党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中的应用，其中党参多糖优选通过以下方法制备获得：以党参为原料，经含沸水提取、去蛋白、透析和乙醇处理工序制备获得，所述的党参多糖具有调节肿瘤微环境的作用，本发明中的党参多糖可以通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫激活及抑制前列腺癌成纤维细胞生长等多途径调节肿瘤微环境，表明其具有良好的辅助抑制前列腺癌肿瘤作用。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明属于多糖【技术领域】，具体涉及一种党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌 功效的功能食品中的应用。 党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用
【背景技术】
[0002] 免疫负调控研究为肿瘤治疗提供了新策略。肿瘤微环境中，存在着大量的负调控 细胞，它们相互作用，相互影响，伴随着肿瘤细胞和微环境的共进化。由于肿瘤细胞的免疫 原性改变和非正常生长，刺激成纤维细胞释放炎症因子，抗原提呈细胞传递肿瘤抗原信号， 共同招募免疫细胞浸润到肿瘤局部，而且肿瘤细胞的异常增殖引起对邻近细胞的压迫，导 致缺血坏死等组织损伤，产生大量的炎性因子，因此肿瘤局部处于非可控性炎症状态，导致 微环境免疫负调控的形成，诱导肿瘤相关成纤维细胞（CAF)和髓样抑制性细胞(MDSC)的形 成，ILKKTGF-β诱导巨噬细胞由杀伤性的Ml型转变为免疫抑制性的M2型；调节性T细胞 在肿瘤局部显著增加。其结果是抑制细胞毒性T细胞（CTL)、自然杀伤细胞（NK)的活性，维 持肿瘤局部的免疫耐受状态。以肿瘤微环境中的免疫负调控细胞为靶点，抑制其生长，诱导 其分化，从而解除肿瘤微环境中的免疫负调控状态，才能维持肿瘤细胞处于休眠状态或者 逆转激活状态的肿瘤细胞重新回到休眠状态，就能达到预防肿瘤发生的目的。
[0003] 近年来的研究发现，多糖就具有显著地抗肿瘤活性并且对人体的毒副作用相对较 小，对多糖的生物活性研究在医学领域已经成为国内外专家学者研究的热点。近年发现一 些多糖及其复合物对多种疾病，如免疫紊乱、癌症、糖尿病、高血压、肝炎、血栓、肺炎、病毒 等都具有显著疗效，并且参与细胞各种生命现象的调节。
[0004] 中药党参为桔梗科多年生草本植物党参、素花党参、川党参及其同属多种植物的 根。党参为中国常用的传统补益药，古代以山西上党地区出产的党参为上品，具有补中益 气，健脾益肺之功效。现代研究，党参含多种糖类、酚类、留醇、挥发油、黄芩素葡萄糖甙、皂 甙及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。此 外对化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。但气滞、肝火盛者禁用；邪盛而正不虚者不宜 用。目前尚无以党参为原料制备多糖组分，用于制备具有辅助抑制前列腺癌的保健食品的 应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品 中的应用。
[0006] 其中所述的辅助抑制前列腺癌功效是指通过抑制前列腺癌肿瘤新生血管生成、免 疫激活及抑制前列腺癌成纤维细胞生长功效，调节前列腺癌肿瘤微环境，从而起到辅助抑 制前列腺癌功效。
[0007] 作为本发明的一种实施方式，本发明中的党参多糖优选通过以下方法制备获得： 以党参为原料，经含沸水提取、去蛋白、透析和乙醇处理工序制备获得，所述的党参多糖具 有调节肿瘤微环境的作用。
[0008] 作为本发明的一种优选的实施方式，本发明所述的党参多糖具体通过以下方法制 备获得：以党参为原料，用沸水多次提取后，合并提取液，将提取液浓缩得浓缩液，在浓缩液 中加入三氯乙酸水溶液进行去蛋白处理，去蛋白后将反应液进行中和、扎袋透析处理，将透 析袋内反应液进行浓缩、离心处理，取上清液加入乙醇进行醇沉、干燥处理，即得党参多糖。
[0009] 本发明在党参多糖的制备过程中，各工序的具体参数优选如下： 沸水提取时，提取次数为1飞次，每次提取时沸水的用量为党参总质量的5~20倍，每 次提取时间为1.5~5 h。
[0010] 沸水提取时，提取次数较佳为3次，其中第一次提取时，沸水的用量优选为原料 党参总质量的ΚΓ20倍，提取2~5 h;第二次提取时，沸水的用量优选为原料党参总质量的 ΚΓ20倍，提取1.5?5h;第三次提取时，沸水的用量优选为原料党参总质量的ΚΓ20倍，提 取1. 5?5 h。 toon] 将提取液优选浓缩至原提取液总体积的约1/10得浓缩液。
[0012] 本发明所述的三氯乙酸水溶液的质量百分含量优选为35%，去蛋白处理时间优选 为：Γ6 h，三氯乙酸水溶液的体积优选与浓缩液的体积相同。
[0013] 中和处理时可以采用质量百分含量为10%的氢氧化钠水溶液。
