一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方的制作方法
【专利摘要】本发明为一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方，属于抗病毒中兽药研究【技术领域】。分别提取制备黄精多糖、硫酸化党参多糖，以糖含量按9∶1组方，对鸡新城疫病毒有显著的抑制作用，可以开发成兽用抗病毒新药。
【专利说明】一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方
一、【技术领域】
[0001]本发明一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方，属于抗病毒中兽药研究【技术领域】。
二、【背景技术】
[0002]动物传染病尤其是病毒性传染病一直严重威胁养殖业的发展，造成巨大的经济损失。防控这类疾病主要靠接种疫苗预防，但是由于种种原因，仍难以完全控制其爆发，如鸡新城疫、禽流感、猪瘟等。这些疾病一旦发病，尚无特效的药物治疗。一些细胞因子虽有一定疗效，由于其价格昂贵，很难在畜禽养殖业中推广应用。因此，寻找安全有效的新型抗病毒药物一直是兽医领域研究的热点。
[0003]大量研究表明，许多中药及其有效成分具有一定的抗病毒作用，但是它们的作用较弱，尤其是中药，由于成分复杂，质量难以控制，国外难以接受。最近的研究证实，硫酸化修饰能进一步提高中药多糖的抗病毒活性，硫酸化多糖复方的作用显著强于单味组分药。进一步的研究发现，虽然硫酸化多糖复方有较好的作用，但通过人工合成硫酸化多糖的成本较高，安全性降低，不利于在兽医临床上推广应用。用部分多糖替代硫酸化多糖后，复方的功效不减，但成本显著降低，安全性提高，更有利于在兽医临床上推广应用。
[0004]本发明通过中药多糖的活性比较与筛选、多糖的硫酸化修饰与活性比较、组方筛选、配伍比例筛选等一系列研究，筛选出一种安全、有效、质量可控、在兽医临床有应用前景的抗新城疫病毒中药多糖复 方。
三、
【发明内容】
[0005]技术问题本发明针对兽医临床缺乏抗病毒药物的问题，提供一种安全、有效、在兽医临床有应用前景的抗病毒中药多糖复方。
[0006]技术方案一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方，包括:提取5种多糖，制备4种硫酸化多糖和15个多糖-硫酸化多糖复方，测定它们细胞毒性和抗病毒活性，筛选出抗病毒活性最强的复方。其特征在于，黄精多糖和硫酸化党参多糖以糖含量按9: I组方对新城疫病毒的抑制作用最为显著。
[0007]有益效果本发明提供一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方，可开发成为兽用抗病毒新药，在动物生产上推广应用，有效地提高动物疫病的防控效果，保障养殖业的健康发展。
[0008]与现有技术相比，本发明优点如下:
[0009]1.从生产需要方面，动物疫病防控缺乏有效、安全、经济的中西药物，本发明提供一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方，可开发成兽用抗病毒新药，填补国内外兽药研究的空白。
[0010]2.从中兽药研究方面，本发明应用分子修饰技术对中药多糖进行结构改造，以多糖-硫酸化多糖组方，不仅药效可靠，而且成分明确，质量可控，国内外未见报道。[0011]3.与全硫酸化多糖复方相比，本发明的药效不降低，但成本大大降低(9份多糖的纯化和硫酸化修饰费用)，安全性提高、有利于在兽医临床上推广应用。
四、【专利附图】
【附图说明】
图1是各组的最闻病毒抑制率的不意图。
