鞘翅目有害生物的生物控制的制作方法

相关申请本申请要求2014年12月23日提交的临时申请62/096,491的权益，并且该临时申请通过引用以其全部内容结合在此。序列表提供ascii文本格式的序列表作为纸质副本的替代，该序列表是根据37c.f.r.§1.821提交的，名称为“80291uspspseqlisting_st25.txt”，大小为39千字节，于2015年11月17日生成并经efs-web提交。这个序列表通过引用以其披露内容结合到本说明书中。发明领域本发明总体上涉及由其摄食活动而引起对作物植物损害的有害生物的控制，并且更具体地涉及通过包括干扰rna分子的组合物控制鞘翅目有害生物。本发明进一步涉及包括干扰rna分子的组合物并且涉及使用此类组合物的方法。背景根萤叶甲属中的昆虫种类(玉米根虫和黄瓜叶甲)被认为是对作物植物最重要的有害生物中的一些。例如，玉米根虫的种类，包括西方玉米根萤叶甲(diabroticavirgiferavirgifera)，西方玉米根虫(wcr)；巴氏根萤叶甲(d.barberi)，北方玉米根虫(ncr)，黄瓜十一星叶甲食根亚种(d.undecimpunctatahowardi)，南方玉米根虫(scr)及墨西哥玉米根萤叶甲(d.virgiferazeae)，墨西哥玉米根虫(mcr)，是北美最具破坏性的玉米有害生物，每年导致估计超过十亿美元的损失。西方玉米根虫也已经入侵欧洲并且每年导致估计五亿欧元损失。南美叶甲(除了别的之外，俗名包括叶甲、巴西小甲虫、葫芦甲虫及菊花甲虫)在南美是一种重要的玉米、大豆及花生有害生物。玉米损失的大部分由根虫幼虫摄食导致。刚孵出的根虫幼虫位于土壤中的玉米根部并且最初开始摄食细根毛并钻入玉米植物的根尖中。随着幼虫长大，它们摄食初生根并挖隧道进入其中。当根虫数量巨大时，幼虫摄食和由根腐病病原体导致的受损根的劣变可以导致根减少至茎的基部。严重的根损伤干扰根将水和营养素运输进植物的能力，减少植物生长，并且导致减少的谷物产量。严重的根损伤还可以导致玉米植物的倒伏，使得机械收获更困难或不可能。玉米根虫成虫主要摄食玉米须、花粉以及暴露的穗尖上的籽粒。如果玉米根虫成虫在玉米生殖组织存在之前开始出现，则成虫可以摄食叶组织，刮掉绿色的表面组织并且留下窗玻璃外观。成虫摄食穗丝可以导致穗尖处的穗丝减少，通常称作穗丝修剪(silkclipping)。在大田玉米中，甲虫种群在花粉散发过程中可以达到足以导致严重的穗丝修剪的程度，这可以干扰授粉并减少收率。因此，不像仅幼虫期导致损失的玉米的鳞翅目有害生物，玉米根虫的幼虫期和成虫期都能够对玉米导致经济损失。根萤叶甲属昆虫有害生物主要是通过密集应用化学杀有害生物剂来控制，这些化学杀有害生物剂通过抑制昆虫生长、预防昆虫摄食或繁殖或导致死亡而可以有效对抗幼虫期和成虫期。由此可以达到良好的昆虫控制，但这些化学品有时也会影响其他益虫。另外的问题出现在使用高杀虫剂的区域中，在这些区域中玉米根虫甲虫种群对某些杀虫剂已经变得有抗性。通过各种抗性管理实践已部分地缓和了这种状况，但对于可替代的害虫控制剂存在着越来越多的需要。来自苏云金芽孢杆菌的若干天然cry蛋白或工程化的cry蛋白已经在转基因作物植物中表达并且在商业上被开发以控制某些鳞翅目和鞘翅目昆虫有害生物。例如，起始于2003年，通过表达cry3bb1、cry34ab1/cry35ab1、或修饰的cry3a(mcry3a)或cry3ab(ecry3.1ab)蛋白而控制玉米根虫的转基因玉米杂交种在美国已经是可商购的。种子产业、大学研究员以及美国环境保护局已经一起合作来制定管理计划，以帮助缓解昆虫对表达杀虫蛋白的转基因植物的抗性的发生。它们主要是基于高剂量以及避护所策略。针对玉米的高剂量策略是使用表达甚至足够杀死部分抗性昆虫的高水平的杀虫蛋白(例如cry蛋白)的玉米杂交种。基础的假设是杀死部分抗性的昆虫并且大力防止它们交配，从而延迟了抗性的产生。高剂量策略的成功部分取决于杀虫蛋白对具体昆虫种类的特异性活性以及多少该杀虫蛋白可以被表达于转基因玉米植物中。杀虫蛋白对有害生物的特异性活性越高，需要表达于转基因植物中以实现高剂量策略的杀虫蛋白的量越少。例如，表达鳞翅目-有效cry蛋白(cry1ab)的玉米杂交种被认为对抗主要靶标有害生物欧洲玉米螟(玉米螟)是高剂量的。由于cry1ab以lc50<10ng/cm2对于欧洲玉米螟幼虫很具毒性(即，高特异性活性)，在转基因植物中可实现的cry1ab表达水平很容易将这样的玉米杂交种置于一种高剂量范畴中。然而，不像鳞翅目-有效产品，当前根虫产品不被认为是高剂量的。它们表达的蛋白不有效对抗成虫并且对晚龄幼虫具有有限活性。因此，当前转基因根虫产品允许一些根虫幼虫存活并成为成虫。因此，由玉米根虫成虫导致的穗丝修剪的经济水平仍可以甚至出现在种植为转基因玉米根虫杂交种的部分大田中。例如，西方玉米根虫成虫的密度可以在种植为转基因玉米根虫杂交种的部分大田中超过经济水平，这归因于甲虫的迁入以及成虫从转基因根系的直接羽化。已经有许多报道确认西方玉米根虫成虫羽化自某些玉米转基因根虫杂交种(crowder等人，2005.j.econ.entomol.[经济昆虫学杂志]98:534-551)。另一个出版物表明，当在大田中遇到一些转基因玉米植物或非转基因玉米植物时，西方玉米根虫成虫将展现出类似的摄食行为，并且表明转基因植物中的某些杀虫蛋白对可能影响抗性管理的成虫将具有显著效果是不太可能的。因此，鉴定具有新作用模式的替代昆虫控制试剂将是有益的。特别有用的将可以是对靶标昆虫有害生物的多个生活期具有毒性的新昆虫控制试剂。此类昆虫控制试剂可以包括靶向遗传因子(例如对于靶标昆虫有害生物的生长和存活必不可少的基因)的那些昆虫控制试剂。将调控dna元件组装成精确的染色质结构对于体内dna复制和转录均是重要的(lee等人，1993.cell[细胞]72:73-84；felsenfeld(1992)nature[自然].355:209)。在真核细胞中，核dna作为染色质结构的序位存在，从而导致核dna被压缩约10,000倍(davie和hendzel.1994.j.cell.biochem.[细胞生物化学杂志]55:98)。染色质的延长的10nm纤维状的重复结构单元是核小体(vanholde.1988.chromatin[染色质].newyork:springer-verlag[纽约：斯普林格出版社])。核小体由围绕组蛋白h2a、h2b、h3和h4的蛋白质核心(称为核心组蛋白)缠绕的146bp的dna组成。这些组蛋白被布置成一个(h3-h4)2四聚体和位于该四聚体的每个面上的两个h2a-h2b二聚体。连接核小体的dna被称为连接区dna；它是与h1或接头组蛋白连接的连接区dna。将该10nm纤维进一步压缩成30nm纤维。核心组蛋白的接头组蛋白和氨基末端区域(“尾”)保持染色质的高阶折叠(garciaramirez等人.1992.j.biolchem[生物化学杂志]267:19587)。当dna被转录或翻译时，该染色质结构必须松解。因此，组蛋白对包括昆虫在内的许多生物体的dna的适当加工至关重要。组蛋白功能性在蛋白质水平上由许多机制进行自然地调节，这些机制包括调节转录阻遏的甲基化、以及通常增加基因转录的乙酰化。然而，很少有研究报道通过例如使用干扰rna(rnai)分子使编码组蛋白蛋白质的基因沉默来调节组蛋白在基因水平上的影响。boutros等人(2004；science[科学]303:832-835)将果蝇细胞暴露于双链rna(dsrna)分子，以测试果蝇细胞基因组(包括一些组蛋白基因)中的几乎全部基因的功能性。得分的表型是细胞死亡。这项研究的这些结果表明，dsrna靶向某些组蛋白基因，导致体外两种果蝇细胞系中一些细胞的死亡。然而，靶向在那些果蝇细胞系中的某些组蛋白基因的作用并不如阳性对照dsrna靶向细胞凋亡(iap)基因抑制剂的作用那么大。由于由boutros等人提供的非常有限数量的研究和结果的变异性，在任何给定生物体(特别是某些昆虫物种包括鞘翅目有害生物类(如根萤叶甲属))中的所有组蛋白基因同样易受rnai沉默的影响是不清楚的。在有害生物根萤叶甲属种类中的组蛋白基因可以作为有害生物控制策略而被靶向也是未确定的。此外，使用干扰rna分子可以调节此类组蛋白蛋白质的表达，并且如果此类蛋白表达可以被调节，这样的调节是否将导致对靶标根萤叶甲属有害生物的毒性甚至是更未确定的。当一种生物体识别双链rna(dsrna)分子并水解它们时，rna干扰(rnai)发生。所产生的水解产物是约19-24个核苷酸长度的小rna片段，这些小rna片段称作小干扰rna(sirna)。然后这些sirna扩散或被携带至整个生物体，包括越过细胞膜，在那里它们与mrna(或其他的rna)杂交并且导致rna的水解。干扰rna由rna干扰沉默复合体(risc)识别，rna的效应链(或“引导链”)位于该复合体中。此引导链充当双链体序列的识别和破坏模板。每次sirna与其互补rna靶标杂交，该此过程都被重复，有效防止那些mrna被翻译，并且因此“沉默”mrna自其中转录的特异性基因的表达。大部分植物微小rna(mirna)对其靶标mrna显示出广泛的碱基配对，并引导其裂解(jones-rhoades等人(2006)annu.rev.plantbiol.[植物生物学年评]57,19-53；llave等人(2002)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]97,13401-13406)。在其他例子中，干扰rna可以结合至具有非完美互补性的靶标rna分子，导致在没有mrna降解的情况下的翻译阻抑。到目前为止，多数研究的动物mirna似乎以此方式发挥功能。对于使用这样的具有杀虫活性的组合物和方法，例如用于作物保护或昆虫介导的疾病的控制存在不断的需要。需要新颖的组合物来克服对现有杀虫剂的抗性问题和/或帮助缓解对现有转基因植物方法的抗性的发展。理想地，此类组合物具有高毒性并且当被靶标有害生物口服摄取时是有效的并且对于使用对抗有害生物昆虫的幼虫期和成虫期两者而言具有适用性。因此，提供了其中这些特性中的任一种被增强的组合物的任何发明将代表本领域的进步。发明概述以上所列出的需要是通过本发明来满足的，在多个实施例中，本发明提供了控制经济上重要的昆虫有害生物的新方法。本发明部分地包括一种抑制一种或多种靶基因和蛋白在昆虫有害生物(例如根萤叶甲属的成员)中的表达的方法。具体而言，本发明包括调节一种或多种组蛋白基因在根萤叶甲属种类中的表达的方法，例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)、墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)、南美叶甲(diabroticaspeciosa)(菊花甲虫)以及相关种类，该方法导致摄食、生长、发育及繁殖的中止，并且最终导致昆虫的死亡。该方法包括将包括双链rna(dsrna)的干扰rna分子或其修饰形式(小干扰rna(sirna)序列)引入进有害生物昆虫体内的细胞或进入细胞外环境(例如中肠)中，其中该dsrna或sirna进入这些细胞中，并且抑制至少一种或多种组蛋白基因的表达，并且其中该一种或多种组蛋白基因的抑制在该有害生物昆虫上发挥有害作用。明确考虑的是，通过在该有害生物的食物中提供一种或多种包括含有dsrna或sirna分子的干扰rna分子的组合物，本发明的这些方法和组合物将在限制或消除任何植物中或其上的有害生物昆虫侵染方面是有用的。本发明还提供了干扰rna分子，当递送至昆虫有害生物时，该干扰rna分子通过毒性作用抑制该昆虫有害生物存活、生长、摄食和/或繁殖的能力，或限制有害生物相关的损害或作物植物的损失。这样的递送可以是通过在转基因植物(例如玉米)中产生干扰rna，或通过将包括干扰rna的组合物局部施用至植物或植物种子(如玉米植物或玉米种子)。该干扰rna分子包括一个核苷酸序列，该核苷酸序列与可从该有害生物昆虫的组蛋白基因转录的mrna的核苷酸序列或可从该有害生物昆虫的组蛋白基因转录的mrna的核苷酸序列的一部分互补并且因此抑制该组蛋白基因的表达，导致摄食、生长、发育、繁殖的中止，并且最终导致该有害生物昆虫的死亡。本发明进一步涉及包括或编码本发明的干扰rna分子的一条链的至少一个片段的核酸构建体、核酸分子和重组载体。本发明还提供了嵌合核酸分子，这些嵌合核酸分子包括该干扰rna的dsrna的一条反义链，该反义链可操作地与植物微小rna前体分子相关。本发明还提供了人工植物微小rna前体，这些前体包括本发明的干扰rna的dsrna的一条反义链。本发明进一步提供了一种干扰核糖核酸(rna)分子，其中该rna包括至少一个dsrna，其中该dsrna是含有退火的互补链的双链rna的区域，其中的一条链包括一个至少21个连续核苷酸的序列，该序列与在根萤叶甲属组蛋白靶基因内的靶核苷酸序列是至少部分互补的，并且其中该干扰rna分子(i)与seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体具有至少80％一致性、至少85％一致性、至少90％一致性、至少92％一致性、至少93％一致性、至少95％一致性、至少97％一致性、至少98％一致性、或至少99％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体；或(iii)包括编码由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47编码的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体，其中该干扰rna分子下调在靶标根萤叶甲属昆虫中的组蛋白靶基因。在一些实施例中，该干扰分子可以包括至少两个dsrna，其中每个dsrna包括核苷酸的一个序列，该序列与组蛋白靶基因内的靶核苷酸序列是至少部分互补的。在进一步的实施例中，每个dsrna可以包括核苷酸的不同序列，该序列与组蛋白靶基因中的不同靶核苷酸序列是互补的。本发明进一步提供了组合物，这些组合物包括本发明的一种或多种干扰rna分子，这些干扰rna分子包括两种或更多种dsrna分子，其中这两种或更多种rna分子各自包括一条不同的反义链，或包括两种或更多种核酸构建体或核酸分子或人工植物微小rna前体。本发明进一步提供了用于抑制根萤叶甲属昆虫组蛋白基因表达的杀昆虫组合物，该组合物包括本发明的dsrna以及一种农业上可接受的载体。根萤叶甲属组蛋白基因表达的抑制引起摄食和生长的中止，并且最终导致该根萤叶甲属昆虫的死亡。本发明进一步涉及转基因植物，这些转基因植物产生一种或多种本发明的干扰rna分子，这些干扰rna分子自我保护免受昆虫摄食损害，并且涉及单独使用或与其他昆虫控制策略组合使用这些植物以赋予最大昆虫控制能力的方法。