用裂解氨基保护基的已知方法将氨基游离出。为了保护氨基，用已知的容易再将氨保护基裂解掉的保护基，例如用肽化学中已知的保护基。适宜的保护基例如叙述于E.McOmie“有机化学中的保护基”(Plenum出版社1971)。例如适宜的保护基为邻苯二甲酰亚胺基、叔丁氧羰基或苄氧羰基。但在选择保护基R5a时，要使后来在裂解条件下，R5a不受攻击。邻苯二甲酰亚胺基在碱性介质中是适宜的可裂解掉的保护基，可用乙醇胺或肼在提高的温度下例如70-90℃之间加以裂解，邻苯二甲酰亚胺基作为保护基时例如适用于化合物中A为硫原子的保护基。酸性可裂解的保护基例如宜用叔丁氧羰基，经酸处理，例如用三氟乙酸或氯化氢气体于乙酸乙酯的溶液中再加以裂解，化合物中A为氧时，宜用叔丁氧羰基作为保护基。作为氢化裂解的保护基例如宜用苄氧羰基，在钯/碳催化剂存在下用氢化法可将其裂解掉。
式III化合物在带有氨基的碳原子上含有手性中心。若用光学纯的式XVI起始化合物，则得到式III的光学纯化合物。这尤其是在A为氧或硫的化合物为如此。若用的式XVI化合物为消旋体，则得到式III的消旋化合物，这通常是A为亚甲基的化合物。式III化合物的消旋体混合物可按已知方法拆分成其光学异构体，例如用手性分离材料经层析分离，或与适宜的光活酸例如酒石酸反应，然后用分步结晶法将得到的盐分离成光活异构体。为了提高光学异构体的收率，在与适宜的光活酸反应时，一种异构体与该光活酸形成的盐大部分沉淀的同时或其后，在反应混合物溶液中剩余的异构体加入芳香醛例如苯甲醛，使其再消旋化。这样，因与醛形成亚胺而引起手性中心的消旋化。
式XVI化合物可按已知方法制备，例如通式XVIa的化合物可由通式XIX中的卤素Y按已知方法被R10R11N-基团取代而得到 式中R2，R3，R10R11N-和Y的含义同前。例如式XIX化合物与胺R10R11NH的碱金属盐如邻苯二甲酰亚胺钾反应。该反应于惰性非质子性有机溶剂中，优选为二甲基甲酰胺、温度为40-80℃之间进行。
式XIX化合物可按已知方法由通式XX肟化合物经贝克曼重排而得到。 式中R2、R3和Y的含义同前，反应中式XX化合物用酸处理，按照贝克曼重排反应的条件进行。式XX化合物宜于用多聚磷酸于60-90℃间处理，转位生成式XIX化合物。
式XX肟可由式XXI环酮制备， 式中R2与R3的含义同前，该式XXI酮首先为引入Y基团而用卤素处理，得到的卤代酮与羟胺反应。该酮的α-卤代和以后的肟化宜于整锅煮方式进行。为此，式XXI酮首先在惰性有机溶剂如低碳醇如甲醇中用卤素处理，然后在反应混合物中加入羟胺。加入的羟胺宜用其盐，例如盐酸盐，然后向反应混合物中加入水，该反应于0℃-40℃、优选于室温下进行。
通式XVIb的化合物可按已知方法将通式XXII芳香氨基酸化 式中R2，R3和R10R11N-基的含义同前，Aa为氧或硫。式XXII化合物的环化是经脱水并按已知形成内酰胺的方法而得到。该环化例如在肽化学中形成酰胺的已知酸活化的缩合剂如碳二亚胺的存在下进行的，该反应条件是在惰性极性有机溶剂中例如二甲基甲酰胺中进行。该反应例如在式II与式III化合物反应所述相同的条件下进行。羧基活化剂也可用氰代膦酸二乙酯，该反应在有机碱如三低碳烷胺如三乙胺存在下进行。
式XXII化合物可用已知方法将通式XXIII1相应的硝基化合物还原得到 式中R2，R3，Aa和R10R11N-基的含义同前。硝基的还原可按已知将硝基苯化合物还原成苯胺化合物方法在钯/碳催化剂存在下用催化氢化法进行。该还原反应也可用其它的使氢就地生成的还原剂例如金属铁/盐酸或金属锌/盐酸进行。
式XXIII化合物可用已知方法将通式XXIV邻氟代硝基苯化合物与通式XXV酸反应而得到 式中R2、R3、Aa和R10R11N-基的含义同前。式XXV的化合物为丝氨酸或半胱氨酸衍生物，其氨基被保护基保护。该反应是在惰性有机溶剂中和有碱的存在下进行。氟代硝基苯与具有强亲核性半胱氨酸衍生物反应可在低碳醇或醇/水混合液中在弱碱如碳酸氢钠存在下进行。对于亲核性较弱的丝氨酸衍生物的反应，宜用强碱如碱金属氢化物于极性有机溶剂如二甲基甲酰胺中进行。
在形成了式XXIII化合物后，起初在式XXV的化合物中已有的氨基保护基可根据需要按已知方法交换成另一种氨基保护基，该保护基与R5a的反应活性可很好地区别开，因而适于对式XXIII化合物作进一步处理。
式I化合物及其药用盐具有重要的药理性质，尤其是这类物质对中性肽链内切酶(NEP)有抑制作用。NEP是一种使内源性排钠肽降解的酶，例如是动脉排钠肽(ANP)降解的酶，这些物质由于抑制了NEP活性，能够改善可被NEP攻击的排钠肽的生物活性和存留时间，因而适于治疗由于这类激素而影响的疾病状态，尤其是心机能不全。
心机能不全是指由于病态造成的心收缩力的降低，导致反射性地提高了外周的阻力，从而导致肺循环和心脏本身的血块栓塞。结果是心脏有较高的充盈压力，引起了心房和心室壁的膨胀。在这种情况下心脏如同一个内分泌器官，能够产生并分泌ANP到血循环中，而ANP具有显著的血管松弛和利尿/排钠作用。ANP的作用是降低心脏充盈压力。其特征是利尿/排钠(减少循环中的血容量)，是通过降低外周阻力实现的(预负荷降低和后负荷降低)。ANP的心脏去负荷作用被认为是内源性心保护机理起作用的，但ANP的作用是短时的，因为该激素可被NEP裂解。
本发明化合物由于有抑制NEP的作用，它可以改善ANP的心保护作用机理，并且在加强利尿/排钠作用方面，尤其表现有很高的活性。
本发明化合物的特征是，有优良的作用样式和良好的耐受性，并对NEP有选择性的抑制作用。此外，对内皮素转化酶(ECE)只有较小的抑制作用。在较严重程度的心功能不全状态下，会反射性地使血中血管紧张素II、内皮素和儿茶酚胺水平提高，以致会进一步增高了外周阻力和心脏充盈压力，因此使心肌肥大和膨胀扩大。抑制ECE的性质从而可增强本发明化合物对外周阻力的降低作用。
这些化合物的抑制NEP和ECE作用和增强利尿/排钠性质，可用体外和体内的药理试验标准方法证明。
药理研究方法的说明1.最小毒性剂量的测定体重20-25g雄性小鼠，口服受试物质最大剂量为300mg/kg，给药后仔细观察3小时的毒性征候。还要记录给药后72小时内的全部症候和死亡性质。同样观察和记录伴随症状。当观察到有动物死亡和较强毒性症状时，再用另外的小鼠给较小剂量，直到不再出现毒性症状。可引起死亡和强毒性症状的最低剂量为列于下表A的最低毒性剂量。在表A中列出的实施例号就是后面的制备实施例号。
表A
2.受试物质对体外NEP抑制作用的研究和对该酶的亲合力为了证明本发明化合物对中性内切肽酶(NEP)的抑制作用，在体外标准试验中测试受试物质对NEP的酶活性引起的蛋氨酸-脑菲肽(Met-Enkephalin)水解的抑制作用。为此，测定Ki值作为该物质抑制作用的尺度(抑制常数)。受试物质的酶抑制作用的Ki值是酶-受试物质复合物或(酶-底物)-受试物质复合物的离解常数，因而单位是浓度。试验方法为进行试验，各制备不同培育溶液的100μl的样品，每个培育溶液中含有10ng纯净的NEP(E.C.3.4.24.11)并且都有不同量的受试物质和底物(蛋氨酸-脑菲肽)，和50mM Tris缓冲液(三-(羟甲基)胺基甲烷/HCl，PH7.4)。
