专利名称：一种绞股蓝多糖的提取方法
技术领域：
本发明涉及天然产物化学，特别是涉及从绞股蓝中提取绞股蓝多糖的方法。
背景技术：
绞股蓝(Gynostemma Pentaphyllum(Thunb.)Makino)又名七叶胆、甘茶蔓、七叶参，是葫芦科绞股蓝属植物。绞股蓝主要有效成分之一为绞股蓝总皂甙，有80余种。绞股蓝有“南方人参”之称，其总皂甙含量是人参总皂甙的四倍，具有降血脂，降血压，坑疲劳，抗衰老，促生长，防癌抗癌等功效。
绞股蓝主要有效成分之二是绞股蓝多糖，它具有SOD类似的活性，可清除超氧阴离子(O2-)和羟基自由基(OH)，据最近有关研究证实，绞股蓝多糖可抑制肿瘤细胞的增殖，绞股蓝多糖无任何毒副作用，且能对抗化疗药物引起的骨髓抑制等不良反应，保护细胞免受自由基的攻击，对机体的免疫机能有一定的增强作用，并有抗氧化、抗衰老等作用(唐晓玲等.绞股蓝粗多糖抗肿瘤作用及其对荷瘤动物免疫机能的影响.江苏药学与临床研究，1999，7(1)15；沈爱宝.绞股蓝粗多糖抗癌作用的初步观察.南通医学院学报，1995，15(1)148；娄振岭.绞股蓝多糖生物学作用的研究.河南肿瘤学杂志，1996，9(3)168)。
现有从绞股蓝中提取的绞股蓝多糖通常有下面一些方法(1)将绞股蓝先用80％乙醇提取3次，再用20％乙醇提取多糖3次，再回收乙醇、浓缩、过滤、醇析、干燥，绞股蓝粗多糖的收率6％，平均含量9.59％(唐晓玲等.绞股蓝粗多糖的提取与初步分析.中成药，1995，17(7)7-8)。但这种方法提取不完全，提取效率低，为粗提物，且通常提取温度较高，容易导致具有活性的多糖成分因长时间受热破坏损失；(2)水煎煮提取，再浓缩、过滤、醇析、干燥(中国专利申请号93109421.6)。这种方法也存在提取不完全、提取效率低、提取温度较高、容易导致具有活性的多糖成分因长时间受热破坏损失的缺点。
关于绞股蓝总皂甙的提取，与本发明相近的方法有绞股蓝在pH值为3.9-4.5的酸性条件下，温度在40℃以下，按0.04-0.1％的量加入由半纤维素酶与果胶酶以任何比例混合的酶进行保温搅拌，浸提，随后按0.01-1％的量加入沉淀助滤剂，经静置沉淀过滤得到富含维生素C的绞股蓝总皂甙有效成份的提取液(中国专利申请号93106940.8)。但该专利通篇未提及多糖的提取，且本发明与该专利提取条件不一样pH值不同、温度不同、酶的组成不同。
发明内容
鉴于现有技术中存在的上述问题，本发明的目的是提供一种在较低温度下，提取率较高，适合工业化生产的提取绞股蓝多糖的方法。
本发明的技术方案是取绞股蓝全草，破碎，脱脂或不脱脂处理后，加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液。再在滤渣中加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液，如此提取滤渣共1-2次。合并几次提取液，浓缩至加水总量的1/5-1/6体积，离心分离除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相当于总体积分数为70％的酒精，沉淀24h以上，离心分出多糖沉淀，丙酮脱水，真空干燥即得绞股蓝粗多糖，绞股蓝全草粗多糖收率为11％以上，多糖含量10％以上，再用常用的方法纯化可得纯绞股蓝多糖；酒精溶液可分离绞股蓝总皂甙。
在本发明中采用加入蛋白酶酶促反应除蛋白，具体方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取时与纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在几次提取液合并后的浓缩液中加入，无论在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值为4.5-8.0，温度为40℃-70℃下酶促反应。
具体实施例方式
实施例一取破碎绞股蓝全草150g，脱脂或不脱脂处理后，加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)和蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液。再在滤渣中加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)和蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液，如此提取滤渣共1-2次。合并几次提取液，浓缩至加水总量的1/5-1/6体积，离心分离除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相当于总体积分数为70％的酒精，沉淀24h以上，离心分出多糖沉淀，丙酮脱水，真空干燥即得绞股蓝粗多糖，再用常用的方法纯化可得纯绞股蓝多糖；酒精溶液可分离绞股蓝总皂甙。
实施例二取破碎绞股蓝全草150g，脱脂或不脱脂处理后，加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液。再在滤渣中加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液，如此提取滤渣共1-2次。合并几次提取液，加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，调PH值为4.5-8.0，温度为40℃-70℃下酶促反应2h-48h。浓缩至加水总量的1/5-1/6体积，离心分离除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相当于总体积分数为70％的酒精，沉淀24h以上，离心分出多糖沉淀，丙酮脱水，真空干燥即得绞股蓝粗多糖，再用常用的方法纯化可得纯绞股蓝多糖；酒精溶液可分离绞股蓝总皂甙。
实施例三取破碎绞股蓝全草150g，脱脂或不脱脂处理后，加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液。再在滤渣中加多倍量的水，调PH值4.5-8.0，加入纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)，在40℃-70℃下酶促反应5h，调PH值至中性，煮沸10分钟，滤出提取液，如此提取滤渣共1-2次。合并几次提取液，浓缩至加水总量的1/5-1/6体积，加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，调PH值为4.5-8.0，温度为40℃-70℃下酶促反应2h-48h。离心分离除去沉淀，得到澄清液。澄清液加入相当于总体积分数为70％的酒精，沉淀24h以上，离心分出多糖沉淀，丙酮脱水，真空干燥即得绞股蓝粗多糖，再用常用的方法纯化可得纯绞股蓝多糖；酒精溶液可分离绞股蓝总皂甙。
权利要求
1.一种从绞股蓝中提取绞股蓝多糖的方法，其技术特征在于绞股蓝在PH值为4.5-8.0水中，温度为40℃-70℃下用纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)酶促反应提取，每次提取后调PH值至中性，煮沸。
2.如权利要求1所述的制备方法，采用加入蛋白酶酶促反应除蛋白，具体方法是蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取时与纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)一同加入、或在提取液中加入、或在合并提取液的浓缩液中加入，无论在哪一工序加入蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)，均需在PH值为4.5-8.0，温度为40℃-70℃下酶促反应。
全文摘要
本发明涉及天然产物化学，特别是涉及从绞股蓝中提取绞股蓝多糖的方法。绞股蓝在pH值为4.5－8.0水中，温度为40℃－70℃下用纤维素酶(或含纤维素酶的混合酶)酶促反应提取数次，合并提取液浓缩、去沉淀，澄清液加入酒精沉淀24h以上，分出多糖沉淀、脱水、真空干燥即得绞股蓝多糖。在本发明中采用蛋白酶法除蛋白，蛋白酶(或含蛋白酶的混合酶)可以在提取时与纤维素酶一同加入、或在提取液中加入、或在三次提取液的浓缩液中加入，无论在哪一工序加入蛋白酶，均需在pH值为4.5－8.0，温度为40℃－70℃下酶促反应。本发明提供了一种在较低温度下，提取率较高，适合工业化生产的提取绞股蓝多糖的方法。
文档编号C08B37/00GK1490338SQ03157680
公开日2004年4月21日 申请日期2003年9月5日 优先权日2003年9月5日
发明者余爱农 申请人:余爱农