本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种感受态细胞的制备方法及其转化方法。
背景技术：
转化是将外源dna分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。这是现代分子生物学最基本的操作技术。转化效率直接影响前后试验的进展和工作效率，而感受态细胞的状态是影响转化效率最直接、关键的因素之一。通常有两种方法获得感受态细胞，一种是购于商业公司，这种感受态通常有较高的转化效率，每微克质粒dna产生108个转化克隆的转化效率，但价格比较昂贵。另一种方法是实验室自己制备。目前常用的感受态细胞制备方法有cacl2和rbcl/kcl法。rbcl/kcl法的感受态细胞转化效率较高，但需要特殊的试剂rbcl，cacl2法简便易行，但转化效率较低。除上述两种方法外，还有制备超级感受态细胞的inoue法和电穿孔法，inoue法细菌的培养条件是18℃，一般的实验室很难达到。电穿孔法要求电穿孔仪，一般实验室不具有该设备。因而，研究一种转化效率高，重复性好，操作简单适用于普通实验室的感受态制备方法对与分子生物学的研究尤为必要，对分子克隆实验具有重要意义。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明旨在提供一种转化效率高的感受态细胞的制备方法。
一种感受态细胞的制备方法，包括如下步骤：
（1）挑取大肠杆菌单菌落，在装有5mllb液体培养基的试管中37℃200rpm振荡培养过夜；将培养的5ml菌体全部倒入装有100mllb液体培养基的1000ml三角瓶中，37℃振荡培养2h，至od600值为0.5；
（2）将培养好的菌液转至冰预冷的50ml离心管中，在冰上放置30min；
（3）4℃，4000rpm离心10min，弃上清，倒置1min使溶液流尽，回收菌体；
（4）每个50ml离心管中加入原菌液1/10倍体积的预冷0.1mcacl2，枪头吹打重悬菌体；冰浴10min，4℃，4000rpm离心10min，回收菌体；
（5）重复步骤4一次；
（6）每50ml培养液用2ml冰预冷的0.1mcacl2重悬，加入甘油终浓度为15%-20%；
（7）分装1.5mlep管中，每管50μl，液氮冻存后-80℃保存备用。
上述感受态细胞的转化方法，包括如下步骤：
（1）取50μl感受态细胞，加5μl连接产物，轻轻混匀，冰上放置30min；
（2）42℃热激90s，冰上放置2min；
（3）加800μllb培养基，37℃200rpm振荡培养1h；
（4）室温4000rpm离心5min，吸出部分上清，用剩余培养基悬浮菌体；
（5）将细菌涂布于含有氨苄的固体lb培养基平板上；
（6）将平板在37℃正向放置1h吸收多余液体，倒置培养过夜。
本发明的感受态细胞制备方法简单、成本低，且转化率高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
一种感受态细胞的制备方法，包括如下步骤：
（1）挑取大肠杆菌单菌落，在装有5mllb液体培养基的试管中37℃200rpm振荡培养过夜；将培养的5ml菌体全部倒入装有100mllb液体培养基的1000ml三角瓶中，37℃振荡培养2h，至od600值为0.5；
（2）将培养好的菌液转至冰预冷的50ml离心管中，在冰上放置30min；
（3）4℃，4000rpm离心10min，弃上清，倒置1min使溶液流尽，回收菌体；
（4）每个50ml离心管中加入原菌液1/10倍体积的预冷0.1mcacl2，枪头吹打重悬菌体；冰浴10min，4℃，4000rpm离心10min，回收菌体；
（5）重复步骤4一次；
（6）每50ml培养液用2ml冰预冷的0.1mcacl2重悬，加入甘油终浓度为15%-20%；
（7）分装1.5mlep管中，每管50μl，液氮冻存后-80℃保存备用。
上述感受态细胞的转化方法，包括如下步骤：
（1）取50μl感受态细胞，加5μl连接产物，轻轻混匀，冰上放置30min；
（2）42℃热激90s，冰上放置2min；
（3）加800μllb培养基，37℃200rpm振荡培养1h；
（4）室温4000rpm离心5min，吸出部分上清，用剩余培养基悬浮菌体；
（5）将细菌涂布于含有氨苄的固体lb培养基平板上；
（6）将平板在37℃正向放置1h吸收多余液体，倒置培养过夜。