蛋白质的制作方法

文档序号:12480915阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分离的具有木聚糖酶活性的多肽,所述多肽选自:

(a)包含与SEQ ID NO:1具有至少87%同一性的氨基酸序列的多肽;

(b)由与SEQ ID NO:2具有至少87%同一性的多核苷酸编码的多肽;或者

(c)a)或b)的多肽的片段,其片段具有木聚糖酶活性。

2.根据权利要求1所述的多肽,其中所述多肽包含选自下列的氨基酸序列:SEQ ID No.1、SEQ ID No:3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9和SEQ ID No.11。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的多肽,其中所述多肽由选自下列的氨基酸序列组成:SEQ ID No.1、SEQ ID No:3、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9和SEQ ID No.11。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽,其中所述多肽由选自下列的多核苷酸编码:SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10和SEQ ID No.12。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的多肽,其中所述多肽为内切-1,4-β-木聚糖酶。

6.根据前述权利要求中任一项所述的多肽,其中所述多肽在pH 6下于65℃温育10分钟之后具有至少50%的木聚糖酶活性的残留活性,并且/或者在pH 6下于61℃温育10分钟之后具有至少80%的木聚糖酶活性的残留活性。

7.根据前述权利要求中任一项所述的多肽,其中所述多肽在与含0.2mg/ml胃蛋白酶的缓冲溶液在pH 3.5下于40℃的温度温育两小时之后具有至少70%的残留活性。

8.根据前述权利要求中任一项所述的多肽,其中在包含所述多肽的饲料经干蒸汽处理以在30秒后达到90℃的目标温度之后,所述多肽具有至少60%(优选至少80%)的木聚糖酶活性的残留活性。

9.一种分离的包含编码权利要求1-16中任一项所述的多肽的核苷酸序列的多核苷酸(例如cDNA)。

10.一种分离的包含与SEQ ID NO:2具有至少87%同一性的多核苷酸的多核苷酸(例如cDNA);或者一种分离的因遗传密码的简并性而不同于SEQ ID No.2的多核苷酸。

11.一种分离的选自下列的多核苷酸(例如cDNA):SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10和SEQ ID No.12,或者一种分离的因遗传密码的简并性而不同于SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10和SEQ ID No.12的多核苷酸。

12.一种包含权利要求9至11中任一项所述的多核苷酸的核酸构建体,所述多核苷酸有效连接至一个或多个指导表达宿主中所述多肽产生的控制序列。

13.一种包含权利要求12所述的核酸构建体的重组表达载体。

14.一种重组宿主细胞,所述重组宿主细胞包含权利要求8-11中任一项所述的多核苷酸、权利要求12所述的核酸构建体、或权利要求13所述的载体。

15.一种用于生产权利要求1-8中任一项所述的多肽的方法,所述方法包括:(a)在有利于产生所述多肽的条件下培养包含根据权利要求12所述的核酸构建体的宿主细胞;以及(b)回收所述多肽。

16.根据权利要求15所述的方法,其中对所述多肽进行回收。

17.根据权利要求15或权利要求16所述的方法,其中所产生的多肽是分离的和/或纯化的。

18.一种通过权利要求15至17中任一项所述的方法生产的发酵物。

19.一种通过权利要求15至17中任一项所述的方法生产的多肽。

20.一种宿主细胞,所述宿主细胞已经用编码权利要求1-8中任一项所述的多肽的多核苷酸、权利要求8-11中任一项所述的多核苷酸、权利要求12所述的核酸构建体、或权利要求13所述的载体进行转化。

21.一种酶组合物,所述酶组合物包含根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的多肽。

22.一种饲料添加剂组合物,所述饲料添加剂组合物包含根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的多肽。

23.一种预混物,所述预混物包含根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的多肽、或根据权利要求21所述的酶组合物、或根据权利要求22所述的饲料添加剂组合物以及至少一种维生素和/或至少一种矿物质。

24.根据权利要求22所述的饲料添加剂组合物或根据权利要求23所述的预混物,所述饲料添加剂组合物或所述预混物还包含一种或多种选自下列的酶:淀粉酶(包括α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、G4-形成淀粉酶(E.C.3.2.1.60)、β-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)和γ-淀粉酶(E.C.3.2.1.3));和/或蛋白酶(例如枯草杆菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢杆菌溶素(E.C.3.4.24.28)或碱性丝氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))和/或植酸酶(例如6-植酸酶(E.C.3.1.3.26)或3-植酸酶(E.C.3.1.38))。