产生一种或多种本发明的干扰rna分子或用一种包括一种或多种本发明的干扰rna分子的组合物处理的植物和/或植物部分对昆虫有害生物侵染是高度抗性的。例如，经济上重要的根萤叶甲属鞘翅目有害生物可以通过一种产生本发明的干扰rna分子的植物或通过用一种包括本发明的干扰rna分子的组合物处理的植物或植物种子加以控制。本发明还提供了一种控制根萤叶甲属昆虫的方法，该方法包括使该根萤叶甲属昆虫与一种作为本发明的干扰rna或能够产生本发明的干扰rna的核酸分子接触，该干扰rna用于抑制组蛋白基因在该根萤叶甲属昆虫中的表达，从而控制该根萤叶甲属昆虫。在其他方面中，本发明提供了一种减少转基因植物上的成虫根萤叶甲属昆虫种群的方法，该转基因植物表达cry蛋白、杂种cry蛋白或修饰的cry蛋白，该方法包括在该转基因植物中表达一种作为本发明的干扰rna或能够产生本发明的干扰rna的核酸分子，该干扰rna能够抑制组蛋白基因在成虫根萤叶甲属昆虫中的表达，从而减少该成虫根萤叶甲属昆虫种群。在其他方面中，本发明提供了一种减少对本发明的干扰rna的抗性在根萤叶甲属昆虫种群中的发展的方法，该方法包括在由该根萤叶甲属昆虫种群摄食的转基因植物中表达一种本发明的干扰rna，该干扰rna能够抑制组蛋白基因在幼虫和成虫根萤叶甲属昆虫中的表达，从而与暴露于仅能够抑制组蛋白基因在根萤叶甲属昆虫的幼虫期或成虫期的表达的干扰rna的根萤叶甲属昆虫种群相比，减少抗性在该根萤叶甲属昆虫种群中的发展。在其他方面中，本发明提供了一种降低可从组蛋白基因转录的靶标rna在根萤叶甲属昆虫中的水平的方法，该方法包括使该根萤叶甲属昆虫与一种包括本发明的干扰rna分子的组合物接触，其中该干扰rna分子降低该靶标rna在根萤叶甲属昆虫的细胞中的水平。在仍其他方面中，本发明提供了一种赋予植物或其部分对根萤叶甲属昆虫耐受性的方法，该方法包括向该植物或其部分中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子和/或组合物，从而赋予该植物或其部分对该根萤叶甲属昆虫的耐受性。在另外的方面中，本发明通过了一种减少被根萤叶甲属昆虫摄食的植物的根损害的方法，该方法包括向该植物的细胞中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子和/或组合物，从而减少被根萤叶甲属昆虫摄食的植物的根损害。在其他方面中，本发明提供了一种产生对根萤叶甲属昆虫具有毒性的转基因植物细胞的方法，该方法包括向植物细胞中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子和/或组合物，从而产生与对照植物细胞相比，对该根萤叶甲属昆虫具有毒性的转基因植物细胞。在另外的方面中，本发明提供了一种产生对根萤叶甲属昆虫摄食损害具有增强的耐受性的转基因植物的方法，该方法包括向植物中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子和/或组合物，从而产生与对照植物相比，对根萤叶甲属昆虫摄食损害具有增强的耐受性的转基因植物。在其他方面中，本发明提供了一种增强根萤叶甲属昆虫种群的控制的方法，该方法包括提供一种本发明的转基因植物或转基因种子并且向该转基因植物或该转基因种子施用一种对根萤叶甲属昆虫而言具有杀虫性的化学杀有害生物剂，从而增强该根萤叶甲属昆虫种群的控制。在其他方面中，本发明提供了一种为玉米种植者提供将玉米作物中的根萤叶甲属昆虫有害生物种群控制在低于一个经济阈值之下的手段的方法，该方法包括(a)向该种植者销售或为其提供包括本发明的dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子和/或组合物的转基因玉米种子；并且(b)向该种植者做广告宣传该转基因玉米种子产生能够控制根萤叶甲属昆虫有害生物种群的转基因玉米植物。在下文本发明的描述中更详细地阐述本发明的这些方面和其他方面。附图简要说明图1是根萤叶甲属组蛋白h2b编码序列(cds)的比对。碱基(a、t、g、或c)下“*”指示与参比序列中的碱基相同。不同于参比序列的碱基由“.”指示。使用类似于edgar，2004(nucleicacidsres[核酸研究]32(5):1792-97)的方法产生比对。图2是根萤叶甲属组蛋白h4编码序列(cds)的比对。碱基(a、t、g、或c)下“*”指示与参比序列中的碱基相同。不同于参比序列的碱基由“.”指示。使用类似于edgar，2004(nucleicacidsres[核酸研究]32(5):1792-97)的方法产生比对。在序列表中的序列的简要说明seqidno:1是包括5’和3'非翻译区(utr)的西方玉米根虫组蛋白h4cdna(dvh4)的核苷酸序列。seqidno:2是包括在seqidno:1中的dvh4的编码区的核苷酸序列。seqidno:3是可从dvh4基因转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:4是dvh4mrna的反义序列，指定为dvh4*。seqidno:5是包括5’和3'非翻译区(utr)的西方玉米根虫组蛋白h2bcdna(dvh2b)的核苷酸序列。seqidno:6是包括在seqidno:5中的dvh2b的编码区的核苷酸序列。seqidno:7是可从dvh2b基因转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:8是dvh2bmrna的反义链，指定为dvh2b*。seqidno:9是由seqidno:2编码的dvh4氨基酸序列。seqidno:10是由seqidno:6编码的dvh2b氨基酸序列。seqidno:11-14是可由sirna靶向的dvh4mrna(seqidno:3)的291个19-mer子序列的实例。seqidno:15-18是可由sirna靶向的dvh2bmrna(seqidno:7)的351个19-mer子序列的实例。seqidno:19-22是dvh4*反义sirna19-mer序列的实例。seqidnos:23-26是dvh2b*反义sirna19-mer序列的实例。seqidno:27是包括5’和3'非翻译区(utr)的南方玉米根虫组蛋白h4cdna(duh4-1)的核苷酸序列的变体1。seqidno:28是包括在seqidno:27中的duh4-1的编码区的核苷酸序列。seqidno:29是可从duh4基因(duh4-1mrna)转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:30是duh4-1mrna的反义序列，指定为duh4-1*。seqidno:31是包括5’和3'非翻译区(utr)的南方玉米根虫组蛋白h4cdna(duh4-2)的核苷酸序列的变体2。seqidno:32是包括在seqidno:31中的duh4-2的编码区的核苷酸序列。seqidno:33是可从duh4基因(duh4-2mrna)转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:34是duh4mrna的反义链，指定为duh4-2*。seqidno:35是由seqidno:28和seqidno:32编码的duh4氨基酸序列。seqidno:36是包括5’和3'非翻译区(utr)的南方玉米根虫组蛋白h2bcdna(duh2b)的核苷酸序列。seqidno:37是包括在seqidno:36中的duh2b的编码区的核苷酸序列。seqidno:38是可从duh2b基因转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:39是duh2bmrna的反义序列，指定为duh2b*。seqidno:40是由seqidno:37编码的duh2b氨基酸序列。seqidno:41是包括5’和3'非翻译区(utr)的北方玉米根虫组蛋白h4cdna(dbh4)的核苷酸序列。seqidno:42是包括在seqidno:41中的dbh4的编码区的核苷酸序列。seqidno:43是可从dbh4基因转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:44是dbh4mrna的反义序列，指定为dbh4*。seqidno:45是由seqidno:42编码的dbh4氨基酸序列。seqidno:46是包括5’和3'非翻译区(utr)的北方玉米根虫组蛋白h4cdna(dbh2b)的核苷酸序列。seqidno:47是包括在seqidno:46中的dbh2b的编码区的核苷酸序列。seqidno:48是可从dbh2b基因转录的mrna的正义链核苷酸序列。seqidno:49是dbh2bmrna的反义序列，指定为dbh2b*。seqidno:50是由seqidno:47编码的dbh2b氨基酸序列。seqidno:51-58是对本发明有用的引物。seqidno:59是包括组成型启动子prubi1-18(christensen等人，1992，pmb18:675)、终止子tzmubi361-01(美国专利申请公开号us-2012-0198584)以及内含子athbaf60-01的表达盒，并且能够形成包括seqidno:6(dvh2b)和seqidno:7(dvh2b*)的dsrnawcrh2b分子。seqidno:60是包括组成型启动子prubi1-18、终止子tzmubi361-01以及内含子athbaf60-01的表达盒，并且能够形成包括seqidno:3(dvh4)和seqidno:4(dvh4*)的dsrnawcrh4分子。发明详述下面提供了本发明的详细说明，以协助本领域的普通技术人员实践本发明。本说明不旨在是一个本发明以其而实施的所有不同方式，或可以加入本发明中的所有特征的详细目录。例如，关于一个实施例所说明的特征可以结合入其他实施例中，并且关于一个具体实施例所说明的特征可以从那个实施例删除。另外，鉴于本披露内容，对本发明的不同实施例的众多变体以及附加对于本领域技术人员是明显的，这不脱离本发明。因此，以下说明旨在阐明本发明的一些具体实施例，并不旨在完全列举出其所有排列、组合以及变体。本领域的普通技术人员将意识到，在本文描述的这些实施例中可以做出修饰和变化而不偏离本发明的精神或范围。除非另外限定，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在此的本发明的说明中使用的术语是仅出于描述具体实施例的目的，且并不旨在限制本发明。在此提及的所有出版物、专利申请、专利以及其他参考文献通过引用以其全文结合在此。为了清晰起见，定义了在本说明书中所使用的某些术语并且将其呈现如下：如在此使用的，“一种/一个(a/an)”或“该(the)”可以表示一种/一个或多于一种/一个。例如，“一个细胞”可以意指单个细胞或多个细胞。如在此使用，“和/或”是指并且涵盖一个或多个相关的列出项的任何及全部可能组合，连同当以可替代性(“或”)解释时组合的缺少。另外，当指可计量值(例如化合物或试剂、剂量、时间、温度等等的量)时，如在此使用的，术语“约(about)”意图包括所指值的±20％、±10％、±5％、±1％、±0.5％、或甚至±0.1％的变化。如在此使用的，过渡短语“基本上由……组成”意指一项权利要求的范围将被解释为包括该权利要求中所提到的指定材料或步骤以及不实质上影响要求保护的发明的一个或多个基本特征和新特征的那些材料或步骤。因此，当用于本发明的权利要求中时，术语“基本上由……组成”并不意在被解释为等同于“包括(comprising)”。a.如在此使用的，“dsrna”或“rnai”是指由单个自身互补rna链或至少由两条互补rna链形成的多核糖核苷酸结构。互补程度(换言之，％一致性)不需要必须是100％。而是，它必须足够允许在所采用的条件下形成双链结构。如在此所使用的，术语“完全地互补”意指dsrna的核苷酸序列的所有碱基都与靶核苷酸序列的碱基互补或‘匹配’。术语“至少部分地互补”意指dsrna的碱基与靶核苷酸序列的碱基之间存在小于100％的匹配。本领域的技术人员将理解，为了介导靶基因表达的下调，dsrna仅需要与靶核苷酸序列至少部分地互补。本领域已知，相对于靶序列而具有插入、缺失以及错配的rna序列在rnai方面仍然可以有效。根据本发明，优选地是，dsrna和靶基因的靶核苷酸序列共有至少80％或85％的序列一致性，优选至少90％或95％序列一致性，或更优选至少97％或98％序列一致性，并且再更优选至少99％序列一致性。可替代地，在24个部分互补的核苷酸的每个长度上，如与靶核苷酸序列相比，dsrna可以包括1、2、或3个错配。本领域的普通技术人员将了解，dsrna与靶核苷酸序列之间共有的互补性程度可以取决于有待下调的靶基因或者取决于基因表达有待控制的昆虫害虫物种而改变。b.应了解的是，dsrna可以包含一个双链rna的区域，该双链rna包括退火的互补链，其中一条链，即正义链，包括与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分互补的核苷酸序列。c.靶核苷酸序列可以选自靶基因或其rna转录物的任何合适区域或核苷酸序列。举例来说，靶核苷酸序列可以位于靶基因或rna转录物的5'utr或3'utr内，或者基因的外显子或内含子区域内。本领域的技术人员熟知在全长靶基因背景下鉴定最合适的靶核苷酸序列的方法。例如，可以合成和测试靶向靶基因的不同区域的多种dsrna。可替代地，用如rnaseh等酶消化rna转录物可以被用来确定rna上构象对基因沉默敏感的位点。靶位点也可以使用计算机模拟(insilico)方法，例如使用被设计成基于靶向全长基因内的不同位点来预测基因沉默效力的计算机算法进行鉴定。优选地，通过gap(needleman和wunsch，1970)分析(gcg程序)，使用默认设置确定多核糖核苷酸的％一致性，其中查询序列是至少约21至约23个核苷酸长度，并且gap分析经至少约21个核苷酸的区域比对这两个序列。在另一个实施例中，查询序列至少150个核苷酸长度，并且gap分析经至少150个核苷酸的区域比对这两个序列。在一个另外的实施例中，查询序列至少300个核苷酸长度并且gap分析经至少300个核苷酸的区域比对这两个序列。在又另一个实施例中，查询序列对应于全长靶标rna(例如mrna)，并且gap分析经全长靶标rna比对这两个序列。便利地，该dsrna可以在重组宿主细胞中产生自单个开放阅读框，其中正义和反义序列的侧翼是一个不相关序列，该不相关序列使得正义和反义序列可以杂交以与该不相关序列形成该dsrna分子，从而形成一个环结构。可替代地，正义链和反义链可以在不具有开放阅读框的情况下产生，以保证在转基因宿主细胞中将不制造蛋白质。