[0014] 扎袋透析处理时优选采用截留分子量3500Da的透析袋进行透析处理。
[0015] 乙醇进行醇沉处理时优选采用体积百分含量优选为70?95%的乙醇水溶液。
[0016] 浓缩可以采用多种现有技术中的浓缩方式，其中以真空浓缩最佳。真空浓缩时温 度优选为40°c。
[0017] 本发明中的党参多糖，可以直接口服，也可以制成药剂学上所说的多种剂型，如胶 囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等，食用后具有辅助抑制前列腺癌肿瘤的功效。
[0018] 因此，本发明所述功能食品的剂型优选为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有如下优点： (1) 本发明中的党参多糖，其纯度和活性高，可以通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫激 活及抑制前列腺癌成纤维细胞生长等多途径调节肿瘤微环境，其具有良好的辅助抑制前列 腺癌肿瘤作用； (2) 本发明中的党参多糖的制备方法，工艺简单稳定高效，适合工业化生产，成本低； (3) 本发明中的党参多糖，可以用于制备具有辅助抑制前列腺癌肿瘤功效的功能食品。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1是本发明实施例4中党参多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光 素酶的活性； 图2是本发明实施例5中党参多糖具有激活带有NF- κ B报告基因的荧光素酶的活性； 图3是本发明实施例6中党参多糖可抑制前列腺癌成纤维细胞的生长。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明，但不以任何形式限制本发明。
[0022] 以下实施例中采用的各原料，如无特殊说明，均为市售产品。
[0023] 实施例1 本实施例中的党参多糖，通过以下方法制备获得：取党参原料，采用沸水提取，第一次 提取时，水的用量为原料总质量的20倍，煮沸5 h ;第二次提取时，水的用量为原料总质量 的20倍，煮沸3 h;第三次提取时，水的用量为原料总质量的10倍，煮沸2 h过滤，合并滤 液，真空浓缩至原来体积的大约1/10,下同。将浓缩液进行三氯乙酸除蛋白处理，加入同体 积(下同）的30%三氯乙酸（质量百分比），处理时间为4 h后，用10% NaOH (质量百分比） 中和，下同，中和后将反应液置于透析袋中扎袋透析，透析时透析袋的截留分子量通常约为 3500Da，下同，然后将透析袋内液浓缩，离心，取上清液加入：Γ4倍体积的85%乙醇水溶液 (体积百分含量）进行醇沉淀处理，取沉淀物经含真空干燥(约40°C，下同）处理得党参多糖 组分。
[0024] 实施例2 本实施例中的党参多糖，通过以下方法制备获得：取党参原料，采用沸水提取，第一次 提取时，水的用量为党参原料总质量的15倍，煮沸5 h ;第二次提取时，水的用量为党参原 料总质量的15倍，煮沸3 h ;第三次提取时，水的用量为党参原料总质量的10倍，煮沸3 h 过滤，合并滤液，真空浓缩。将浓缩液进行三氯乙酸除蛋白处理，加入同体积的25%三氯乙 酸（质量百分比），处理时间为3 h后，用10% NaOH (质量百分比）中和，中和后将反应液 置于透析袋中扎袋透析，然后将透析袋内液浓缩，离心，取上清液加入:Γ4倍体积的70%乙 醇水溶液(体积百分含量）进行醇沉淀处理，取沉淀物经含真空干燥处理得党参多糖组分。
[0025] 实施例3 本实施例中的党参多糖，通过以下方法制备获得：取党参原料，采用沸水提取，第一次 提取时，水的用量为党参原料总质量的10倍，煮沸3 h ;第二次提取时，水的用量为党参原 料总质量的20倍，煮沸3 h;第三次提取时，水的用量为党参原料总质量的10倍，煮沸5 h 过滤，合并滤液，真空浓缩，将浓缩液进行三氯乙酸除蛋白处理，加入同体积的15%三氯乙 酸（质量百分比），处理时间为5 h后，用10% NaOH (质量百分比）中和，中和后将反应液 置于透析袋中扎袋透析，然后将透析袋内液浓缩，离心，取上清液加入:Γ4倍体积的95%乙 醇水溶液(体积百分含量）进行醇沉淀处理，取沉淀物经含真空干燥处理得党参多糖组分。
[0026] 实施例4党参多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性 C2C12细胞株购自中科院细胞库，C2C12- pGFl-BRE细胞株由中国科学院上海药物研究 所丁侃实验室构建，保存于液氮中。C2C12- pGFl-BRE细胞用含10 % Gibco胎牛血清DMEM 培养基培养，置于37°C饱和湿度、含5% C02的恒温箱中培养，以1 X 104细胞/孔的密度接 种于96孔板内，每孔100 μ L。贴壁24 h后吸去60 μ L培养基，加配置好相应浓度的样 品（来自实施例1中的党参多糖样品）50 μ L，终浓度分别为0· 5 mg/mL、0· 1 mg/mL、0· 02 mg/mL，10 ULBMP2调整至终浓度200 ng/mL。同时设空白组和BMP2组对照。给药16 h后 吸去培养基，加20 μ LR印orter Lysis IX Buffer，将溶解的细胞裂解液20 μ L转移至白 板，加入40 μ L luciferase底物，于3分钟内读板，读取RLU值。采用SPSS统计软件进行 统计学处理。数据均以均数土标准差（.Z ±s)表示，两组间比较采用独立样本?检验， 多组间比较采用单因素方差分析。