注:CP-sCA，党参多糖加硫酸化当归多糖复方；EP-sAP，淫羊藿多糖加硫酸化黄芪多糖复方；EP-sCA，淫羊藿多糖加硫酸化当归多糖复方；CA-sEP，当归多糖加硫酸化淫羊藿多糖复方；SR-sCP黄精多糖加硫酸化党参多糖复方JS9-SPS1，多糖与硫酸化多糖的配比为9:1 ；PS7-SPS3，多糖与硫酸化多糖的配比为7:3 ;PS6-sPS4，多糖与硫酸化多糖的配比为6:4。a_h柱上标注字母不同者差异显著(P〈0.05)。
五、【具体实施方式】
[0012]1.多糖提取和硫酸化多糖的制备
[0013]当归多糖(CA)、黄芪多糖(AP)、淫羊藿多糖(EP)、党参多糖(CP)和黄精多糖(SR)，分别用水煎醇沉法提取；硫酸化当归多糖(sCA)、硫酸化黄芪多糖(sAP)、硫酸化淫羊藿多糖(sEP)和硫酸化党参多糖(sCP)，分别用氯磺酸-吡啶法制备，用硫酸-苯酚法测定多糖含量，氯化钡-明胶法测定硫酸基取代度。
[0014]2.多糖-硫酸化多糖复方的制备
[0015]五种组方分别由党参多糖加硫 酸化当归多糖(CP-sCA)、淫羊藿多糖加硫酸化黄芪多糖(EP-sAP)、淫羊藿多糖加硫酸化当归多糖(EP-sCA)、当归多糖加硫酸化淫羊藿多糖(CA-sEP)、黄精多糖加硫酸化党参多糖(SR-sCP)组成，各组方再分别按照多糖(PS)与硫酸化多糖(sPS)糖含量比为 9: I(PS9-SPS1)J: 3 (PS7-SPS3)、6: 4 (PS6_sPS4)配成 3 个复方，共15个方剂。
[0016]3.多糖复方的细胞毒性测定
[0017]将15个方剂分别用MEM培养液自500 ii g ? mL—1倍比稀释至0.977 u g ? mL—1共10个浓度。取9日龄SPF鸡胚(购于南京药械厂)制备鸡胚成纤维细胞(CEF)。将细胞浓度调整到5X105 ?mL—1，接种于96孔细胞培养板，每孔IOOy L，置38.5°C>5% CO2培养箱培养24h，加入各浓度的方剂，每浓度重复4孔，另设细胞对照孔，37°C、5% CO2条件下培养72h，用MTT法测定细胞A57tl值。以A57tl值不显著小于细胞对照孔A57tl值的最高浓度作为该方剂的最大安全浓度。结果，各方剂的最大安全浓度在31.25~7.813 ii g ? ml/1。为便于统一比较，将各方剂最大安全浓度统一设定为7.813 V- g ? ml/1。
[0018]4.多糖复方的抗病毒活性的比较
[0019]将各复方分别从7.倍比稀释至0.4881^1171共5个浓度。培养CEF，待细胞长成单层时，每孔加入IOOTCID5ci的鸡新城疫病毒(La Sota strain IV)液IOOii L，置CO2培养箱孵育2h，除去病毒液，分别加入各浓度的方剂。每浓度重复4孔，同时设病毒对照组(VC，只加病毒)、细胞对照组(CC，只加丽培养液)和空白对照组(BC，不加细胞)，37 °C、5 % CO2条件下培养72h，用MTT法测定细胞A570值，作为各方剂抗病毒作用的指标(A57tl值越大，抗病毒作用越强)；并计算最高病毒抑制率(%)[=(最高 A 多糖+病毒_ A病毒对照)/( A细胞对照_ A mmm) X 100%],比较各方剂抗病毒作用的强弱。结果如下:
[0020](I)PS9-SPS1各组的抗病毒活性[0021]各复方组在7.813~0.488的细胞A57tl值均显著高于病毒对照组(P< 0.05)(表1)，表明它们在这些浓度均具有显著的抗病毒作用。
[0022]表1 PS9-SPS1各组的细胞A57。值
[0023]
【权利要求】
1.一种具有抗新城疫病毒作用的中药多糖复方，其特征在于，以糖含量计，黄精多糖9份，硫酸化党参多糖1份。
2.权利要求1所述 方法获得的中药多糖复方，对鸡新城疫病毒有显著的抑制作用。
【文档编号】A61K31/715GK103520201SQ201310282665
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年7月8日 优先权日:2013年7月8日
【发明者】胡元亮, 王德云, 刘翠, 赛福丁, 赵晓娜, 杨淑娟 申请人:南京农业大学