这两条链还可以被分别表达为两种转录物，一种编码正义链并且一种编码反义链。可以在细胞内部或外部启动rna双链体形成。该dsrna可以是部分或完全双链的。rna可以在体外或在体内酶促地或化学地合成。该dsrna相对于初级转录产物或完全加工的rna不需要是全长的。通常，可以使用较高的一致性来补偿较短的序列的使用。此外，该dsrna还可以包括单链区域，例如该dsrna可以是部分或完全双链的。该dsrna的双链区域可以具有至少约18至约25个碱基对的长度，任选是约18至约50个碱基对的序列，任选是约50至约100个碱基对的序列，任选是约100至约200个碱基对的序列，任选是约200至约500个碱基对的序列，并且任选是约500至约1000个或更多个碱基对的序列，直到对于其全长是双链的分子，大小对应于全长靶标rna分子。该dsrna可以包含已知的核苷酸类似物或修饰的主链残基或连接物，其是合成的、天然发生的及非天然发生的。此类类似物的实例包括但不限于，硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基磷酸酯、手性甲基磷酸酯以及2-o-甲基核糖核苷酸。如在此使用的，术语“特异性减少靶标rna的水平和/或由该rna编码的靶蛋白的产生”及其变体是指该dsrna的一条链的一部分与该靶标rna足够相同，这样使得在细胞中存在的该dsrna减少稳态水平和/或所述rna的产生。在许多情况下，该靶标rna将是mrna，并且在产生该mrna的细胞中存在该dsrna将导致所述蛋白的产生的减少。优选地，当与野生型细胞相比时，这一积累或产生被减少至少10％，更优选至少50％，甚至更优选至少75％，仍甚至更优选至少95％并且最优选100％。抑制的后果可以通过检查该细胞或生物体的外表特性或通过生化技术加以确认，这些生化技术是例如但不限于，northern杂交、逆转录、用微阵列监测基因表达、抗体结合、酶联免疫吸附测定(elisa)、蛋白质印迹法、放射免疫测定(ria)以及其他免疫测定。a.本发明的干扰rna可以包括一种dsrna或多种dsrna，其中每种dsrna包含与在靶标组蛋白基因中的靶核苷酸序列至少部分互补的核苷酸序列或由其组成，并且在被昆虫有害生物摄入后起到下调所述靶标组蛋白基因的表达的作用。通过引用结合在此的wo2006/046148中描述了这种类型的多联体rna构建体。在本发明的上下文中，术语‘多个’意指至少两个，至少三个，至少四个等并且直到至少10、15、20个或至少30个。在一个实施例中，该干扰rna包括单个dsrna的多个拷贝，即结合至一个特定靶标组蛋白基因内的一个特定靶核苷酸序列的dsrna的重复。在另一个实施例中，干扰rna内的dsrna包括与不同的靶核苷酸序列互补的不同核苷酸序列或由其组成。应该清楚的是，与结合于不同靶核苷酸序列的dsrna组合的相同dsrna的多个拷贝的组合是在本发明的范围内。b.这些dsrna可以安排为干扰rna的一个连续区域或者可以通过接头序列的存在加以隔开。接头序列可以包含不与任何靶核苷酸序列或靶基因互补的短的随机核苷酸序列。在一个实施例中，该接头是条件性自切割rna序列，优选是ph敏感性接头或疏水敏感性接头。在一个实施例中，该接头包含与内含子序列等效的核苷酸序列。本发明的接头序列的长度可以在从约1个碱基对到约10000个碱基对的范围内，其条件是该接头不会削弱干扰rna下调一种或多种靶标组蛋白基因的表达的能力。除了这样的一种或多种dsrna和任何接头序列，本发明的干扰rna可以包括至少一种另外的多核苷酸序列。在本发明的不同实施例中，该另外的序列选自(i)能够保护干扰rna免于rna加工的序列，(ii)影响干扰rna的稳定性的序列，(iii)允许蛋白质结合以例如促进干扰rna被昆虫害虫物种的细胞摄入的序列，(iv)促进大规模产生干扰rna的序列，(v)作为结合于受体或结合于昆虫害虫细胞表面上的分子以促进摄入的适体的序列，或(v)催化昆虫害虫细胞中干扰rna的加工并由此增强干扰rna的效力的序列。用于增强rna分子的稳定性的结构在本领域中是众所周知的并且进一步描述在wo2006/046148中，该案通过引用结合在此。该干扰rna可以包含dna碱基、非天然碱基或者糖-磷酸骨架的非天然骨架连接或修饰，例如以增强储存期间的稳定性或增强对核酸酶降解的抗性。此外，该干扰rna可以由本领域的普通技术人员通过手动或自动反应化学地或酶促地产生。可替代地，该干扰rna可以由编码其的多核苷酸转录。因此，在此提供了编码本发明的干扰rna中的任一个的一种分离的多核苷酸。微小rna(mirna)是不编码蛋白质的rna，通常在约18至约25个核苷酸长度之间(植物中常见地是约20-24个核苷酸长度)。这些mirna指导靶转录物的反式切割，负向调节参与各种调节及发育途径的基因的表达(bartel，cell[细胞]，116:281-297(2004)；zhang等人，dev.biol.[发育生物学]289:3-16(2006))。照此，已经显示mirna参与植物生长和发育的不同方面以及参与信号转导和蛋白质降解。此外，内源性小mrna(包括mirna)也可以参与生物胁迫反应，例如病原体攻击。自第一个mirna在植物中发现以来(reinhart等人，genesdev[基因与发育]16:1616-1626(2002)，park等人，curr.biol[当代生物学]12:1484-1495(2002))，已经鉴定了数百种mirna。此外，已经示出了许多植物mirna是跨非常趋异性分类群而高度保守的(floyd等人，nature[自然]428:485-486(2004)；zhang等人，plantj.[植物杂志]46:243-259(2006))。许多微小rna基因(mir基因)已经被鉴定出并且是在数据库中公众可获得的(mirbase；microrna.sanger.ac.uk/sequences)。mirna还在美国专利公开2005/0120415和2005/144669a1中被描述，其全部内容通过引用被结合在此。编码mirna的基因产生长度70bp至300bp的初级mirna(称作“pri-mirna”)，其可以形成不完美的茎环结构。单个初级mirna可以含有从1个至若干个mirna前体。在动物中，初级mirna在细胞核中由rna酶iiidrosha及其辅因子dgcr8/pasha加工成约65nt的更短发夹rna(前mirna)。这种前mirna随后输出至细胞质，在那里，它由另一种rna酶iii-切丁酶(dicer)进一步加工，释放出大小约22nt的mirna/mirna*双链体。与动物相反，在植物中，初级mirna加工为成熟mirna完全在细胞核内利用单一rna酶iii-dcl1(切丁酶样1)进行。(zhu，proc.natl.acad.sci[美国国家科学院院刊]105:9851-9852(2008))。关于微小rna生物起源和功能的许多综述是可获得的，例如，参见，bartel，cell[细胞]116:281-297(2004)；murchison等人，curr.opin.cellbiol[细胞生物学新见]16:223-229(2004)；dugas等人，curr.opin.plantbiol.[植物生物学新见]7:512-520(2004)和kim，naturerev.mol.cellbiol[自然综述分子细胞生物学]6:376-385(2005)。如在此使用的，术语“植物微小rna前体分子”描述一种(约70nt-300nt)小非编码性rna序列，它由植物酶加工以产生约19-24个核苷酸的产物，称作成熟微小rna序列。这些成熟序列通过与信使rna(mrna)的互补性而具有调节作用。术语“人工植物微小rna前体分子”描述在加工之前的非编码mirna前体序列，其中经由以下方式使用该前体序列作为递送sirna分子的主链序列，将这种mirna前体分子的内源性天然mirna/mirna*双链体置换为一种非天然异源性mirna的双链体(amirna/amirna*；例如sirna/sirna*)，后一种双链体然后与该sirna序列一起加工为成熟mirna序列。在本发明的背景下，用于描述本发明的dsrna的术语“有毒的”意指本发明的这些dsrna分子以及此类dsrna分子的组合作为对昆虫具有负面作用的口服有效昆虫控制试剂而起作用。当本发明的一种组合物被递送至昆虫时，这种结果典型地是该昆虫的死亡，或者该昆虫不以使该组合物可供该昆虫使用的来源为食。这样一种组合物可以是一种表达本发明的dsrna的转基因植物。“编码序列”是转录成rna(如mrna、rrna、trna、snrna、正义rna或反义rna)的一个核酸序列。优选地，该rna进而在一个生物体中被翻译以产生一种蛋白质。如在此使用的，“互补”多核苷酸是能够根据标准watson-crick互补性规则发生碱基配对的那些。具体而言，嘌呤将与嘧啶进行碱基配对，以便形成鸟嘌呤与胞嘧啶配对(g:c)和在dna情况下腺嘌呤与胸腺嘧啶配对(a:t)或在rna情况下腺嘌呤与尿嘧啶配对(a:u)的组合。例如，序列“a-g-t”结合至互补序列“t-c-a”。应当理解两种多核苷酸可以相互杂交，甚至它们彼此并不完全互补，其条件是每种多核苷酸具有至少一个与另一种多核苷酸基本上互补的区域。如本文使用的，术语“互补的(complementary)”或“互补性(complementarity)”是指多核苷酸在容许性盐条件和温度条件下通过碱基配对发生天然结合。两单链分子之间的互补性可以是“部分的(partial)”，其中这些核苷酸中仅一些结合，或者当这些单链分子之间存在完全互补性时，这种互补性可以是完全的。核酸链之间的互补性程度对于核酸链之间杂交的效率和强度具有显著影响。如本文所用，术语“基本上互补”或“部分互补的”意指两个核酸序列在其至少约50％、60％、70％、80％或90％的核苷酸处是互补的。在一些实施例中，这两个核酸序列可以至少在其85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的核苷酸处是互补的。术语“基本上互补的”和“部分互补的”也可以意指两个核酸序列可以在高严格性条件下杂交并且这类条件是本领域熟知的。“控制(control或controlling)”昆虫意指通过一种毒性作用抑制一种或多种昆虫有害生物存活、生长、摄食和/或繁殖的能力，或限制昆虫相关的损害或作物植物损失。“控制”昆虫可以或可以不是意为杀死昆虫，尽管它优选意指杀死昆虫。“递送(deliver或delivering)”一种组合物或dsrna意指该组合物或dsrna与一种昆虫接触，产生一种毒性作用和对昆虫的控制。可以按照许多公认方式，例如，通过昆虫经口摄取、经由转基因植物表达、一种或多种配制的组合物、一种或多种可喷洒的组合物、一种饵基(baitmatrix)、或任何其他的领域公认的毒物递送系统来递送该组合物或dsrna。“根萤叶甲属”是一种甲虫属，通常称为“玉米根虫”或“黄瓜甲虫”。根萤叶甲属昆虫是作物植物的有害生物，这些昆虫包括但不限于，巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫；ncr)、西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫；wcr)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫；scr)以及墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫；mcr)。在本发明的背景下，术语“玉米根虫”或“黄瓜甲虫”与术语“根萤叶甲属”是可互换的。“根萤叶甲属生活期”或“玉米根虫生活期”意指根萤叶甲属物种的卵、幼虫、蛹或成虫发育形式。“有效的昆虫控制量”意指dsrna的浓度，它通过一种毒性作用抑制昆虫存活、生长、摄食和/或繁殖的能力，或限制昆虫相关的损害或作物植物损失。“有效的昆虫控制量”可以或可以不意指杀死昆虫的浓度，尽管优选它意指杀死昆虫。如在此使用的“表达盒”意指能够在一个适当的宿主细胞中指导特定的核酸序列的表达的一个核酸序列，包括一个启动子，该启动子可操作地连接至感兴趣的核酸序列上，该核酸序列可操作地连接至终止信号序列。它还典型地包含正确翻译该核酸序列所需要的序列。包含该感兴趣的核酸序列的表达盒可以是嵌合的，意味着至少一个它的组分相对于至少一个它的其他组分是异源的。该表达盒还可以是一种天然发生的表达盒，但已经是以对于异源表达有用的重组形式而获得的。然而，典型地，该表达盒相对于该宿主而言是异源的，即该表达盒的特定核酸序列不是天然存在于该宿主细胞中的，并且必须已经通过一个转化事件引入到该宿主细胞或该宿主细胞的祖先中。该核酸序列在该表达盒中的表达可以是在例如一个组成型启动子或一个诱导型启动子的控制之下，只有当该宿主细胞暴露于某一特定的外部刺激时该启动子才引发转录。在多细胞生物(如一种植物)的情况下，该启动子还可能对于特定组织、或器官、或者发育阶段是特异性的。“基因”是一个限定的区域，该区域位于一个基因组之内，并且除了前述的编码序列之外，它还包括其他负责该编码部分的表达控制(也就是转录和翻译)的主要调节核酸序列。一个基因还可以包含其他5'和3'未翻译序列和终止序列。其他可能存在的元件是，例如，内含子。如在此使用的，术语“种植者”意指从事农业，养殖生物机体(如玉米植物，例如玉米)用于食物、饲料、或原料的个人或实体。“异源”核酸序列是一个天然地不与将该核酸序列引入其中的宿主细胞相关联的核酸序列，包括天然发生的核酸序列的非天然发生的多拷贝。组蛋白是在真核细胞核中发现的高碱性蛋白质，其将dna包裹并且指令dna进入称为核小体的结构单元中。组蛋白是染色质的主要蛋白质组分，并在基因调控中发挥作用。组蛋白h2a、h2b、h3和h4是核心组蛋白，并且形成核小体核心，核小体核心包括两个h2a-h2b二聚体和一个h3-h4四聚体。四种核心组蛋白在结构上相对相似，并且以主球状结构域和长n末端尾为特征。使这些核心组蛋白经受共价修饰(包括乙酰化和甲基化)，共价修饰可以改变位于与其亲本组蛋白八聚体相关的dna上的基因的表达。“同源”核酸序列是一个与将该核酸序列引入其中的一个宿主细胞天然地关联的核酸序列。“杀虫”被定义为有毒的生物活性，它能够控制虫，优选地通过杀死它们来控制。本发明的“分离的”核酸分子或核苷酸序列或核酸构建体或dsrna分子或蛋白通常与其天然环境分离而存在并且因此不是自然的产物。分离的核酸分子或核苷酸序列或核酸构建体或dsrna分子或蛋白能以纯化形式存在，或能存在于非天然环境(例如像重组宿主或宿主细胞，如转基因植物或转基因植物细胞)中。在本发明的背景下，后缀“mer”前的数字指示亚基的特定数目。当应用于rna或dna时，这指定了分子中碱基的数目。