每个受试物质制成24个不同的培育溶液，有3种不同的溶度，并与2、5、7、10、12、15、40和100μM的蛋氨酸-脑菲肽相混合。
每次测定，也要同时进行两次对照培育溶液的试验，一次酶对照液中不含受试物质，另一次底物对照液既不含酶也不含受试物质。
培育溶液在振荡水浴37℃保温45分钟，在15分钟后，加入底物(Met-脑菲肽)使酶反应开始，培育时间终结时，于95℃加热5分钟，使反应中止。然后将中止的培育液于12,000Xg离心3分钟，上清液测定未发生反应的底物的浓度和经酶反应生成的水解产物的浓度。为此，每个上清液样品于疏水化的硅胶上进行HPLC(高压液相色谱)分离，用分光光度法于波长207nm处测定酶反应产物和未反应之底物。为进行HPLC分离，用反相分离柱(4.6×250mm)，填充物质为Encapharm*100RP18，粒度5μ。溶液流速1.4ml/min，柱温40℃。流动相A为5mMH3PO4，PH2.5，流动相B为乙腈+1％5mMH3PO4，PH2.5。
由各个试样测得的水解产物浓度和未反应的底物浓度。按已知方法，计算各受试物质的Ki值。下表B列出了受试物质的Ki值。表B中列出的实施例号是后面的制备实施例号。
表B
3.受试物质对ECE抑制作用的体外测试本发明化合物对内皮素转化酶(ECE)的抑制作用的确定是在体外标准试验中测试受试物质对由于ECE酶活性诱导的Big-内皮素1(BigET-1)水解裂解的抑制作用。为此，测定受试物质的抑制作用IC50值，受试物质的酶抑制作用IC50值是能够抑制ECE酶活性50％时的受试物质的浓度。制备含有ECE的内皮细胞膜成分中国地鼠卵细胞(以下简写CHO细胞)，用来进行人的ECE重组实验(见Schmidt等，Federation of European BiochemicalSocietie Letters 356(1994)，238-243)，使细胞溶解后，经10000xg离心10分钟，分出细胞膜。经3次再悬浮和多次离心操作洗涤细胞膜。含有ECE的细胞膜组分再悬浮于Tris/HCl缓冲液中(PH7.0含250mM NaCl)，于-70℃冷冻保存，做酶实验时化开。试验步骤为进行试验，各制备100μl不同培育溶液的样品，每个培育溶液中含5μg的含有ECE的内皮细胞膜的蛋白，不同量的受试物质和24μM的底物(合成肽H2N-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH)，和100mM Tris缓冲液(PH7.0，含250mM NaCl)。此外，在每个培育溶液中还含有100μM Thiorphan和10μM卡托普利和1mM苯磺酰氟，100μM胃酶抑素A(蛋白酶抑制剂)和100μMAmastatin(蛋白酶抑制剂)。
每个受试物质制成6个不同的培育溶液，三种不同的浓度，每个进行双次测定。
每次试验各进行不合酶的对照实验。
于37℃预培育15分钟后，加入底物。加入底物后使酶反应开始，于37℃反应60分钟，然后于95℃加热培育液5分钟，使反应中止。由于酶促反应由底物生成的水解产物H2N-Asp-Ile-Ala-Trp-COOH和H2N-Phe-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH，用高压液相层析进行测定。HPLC测定的条件按前述的对NEP抑制作用的体外测定进行。
由不同的检样测定的水解产物的浓度，按已知方法计算每个受试物质的IC50，下表C列出了受试物质的IC50。
表C
4.体内方法测定受试物质对容积负载大鼠利尿作用/排钠作用的影响用容积负载大鼠进行体内活性试验。该实验是将等渗氯化钠溶液灌注大鼠，以造成心脏高充盈状态，从而引起ANP释放，导致利尿/排钠。试验方法用体重200-400g雄性Wistar大鼠进行试验。在神经性镇痛(芬太尼；Hypnorm杨森公司制造)下，将导管插入右大腿静脉中，以进行后基底灌注，用等渗氯化钠溶液使呈容积负载。打开腹腔后，第二根导管插到膀胱中，结紧输尿管，以便测定尿体积、排钠量、排钾量。
再将腹腔缝合，在整个试验的2小时过程中，持续灌注氯化钠溶液(0.5ml/100g体重)。在30分钟的平衡期后，加入受试物质之前，每10分钟接尿样，共3次。这些预先值(加药前值)的测定，是为了检查对受试动物发生的连续性尿量的影响。
然后，将含有受试化合物的溶液静脉注射(股静脉注射)或口服(用灌胃针头)给大鼠，每组10只。用两种给药途径分别给对照组以安慰剂溶液(不含有效物质)。受试物质静脉注射5分钟后或口服120分钟后，静脉注射大体积的氯化钠溶液(在2分钟内注入2ml/100g体重)给大鼠，并在6分钟内收集尿量。在这段时间内测量降低的尿量，从而得到钠和钾含量。由该降低的尿量可以得到在容积载负的情况下，与开始时数值相比较所增高的排泄量。
在下表D中列出了在容积载负情况下，给了受试物质后，所出现的尿排泄量增加的％数(以容积载负情况下只给安慰剂而增高的尿排泄量为基计)。此外，也得出在容积载负情况下给受试物质后排泄的钠和钾的％量(以容量载负情况下给安慰剂后的钠和钾排出量计)。
表D
*n＝未测以上试验结果表明，式I化合物对NEP有高亲合力，通过抑制该ANP-降解酶，提高了血液中ANP水平，因此呈剂量依赖性地提高了因ANP引起的利尿和排钠作用，而对钾的排泄基本上没有影响。
根据上述的作用，式I化合物作为药物适于对大哺乳动物、尤其是人治疗心机不全，促进排尿/排钠，尤其是心力不全的患者。式I的二羧酸及其盐宜于肠胃道外用药，尤其是静脉注射给药形式；式I的单酯或双酯宜于口服给药方式。给药剂量因个体而异，根据受治疾病的性质，所用的药物，用药剂型而剂量有变化。例如胃肠道外给药剂型的含有效成分一般比口服剂量低。对于大哺乳动物、尤其是人用药的剂量一般是每个剂型单元含1-200mg有效成分。
式I化合物作为治疗药与常规用的药用助剂制成格林制剂，例如片剂，胶囊剂，栓剂或溶液。这些格林制剂可按已知方法制备，与常规的固体或液体载体混合，如乳糖，淀粉，或滑石粉，或液体石腊，和/或与常规的药用助剂合用，如片剂崩解剂，助溶剂或防腐剂。
下面的实施例对本发明作进一步说明，但不以任何方式限制本发明范围。
这些新化合物的结构用光谱方法确证，尤其是NMR、质谱、红外或紫外法，并且必要时测定旋光度。实施例13-{1-〔2’(乙氧羰基)-4’-苯基-丁基〕-环戊-1-羰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯A)于15℃下将123.4g叔丁醇钾分次加到160.1g丙二酸二乙酯于1升二甲基甲酰胺的溶液中。反应混合物搅拌30分钟，然后于室温下滴入207.7g溴苯乙烷于200ml的二甲基甲酰胺溶液中。反应混合物于60℃加热1小时，冷却之。减压蒸除二甲基甲酰胺，剩余物与甲基-叔丁基醚和水混合。分离有机相，用水洗涤，硫酸钠干燥，蒸干。剩余的油状物为粗品，减压蒸馏以纯化。得202.5g2-乙氧羰基-4-苯基丁酸乙酯，沸点(KP1.5)＝148-153℃。
