本发明属于生物技术领域，尤其涉及花椒叶蛋白的提取方法。
技术背景
目前，发展中国家都面临着蛋白质危机，我国蛋白质严重紧缺。新蛋白质资源的开发利用是当前急需解决的问题。叶蛋白原料丰富、营养价值高、食用效果好、经济效益高，是一种具有开发利用价值的新型蛋白质资源。
目前，国内外对叶蛋白的提取研究主要集中在苜蓿、桑叶、三叶草等植物上，而对花椒叶蛋白的研究国内外相关文献报道较少。
花椒叶具有很强的固氮能力，干花椒叶中粗蛋白含量达24.4％，与猪肉19.2％、羊肉22.7％、核桃仁22.4％、花生仁27.6％的氨基酸含量相差无几，是一种富含蛋白的植物，因此，从花椒叶中提取叶蛋白具有重要意义。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有技术中存在的不足，提供了花椒叶蛋白的提取方法，其特征在于，是通过以下步骤实现的：
(1) 打浆、酶解、过滤：采用料液比1: 3-5，用打浆机将洗净沥干的花椒叶打浆3-5min，然后加入（花椒叶浆质量0.1-0.3%）蛋白酶充分搅拌后静置1-2 h 进行酶解后， 用 800-2000 目滤网过滤取上清液备用。
（2）加热、发酵：将(1) 所取上清液迅速放入沸水中加热到40-45℃后加入保加利亚乳酸杆菌((1) 所取上清液质量0.01-0.03%)、嗜热链球菌((1) 所取上清液质量0.01-0.03%)、在密闭条件下发酵 36-48 小时。
（3）膜分离：将经（2）发酵过的花椒叶液用10000-50000 道尔顿膜超滤，分离出乳清溶液和蛋白溶液。
（4）吸附、酶氧化脱色：将经（3）分离出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附5-10 min，然后过滤将活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液质量0.3-0.5%) 脂肪氧合酶充分搅拌后静置1-2 h 进行酶解。
（5）干燥：将经（4）吸附、酶氧化脱色后的花椒叶蛋白溶液采用真空冷冻干燥制得白色花椒叶蛋白粉。冻干工艺参数：物料厚度8-9 mm，预冻温度-35--40℃，预冻时间2-2.5h，升华时加热板温度45-50℃，干燥仓工作压力22-26Pa，解析时加热板温度60-65℃。
步骤（1）中的蛋白酶含量为花椒叶浆质量的0.1-0.3%。
步骤（2）中保加利亚乳酸杆菌含量为所取步骤(1) 上清液质量0.01-0.03%、嗜热链球菌含量为步骤(1) 所取上清液质量0.01-0.03%。
步骤（4）中脂肪氧合酶含量为蛋白溶液质量的0.3-0.5%。
本发明的优点 ：本发明以花椒叶为原料经→打浆→酶解→过滤→加热→发酵→膜分离→吸附→酶氧化脱色→真空冷冻干燥，得到的花椒叶蛋白的提取率为50.32%，花椒叶蛋白得率为7.45%，花椒叶蛋白的颜色为白色，无草腥味，蛋白质量分数为63.24%。
具体实施方式
实施例1
(1) 打浆、酶解、过滤：采用料液比1: 3，用打浆机将洗净沥干的花椒叶打浆3min，然后加入（花椒叶浆质量0.1%）蛋白酶充分搅拌后静置1h 进行酶解后， 用 800 目滤网过滤取上清液备用。
（2）加热、发酵：将(1) 所取上清液迅速放入沸水中加热到40℃后加入保加利亚乳酸杆菌((1) 所取上清液质量0.01%)、嗜热链球菌((1) 所取上清液质量0.01%)、在密闭条件下发酵 36 小时。
（3）膜分离：将经（2）发酵过的花椒叶液用10000 道尔顿膜超滤，分离出乳清溶液和蛋白溶液。
（4）吸附、酶氧化脱色：将经（3）分离出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附5 min，然后过滤将活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液质量0.3%) 脂肪氧合酶充分搅拌后静置1 h进行酶解。
（5）干燥：将经（4）吸附、酶氧化脱色后的花椒叶蛋白溶液采用真空冷冻干燥制得白色花椒叶蛋白粉。冻干工艺参数：物料厚度8 mm，预冻温度-35℃，预冻时间2h，升华时加热板温度45℃，干燥仓工作压力22Pa，解析时加热板温度60℃。
实施例2
(1) 打浆、酶解、过滤：采用料液比1: 5，用打浆机将洗净沥干的花椒叶打浆5min，然后加入（花椒叶浆质量0.3%）蛋白酶充分搅拌后静置2 h 进行酶解后， 用2000 目滤网过滤取上清液备用。
（2）加热、发酵：将(1) 所取上清液迅速放入沸水中加热到45℃后加入保加利亚乳酸杆菌((1) 所取上清液质量0.03%)、嗜热链球菌((1) 所取上清液质量0.03%)、在密闭条件下发酵48 小时。
（3）膜分离：将经（2）发酵过的花椒叶液用50000 道尔顿膜超滤，分离出乳清溶液和蛋白溶液。
（4）吸附、酶氧化脱色：将经（3）分离出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附10 min，然后过滤将活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液质量0.5%) 脂肪氧合酶充分搅拌后静1-2 h进行酶解。
（5）干燥：将经（4）吸附、酶氧化脱色后的花椒叶蛋白溶液采用真空冷冻干燥制得白色花椒叶蛋白粉。冻干工艺参数：物料厚度9 mm，预冻温度-40℃，预冻时间2.5 h，升华时加热板温度50℃，干燥仓工作压力26Pa，解析时加热板温度65℃。
实施例3
(1) 打浆、酶解、过滤：采用料液比1: 4，用打浆机将洗净沥干的花椒叶打浆4min，然后加入（花椒叶浆质量0.2%）蛋白酶充分搅拌后静置1.5 h 进行酶解后， 用 1500 目滤网过滤取上清液备用。
（2）加热、发酵：将(1) 所取上清液迅速放入沸水中加热到42℃后加入保加利亚乳酸杆菌((1) 所取上清液质量0.02%)、嗜热链球菌((1) 所取上清液质量0.02%)、在密闭条件下发酵 40 小时。
（3）膜分离：将经（2）发酵过的花椒叶液用30000 道尔顿膜超滤，分离出乳清溶液和蛋白溶液。
（4）吸附、酶氧化脱色：将经（3）分离出的蛋白溶液中放入活性炭粉吸附5-10min，然后过滤将活性炭粉清除，再加入( 蛋白溶液质量0.4%) 脂肪氧合酶充分搅拌后静置1.5 h 进行酶解。
（5）干燥：将经（4）吸附、酶氧化脱色后的花椒叶蛋白溶液采用真空冷冻干燥制得白色花椒叶蛋白粉。冻干工艺参数：物料厚度8 mm，预冻温度-37℃，预冻时间2 h，升华时加热板温度47℃，干燥仓工作压力24Pa，解析时加热板温度62℃。
以上关于本发明的具体描述，仅用于说明本发明而并非受限于本发明实施例索描述的技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换。