例如，具有序列acuggucgcguugcaugcu的mrna的19个核苷酸子序列是“19-mer”。“植物”是在发育的任何阶段的任何植物，特别是种子植物。“植物细胞”是植物的结构和生理单位，包括原生质体和细胞壁。植物细胞可以处于一种分离的单细胞或一种培养细胞的形式，或者是作为较高级的组织单位(例如，植物组织、植物器官、或整株植物)的一部分。“植物细胞培养物”意指植物单元(例如像，原生质体、细胞培养物细胞、植物组织中的细胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、接合子以及处于不同发育阶段的胚)的培养物。“植物材料”是指叶、茎、根、花或花的部分、果实、花粉、卵细胞、接合子、种子、切条、细胞或组织培养物、或一种植物的任何其他部分或产物。“植物器官”是植物的一个独特而明显的已结构化并且分化的部分，如根、茎、叶、花蕾或胚。如在此使用的“植物组织”意指组织化成结构和功能单元的一组植物细胞。包括植物中或培养物中的任何植物组织。这个术语包括但不限于：全株植物、植物器官、植物种子、组织培养物以及被组织化成结构和/或功能单元的任何植物细胞群组。这个术语与以上列出的或由该定义以其他方式涵盖的任何具体类型的植物组织的联合应用或单独应用并不旨在排除任何其他类型的植物组织。玉米根虫“转录组”是玉米根虫细胞中的所有或几乎所有的核糖核酸(rna)转录物的集合。“转化”是一种用于将异源核酸引入到宿主细胞或生物的方法。具体地，“转化”意为dna分子稳定整合到一种感兴趣生物的基因组中。“转化的/转基因的/重组的”是指一种宿主生物体，例如其中引入了一种异源核酸分子的一种细菌或一种植物。该核酸分子可以被稳定地整合到宿主的基因组中，或者该核酸分子还可以作为一种染色体外分子存在。这样的一种染色体外分子能够自主复制。转化的细胞、组织或植物应当理解为不仅包含转化过程的终产物，而且包含其转基因子代。一种“非转化的”、“非转基因的”、或“非重组的”宿主是指一种野生型生物，例如一种细菌或植物，它不包含该异源的核酸分子。在此使用的对于dna或rna碱基和氨基酸给出的命名法如在37c.f.r.§1.822中给出。本发明是基于以下出乎意料的发现，设计用于靶向可从根萤叶甲属昆虫的组蛋白基因转录的mrna的双链rna(dsrna)或小干扰rna(sirna)，对根萤叶甲属昆虫有害生物具有毒性并且可以用于控制植物的根萤叶甲属侵染并赋予转基因植物对根萤叶甲属侵染的耐受性。因此，在一个实施例中，本发明提供了包括一条正义链和一条反义链的双链rna(dsrna)分子，其中该反义链的核苷酸序列与可从根萤叶甲属昆虫组蛋白基因转录的mrna多核苷酸的一部分互补，其中该dsrna分子对根萤叶甲属昆虫是具有毒性的。在其他实施例中，本发明提供了一种包含dsrna的干扰rna分子，该dsrna包括一条正义链和一条反义链，其中该反义链的核苷酸序列与可从根萤叶甲属组蛋白基因转录的mrna多核苷酸的一部分互补，该组蛋白基因包括以下组蛋白编码序列，该编码序列与seqidno:2(dvh4)或seqidno:6(dvh2b)具有至少90％一致性、或至少91％一致性、或至少92％一致性、或至少93％一致性、或至少94％一致性、或至少95％一致性、或至少96％一致性、或至少97％一致性、或至少98％一致性、或至少99％一致性，并且其中该dsrna分子对根萤叶甲属昆虫具有毒性。在一些实施例中，该干扰核糖核酸(rna)分子包括至少一个dsrna，其中该dsrna是包括退火的互补链的一个双链rna的区域，其中一条链包括一个至少19个连续核苷酸的序列，该序列与在根萤叶甲属组蛋白靶基因中的靶核苷酸序列是至少部分互补的，并且其中该干扰rna分子(i)与seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体具有至少85％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体；或(iii)包括编码由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47编码的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体，其中该干扰rna分子下调在靶标根萤叶甲属昆虫中的组蛋白靶基因。在一些实施例中，该根萤叶甲属组蛋白靶基因是来自选自下组的根萤叶甲属昆虫，该组由以下各项组成：巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)、黄瓜条根萤叶甲(d.balteata)(带状黄瓜甲虫)、黄瓜十一星叶甲(d.undecimpunctataundecimpunctata)(西方斑点黄瓜甲虫)、斯格尼根萤叶甲(d.significata)(3斑叶甲)、南美叶甲(菊花甲虫)、墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)、班尼根萤叶甲(d.beniensis)、克里斯塔根萤叶甲(d.cristata)、科威根萤叶甲(d.curvipustulata)、双斑根萤叶甲(d.dissimilis)、华丽根萤叶甲(d.elegantula)、伊墨根萤叶甲(d.emorsitans)、禾本科根萤叶甲(d.graminea)、伊斯帕尼根萤叶甲(d.hispanolae)、莱米妮根萤叶甲(d.lemniscata)、赭腿根萤叶甲(d.linsleyi)、米勒根萤叶甲(d.milleri)、钱币形根萤叶甲(d.nummularis)、扇叶根萤叶甲(d.occlusa)、普拉根萤叶甲(d.porracea)、蜗牛根萤叶甲(d.scutellata)、胫骨根萤叶甲(d.tibialis)、三线根萤叶甲(d.trifasciata)、以及微绿根萤叶甲(d.viridula)。在另外的实施例中，该根萤叶甲属昆虫是西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)、或巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)。在一些实施例中，该组蛋白基因选自下组，该组由以下各项组成：h1组蛋白、h2a组蛋白、h2b组蛋白、h3组蛋白以及h4组蛋白。在一些实施例中，该组蛋白是h4或h2b组蛋白。在一些实施例中，该组蛋白编码序列包括选自下组的序列，该组由以下各项组成：seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、以及seqidno:47。在一些实施例中，该干扰rna分子包括至少两种dsrna，其中每种dsrna包括核苷酸的一个序列，该序列与组蛋白靶基因内的靶核苷酸序列是至少部分互补的。在一些实施例中，每种dsrna包括不同的核苷酸序列，该核苷酸序列与组蛋白靶基因内的不同靶核苷酸序列是互补的。在其他实施例中，每种dsrna包括不同的核苷酸序列，该核苷酸序列与两个不同的组蛋白靶基因内的靶核苷酸序列是互补的。在一些实施例中，该干扰rna分子包括一种dsrna，该dsrna可以包括从至少18至约25个连续核苷酸(例如18、19、20、21、22、23、24或25)至至少约300个连续核苷酸，基本由其组成或由其组成。在一些实施例中，该dsrna分子可以包括约309、或约369个连续核苷酸，基本由其组成或由其组成。可以在3'末端、5'末端或3'和5'末端二者处添加另外的核苷酸，以促进rna分子的操作但是不实质地影响该dsrna分子在rna干扰(rnai)中的基本特征或功能。在一些实施例中，该干扰rna分子包括一种dsrna，该dsrna包括与包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48的至少18个连续核苷酸的核苷酸序列互补的一条反义链。在其他实施例中，dsrna的该部分包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48的至少从19、20、或21个连续核苷酸至至少约300个连续核苷酸，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，dsrna的该部分包括seqidno:3的至少约309个核苷酸、seqidno:7的至少约369个连续核苷酸、seqidno:29的至少约309个核苷酸、seqidno:33的至少约309核苷酸、seqidno:38的至少约369连续核苷酸、seqidno:43的至少约309核苷酸、或seqidno:48的至少约369连续核苷酸，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，本发明的干扰rna分子包括一种dsrna，该dsrna包括由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:3(dvh4mrna)的任何19-mer子序列，基本由其组成或由其组成，其中n是seqidno:3的核苷酸1至291。换言之，被靶向的mrna的该部分包括291个seqidno:3的19个连续核苷酸的子序列(即19-mer)中任一个，例如，碱基1-19(5'-augacuggacguggaaagg-3')(seqidno:11)、碱基2-20(5'-ugacuggacguggaaaggg-3')(seqidno:12)、碱基3-21(5'-gacuggacguggaaagggu-3')(seqidno:13)依次类推直至碱基291-309(5'-uuuguacgguuuugguggu-3')(seqidno:14)，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，本发明的干扰rna分子包括一种dsrna，该dsrna包括由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:7(dvh2bmrna)的任何19-mer子序列，基本由其组成或由其组成，其中n是seqidno:7的核苷酸1至核苷酸351。换言之，被靶向的mrna的该部分包括351个seqidno:7的19个连续核苷酸子序列(即19-mer)中的任一个，例如碱基1-19(5'-augccuccuaagacgagug-3')(seqidno:15)、碱基2-20(5'-ugccuccuaagacgagugg-3’)(seqidno:16)、碱基3-21(5'-gccuccuaagacgaguggu-3’)(seqidno:17)依次类推直至碱基351-369(5'-uaaauacacaaguucuaag-3')(seqidno:18)。在其他实施例中，本发明的干扰rna分子包括一种dsrna，该dsrna包括、基本上由或由以下各项组成：由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:29(duh4-1)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:29的核苷酸1至291；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:33(duh4-2)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:33的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:38(duh2b)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:38的核苷酸1至351；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:43(dbh4)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:43的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:48(dbh2b)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:48的核苷酸1至351。在仍其他的实施例中，本发明的干扰rna分子包括一种dsrna，该dsrna包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48，基本上由其组成或由其组成。在本发明的干扰rna分子的另外的实施例中，该dsrna的反义链的核苷酸序列可以包括由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:4(dvh4*)的任何19-mer子序列，基本上由其组成或由其组成，其中n是seqidno:4的核苷酸1至291。换言之，该反义链包括291个seqidno:4的19个连续核苷酸子序列(即19-mer)的任一个，例如，碱基1-19(5'-uacugaccugcaccuuucc-3')(seqidno:19)、碱基2-20(5'-acugaccugcaccuuuccc-3')(seqidno:20)、碱基3-21(5'-cugaccugcaccuuuccca-3')(seqidno:21)依次类推直至碱基291-309(5'-aaacaugccaaaaccacca-3')(seqidno:22)，基本上由其组成或由其组成。在本发明的干扰rna分子的其他实施例中，该dsrna的反义链的核苷酸序列可以包括由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:8(dvh2b*)的任何19-mer子序列，基本上由其组成或由其组成，其中n是seqidno:8的核苷酸1至核苷酸351。换言之，该反义链基本由351个seqidno:8的19个连续核苷酸子序列(即19-mer)的任一个组成，例如，碱基1-19(5'-uacggaggauucugcucac-3')(seqidno:23)、碱基2-20(5'-acggaggauucugcucacc-3')(seqidno:24)、碱基3-21(5'-cggaggauucugcucacca-3')(seqidno:25)依次类推直至碱基351-369(5'-ugauuuauguguucaagau-3')(seqidno:26)。