B)于冰冷条件下将6.17g氢氧化钾于76ml水的溶液加到23.6g上面得到的二酯产物于285ml乙醇的溶液中。室温下搅拌混合物数小时。减压蒸除乙醇，剩余物与甲基叔丁基醚和水混合。分开有机相，水相在冰冷条件下用稀盐酸水溶液酸化，用甲基叔丁基醚多次萃取。合并有机相，用水洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸发，得到20.2g油状粗产物，为2-羧基-4-苯丁酸乙酯，不必精制而进入下一步加工。
C)在冰冷条件下，相继将11ml 35％甲醛水溶液和9.23ml哌啶加到20.2g上述制的产物中。室温搅拌数小时，然后用甲基叔丁基醚稀释，用硫酸氢钾水溶液和水洗涤，硫酸钠干燥，蒸干。剩余物减压干燥，得14.8gα-(2-苯乙基)-丙烯酸乙酯。
D)在氮气氛下，将25.2ml二异丙胺溶解于150ml无水四氢呋喃中，冷却至-35℃。将100ml1.6摩尔浓度的丁基锂于正己烷的溶液滴加到该溶液中。然后，将反应混合液于0℃搅拌30分钟。然后滴入8.1ml环戊甲酸于20ml无水四氢呋喃溶液。0℃下搅拌该混合物2小时。然后滴入16.8g于C)步得到的丙烯酸酯于20ml无水四氢呋喃的溶液。0℃搅拌2小时，然后于-15℃放置数小时。用10％盐酸水溶液酸化反应混合物，正己烷萃取。有机层用半饱和的碳酸氢钠水溶液涤涤7次，水洗1次。硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，得到的剩余物为粗品，经快速硅胶层析，用正己烷/乙酸乙酯(8∶2)洗脱，得19.6g纯净的1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酸，熔点68-69℃。
E)冰冷下将108.3g溴慢慢滴入100gα-四氢萘酮于820ml甲醇的溶液中。室温搅拌反应混合物30分钟，然后室温下先加入122.4g盐酸羟胺，后加入110ml水。室温搅拌该混合物3天。再加入493ml水。1小时后沉出白色沉淀。该反应混合物再搅拌3天，于5℃冷却。滤集沉淀。水洗，40℃减压干燥，得136.7g 2-溴-3，4-二氢萘-1(2H)-酮-肟，熔点130-132℃。
F)79.5g上面制得的肟分次加到热至80℃的452g多聚磷酸中，于80℃搅拌18小时。然后小心地用710ml水稀释，并于室温下搅拌2小时。滤集生成的沉淀，用水、碳酸氢钠水溶液和水洗涤，最后用甲基叔丁基醚洗涤，于60℃氢氧化钾上干燥，得66.6g3-溴-4，5-二氢-1H-1-苯并氮-2(3H)-酮，熔点168-170℃。
G)80g上制的产物悬浮于140ml二甲基甲酰胺中加入72.6g邻苯二甲酰亚胺钾于205ml二甲基甲酰胺的溶液，60℃搅拌该混合物16小时。冷却至室温，慢慢滴加入800ml水，并于冰冷下搅拌2小时。滤集结晶性产物，先用水/二甲基甲酰胺混合液洗涤，再用甲基叔丁基醚洗涤，60℃减压干燥2日，得73.3g 4，5-二氢-3-邻苯二甲酰亚胺基-1H-1-苯并氮-2(3H)-酮，熔点185-195℃。
H)于冰冷下将12.3叔丁醇钾于二甲基甲酰胺的溶液加到上述制的27g产物于90ml二甲基甲酰胺的悬浮液中。于冰冷却下搅拌30分钟后，于1小时、0-5℃内滴加入20.7g溴乙酸叔丁酯，0℃搅拌1小时。温热至40℃，于3小时内滴加入164ml水，再于30℃搅拌1小时。倾析出生成之沉淀，剩余固体物用甲基-叔丁基醚结晶，滤集结晶，用水、甲基叔丁基醚洗涤，60℃减压干燥，得26.3g 2，3，4，5-四氢-2-氧代-3-邻苯二甲酰亚胺基-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯，熔点194-197℃。
I)7g上制的酯，于5分钟内加到80℃的13.8ml乙醇胺中，5分钟后，呈澄清溶液，冷却至室温，用105ml甲苯稀释，该溶液和140ml5％氯化钠溶液一起振摇，分出有机相，硫酸钠干燥，蒸干。甲基叔丁基醚结晶，得4.0g3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯，熔点117-118℃。
J)2.9g上面得到的胺与3.2g于D)项得到的酸溶解于100ml二氯甲烷中，冰冷却下，向反应混合物中加入2.2mlN-甲基吗啉、1.27g羟基苯并三唑，和3.81gN-乙基-N-(3-二甲胺基丙基)-碳二亚胺盐酸盐。室温搅拌反应混合物1小时，用二氯甲烷稀释，先后用水、硫酸氢钾水溶液、水、碳酸氢钠水溶液洗涤，再用水洗涤。有机相用硫酸钠干燥，减压蒸干，得到的粗品用硅胶柱层析快速层析(略提高压力)，用正己烷/乙酸乙酯洗脱。洗脱剂中的乙酸乙酯含量由开始的1∶9到3∶7。得纯净的本标题化合物5.4g，为油状物。IR谱(涂膜)3400cm-1，1725cm-1，1660cm-1.实施例23-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯基-丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸5g3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4-苯基丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制备方法见实施例1)溶解于16ml三氟乙酸中，室温搅拌3小时。减压蒸除三氟乙酸。剩余物溶于二氯甲烷，用水洗至中性。有机相经硫酸钠干燥，减压蒸干。剩余物和正己烷一起搅拌，并蒸干，重复多次。得到3.4g本标题化合物，为泡沫状固体，熔点81-104℃。实施例3(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基)-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯A)30.5g1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-羧酸(制法见实施例1D))和11.6g L-(-)-α-甲基苄胺加热溶于乙醇。混合物于冷柜中放置12小时，滤集析出的结晶，干燥后于乙醇中多次重结晶直至旋光度恒定，减压下干燥。得到该酸的α-甲基苄胺盐17.7g，熔点118-121℃，旋光度〔α〕20D＝+5.6°(C＝0.5，甲醇)。
