专利名称：一种制备具有抗肿瘤活性银条多糖的方法
技术领域：
本发明涉及从水苏属植物根状茎中提取相关成分的技术领域，具体涉及一种制备具有抗肿瘤活性银条多糖的方法。
背景技术：
银条(Stachys Floridana Schuttl. exBenth.)是唇形科水苏属一年生草本植物， 别名银白条、银苗、地灵、一串紫等，是原产于中国的传统蔬菜，栽培历史悠久，零星种植遍及全国，其中以洛阳偃师最为有名，十九世纪曾传入日本，后又引至欧美。其根状茎洁白脆嫩、肉质多汁，炒食、煮食、酱渍或制成蜜饯等，风味独特，营养丰富，具有消腥除腻、解酒、清神、增进食欲、帮助消化之功能。银条含有多种矿物质、维生素、粗蛋白、氨基酸、有机酸、糖类、酚类，还含有水苏糖(其含量比国际上通用的大豆原料的含量高2-3倍)、水苏碱、胆碱、 胡卢巴碱等生理活性物质，具有润肺、补血、益肾之功效，可治疗气喘、肺虚咳嗽、肾虚腰痛、 淋巴结核、咯血等病症，有软化血管、降低血液浓度、改善血液循环的独特作用。大量药理及临床研究证实，植物多糖有抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂和增强免疫功能等生理功能。但是迄今为止，国内外对银条多糖的研究鲜见于报道。
发明内容
本发明目的旨在提供一种高效、环保的制备具有抗肿瘤活性银条多糖的方法，实现本发明的具体方案如下(1)取新鲜银条洗净，55°C烘干，粉碎，过60目筛，得颗粒均勻的粉碎物；(2)将步骤(1)制得的粉碎物，用85%乙醇80°C水浴脱脂两次，每次2h，5000rpm、 15min离心，去掉上清液，所得残留物自然晾干；(3)将步骤( 所得残留物按液料比5_25mL/g，加去离子水进行热水浸提，提取温度75-100°C，时间l_5h，提取次数1-4次，得提取液；(4)将步骤(3)所得提取液离心分离(离心分离条件5000rpm，15min)，取上清液；(5)将步骤(4)所得提取液在50°C条件下，减压浓缩至合适的体积，得浓缩液，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4°C沉淀过夜，离心取沉淀，离心分离条件5000rpm，15min ；(6)将步骤( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗涤2次，55°C烘干至恒重，即为银条多糖。(7)将步骤(6)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，MTT法测定其对人胃癌BGC-823细胞体外增殖的抑制能力。制备的银条多糖为浅褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为800 μ g/mL与作用7 时，最大抑制率为78. 35%。2、根据专利要求1所述的一种热水提取具有抗胃癌活性的银条多糖的方法，其特征在于所述步骤O)的液料比19mL/g，提取温度94°C，提取时间4h，提取次数3次。制备的银条多糖为浅褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为800 μ g/mL与作用7 时，最大抑制率为78. 35%。
图1提取温度(V )和液料比(mL/g)对多糖提取率的影响图2银条多糖对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用(72h)
具体实施例方式下面通过实施例，对本发明作进一步描述。实施例1 (1)取新鲜银条洗净，55°C烘干，粉碎，过60目筛，得颗粒均勻的粉碎物；(2)将步骤(1)制得的粉碎物，用85%乙醇80°C水浴脱脂两次，每次2h，5000rpm、 15min离心，去掉上清液，所得残留物自然晾干；(3)将步骤( 所得残留物按液料比5_25mL/g，加去离子水进行热水浸提，提取温度75-100°C，时间l_5h，提取次数1-4次，得提取液；(4)将步骤(3)所得提取液离心分离(离心分离条件5000rpm，15min)，取上清液；(5)将步骤(4)所得提取液在50°C条件下，减压浓缩至合适的体积，得浓缩液，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4°C沉淀过夜，离心取沉淀，离心分离条件5000rpm，15min ；(6)将步骤( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗涤2次，55°C烘干至恒重，即为银条多糖。(7)将步骤(6)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，MTT法测定其对人胃癌BGC-823细胞体外增殖的抑制能力。制备的银条多糖为浅褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为800 μ g/mL与作用7 时，最大抑制率为78. 35%。采用苯酚-硫酸法测定银条提取物中多糖的含量，多糖提取率按下面公式计算多糖提取率(％ )=[多糖提取物中多糖质量(g)/脱脂残渣质量(g)]X100%。肿瘤抑制率(％ ) = (1-测定孔吸光度/空白孔吸光度)X 100%实施例2 制备具有抗肿瘤活性银条多糖的提取条件优化实验(1)制备具有抗肿瘤活性银条多糖的提取条件优化的单因素实验①提取温度对银条多糖提取率的影响提取温度设置75、80、85、90、95和100°C六个梯度，提取时间、液料比和提取次数分别为4h、15ml/g和1次。不同提取温度的多糖提取率见表1 :
权利要求
1.一种热水浸提制备具有抗肿瘤活性的银条多糖的方法，其特征在于包括以下操作步骤(1)取新鲜银条洗净，55°c烘干，粉碎，过60目筛，得颗粒均勻的粉碎物；(2)将步骤(1)制得的粉碎物，用85%乙醇80°C水浴脱脂两次，每次ai，5000rpm、 15min离心，去掉上清液，所得残留物自然晾干；(3)将步骤(2)所得残留物按液料比5-25mL/g，加去离子水进行热水浸提，提取温度 75-100°C，时间l_5h，提取次数1-4次，得提取液；(4)将步骤(3)所得提取液离心分离(离心分离条件5000rpm，15min)，取上清液；(5)将步骤(4)所得提取液在50°C条件下，减压浓缩至合适的体积，得浓缩液，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4°C沉淀过夜，离心取沉淀，离心分离条件5000rpm，15min ；(6)将步骤( 所得沉淀物依次用乙醇、丙酮洗涤2次，55°C烘干至恒重，即为银条多糖。(7)将步骤(6)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，MTT法测定其对人胃癌BGC-823细胞体外增殖的抑制能力。制备的银条多糖为浅褐色粉末，其中多糖含量68. 86%，多糖对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为800 μ g/mL与作用7 时，最大抑制率为 78. 35%。
2.根据专利要求1所述的一种热水提取具有抗胃癌活性的银条多糖的方法，其特征在于所述步骤O)的液料比19mL/g，提取温度94°C，提取时间4h，提取次数3次。
全文摘要
本发明涉及一种热水浸提制备具有抗肿瘤活性的银条多糖的方法。该方法包括银条烘干、粉碎→乙醇脱脂→热水浸提→离心取上清液→碱压浓缩→乙醇沉淀→离心取沉淀乙醇和丙酮依次洗涤→烘干至恒重，即为银条多糖。MTT法分析银条多糖的抗肿瘤活性，发现其对胃癌BGC-823细胞增殖具有显著的抑制能力。本发明的工艺方法具有提取条件温和、不破坏多糖结构、成本低、对环境友好等优点，制备的银条多糖具有显著的抗肿瘤活性，因此具有广阔的应用前景。
文档编号C08B37/00GK102174117SQ201110007318
公开日2011年9月7日 申请日期2011年1月14日 优先权日2011年1月14日
发明者张佳, 徐希妍, 曾晓雄, 韩文庆, 马丽苹 申请人:南京农业大学