在本发明的干扰rna分子的其他实施例中，该dsrna的反义链的核苷酸序列可以包括、基本上由或由以下各项组成：由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:30(duh4-1*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:30的核苷酸1至291；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:34(duh4-2*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:34的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:39(duh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:39的核苷酸1至351；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:44(dbh4*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:44的核苷酸1至核苷酸291；或由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:49(dbh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:49的核苷酸1至351。在仍其他实施例中，与可从根萤叶甲属昆虫组蛋白基因转录的mrna多核苷酸的一部分互补的本发明的dsrna的反义链核苷酸序列包括seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49，或基本由其组成或由其组成。应理解的是，seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49的19-mer序列的任一个在3’或5’末端可以缺失一个核苷酸或在3’末端、5’末端或两者处可以添加多达六个核苷酸(以任何组合)，以实现反义链基本由seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49的任何19-mer核苷酸序列组成，因为将理解的是，缺失一个核苷酸或添加多达六个核苷酸不实质地影响本发明的双链rna分子的基本特征或功能。这类另外的核苷酸可以是沿靶序列延伸反义链互补性的核苷酸和/或这类核苷酸可以是促进rna分子或编码该rna分子的核酸分子的操作的核苷酸，如本领域的普通技术人员将已知。例如，在3'末端可以存在一个tt突出端，使用该突出端来稳定sirna双链体并且不影响该sirna的特异性。在本发明的一些实施例中，该干扰rna分子的双链rna的反义链可以与该靶标rna多核苷酸完全互补，或该反义链可以与靶标rna多核苷酸基本上互补或部分互补。该干扰rna分子的dsrna可以包括一种dsrna，该dsrna是包括基本上互补的退火链的双链rna的一个区域，或是包括完全互补的退火链的双链rna的一个区域。基本上或部分互补意指反义链和靶标rna多核苷酸可以按约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸配对错配。可以将这类错配引入反义链序列中，例如，靠近3'末端，以便增强双链rna分子由切丁酶加工，以便在插入本发明的嵌合核酸分子或人工微小rna前体分子内的sirna分子中重复错配样式(参见实例部分)等，如本领域的普通技术人员将已知。这类修饰将在双链体的一个末端削弱碱基配对作用并且产生链非对称性，因此增大反义链(而非正义链)受到加工和沉默预期基因的几率(geng和ding，“double-mismatchedsirnasenhanceselectivegenesilencingofamutantals-causingallele1[双错配sirna增强造成突变als的等位基因1的选择性基因沉默]”actapharmacol.sin.[中国药理学报]29:211-216(2008)；schwarz等人，“asymmetryintheassemblyofthernaienzymecomplex[rnai酶复合体的组合体中的非对称性]”cell[细胞]115:199-208(2003))。在本发明的一些实施例中，该干扰rna含有一种短发夹rna(shrna)分子的一种dsrna。shrna在细胞中的表达典型地通过将质粒或重组载体递送例如进入转基因植物(如转基因玉米)中而完成。本发明涵盖一种包括本发明的干扰rna的核酸构建体。本发明进一步涵盖一种核酸分子，该核酸分子编码本发明的至少一种干扰分子。本发明进一步涵盖一种核酸构建体，该核酸构建体包括本发明的至少一种干扰分子，或包括编码本发明的至少一种干扰分子的核酸分子。本发明进一步涵盖一种核酸构建体，其中该核酸构建体是一种表达载体。本发明进一步涵盖一种重组载体，该重组载体包括可操作地连接至编码本发明的干扰rna分子的一个核苷酸序列的一种调节序列。调节序列可以意指一种启动子、增强子、转录因子结合位点、隔离子、沉默子、或参与基因表达的任何其他dna元件。本发明进一步涵盖一种嵌合核酸分子，该嵌合核酸分子包括具有dsrna的反义链的干扰rna分子，该dsrna可操作地连接至植物微小rna前体分子。在一些实施例中，该嵌合核酸分子包括一条反义链，该反义链具有seqidno:4或seqidno:8的19-mer子序列的任一个的核苷酸序列，该反义链可操作地连接至植物微小rna前体分子。在一些实施例中，该植物微小rna前体分子是一种玉蜀黍微小rna前体。在一些实施例中，本发明涵盖一种人工植物微小rna前体分子，该前体分子包括本发明的干扰rna分子的dsrna的一条反义链。在其他实施例中，该人工植物微小rna前体分子包括具有seqidno:4或seqidno:8的19-mer子序列的任一个的核苷酸序列的一条反义链。使用人工植物微小rna将感兴趣的核苷酸序列(例如人工mirna；sirna/sirna*)递送进植物中在本领域是已知的(参见例如，schwab等人，2006，theplantcell[植物细胞]18:1121-1133和在此的实例部分)。在本发明中，这些人工微小rna是其中插入一个植物微小rna前体主链和一个昆虫sirna序列的嵌合或杂交分子。如本领域的普通技术人员将理解，典型地希望维持错配，这些错配正常情况下在植物微小rna前体序列中存在于被置换入该植物微小rna前体主链中的任何核苷酸序列中。在仍其他实施例中，该人工植物微小rna前体包括玉米微小rna前体分子的部分。任何玉米微小rna(mirna)前体都适于本发明的这些组合物和方法。非限制性实例包括mir156、mir159、mir160、mir162、mir164、mir166、mir167、mir168、mir169、mir171、mir172、mir319、mir390、mir393、mir394、mir395、mir396、mir397、mir398、mir399、mir408、mir482、mir528、mir529、mir827、mir1432以及现在已知或后来被鉴定出的任何其他植物mirna前体。在一些实施例中，本发明涵盖干扰rna分子、核酸构建体、核酸分子、或重组载体，其包括本发明的干扰rna分子的dsrna的至少一条链，或包括本发明的嵌合核酸分子，或包括本发明的人工植物微小rna。在一些实施例中，该核酸构建体包括本发明的核酸分子。在其他实施例中，该核酸构建体是一种重组表达载体。在一些实施例中，本发明涵盖包括一种干扰rna分子的组合物，该干扰rna分子包含两种或更多种dsrna，其中这两种或更多种dsrna各自包括不同的反义链。在一些实施例中，本发明涵盖包括至少两种或更多种干扰rna分子的组合物，其中这两种或更多种干扰rna分子各自包括含有不同的反义链的dsrna。这两种或更多种干扰rna可以在相同的核酸构建体上、在不同的核酸构建体上、或其任何组合上存在。在其他实施例中，该组合物包括一种含有基本上由seqidno:4的核苷酸序列组成的反义链的rna分子，和/或一种含有基本上由seqidno:8的核苷酸序列组成的反义链的rna分子，和/或一种含有基本上由seqidno:30的核苷酸序列组成的反义链的rna分子，和/或一种含有基本上由seqidno:34的核苷酸序列组成的反义链的rna分子，和/或一种含有基本上由seqidno:39的核苷酸序列组成的反义链的rna分子，和/或一种含有基本上由seqidno:44的核苷酸序列组成的反义链的rna分子，和/或一种含有基本上由seqidno:49的核苷酸序列组成的反义链的rna分子。在其他实施例中，该组合物可以包括两种或更多种核酸分子，其中这两种或更多种核酸分子各自编码不同的干扰rna分子。在其他实施例中，该组合物可以包括两种或更多种核酸构建体，其中这两种或更多种核酸构建体各自包括编码不同干扰rna的核酸分子。在其他实施例中，该组合物包括本发明的两种或更多种核酸构建体、两种或更多种核酸分子、两种或更多种嵌合核酸分子、两种或更多种人工植物微小rna前体，其中这两种或更多种核酸构建体、两种或更多种核酸分子、两种或更多种嵌合核酸分子、或两种或更多种人工植物微小rna前体各自包括一条不同的反义链。在一些实施例中，本发明涵盖一种用于抑制根萤叶甲属昆虫组蛋白基因表达的杀昆虫组合物，该组合物包括本发明的干扰rna和农业上可接受的载体。在一些实施例中，该可接受的农用载体是一种表达本发明的干扰rna的转基因生物体。在一些实施例中，该转基因生物体可以是一种表达本发明的干扰rna的转基因植物，当被靶标有害生物摄食时导致该靶标有害生物停止摄食、生长、或繁殖，或导致该靶标有害生物的死亡。在其他实施例中，该转基因植物是一种转基因玉米植物并且该靶标有害生物是一种根萤叶甲属昆虫有害生物。在仍其他实施例中，该根萤叶甲属昆虫有害生物选自下组，该组由以下各项组成：巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)，西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)，黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)，黄瓜条根萤叶甲(带状黄瓜甲虫)，黄瓜十一星叶甲(西方斑点黄瓜甲虫)，斯格尼根萤叶甲(3斑叶甲)，南美叶甲(菊花甲虫)，墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。在其他实施例中，该转基因生物体选自(但不限于)下组，该组由以下各项组成：表达本发明的干扰rna分子的酵母、真菌、藻类、细菌、病毒、或节肢动物。在一些实施例中，该转基因生物体是一种病毒，例如一种当侵染昆虫宿主时表达本发明的干扰rna分子的昆虫杆状病毒。这样的一种杆状病毒比野生型未转化杆状病毒针对靶标昆虫可能更具剧毒。在其他实施例中，该转基因生物体是一种施用至靶标有害生物出现或已知已经出现的环境的转基因细菌。在一些实施例中，使用能够在植物组织内生活并复制的非致病共生细菌(所谓的内寄生菌)，或能够定居在叶际或根际的非致病共生细菌(所谓的附生菌)。此类细菌包括以下属的细菌：农杆菌属、产碱菌属、固氮螺菌属、定氮菌属、芽孢杆菌属、棒形杆菌属、肠杆菌属、欧文菌属、黄杆菌属、克雷白菌属、假单胞菌属、根瘤菌属、沙雷菌属、链霉菌属以及黄单胞菌属。共生真菌(如木霉属和胶枝霉属)也是为了相同目的表达本发明的干扰rna分子的可能宿主。在一些实施例中，可接受的农用载体是一种可用于将包括该干扰rna分子的组合物施用至植物或种子的配制品。在一些实施例中，这些干扰rna分子稳定对抗降解，由于其双链性质和dna酶/rna酶抑制剂的引入。例如，可以通过包括胸苷或尿苷核苷酸3'突出端来稳定dsrna或sirna。包含在本发明的组合物中的dsrna或sirna能大量地以工业规模化学地合成。可获得的方法将是通过化学合成或通过使用生物剂。在其他实施例中，该配制品包括一种转染促进剂。在其他实施例中，该转染促进剂是一种含脂质化合物。在另外的实施例中，该含脂质化合物选自下组，该组由以下各项组成：lipofectamine，cellfectin，dmrie-c，dotap以及lipofectin。在另一个实施例中，该含脂质化合物是一种tris阳离子脂质。在一些实施例中，该配制品进一步包括一种核酸冷凝剂。该核酸冷凝剂可以是本领域已知的任何此类化合物。核酸冷凝剂的实例包括但不限于，亚精胺(n-[3-氨基丙基]-1,4-丁二胺)、鱼精蛋白硫酸盐、聚赖氨酸以及其他带正电的肽。在一些实施例中，该核酸冷凝剂是亚精胺或鱼精蛋白硫酸盐。在仍另外的实施例中，该配制品进一步包括缓冲的蔗糖或磷酸盐缓冲生理盐水。在一些实施例中，本发明涵盖转基因植物或其部分，其包括本发明的干扰rna分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物，其中当与对照植物相比时，该转基因植物对根萤叶甲属昆虫具有增强的抗性。在其他实施例中，该转基因植物或其部分是转基因玉米植物或其部分。本发明进一步涵盖本发明的转基因植物的转基因种子，其中该转基因种子包括本发明的干扰rna分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物。在一些实施例中，该转基因种子是转基因玉米种子。表达本发明的干扰rna的转基因植物对被靶标昆虫有害生物袭击具有耐受性或抗性。当该昆虫开始摄食这样一种转基因植物时，它也摄取所表达的dsrna或sirna。这可以妨碍昆虫进一步咬食植物组织或者甚至可以伤害或杀死昆虫。编码本发明的dsrna或sirna的核酸序列被插入到一种表达盒中，然后该表达盒被优选稳定地整合到该植物的基因组中。引入到植物基因组中的表达盒的这些核酸序列对于该植物而言是异源的，并且是天然发生的。跟据本发明所转化的植物可以是单子叶植物或双子叶植物，并且包括但不限于：玉米、小麦、大麦、黑麦、甘薯、豆、豌豆、菊苣、莴苣、卷心菜、花椰菜、西兰花、芜菁、萝卜、菠菜、芦笋、洋葱、大蒜、胡椒(pepper)、芹菜、小南瓜(squash)、大南瓜(pumpkin)、大麻、西葫芦、苹果、梨、榅桲、甜瓜、李子(plum)、樱桃、桃、油桃、杏、草莓、葡萄、覆盆子、黑莓、菠萝、鳄梨、番木瓜、芒果、香蕉、大豆、番茄、高粱、甘蔗、甜菜、向日葵、油菜籽、三叶草、烟草、胡萝卜、棉花、苜蓿、水稻、马铃薯、茄子、黄瓜、拟南芥属，以及木本植物，如针叶树以及落叶树。在另外的实施例中，该转基因植物是一种转基因玉米植物。在转基因植物中该干扰rna分子的表达是由包括在植物中发挥作用的启动子的调节序列所驱动的。启动子的选择将依赖于表达的时间和空间需要而变化，并且还依赖于昆虫目标种类而变化。