为将酸游离出，将此盐用水/二氯甲烷混合液处理，该混合物中加入硫酸氢钾水溶液使呈酸性。分开有机相，水相用二氯甲烷萃取3次，合并有机萃取液，水洗，硫酸钠干燥，减压蒸发。剩余物干燥后，得11.2g纯净的(2’R)-1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-羧酸，旋光度〔α〕20D＝+7.4°(C＝0.651，甲醇)。
B)将12.65gL-(+)酒石酸于54ml加热到65℃的乙醇中的溶液加到65℃ 24.5g消旋的3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法见实施例1I))于54ml乙醇的溶液中，混合物室温下搅拌1小时，然后滴加入1.72ml苯甲醛于1.3ml乙醇中的溶液。该悬浮物于80℃加热回流14小时，冷至室温。滤集生成的结晶性沉淀，溶于80ml乙醇中，再加热回流8小时。冷却至室温，滤集结晶，50℃减压干燥。得23.6g酒石酸盐，熔点195-196℃，旋光度〔α〕20D＝152°(C＝0.5，甲醇)。
为游离出碱，将23.6g酒石酸盐与由250ml水和108ml二氯甲烷组成的混合液于0℃下搅拌，加入氨水，PH9.6。分离出有机相，水相用30ml二氯甲烷萃取，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物用甲基叔丁基醚结晶，减压干燥，得12.2g(3S)-3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯，熔点113-115℃，旋光度〔α〕20D＝-276.2°(C＝0.5，甲醇)。
C)5.4g于A)项制得的酸溶解于60ml干燥二氯甲烷中，加入2.33ml三乙胺，冷却至-20℃，然后慢慢滴入1.31ml甲烷磺酰氯于5ml干燥二氯甲烷的溶液中，搅拌15分钟后，滴加入4.8g于B)项得到的胺和2.33ml三乙胺于60ml二氯甲烷的溶液。室温搅拌1小时，反应混合物中加入水，分离有机相，用硫酸氢钾水溶液和水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。剩余物粗品于500g硅胶柱作快速层析纯化(正己烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脱)，减压干燥后得9.5g纯净的本标题化合物，为油状物，旋光度〔α〕20D＝-115.2°(C＝0.463，甲醇)。实施例4(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸。
9.4g(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法见实施例3)于冰冷却下溶解于15ml二氯甲烷中，该溶液与31ml三氟乙酸混合，于4℃冰箱中放置12小时。减压下蒸去二氯甲烷和三氟乙酸，剩余的粗产物溶于乙酸乙酯，先后用水、稀碳酸氢钠水溶液和水洗涤，分出有机层，硫酸钠干燥，减压蒸发。剩余物进行硅胶快速层析纯化洗脱液先用二氯甲烷，然后用二氯甲烷/甲醇(95∶5)，得到的产物于80℃减压干燥2日，得7.3g纯净的今标题化合物熔点71-74℃，旋光度〔α〕20D＝-131.0°(C＝0.5甲醇)。实施例53-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯。
A)在氮气氛下将118g二甲基膦乙酸叔丁酯溶解于875ml无水二甲基甲酰胺中，于冰冷下加入58.9g叔丁醇钾溶液得到的混合物于60℃加热片刻，冷却至室温。向此混合物中滴加入104.9g溴代乙苯干110ml二甲基甲酰胺的溶液，60℃加热2小时。减压蒸除二甲基甲酰胺，剩余物溶解于甲基叔丁基醚中，该溶液用硫酸氢钾水溶液至酸性。分开有机相，水洗，硫酸钠干燥，减压蒸干，得到的粗品经硅胶快速层析，(3kg硅胶，洗脱液为二氯甲烷/甲基叔丁基醚4∶1)，得105.1g纯净的2-(二甲基膦酰基)-4-苯基-正丁酸叔丁酯，为油状物。
B)105.1g上面得之产物于氮气氛下溶解于705ml无水四氢呋喃中，向此溶液中加入28.4g多聚甲醛，然后慢慢滴入32.5g叔丁醇钾于100ml四氢呋喃的溶液。搅拌1小时。反应混合物中加冷硫酸氢钾水溶液使至酸性，用甲基叔丁基醚稀释。分开有机相，水洗，硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品于700g硅胶上快速层析，洗脱液为正己烷/乙酸乙酯(9∶1)，得47.0gα-(苯乙基)-丙烯酸叔丁酯，为无色油状液体。
C)将200ml 1.6M丁基锂在正己烷中的溶液滴加到冷却至-50℃的50.2ml二异丙胺于450ml无水四氢呋喃的溶液中。再于0℃保持30分钟。于此温度下滴加入16.2ml环戊甲酸于40ml无水四氢呋喃的溶液，0℃搅拌2小时，向反应液中慢慢加入B)项制备的产物38g于50ml无水四氢呋喃的溶液，0℃搅拌2小时，再于-15℃放置数小时。冰冷下用饱和硫酸氢钾水溶液酸化，正己烷萃取3次，合并有机相，用半饱和的碳酸氢钠溶液洗涤7次，水洗1次，硫酸钠干燥，减压蒸干，油状粗品用冰冷正己烷结晶，得41.9g纯净结晶的1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酸，熔点75-77℃。
D)在氮气氛下将上制的3.3g产品、2.7g3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(实施例1I制得)、1.53mlN-甲基吗啉和1.18g羟基苯并三唑溶解于93ml无水二氯甲烷中，冰冷却下加入3.52gN-乙基-N’-(3-二甲胺基丙基)-碳二亚胺盐酸盐，冰冷却下搅拌2小时。反应液先后用水硫酸氢钾水溶液、水、碳酸氨钠水溶液，再用水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品于200g硅胶上快速层析纯化，正己烷/乙酸乙酯(7∶3)洗脱，用甲基叔丁基醚结晶。得4.2g纯净的本标题化合物，熔点110-114℃。实施例63-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-环戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸于4℃和避潮气情况下将4.1g3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)--4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法见实施例5)溶解于13ml三氟乙酸中。于此温度下搅拌3小时。减压浓缩溶剂。为了完全除去三氟乙酸，剩余物加入二氯甲烷并蒸干，重复多次。