[0027] 实验结果如图1所示，党参多糖在0.02 mg/mL低浓度下具有抑制ΒΜΡ2诱导的带有 BRE报告基因的荧光素酶的活性，且该活性随多糖浓度增加而显著增加，表明该多糖在该活 性方面具有剂量依赖性。已知肿瘤新生血管生成在肿瘤的发生发展过程中起着关键作用， 而BMP2信号通路在肿瘤新生血管生成过程中起关键作用。该多糖可显著抑制BMP2信号通 路，表明该多糖具有潜在的调节肿瘤微环境功效。
[0028] 实施例5党参多糖能激活带有NF- κ B报告基因的荧光素酶的活性 THP-1细胞株购自中科院细胞库，THP-l/pGFl-NF-κΒ细胞株由中国科学院上海药 物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。THP-l/pGFl-NF-κΒ细胞用含10%胎牛血清 RPMI-1640培养基培养。置于37 °C饱和湿度、含5% 0)2的恒温箱中培养，以5X104细胞/ 孔的密度接种于96孔板内，每孔50 μ L容积。加入受试样品（实施例1中的党参多糖）50 μ L，终浓度分别为0· 5 mg/mL、0· 1 mg/mL、0· 02 mg/mL，同时设立空白组和LPS对照组。力口 入LPS溶液10 μ L，终浓度为1 μ g/mL，置于37° C饱和湿度、含5% C02的恒温箱中培养 过夜。培养过夜后，每空加入1〇〇 yL Bright-Glo? Luciferase Assay System底物，于酶 标仪读板，读取RLU值。
【权利要求】
1. 党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中的应用。
2. 根据权利要求1所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：所述的辅助抑制前列腺癌功效是指通过抑制前列腺癌肿瘤新生血管生 成、免疫激活及抑制前列腺癌成纤维细胞生长功效，调节前列腺癌肿瘤微环境，从而起到辅 助抑制前列腺癌功效。
3. 根据权利要求1所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品 中的应用，其特征是：所述的党参多糖通过以下方法制备获得：以党参为原料，经含沸水提 取、去蛋白、透析和乙醇处理工序制备获得，所述的党参多糖具有调节肿瘤微环境的作用。
4. 根据权利要求3所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：所述的党参多糖具体通过以下方法制备获得：以党参为原料，用沸水多 次提取后，合并提取液，将提取液浓缩得浓缩液，在浓缩液中加入三氯乙酸水溶液进行去蛋 白处理，去蛋白后将反应液进行中和、扎袋透析处理，将透析袋内反应液进行浓缩、离心处 理，取上清液加入乙醇进行醇沉、干燥处理，即得党参多糖。
5. 根据权利要求4所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：沸水提取时，提取次数为1飞次，每次提取时沸水的用量为党参总质量 的5~20倍，每次提取时间为1. 5~5 h。
6. 根据权利要求4所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：去蛋白时采用三氯乙酸水溶液，所述三氯乙酸水溶液的质量百分含量为 35%，处理时间为：Γ6 h。
7. 根据权利要求4所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：乙醇处理时采用体积百分含量为7(Γ95%的乙醇水溶液。
8. 根据权利要求4所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：透析时透析袋的截留分子量为3500Da。
9. 根据权利要求1所述的党参多糖在制备具有辅助抑制前列腺癌功效的功能食品中 的应用，其特征是：所述功能食品的剂型为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液。
【文档编号】C08B37/00GK104116025SQ201410273729
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年6月19日 优先权日:2014年6月19日
【发明者】马方励, 胡明华, 王培培, 梁明, 陈伟鸿 申请人:无限极（中国）有限公司