因此，考虑了本发明的干扰rna在叶、柄(stalk)或茎(stem)、穗、花序(例如穗状花序、圆锥花序、穗轴等)、根和/或幼苗中的表达。然而在许多情况下，寻求针对多于一种类型虫害的保护，并且因此在多个组织中的表达是令人希望的。尽管已经显示来自双子叶植物的很多启动子在单子叶植物中是可操作的并且反之亦然，但理想的是选择双子叶植物启动子用于在双子叶植物中的表达，并且选择单子叶植物启动子用于在单子叶植物中的表达。然而，对所选择的启动子的起源并没有限制；足够的是它们在驱动dsrna或sirna在所希望的细胞中的表达中是操作性的。适用于本发明的启动子包括但不限于组成性地驱动核苷酸序列的表达的那些启动子、在诱导时驱动表达的那些启动子、以及以组织或发育特异性方式驱动表达的那些启动子。这些不同类型的启动子在本领域是已知的。组成型启动子的实例包括但不限于夜香树病毒启动子(cmp)(美国专利号7,166,770)、稻肌动蛋白1启动子(wang等人，(1992)mol.cell.biol.[分子细胞生物学]12:3399-3406；以及美国专利号5,641,876)、camv35s启动子(odell等人，(1985)nature[自然]313:810-812)、camv19s启动子(lawton等人，(1987)plantmol.biol.[植物分子生物学]9:315-324)、nos启动子(ebert等人，(1987)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]84:5745-5749)、adh启动子(walker等人，(1987)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]84:6624-6629)、蔗糖合酶启动子(yang和russell(1990)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]87:4144-4148)、玄参花叶病毒(fmv)启动子(govindarajulu等人2008.molplantmicrobeinteract[分子植物微生物相互作用]21:1027-35)以及泛素启动子。源于泛素的组成型启动子积累在很多细胞类型中。已经从几种植物物种中克隆出泛素启动子以用在转基因植物中使用，例如，向日葵(binet等人，1991.plantscience[植物科学]79:87-94)、玉米(christensen等人，1989.plantmolec.biol.[植物分子生物学]12:619-632)和拟南芥(norris等人，1993.plantmolec.biol.[植物分子生物学]21，895-906)。玉蜀黍泛素启动子(ubip)已经在转基因单子叶植物系统中得以发展，并且它的序列以及构建用于单子叶植物转化的载体披露于quail等人(美国专利号6,020,190)中。在一些实施例中，可以使用组织特异性/组织优选的启动子。组织特异性或组织优选的表达模式包括但不限于绿色组织特异性或优选的、根特异性或优选的、茎特异性或优选的、以及花特异性或优选的。适用于在绿色组织中表达的启动子包括调节涉及光合作用的基因的许多启动子，并且这些中的许多已经从单子叶植物和双子叶植物两者中得以克隆。在一个实施例中，可用于本发明的一种启动子是来自磷酸烯醇羧化酶基因的玉蜀黍pepc启动子(hudspeth和grula，plantmolec.biol.[植物分子生物学]12:579-589(1989))。组织特异性启动子的非限制性实例包括与编码种子贮藏蛋白(如β-伴大豆球蛋白、十字花科蛋白、油菜籽蛋白以及菜豆素)、玉米蛋白或油体蛋白(如油质蛋白)、或脂肪酸生物合成中涉及的蛋白质(包括酰基载体蛋白、硬脂酰-acp去饱和酶、以及脂肪酸去饱和酶(fad2-1))的基因关联以及与胚发育过程中表达的其他核酸(如bce4，参见，例如kridl等人(1991)seedsci.res.[种子科学研究]1:209-219；连同欧洲专利号255378)关联的那些启动子。可用于本发明的核苷酸序列在植物(特别是玉蜀黍)中表达的组织特异性或组织优选的启动子包括但不限于直接在根或根中的特定细胞、髓、叶或花粉中表达的那些启动子。此类启动子披露于例如但不限于wo93/07278中，通过引用以其全文结合在此。适用于本发明的组织特异性或组织优选的启动子的其他非限制性实例包括披露于美国专利6,040,504中的棉花二磷酸核酮糖羧化酶(rubisco)启动子；披露于美国专利5,604,121中的稻蔗糖合酶启动子；由deframond(febs290:103-106(1991)；授予ciba-geigy的ep0452269)描述的根特异性启动子；描述于美国专利5,625,136(授予ciba-geigy)并驱动玉蜀黍trpa基因表达的茎特异性启动子；以及披露于wo01/73087中的夜香树黄叶卷曲病毒启动子，所有专利文献通过引用结合在此。植物组织特异性/组织优选的启动子的其他实例包括但不限于根毛特异性顺式-元件(rhe)(kim等人，theplantcell[植物细胞]18:2958-2970(2006))、根特异性启动子rcc3(jeong等人，plantphysiol.[植物生理学]153:185-197(2010))和rb7(美国专利号5459252)、凝集素启动子(lindstrom等人，(1990)der.genet.11:160-167；和vodkin(1983)prog.clin.biol.res.[临床生物研究进展]138:87-98)、玉米乙醇脱氢酶1启动子(dennis等人，(1984)nucleicacidsres.[核酸研究]12:3983-4000)、s-腺苷基-l-甲硫氨酸合成酶(sams)(vandermijnsbrugge等人，(1996)plantandcellphysiology[植物和细胞生理学]，37(8):1108-1115)、玉米集光复合体启动子(bansal等人，(1992)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]89:3654-3658)、玉米热激蛋白启动子(o'dell等人，(1985)emboj.5:451-458；和rochester等人，(1986)emboj.5:451-458)、豌豆小亚基rubp羧化酶启动子(cashmore，“nucleargenesencodingthesmallsubunitofribulose-l,5-bisphosphatecarboxylase[编码核酮糖-l,5-二磷酸羧化酶的小亚基的核基因]”第29-39页于geneticengineeringofplants[植物基因工程]中(hollaender编，普莱南出版社(plenumpress)1983；和poulsen等人，(1986)分子遗传学与普通遗传学)205:193-200)、ti质粒甘露氨酸合酶启动子(langridge等人，(1989)美国国家科学院院刊86:3219-3223)、ti质粒胭脂碱合酶启动子(langridge等人，(1989)，同上)、矮牵牛查尔酮异构酶启动子(vantunen等人，(1988)emboj.7:1257-1263)、菜豆富甘氨酸蛋白1启动子(keller等人，(1989)genesdev.[基因与发育]3:1639-1646)、截短camv35s启动子(o'dell等人，(1985)nature[自然]313:810-812)、马铃薯糖蛋白启动子(wenzler等人，(1989)植物分子生物学13:347-354)、根细胞启动子(yamamoto等人(1990)核酸研究18:7449)、玉米醇溶蛋白启动子(kriz等人，(1987)分子遗传学与普通遗传学)207:90-98；langridge等人，(1983)cell[细胞]34:1015-1022；reina等人，(1990)核酸研究18:6425；reina等人，(1990)核酸研究18:7449；和wandelt等人，(1989)核酸研究17:2354)、球蛋白-1启动子(belanger等人，(1991)genetics[遗传学]129:863-872)、α-微管蛋白cab启动子(sullivan等人，(1989)分子遗传学与普通遗传学)215:431-440)、pepcase启动子(hudspeth和grula(1989)植物分子生物学12:579-589)、r基因复合物相关启动子(chandler等人，(1989)植物细胞1:1175-1183)和查尔酮合酶启动子(franken等人，(1991)emboj.10:2605-2612)。在一些具体实施例中，本发明的核苷酸序列与一种根优选的启动子可操作地关联。尤其可用于种子特异性表达的是豌豆球蛋白启动子(czako等人，(1992)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学])235:3-40；以及披露在美国专利号5,625,136中的种子特异性启动子。可用于成熟的叶中表达的启动子是当衰老开始时开启的那些启动子，如来自拟南芥属(arabidopsis)的sag启动子(gan等人，(1995)science[科学]270:1986-1988)。另外，可以使用在质体中起作用的启动子。此类启动子的非限制性实例包括噬菌体t3基因95'utr以及其他的披露于美国专利号7,579,516中的启动子。可用于本发明的其他启动子包括但不限于s-e9小亚基rubp羧化酶启动子和kunitz胰蛋白酶抑制剂基因启动子(kti3)。在本发明的一些实施例中，可以使用诱导型启动子。因此，例如，可以使用化学调节型启动子以通过应用外源化学调节物来调节本发明的核苷酸序列的表达。本发明的核苷酸序列的表达经由化学调节过的启动子进行的调节使得本发明的多肽仅当用诱导的化学品处理作物植物时能被合成。取决于目的，在应用化学品诱导本发明的核苷酸序列的表达时，该启动子可以是化学诱导型启动子，或者在应用化学品抑制本发明的核苷酸序列表达时该启动子可以是化学阻抑型启动子。化学诱导型启动子在本领域中是已知的，并且包括但不限于玉米in2-2启动子(它是由苯磺酰胺除草剂安全剂激活)、玉米gst启动子(它是由用作发芽前除草剂的疏水亲电子化合物激活)、以及烟草pr-1a启动子(它是由水杨酸激活)(例如，pr1a系统)、类固醇反应性启动子(参见例如，schena等人，(1991)美国国家科学院院刊88,10421-10425和mcnellis等人，(1998)plantj.[植物学杂志]14,247-257中的糖皮质激素-诱导型启动子)以及四环素-诱导型启动子和四环素-阻抑型启动子(参见例如，gatz等人，(1991)分子遗传学与普通遗传学227、229-237和美国专利号5,814,618和5,789,156)、lac阻遏物系统启动子、铜-诱导型系统启动子、水杨酸诱导型系统启动子(例如，pr1a系统)、糖皮质激素-诱导型启动子(aoyama等人，(1997)植物学杂志11:605-612)和蜕皮激素-诱导型系统启动子。诱导型启动子的其他非限制性实例包括aba-和细胞膨胀-诱导型启动子、植物生长素结合蛋白基因启动子(schwob等人，(1993)植物学杂志4:423-432)、udp葡萄糖类黄酮糖基转移酶启动子(ralston等人，(1988)遗传学119:185-197)、mpi蛋白酶抑制剂启动子(cordero等人，(1994)植物学杂志6:141-150)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(kohler等人，(1995)植物分子生物学29:1293-1298；martinez等人，(1989)j.mol.biol.[分子生物学杂志]208:551-565；和quigley等人，(1989)j.mol.evol.[分子进化杂志]29:412-421)。还包括苯磺酰胺诱导型(美国专利号5,364,780)和乙醇诱导型(国际专利申请公开号wo97/06269和wo97/06268)系统和谷胱甘肽s-转移酶启动子。同样地，可以使用描述于gatz(1996)currentopinionbiotechnol.[生物技术新见]7:168-172和gatz(1997)annu.rev.plantphysiol.plantmol.biol.[植物生理学与植物分子生物学年度综述]48:89-108中的诱导型启动子中的任一种。适用于指导本发明的核苷酸序列在植物中的表达的其他化学诱导型启动子披露于美国专利5,614,395中，该专利通过引用以其全文结合在此。基因表达的化学诱导还详述于公开申请ep0332104(授予ciba-geigy)和美国专利5,614,395中。在一些实施例中，一种用于化学诱导的启动子可以是烟草pr-1a启动子。在另外的方面中，本发明的核苷酸序列可以与一种启动子可操作地关联，该启动子是创伤诱导型或由有害生物或病原体侵染(例如，昆虫或线虫植物有害生物)进行的诱导型。已经描述了在创伤部位和/或在有害生物攻击(例如，昆虫/线虫吞食)或植物病原菌侵染的部位处表达的数量众多的启动子。理想地，这种启动子应仅在攻击部位处或邻近该部位具有局部活性，并且以这种方式，本发明的核苷酸序列的表达将集中在所侵入或摄食的细胞中。此类启动子包括但不限于由以下各项描述的那些启动子：stanford等人，mol.gen.genet.[分子与普通遗传学]215:200-208(1989)；xu等人，plantmolec.biol.[植物分子生物学]22:573-588(1993)；logemann等人，plantcell[植物细胞]1:151-158(1989)；rohrmeier和lehle，植物分子生物学22:783-792(1993)；firek等人，植物分子生物学22:129-142(1993)；warner等人，plantj.[植物杂志]3:191-201(1993)；美国专利号5,750,386；美国专利号5,955,646；美国专利号6,262,344；美国专利号6,395,963；美国专利号6,703,541；美国专利号7,078,589；美国专利号7,196,247；美国专利号7,223,901；以及美国专利申请公开2010043102。在本发明的一些实施例中，使用“最小启动子”或“基本启动子”。最小启动子能够募集并结合rna聚合酶ii复合体及其辅助蛋白，以允许转录起始和延伸。在一些实施例中，最小启动子被构建成仅包括来自转录因子的结合和感兴趣的核苷酸序列的转录所必需的一个选定启动子的核苷酸/核苷酸序列的一个启动子，这一感兴趣的核苷酸序列可操作地与包括但不局限于tata盒序列的最小启动子相关联。