剩余物溶于二氯甲烷，水洗，硫酸钠干燥，减压浓缩。剩余物为粗品，二氯甲烷结晶，得2.7g纯的本标题化合物，熔点178-183℃。实施例7(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯A)68g 1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酸(制法见实施5C))和23.5mlL-(-)-α-甲基苄胺加热溶于200ml乙醇中。该反应混合物按实施例3A)所述处理。得到32.2g该酸的α-甲基苄胺盐，熔点118-119℃，旋光度〔α〕20D＝+9.2°(C＝0.5，甲醇)。按实施例3A)所述方法处理此盐以游离出酸，得23g(2’R)-1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酸，熔点68-70℃，旋光度〔α〕20D＝+15.4°(C＝0.5，甲醇)B)60.1g上制的酸与50.3g(3S)-3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法见实施例3B)，按实施例3C)所述反应，并按3C)所述方法处理反应混合物，得94.3g本标题化合物，为泡沫状物，旋光度〔α〕20D＝-110.2(C＝0.5，甲醇)。红外光谱(KBr压片)3420cm-1；1743cm-1；1725cm-1；1670cm-1。实施例8(3S，2’R)-3-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-环戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸93g(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法见实施例7)，按实施例6所述方法用三氟乙酸水解，并按实施例6所述方法处理。得63.5g本标题化合物，为固体泡沫状物，熔点97-122℃，旋光度〔α〕20D＝-136.2°(C＝0.5，甲醇)实施例9(3S，2’S)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酰胺基}-3，4-二氢-4-氧代-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸苄酯A)7ml硫酸加到100g3-溴丙酸于200ml乙醚的溶液中，冷却至-20℃。然后加入123ml液化异丁烯。于加压釜中室温搅拌混合物数小时。加入冷却的氢氧化钠水溶液，分开乙醚相，水相用乙醚萃取数次，合并有机相，氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸干，得100g3-溴丙酸叔丁酯，沸点(KP20)＝75-77℃。
B)在氮气氛下将50.4ml二异丙胺溶解于300ml无水四氢呋喃中，将此溶液冷却至-70℃。于此温度下滴加入200ml 1.6摩尔浓度的丁基锂于正己烷中的溶液，温热至0℃，搅拌30分钟，再冷却至-20℃，于此温度下，滴加入16.2ml环戊甲酸于30ml无水四氢呋喃中的溶液，室温搅拌2小时，再将混合物冷却至-10℃，并滴加到35g3-溴丙酸叔丁酯于100ml四氢呋喃中的溶液中，再于室温搅拌数小时。用稀盐酸水溶液酸化反应液，加入375ml乙醚。分开有机相，水相用乙醚萃取3次，每次100ml，合并有机相，用氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸干，剩余物溶解于300ml乙醚中，用碳酸氢钠水溶液洗涤6次，并用10％碳酸钠水溶液洗涤四次，合并碳酸钠溶液，冰冷却下酸化，乙醚萃取3次，每次150ml。合并乙醚和萃取液，用氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥，减压浓缩，用冰冷正己烷结晶粗产物。得7.7g纯净的1-〔2’-(叔丁氧羰基)-乙基〕-1-环戊甲酸，熔点78-81℃。
C)在氮气氛下将30ml二异丙胺溶解于100ml无水四氢呋喃中，冷却至-70℃。向此溶液中滴加132ml 1.6摩尔浓度的丁基锂正己烷溶液，0℃再搅拌30分钟，再冷却至-70℃。然后依次向其中滴加入24.2gB)项制得的产物于100ml四氢呋喃中的溶液，再加入14.2ml甲氧乙氧基氯甲烷于20ml四氢呋喃中的溶液。再于室温下搅拌16小时。加入冰水，用硫酸氢钾水溶液酸化，乙酸乙酯萃取3次，每次300ml。合并有机相，氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用500g硅胶快速层析纯化，洗脱液为二氯甲烷/乙醚(8∶2)，得26.5g纯净的1-〔2’-(叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酸，为油状物。
D)将36.7g上制的消旋酸溶解于184ml正己烷，加入18.4g(+)-伪麻黄碱。生成的沉淀经短时间加热沸腾回流使重新溶解，冷却并于冰柜中放置数小时。滤集生成的沉淀。用冰冷的正己烷洗涤，并用正己烷重结晶四次。得16.2g该酸的伪麻黄碱盐，熔点89-91℃，旋光度〔α〕20D＝36.5°(C＝1，甲醇)为将酸游离出，将16g盐悬浮于正己烷中，用冰冷的硫酸氢钾水溶液酸化，分开有机层，水层用正己烷萃取2次。合并有机层，氯化钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸干。剩余物于50℃减压干燥。得9.9g(2’S)-1-〔2-(叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酸，为油状物，旋光度〔α〕20D＝+2.9°(C＝1，甲醇)E)在氮气氛和避潮气条件下将17.2g氢化钠(80％)溶解于400ml干燥的二甲基甲酰胺中。向此溶液中于0℃下慢慢滴加入50gL-BOC-丝氨酸(N-(叔丁氧羰基)-丝氨酸)于50ml干燥的二甲基甲酰胺中的溶液，然后缓慢加热到15℃并滴加入37.4g邻硝基酚于50ml二甲基甲酰胺中的溶液。再于室温下搅拌数小时，加入冰冷的硫酸氢钾水溶液。乙酸乙酯萃取数次，合并有机相，加入碳酸氢钠水溶液。分开水相，用乙醚洗涤，然后用硫酸氢钾水溶液酸化，乙酸乙酯萃取。萃取液用水洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸干，得54.2g粗品，为(2S)-3-(2-硝基苯氧基)-2-(叔丁氧羰胺基)-丙酸，无需精制，进入下一步反应。
F)54.2g上制的酸溶解于600ml甲醇，加入1.8g5％钯/碳催化剂，于5巴氢气中氢化1小时。滤除催化剂，滤液减压浓缩，粗品于甲基叔丁基醚/正己烷中冰冷结晶，得30.1g(2S)-3-(2-氨基苯氧基)-2-(叔丁氧羰胺基)-丙酸，熔点87-91℃，旋光度〔α〕20D＝+55.9°(C＝1，甲醇)。