25.一种饲料(或喂养料),其包含根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的多肽、或根据权利要求21所述的酶组合物、或根据权利要求22或权利要求24所述的饲料添加剂组合物、或根据权利要求23或权利要求24所述的预混物。

26.一种制备喂养料的方法,所述方法包括使饲料组分与根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的木聚糖酶、或根据权利要求21所述的酶组合物、或根据权利要求22或权利要求24所述的饲料添加剂组合物、或根据权利要求23或权利要求24所述的预混物相混合。

27.一种用于降解含木聚糖材料中含阿拉伯聚糖材料的方法,所述方法包括使所述含木聚糖材料与根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的木聚糖酶、或根据权利要求21所述的酶组合物、或根据权利要求22或权利要求24所述的饲料添加剂组合物、或根据权利要求23或权利要求24所述的预混物相混合。

28.根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的木聚糖酶、或根据权利要求21所述的酶组合物、或根据权利要求22或权利要求24所述的饲料添加剂组合物、或根据权利要求23或权利要求24所述的预混物用于使含木聚糖材料中阿拉伯聚糖增溶的用途。

29.根据权利要求27或28中任一项所述的方法或用途,其中所述阿拉伯聚糖是不溶性阿拉伯聚糖(AXinsol)。

30.根据权利要求27至29中任一项所述的方法或用途,其中所述含木聚糖材料选自下列中的一者或多者:饲料或喂养料;饲料组分;谷物基材料;麦芽浆;麦芽汁;麦芽;发芽大麦;助剂,大麦麦芽浆;和谷类面粉。

31.根据权利要求30中任一项所述的方法或用途,其中所述饲料或喂养料或饲料组分包括玉米、DDGS(诸如cDDGS)、小麦、麦麸或它们的组合或者由这些物质组成。

32.根据权利要求30或权利要求31所述的方法或用途,其中所述饲料或喂养料为玉米基喂养料。

33.根据权利要求27至32中任一项所述的方法或用途,其中所述多肽与选自下列的酶中的一种或多种组合使用:内切葡聚糖酶(E.C.3.2.1.4);纤维二糖水解酶(E.C.3.2.1.91)、β-葡糖苷酶(E.C.3.2.1.21)、纤维素酶(E.C.3.2.1.74)、地衣多糖酶(E.C.3.2.1.73)、脂酶(E.C.3.1.1.3)、脂质酰基转移酶(通常归类为E.C.2.3.1.x)、磷脂酶(E.C.3.1.1.4、E.C.3.1.1.32或E.C.3.1.1.5)、植酸酶(例如6-植酸酶(E.C.3.1.3.26)或3-植酸酶(E.C.3.1.3.8)、淀粉酶、α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)、其它木聚糖酶(E.C.3.2.1.8、E.C.3.2.1.32、E.C.3.2.1.37、E.C.3.2.1.72、E.C.3.2.1.136)、葡糖淀粉酶(E.C.3.2.1.3)、半纤维素酶、蛋白酶(例如枯草杆菌蛋白酶(E.C.3.4.21.62)或芽孢杆菌溶素(E.C.3.4.24.28)或碱性丝氨酸蛋白酶(E.C.3.4.21.x)或角蛋白酶(E.C.3.4.x.x))、脱支酶、角质酶、酯酶和/或甘露聚糖酶(例如β-甘露聚糖酶(E.C.3.2.1.78))。

34.根据权利要求27至33中任一项所述的方法或用途,所述方法或用途包括对受试者施用根据权利要求1-8中任一项所述的多肽、或根据权利要求18所述的发酵物、或根据权利要求19所述的木聚糖酶、或根据权利要求21所述的酶组合物、或根据权利要求22或权利要求24所述的饲料添加剂组合物、或根据权利要求23或权利要求24所述的预混物、或根据权利要求25所述的喂养料。

35.根据权利要求27至33中任一项所述的方法或用途,其中所述方法或用途为小麦谷朊蛋白-淀粉分离工艺(或其一部分)。

36.根据权利要求27至33中任一项所述的方法或用途,其中所述方法或用途为生物燃料(例如生物乙醇)或生化物质(例如生物基异戊二烯)生产工艺(或其一部分)。

37.根据权利要求27至33中任一项所述的方法或用途,其中所述方法或用途为麦芽制造或酿造工艺(或其一部分)。

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