在其他实施例中，最小启动子缺少募集并结合转录因子的cis序列，这些转录因子调节(例如，增强、抑制、赋予组织特异性，赋予诱导性或抑制性)转录。最小启动子通常被放置在待表达的核苷酸序列的上游(即，5’)。因此，可以选择来自与本发明一起可用的任何启动子的核苷酸/核苷酸序列用作一个最小启动子。在一些实施例中，本发明的重组核酸分子可以是一种“表达盒”。如在此使用的，“表达盒”意指一种包含感兴趣的核苷酸序列(例如，本发明的核苷酸序列)的重组核酸分子，其中该核苷酸序列与至少一个控制序列(例如，启动子)可操作地关联。因此，本发明的一些实施例提供了被设计成表达编码本发明的dsrna或sirna的核苷酸序列的表达盒。以这种方式，例如，可操作地与本发明的一个或多个核苷酸序列相关联的一个或多个植物启动子可以提供于表达盒中，用于玉米植物、植物部分和/或植物细胞中的表达。包含感兴趣的核苷酸序列的表达盒可以是嵌合的，意味着它的组分中的至少一种相对于它的其他组分中的至少一种是异源的。表达盒还可以是一种包括驱动其天然基因的天然启动子，然而已经以适用于异源表达的重组形式而获得的。表达盒的这种用途使它如此在其被引入的细胞中不是天然发生的。表达盒还可以任选地包括在植物中具有功能性的一个转录和/或翻译终止区(即，终止区)。多种转录终止子是可供用于在表达盒中使用并且负责在超出感兴趣的异源核苷酸序列时的转录终止以及正确的mrna聚腺苷酸化。该终止区对于该转录起始区可以是天然的，对于该可操作地连接的感兴趣的核苷酸序列可以天然的，对于该植物宿主可以是天然的，或者可以是源自另一种来源(即，对于该启动子、该感兴趣的核苷酸序列、该植物宿主、或其任意组合而言是外来的或异源的)。适当的转录终止子包括但不限于camv35s终止子、tml终止子、胭脂碱合酶终止子和/或豌豆rbcse9终止子。这些终止子可以在单子叶植物和双子叶植物二者中使用。此外，可以使用编码序列的天然转录终止子。本发明的表达盒还可以包括用于选择性标记的核苷酸序列，该选择性标记可以用于选择转化的植物、植物部分和/或植物细胞。如在此使用的“选择性标记(selectablemarker)”意指一种核苷酸序列，当该核苷酸序列表达时向表达该标记的植物、植物部分和/或植物细胞赋予一种不同的表型，并且因此允许此类转化的植物、植物部分和/或植物细胞与不具有该标记的那些区别开来。这样一个核苷酸序列可以编码一种可选择的抑或可筛选的标记，这取决于该标记是否赋予可以通过化学手段而被选择的性状，如通过使用选择剂(例如，抗生素、除草剂等)，或者取决于该标记是否仅是一种人们可以通过观察或测试而鉴别的性状，如通过筛选(例如，r座位性状)。当然，适合的选择性标记的许多实例在本领域中是已知的并且可以用于在此描述的表达盒中。选择性标记的实例包括但不限于一种编码neo或nptii的核苷酸序列，它赋予对卡那霉素、g418等的抗性(potrykus等人(1985)mol.gen.genet.[分子遗传学与普通遗传学]199:183-188)；一种编码bar的核苷酸序列，它赋予对草丁膦的抗性；一种编码改变的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸(epsp)合酶的核苷酸序列，它赋予对草甘膦的抗性(hinchee等人(1988)biotech.[生物技术]6:915-922)；一种编码腈水解酶(如来自臭鼻克雷白氏杆菌(klebsiellaozaenae)的bxn)的核苷酸序列，它赋予对溴草腈的抗性(stalker等人(1988)，science[科学]242:419-423)；-种编码改变的乙酰乳酸合酶(als)的核苷酸序列，它赋予对咪唑啉酮、磺酰脲或其他als-抑制化学品的抗性(欧洲专利申请号154204)；一种编码甲氨蝶呤-抗性的二氢叶酸还原酶(dhfr)的核苷酸序列(thillet等人(1988)j.biol.chem.[生物化学杂志]263:12500-12508)；一种编码茅草枯脱卤素酶的核苷酸序列，它赋予对茅草枯的抗性；一种编码甘露糖-6-磷酸异构酶(也称为磷酸甘露糖异构酶(pmi))的核苷酸序列，它赋予代谢甘露糖的能力(美国专利号5,767,378和5,994,629)；一种编码改变的邻氨基苯甲酸盐合酶的核苷酸序列，它赋予对5-甲基色氨酸的抗性；或一种编码hph的核苷酸序列，它赋予对潮霉素的抗性。本领域技术人员能够选择用于在本发明的表达盒中使用的适合的选择性标记。另外的选择性标记包括但不限于：编码β-葡萄糖醛酸酶或uida(gus、编码一种不同的显色底物已知的酶的一种核苷酸序列；编码一种调节花青素颜料(红色)在植物组织中的产生的产物的一种r-基因座核苷酸序列(dellaporta等人，“molecularcloningofthemaizer-njallelebytransposon-taggingwithac[通过用ac进行转座子-标记的玉蜀黍r-nj等位基因的分子克隆]”，第263-282页，其中：chromosomestructureandfunction:impactofnewconcepts[染色体结构和功能：新概念的影响]，18thstadlergeneticssymposium[第18次斯塔德勒遗传学研讨会](gustafson和appels编辑，普莱纽姆出版社(plenumpress)1988))；编码β-内酰胺酶(一种不同的显色底物(例如，padac，一种显色的头孢菌素)已知的酶)的一种核苷酸序列(sutcliffe(1978)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]75:3737-3741)；编码xyle、编码一种邻苯二酚双加氧酶的一种核苷酸序列(zukowsky等人(1983)美国国家科学院院刊80:1101-1105)；编码酪氨酸酶(一种能够将酪氨酸氧化成dopa和多巴醌(它们又缩合形成黑色素)的酶)的一种核苷酸序列(katz等人(1983)j.gen.microbiol.[普通微生物学杂志]129:2703-2714)；编码β-半乳糖苷酶(一种存在显色底物的酶)的一种核苷酸序列；编码允许生物体发光检测的荧光素酶(lux)的一种核苷酸序列(ow等人(1986)science[科学]234:856-859)；编码可以用于钙敏感性的生物体发光检测中的水母发光蛋白的一种核苷酸序列(prasher等人(1985)biochem.biophys.res.comm.[生物化学与生物物理研究通讯]126:1259-1268)；或者编码绿色荧光蛋白的一种核苷酸序列(niedz等人(1995)plantcellreports[植物细胞报告]14:403-406)。本领域技术人员能够选择用于在本发明的表达盒中使用的适合的选择性标记。本发明的表达盒还可以包括对其他所希望的性状进行编码的多核苷酸。此类所希望的性状可以是赋予昆虫抗性或赋予线虫抗性的其他多核苷酸，或其他农业上所希望的性状。此类多核苷酸可以与核苷酸序列的任何组合叠加，以产生出具有所希望的表型的植物、植物部分或植物细胞。叠加的组合可以通过任何方法来产生，包括但不限于，通过任何常规的方法学的杂交育种植物或通过遗传转化。如果是通过遗传转化这些植物来进行叠加，则编码其他所希望的性状的核苷酸序列可以在任何时间并且以任何次序进行组合。例如，一个单个转基因可以包括多个表达盒，以致于多个表达盒被引入在单个基因组位置处的转化细胞的基因组中。可替代地，包括一种或多种所希望的性状的转基因植物可以用作通过后续转化而引入另外的性状的靶标。另外的核苷酸序列可以在一个共转化方案中与由表达盒的任何组合提供的本发明的核苷酸序列、核酸分子、核酸构建体、和/或其他组合物同时引入。例如，如果将引入两个核苷酸序列，则它们可以合并在分开的盒(反式)中或可以合并在相同的盒(顺式)上。这些核苷酸序列的表达可以通过相同的启动子或通过不同的启动子来驱动。进一步认识到的是，核苷酸序列可以在一个所希望的基因组位置处使用位点特异性重组系统进行叠加。参见，例如，国际专利申请公开号wo99/25821；wo99/25854；wo99/25840；wo99/25855；以及wo99/25853。因此，表达盒可以包括用于农艺性状的一种或多种多肽的一个编码序列，这些农艺性状的主要受益者是种子公司、种植者或谷粒加工者。感兴趣的多肽可以是由感兴趣的多核苷酸序列编码的任何多肽。适合用于在植物中生产的感兴趣的多肽的非限制性实例包括产生农艺学重要性状的那些多肽，这些性状如除草剂抗性(有时也称为“除草剂耐受性”)、病毒抗性、细菌病原体抗性、昆虫抗性、线虫抗性、和/或真菌抗性。参见，例如，美国专利号5,569,823；5,304,730；5,495,071；6,329,504；以及6,337,431。适合于植物转化的载体说明于在本说明书的其他地方。对于农杆菌介导的转化，二元载体或携带至少一个t-dna边界序列的载体是适合的，而对于直接基因转移，任何载体都是适合的，并且仅含有感兴趣的构建体的线性dna也许是优选的。在直接基因转移的情况下，可以使用以单个dna种类的转化或共转化(schocher等人，biotechnology[生物技术]4:1093-1096(1986))。对于直接基因转移以及农杆菌介导的转化这二者，转化通常(但不是必需的)用一种选择性标记进行，这种选择性标记可以提供针对一种抗生素(卡那霉素、潮霉素、或甲氨蝶呤)或一种除草剂(basta)的抗性。本发明的植物转化载体还可以包括其他选择性标记基因，例如，在美国专利5,767,378和5,994,629中所披露的，包含提供转基因植物阳性选择的基因(如磷酸甘露糖异构酶(pmi))(通过引用将其合并在此)或提供对除草剂草铵膦(草丁膦)耐受性的草铵膦乙酰转移酶(pat)。然而，选择性标记的选择对于本发明并不是至关重要的。在其他实施例中，本发明的核酸序列被直接转化进入质体基因组中。在美国专利号5,451,513、5,545,817和5,545,818中，在pct申请号wo95/16783中，以及在麦克布莱德(mcbride)等人(1994)美国国家科学院院刊(proc.nati.acad.sci.usa)91，7301-7305中广泛描述了质体转化技术。基本的叶绿体转化技术涉及将位于选择性标记侧翼的克隆的质体dna区连同感兴趣的基因一起引入适合的靶组织中，这是(例如)使用生物射弹(biolistic)或原生质体转化(例如，氯化钙或peg介导的转化)来进行的。这些1至1.5kb的侧翼区(被命名为靶向序列)促进了与质体基因组的同源重组，并且因而允许置换或修饰该原质体(plastome)的特定区域。最初，将叶绿体16srrna和rps12基因的点突变(赋予对大观霉素和/或链霉素抗性)用作用于转化的选择性标记(svab,z.，hajdukiewicz，p.和maliga，p.(1990)proc.nati.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]87，8526-8530；staub，j.m.和maliga,p.，(1992)plantcell[植物细胞]4，39-45)。这以大约每100次靶叶轰击大约1个的频率产生稳定的同质转化株。在这些标记之间克隆位点的存在允许建立质体靶向载体用于外来基因的引入(staub,j.m.和maliga,p.(1993)emboj.[欧洲分子生物学杂志]12，601-606)。转化效率的实质性增加通过用显性的选择性标记(对大观霉素解毒酶氨基糖苷-3'-腺苷转移酶进行编码的细菌aada基因)置换隐性的rrna或r蛋白抗生素抗性基因而获得(svab,z.和maliga,p.(1993)proc.natl.acad.sci.[美国国家科学院院刊]，90，913-917)。先前，这种标记已经被成功地用于莱茵衣藻这种绿藻的质体基因组的高频率转化(goldschmidt-clermont,m.(1991)nucl.acidsres.[核酸研究]19:4083-4089)。有用于质体转化的其他选择性标记在本领域是已知的，并且被包括在本发明的范围之内。典型地，转化之后需要大致15-20个细胞分裂循环以便达到一种同质状态。质体表达(其中多种基因通过同源重组被插入到在每个植物细胞中存在的所有数千个环状质体基因组的拷贝中)利用了超过核表达的基因的庞大的拷贝数目的优点，以便允许能够很容易超过总的可溶性植物蛋白的10％的表达水平。在一个优选的实施例中，将本发明的一种核酸序列插入至一种质体靶向的载体中并且转化至一种所希望的植物宿主的质体基因组中。获得了包含本发明的一种核酸序列的对于质体基因组同型的植物，并且这些植物优选地能够高表达该核酸序列。包括本发明的干扰rna的转基因植物或种子还可以用一种杀虫剂或杀虫种子包衣进行处理，如描述于美国专利号5,849,320和5,876,739(通过引用结合在此)中。在本发明的杀虫剂或杀虫种子包衣以及转基因植物或种子有效对抗同一靶标昆虫(例如根萤叶甲属靶标昆虫)的情况下，该组合(i)在一种用于进一步增强本发明的组合物对抗该靶标昆虫的活性的方法中以及(ii)在一种用于通过提供对抗该靶标昆虫的又另一种作用机制而防止对本发明的组合物产生抗性的方法中是有用的。因此，本发明提供了一种增强根萤叶甲属昆虫种群的控制的方法，该方法包括提供一种本发明的转基因植物或种子并且向该植物或该种子施用本发明的杀虫剂或杀虫种子包衣。此类杀虫剂和/或杀虫种子包衣的实例包括但不限于，氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、有机磷酸酯、friprole、新烟碱、有机氯化物、沙蚕毒素或其组合。在另一个实施例中，该杀虫剂或杀虫种子包衣选自下组，该组由以下各项组成：克百威，胺甲萘，灭多虫，联苯菊酯，七氟菊酯，氯菊酯，氟氯氰菊酯，λ-氯氟氰菊酯，氯氰菊酯，溴氰菊酯，毒死蜱，氯氧磷，乐果，灭线磷，马拉硫磷，甲基对硫磷，甲拌磷，特丁磷，叔丁嘧啶磷(tebupirimiphos)，氟虫腈，啶虫脒，吡虫啉，噻虫啉，噻虫嗪，硫丹，杀虫磺，及其组合。包含此类杀虫剂和杀虫种子包衣的商业产品包括但不限于以及本发明的组合物还可以与其他生物控制剂组合，以增强根萤叶甲属昆虫种群的控制。因此，通过提供一种转基因植物，本发明提供了一种增强根萤叶甲属昆虫种群的控制的方法，该转基因植物产生本发明的干扰rna，并且进一步包括一种编码杀有害生物剂(例如像马铃薯糖蛋白、蛋白酶、杀虫蛋白、细菌派生出的杀虫蛋白、苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白、致病杆菌杀虫蛋白或蛋白质复合物、发光杆菌杀虫蛋白或蛋白质复合物、侧孢芽孢杆菌杀虫蛋白或蛋白质复合物，以及球形芽孢杆菌杀虫蛋白)的多核苷酸。