G)在避潮气条件下，将13.3g上制的酸溶解于71ml无水二甲基甲酰胺中，冰冷下向其中加入7.8ml氰化膦酸二乙酯于6ml二甲基甲酰胺中的溶液，10分钟后，滴加入5.7ml三乙胺，室温搅拌1小时。反应混合物倾入冰水中，甲基叔丁基醚萃取数次，合并有机相，干燥后减压蒸干，粗品于乙醇中结晶，得1.3g(3S)-3-(叔丁氧羰胺基)-2，3-二氢-1，5-苯并氧氮-4(5H)-酮，旋光度〔α〕20D＝-194°(C＝1，甲醇)。
H)在避潮气情况下，将上制的16g产物溶解于313ml四氢呋喃中，向其中先后滴加入7.1g叔丁醇钾于30ml四氢呋喃中的溶液和10.9ml溴乙酸苄酯于10ml四氢呋喃中的溶液。室温搅拌1小时，用甲基叔丁基醚稀释，水洗，有机相用硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用500g硅胶快速层析，正己烷/乙酸乙酯(3∶2)洗脱，得20.5g纯的(3S)-3-(叔丁氧羰胺基)-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸苄酯，为油状物，旋光度〔α〕20D＝-152°(C＝0.68，甲醇)。
I)20g上制产物溶于137ml二氯甲烷，加入77ml三氟乙酸，搅拌1小时，减压浓缩，剩余物溶于二氯甲烷，碳酸氢钠洗至碱性。分出有机相，水洗，硫酸钠干燥，减压浓缩，得15.7g纯净的(3S)-3-氨基-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸苄酯，旋光度〔α〕20D＝-187.5°(C＝0.536，甲醇)。
J)15.7g上制产物溶于48ml无水二氯甲烷，室温下先后加入1.6gD)项制备的酸，0.79mlN-甲基吗啉和1.83gN-乙基-N’-(3-二甲胺基丙基)-碳二亚胺盐酸盐，室温搅拌1小时。然后相继用水、硫酸氢钾水溶液、水、碳酸氢钠水溶液、水洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸干，剩余物经快速硅胶层析，正己烷/乙酸乙酯洗脱，得1.8g本标题化合物，为油状物，旋光度〔α〕20D＝-96.3°(C＝0.326，甲醇)。实施例10(3S，2’S)-3-{1-〔2’-羧基-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并氧氮-S(2H)-乙酸苄酯冰冷下将1.6g(3S，2’S)-3-{1-(2’-叔丁氧羰基)-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并氧氮-5(2H)-乙酸苄酯(制法见实施例9)溶解于5ml三氟乙酸，4℃放置数小时。减压蒸除溶剂，剩余物经硅胶快速层析，二氯甲烷/甲基叔丁基醚/甲醇(85∶15∶5)洗脱，干燥得1.0g油状标题化合物，旋光度〔α〕20D＝-117.2°(C＝0.42，甲醇)。实施例11(3S，2’S)-3-{1-〔2’-羧基-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并氧氮-5(2H)乙酸0.95g(3S，2’S )-3-{1-〔2’-羧基-3’-(2-甲氧乙氧基)-丙基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并氧氮-5-(2H)-乙酸苄酯(制法见实施例10)溶于10ml乙醇，向此溶液加入钯催化剂(钯/碳5％)0.2g，于5巴氢气中氢化2小时，滤除催化剂，滤液减压蒸发，剩余物干燥，得0.7g泡沫状标题化合物，旋光度〔α〕20D＝-142.6°(C＝0.5，甲醇)。实施例12(3R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯A)20.5g二甲基膦代乙酸叔丁酯与25g 4-氟苯乙基溴化物按实施例5A)方法反应，并按5A)法处理，得到20.4g 4-(4-氟苯氧基)-2-(二甲基膦代)-正丁酸叔丁酯。
B)20.4g上制之产物与4.8g多聚甲醛按实施例5B)所述方法反应并处理，得粗品15.3gα-〔2-(4-氟苯氧基)-乙基〕-丙烯酸叔丁酯，为油状物，无需进一步层析纯化，进入下一步反应。
C)15.3g上制之产物与5.1ml环戊甲酸按实施例5C)的方法反应并处理，得6.0g1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-环戊-1-甲酸(熔点58-63℃)和7.6g油状不易纯化的产品。
D)将122.4g N-乙酰-L-半胱氨酸和181.9g碳酸氢钠于550ml水中的溶液加到100ml1-氟-2-硝基苯于1800ml乙醇的溶液中。混合物加热回流3小时，冷却至室温，滤集沉淀，滤液浓缩到大约700ml，剩余物中加入1.8l水。水相用乙醚萃取，加入浓盐酸水溶液，使PH1，析出黄色固体，滤集，得253.6gR-(2-硝基苯基)-N-乙酰基-L-半胱氨酸粗品，无需进一步纯化，进入下步反应。
E)253.6g上制的产物与825ml18摩尔浓度硫酸和3.3l水相混合，混合物加热回流40分钟后，冷却至0℃，加入1925ml浓氨水，滤集析出的沉淀，水重结晶，得143gR-(2-硝基苯基)-L-半胱氨酸。
F)100g上制的产物和62.2g碳酸钾溶解于7l水中，随后于3小时内分次加入120g乙氧羰基邻苯二甲酰亚胺，搅拌5小时，再放置数小时。滤集析出的沉淀，滤液加入浓盐酸，使PH2-3，滤集析出的沉淀，水多次洗涤，然后用约1l乙醇温热悬浮液(约40℃)，冷却后，滤集沉淀，空气干燥，得100g(2R)-3-(2-硝基苯硫基)-2-邻苯二甲酰亚胺基丙酸，无需纯化，进入下步反应。
G)100g上制的产物溶于1.5l甲醇，加入0.8g5％钯/碳催化剂，氢化5小时，滤除催化剂，滤液减压蒸发，得71.6g(2R)-3-(2-氨苯基硫代)-2-邻苯二甲酰亚胺基丙酸粗品，为黄褐色油状物，无需纯化，进入下步反应。
H)71.6g上制的产品溶于440ml二甲基甲酰胺中，向此溶液中加入38.0g1-〔3-(二甲胺基)-丙基〕-3-乙基碳二亚胺-盐酸盐，室温下搅拌3小时。然后用1.5l乙酸乙酯稀释，用1.5l1N碳酸氢钠水溶液洗涤数次，有机相再用水洗2次，每次200ml，硫酸镁干燥，减压浓缩至干，剩余物用硅胶柱快速层析纯化，乙酸乙酯/环己烷(1∶1)洗脱，得46.3g(3R)-2，3-二氢-3-邻苯二甲酰亚胺基-1，5-苯并硫氮-4(5H)-酮。
I)将10.6g粉状氢氧化钾和4.8g溴化四丁铵加到46.3g上制产物于300ml四氢呋喃的溶液中。反应混合物冷却到0℃，慢慢滴加23.2ml溴乙酸叔丁酯，再于室温搅拌3小时。过滤，滤液减压浓缩至干，剩余物溶于乙醚，醚液用水和1摩尔浓度(M)硫酸氢钾洗涤，硫酸镁干燥，减压浓缩。油状剩余物加入乙酸乙酯和乙醚，滤集析出的沉淀，得34g(3R)-5-(叔丁氧羰甲基)-2，3-二氢-5-邻苯二甲酰亚胺基-1，5-苯并硫氮-4(5H)-酮，为固体，减压浓缩母液，又得25g不易纯化的油状产物。旋光度〔α〕20D＝-146°(C＝0.8，二氯甲烷)。
J)2g上制的产物与7.5ml乙醇胺混合，于80℃搅拌10分钟，撤去热源，再搅拌30分钟，加入70ml 5％氯化钠水溶液，用甲苯萃取。分开有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩至于。得1.46g含有甲苯的(3R)-3-氨基-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯，为含甲苯的固体。
K)1.45g上制的产物、1.75g C)项制得的环戊甲酸衍生物、0.70g羟基苯并三唑和1.50ml N-甲基吗啉加到100ml干二氯甲烷中，混合物冷却至0℃，加入1.76g 1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)-碳二亚胺盐酸盐，室温搅拌5小时，加入1摩尔浓度(M)的硫酸氢钾水溶液，分开有机相，用1摩尔浓度(M)的碳酸氢钾水溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，减压蒸干，粗品经硅胶柱快速层析，用正己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得1.4g本标题化合物，为油状物。红外光谱(涂膜)3366cm-1；3059cm-1；2969cm-1；2874cm-1；1727cm-1；1657cm-1；1505cm-1。实施例13(3R)-3-{1-〔2’-羧基-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸。
1.9g(3R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-(4-氟苯氧基)-丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯(制法见实施例12)按实施例6所述方法用三氟乙酸水解，并按实施例6方法处理，得0.56g本标题化合物，为无定形固体，熔点90-94℃。实施例14(3R)-3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-5’-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯。
A)6.7g三苯膦溶于200ml乙腈中，冷却至0℃，滴入1.3ml溴。除去冷浴，滴加入5g 3-(3，4-二甲氧苯基)-1-丙醇于80ml乙腈的溶液，混合物加热回流，在6小时内多次用分水器，每次蒸出10ml乙腈，并用新鲜乙腈补充除去的乙腈。减压蒸除乙腈，剩余物溶于乙醚，过滤。滤液减压浓缩，剩余物用硅胶柱快速层析，环己烷/甲基叔丁基醚(7∶2)洗脱，得5.5g 3-(3，4-二甲氧苯基-1-溴-丙烷，为无色油状物。
B)5.5g上制的产物与3.8ml二甲基膦代乙酸叔丁酯按实施例5A)方法反应并处理，得6.1g4-(3，4-二甲氧基苯基)-2-(二甲基膦代)-戊酸叔丁酯，为无色油状物。
C)6g上制的产物与多聚甲醛按实施例5B)所述方法反应并处理，得之粗品用硅胶柱快速层析，甲基叔丁基醚/环己烷(1∶3)洗脱，得3.4g油状1-〔3-(3，4-二甲氧苯基)-丙基)丙烯酸叔丁酯。
D)3.4g上制的产物与1.3ml环戊甲酸按实施例5C)所述方法反应并处理。粗品经硅胶柱快速层析纯化，乙酸乙酯/环己烷(1∶3)洗脱，得2.5g油状1-〔2-(叔丁氧羰基)-5-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-环戊甲酸。
E)2.5g上制的产物溶于50ml乙腈，于0℃避潮气条件下加入4.2ml二异丙基乙胺、1.7g2-氯-1-甲基吡啶碘化物鎓和2.5g(3R)-3-氨基-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并二氮-5(2H)-乙酸叔丁酯(制法见实施例12J)，混合物于0℃搅拌30分钟，室温搅拌2小时。减压蒸除溶剂至干，剩余物溶于二氯甲烷，先用稀盐酸水溶液洗，后用水洗，分开有机相，水相用二氯甲烷萃取2次，合并有机相，硫酸钠干燥，减压浓缩，得3g本标题化合物，为油状物。硅胶薄层层析Rf值0.4(洗脱剂环己烷/乙酸乙酯，1∶1)。实施例15(3R)-3-{1-〔2’-羧基-5’-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸3g(3R)-3-{1-〔2’-叔丁氧羰基)-5’-(3，4-二甲氧苯基)-戊基〕-环戊-1-甲酰胺基}-4-氧代-3，4-二氢-1，5-苯并硫氮-5(2H)-乙酸叔丁酯(制法见实施例14)溶于20ml二氯甲烷。向此溶液加入3ml三氟乙酸，室温搅拌2日，减压浓缩，为完全除去三氟乙酸，多次加入2ml甲苯并蒸干。得之粗品经硅胶快速层析，二氯甲烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，后用纯乙酸乙酯。减压蒸发洗脱液，得1.26g本标题化合物，为无定形固体。红外光谱，KBr压片3365cm-1；2942cm-1；1726cm-1；1652cm-1。实施例163-{1-(2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯A)10.5g3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸叔丁酯(制法见实施例1I)、8.25g对甲苯磺酸水合物和20.1ml苄醇加到174ml甲苯中。分水器加热4小时，此时开始形成的沉淀慢慢进入溶液中。减压蒸除甲苯，剩余物与甲基叔丁基醚搅拌，过滤，得到的固体溶于二氯甲烷中，冰冷下用碳酸氢钠调至碱性。分开二氯甲烷溶液，水洗，硫酸钠干燥并蒸干，粗品用甲基叔丁基醚重结晶，得8.2g 3-氨基-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯，熔点105-107℃。
B)12.8g上制的产物与13.7g1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-羧酸(制法见实施例5C))按实施例3C)所述方法反应并处理，得19.3g本标题化合物，熔点118-123℃。实施例173-〔1-(2-羧基-4’-苯丁基)-环戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯15g3-{1-〔2’-(叔丁氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯(制法见实施例16)与56ml三氟乙酸按实施例6所述方法反应和处理，粗品用甲基叔丁基醚结晶，得13.1g本标题化合物，熔点86-90℃。实施例183-{1-〔2’-(叔丁基羰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯2g3-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-环戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯(制法见实施例17)在避潮气条件下溶于20ml干燥二氯甲烷中。向该溶液加入0.46ml三乙胺和0.1g二甲胺基吡啶。然后于冰冷下滴入0.5g新戊酸氯甲基酯于3ml干燥二氯甲烷的溶液。室温搅拌2日，混合物中加入水，分开有机层，用碳酸氢钠水溶液和水洗涤，硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物于150g硅胶上快速层析纯化，正己烷/乙酸乙酯混合液洗脱，开始比例为7∶3，后为1∶1。得1.1g纯净的3-{1-〔2’-(新戊酰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯，为泡沫状固体，熔点71-78℃。实施例193-{1-〔2’-(新戊酰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸1.0g 3-{1-〔2’-(新戊酰氧甲氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸苄酯(制法见实施例18)溶解于100ml乙醇中。加入0.5g 5％钯/碳催化剂，于5巴氢压下氢化3小时。滤除催化剂，滤液浓缩。剩余物于80℃减压干燥，得0.7g本标题化合物，为玻璃状固体。红外光谱(KBr压片)3410cm-1；1750cm-1；1660cm-1；按上述诸法可制备下表1所列的式I化合物。
Phe＝苯基；nap＝α-萘基；ind＝吲哚基；diox＝(2，2-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)-甲基；C-Sei＝侧链上的手性中心；C-rin＝环上的手性中心，rac＝消旋；R-k＝R-构型；S-k＝S-构型；Sch＝泡沫状物；l＝油状物；Su＝游离酸；Na＝钠盐。实施例I含(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸的片剂按如下配方制备片剂，每片中含有(3S，2’R)-3-{1-〔2’-(乙氧羰基)-4-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸20mg玉米淀粉 60mg乳糖 135mg明胶(为10％溶液) 6mg将有效成分、玉米淀粉、乳糖用105明胶溶液增稠成团，制粒，置于适宜的铁皮上，45℃干燥，干燥的颗粒进入粉碎机上，再与下列的助剂混合滑石粉 5mg硬脂酸镁 5mg玉米淀粉 9mg
然后压制成240mg重的片剂。实施例II含有(3S，2’R)-3-〔1-(2’-羧基-4’-苯丁基)-环戊-1-甲酰胺基〕-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸的注射剂。
按如下配方制备注射液，每5ml中含(3S，2’R)-3-{1-〔2’-羧基-4’-苯丁基〕-环戊-1-甲酰胺基}-2，3，4，5-四氢-2-氧代-1H-1-苯并氮-1-乙酸10mgNa2HPO4·7H2O 43.24mgNa2HPO4·2H2O 7.72mgNaCl 30.0mg纯化水 4948.0mg将固体物质溶水中，杀菌，分装5ml注入安瓿中。
权利要求
1.通式I的化合物及式I酸的药用盐 式中R1为低碳烷氧基-低碳烷基，在低碳烷氧基上可被低碳烷氧基取代，苯基低碳烷基-，或苯氧基低碳烷基，在苯环上可任选地被低碳烷基、低碳烷氧基或卤素取代，或是萘基低碳烷基；A为CH2、O或S；R2为氢或卤素；R3为氢或卤素；R4为氢或形成生物不稳性酯的基团；R5为氢或形成生物不稳性酯的基团。
2.根据权利要求1的化合物，其中R4和/或R5为形成生物不稳性酯的基团。
3.根据上述权利要求之一的化合物，其中形成生物不稳性酯的基团为低碳烷基，任选地在苯环上被低碳烷基取代、或被连接到2个相邻碳原子上的低碳亚烷链取代的苯基或苯基低碳烷基，尤其是苯基、苄基、或茚基，一个在二氧戊烷环上任选被低碳烷基取代的二氧戊烷基甲基，尤其是(2，2，-二甲基-1，3-二氧戊烷-4-基)甲基，或任选地在氧甲基上被低碳烷基取代的C2-C6-链烷酰氧甲基。
4.根据上述权利要求之一的化合物，其特征是，R4为形成生物不稳性酯的基团，R5为氢。
5.根据上述权利要求之一的化合物，其特征是，A为CH2。
6.根据权利要求5的化合物，其中R1为苯乙基或萘乙基，R2为氢。
7.含有有效药理量的权利要求1的化合物和常规药用助剂和/或载体的药物。
8.通式I化合物及式I酸的药用盐的制备方法， 式中R1为低碳烷氧基-低碳烷基，在低碳烷氧基上可被低碳烷氧基取代，苯基低碳烷基-，或苯氧基低碳烷基，在苯环上可任选地被低碳烷基、低碳烷氧基或卤素取代，或是萘基低碳烷基；A为CH2、O或S；R2为氢或卤素；R3为氢或卤素；R4为氢或形成生物不稳性酯的基团；R5为氢或形成生物不稳性酯的基团。其特征是，通式II的酸或它的活化的酸衍生物与通式III的胺反应， 式中R1、R2、R3、和A的含义同前所述，R4a、R5a为酸保护基，生成通式IV的酰胺， 式中R1、R2、R3、R4a、R5a和A的含义同前所述，若在式IV化合物中酸保护基R4a和R5a不是所希望的形成生物不稳性酯的基团，则同时或任意顺序先后裂解掉，并且任选地将游离的酸基用通式V的醇或通式Va的相应活化的衍生物酯化，R6-OH(V)R6-X(Va)式中R6为形成生物不稳性酯的基团，X为可裂解掉的活化基团。并任选地将生成的式I酸转变成药用盐或将式I的酸的药用盐转变成游离酸。
全文摘要
本发明涉及通式I的具有对NEP有抑制作用的化合物及通式I酸的药用盐，式中R
文档编号C07D223/16GK1147506SQ9610425
公开日1997年4月16日 申请日期1996年3月20日 优先权日1995年3月23日
发明者H·沃德克, D·郝特杰, J·麦森格, J·安特尔, M·沃尔, D·索曼林 申请人:卡利药物化学股份公司