在一些实施例中，该苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自下组，该组由以下各项组成：cry1蛋白，cry3蛋白，cry7蛋白，cry8蛋白，cry23蛋白，cry36蛋白，cry37蛋白，cry34蛋白连同cry35蛋白，修饰的cry3a蛋白，以及由其产生的杂交蛋白。在其他实施例中，该苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自下组，该组由以下各项组成：cry3bb1，cry34ab1连同cry35ab1，mcry3a以及ecry3.1ab。在另一个实施例中，该转基因植物和转基因种子是一种玉米植物或玉米种子。在另一个实施例中，该转基因玉米植物通过一种包含本发明的dsrna的第一转基因玉米植物与一种包含选自下组的转基因事件的转基因玉米植物杂交而提供，该组由以下各项组成：mir604、事件5307、das51922-7、mon863以及mon88017。即使在该杀虫剂或杀虫种子包衣有效对抗一种不同的昆虫的情况下，该杀虫剂或杀虫种子包衣对于扩展昆虫控制的范围是有用的，例如通过将一种具有对抗鳞翅目昆虫活性的杀虫剂或杀虫种子包衣加入本发明的转基因植物或种子(具有对抗鞘翅目昆虫的活性)中，所处理的植物或包衣的转基因种子控制鳞翅目和鞘翅目害虫两者。在另外的实施例中，本发明涵盖来自本发明的转基因植物、种子或其部分的生物样品，其中该样品包括作为本发明的dsrna或编码本发明的dsrna的至少一条链的核酸。在其他实施例中，本发明涵盖一种衍生自本发明的转基因植物、种子或其部分的商品产品。在一些实施例中，该商品产品选自下组，该组由以下各项组成：整个或经处理的种子、豆类、谷物、籽粒、壳、粉、粗碾去壳谷类、面粉、糖、糖、淀粉、蛋白质浓缩物、蛋白质分离物、蜡、油、提取物、汁、浓缩物、液体、糖浆、饲料、青贮饲料、纤维、纸或其他从植物生产的食物或产品。在其他实施例中，该生物样品或商品产品对昆虫具有毒性。在其他实施例中，该转基因植物是一种转基因玉米植物。本发明进一步涵盖一种控制根萤叶甲属昆虫的方法，该方法包括使该根萤叶甲属昆虫与一种作为本发明的干扰rna分子或能够产生本发明的干扰rna分子的核酸分子接触，该干扰rna分子用于抑制组蛋白基因在根萤叶甲属昆虫中的表达，从而控制该根萤叶甲属昆虫。在一些实施例中，该组蛋白基因包括一个组蛋白编码序列(i)与seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体具有至少80％一致性、至少85％一致性、至少90％一致性、至少95％一致性、至少96％一致性、至少97％一致性、至少98％一致性、或至少99％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体；或(iii)包括编码由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47编码的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体。在一些实施例中，该组蛋白编码序列包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47。在其他实施例中，本发明的干扰rna分子与可从根萤叶甲属组蛋白基因转录的mrna多核苷酸的一部分互补。在控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法的一些实施例中，该干扰rna分子包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48的从18、19、20、或21个连续核苷酸至至少约300个连续核苷酸，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，本发明的干扰rna包括以下各项，基本由或由以下各项组成：(a)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:3(dvh4mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:3的核苷酸1至291；(b)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:7(dvh2bmrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:7的核苷酸1至核苷酸351；(c)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:29(duh4-1mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:29的核苷酸1至291；(d)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:33(duh4-2mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:33的核苷酸1至核苷酸291；(e)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:38(duh2bmrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:38的核苷酸1至351；(f)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:43(dbh4mrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:43的核苷酸1至核苷酸291；或(f)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:48(dbh2bmrna)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:48的核苷酸1至351。换言之，控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法包括一种干扰rna，该干扰rna包括，例如，291个seqidno:3的19个连续核苷酸子序列(即，19-mer)中任一个，例如，碱基1-19(5'-augacuggacguggaaagg-3')(seqidno:11)、碱基2-20(5'-ugacuggacguggaaaggg-3')(seqidno:12)、碱基3-21(5'-gacuggacguggaaagggu-3')(seqidno:13)依次类推直至碱基291-309(5'-uuuguacgguuuugguggu-3')(seqidno:14)，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法包括一种干扰rna，该干扰rna包括由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:7(dvh2bmrna)的任何19-mer子序列，基本由其组成或由其组成，其中n是seqidno:4的核苷酸1至核苷酸351。换言之，被靶向的mrna的该部分包括351个seqidno:7的19个连续核苷酸子序列(即，19-mer)中任一个，例如，碱基1-19(5'-augccuccuaagacgagug-3')(seqidno:15)、碱基2-20(5'-ugccuccuaagacgagugg-3')(seqidno:16)、碱基3-21(5'-gccuccuaagacgaguggu-3')(seqidno:17)依次类推直至碱基351-369(5'-uaaauacacaaguucuaag-3')(seqidno:18)，基本由其组成或由其组成。在仍其他的实施例中，控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法包括一种干扰rna，本发明的该干扰rna包括seqidno:3、seqidno:7、seqidno:29、seqidno:33、seqidno:38、seqidno:43、或seqidno:48，基本由其组成或由其组成。在控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法的一些实施例中，该干扰rna分子包括以下各项，基本由或由以下各项组成：(a)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:4(dvh4*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:4的核苷酸1至291；(b)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:8(dvh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:7的核苷酸1至核苷酸351；(c)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:30(duh4-1*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:30的核苷酸1至291；(d)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:34(duh4-2*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:34的核苷酸1至核苷酸291；(e)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:39(duh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:39的核苷酸1至351；(f)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:44(dbh4*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:44的核苷酸1至核苷酸291；或(f)由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:49(dbh2b*)的任何19-mer子序列，其中n是seqidno:49的核苷酸1至351。换言之，控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法包括一种干扰rna，该干扰rna包括，例如，291个seqidno:4的19个连续核苷酸子序列(即，19-mer)中的任一个，例如，碱基1-19(5'-uacugaccugcaccuuucc-3')(seqidno:19)、碱基2-20(5'-acugaccugcaccuuuccc-3')(seqidno:20)、碱基3-21(5'-cugaccugcaccuuuccca-3')(seqidno:21)依次类推直至碱基291-309(5'-aaacaugccaaaaccacca-3')(seqidno:22)，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法包括一种干扰rna，该干扰rna包括由n至n+18个核苷酸组成的seqidno:8(dvh2b*)的任何19-mer子序列的核苷酸序列，基本由其组成或由其组成，其中n是seqidno:8的核苷酸1至核苷酸351。换言之，该反义链包括351个seqidno:8的19个连续核苷酸子序列(即，19-mer)中的任一个，例如，碱基1-19(5'-uacggaggauucugcucac-3')(seqidno:23)、碱基2-20(5'-acggaggauucugcucacc-3')(seqidno:24)、碱基3-21(5'-cggaggauucugcucacca-3')(seqidno:25)依次类推直至碱基351-369(5'-ugauuuauguguucaagau-3')(seqidno:26)，基本由其组成或由其组成。在其他实施例中，控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法包括一种干扰rna，该干扰rna包括核苷酸序列seqidno:4、seqidno:8、seqidno:30、seqidno:34、seqidno:39、seqidno:44、或seqidno:49，基本由其组成或由其组成。在控制根萤叶甲属昆虫有害生物的方法的一些实施例中，该根萤叶甲属昆虫选自下组，该组由以下各项组成：巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)，西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)，黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)，黄瓜条根萤叶甲(带状黄瓜甲虫)，黄瓜十一星叶甲(西方斑点黄瓜甲虫)，斯格尼根萤叶甲(3斑叶甲)，南美叶甲(菊花甲虫)以及墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。在控制根萤叶甲属昆虫的方法的其他实施例中，该接触包括(a)种植转基因种子，该转基因种子能够产生一种表达该核酸分子的转基因植物，其中该根萤叶甲属昆虫摄食该转基因植物或其部分；或(b)将包括该核酸分子的组合物施用至种子或植物或其部分，其中该根萤叶甲属昆虫摄食该种子、该植物或其部分。在一些实施例中，该转基因种子和该转基因植物是一种玉米种子或一种玉米植物。在其他施例中，该种子或植物是一种玉米种子或一种玉米植物。本发明还涵盖一种减少转基因植物上的成虫根萤叶甲属昆虫种群的方法，该转基因植物表达cry蛋白、杂种cry蛋白、或修饰的cry蛋白，该方法包括在该转基因植物中表达一种作为干扰rna或能够产生干扰rna的核酸分子，从而减少该成虫根萤叶甲属昆虫种群，该干扰rna能够抑制组蛋白基因在成虫根萤叶甲属昆虫中的表达。在一些实施例中，本发明涵盖一种降低可从组蛋白基因转录的靶标mrna在根萤叶甲属昆虫中的水平的方法，该方法包括使该根萤叶甲属昆虫与一种包括本发明的干扰rna分子的组合物接触，其中该干扰rna分子降低该靶标rna在根萤叶甲属昆虫的细胞中的水平。在一些实施例中，该方法的干扰rna包括至少一个dsrna，其中该dsrna是包括退火的互补链的一个双链rna的区域，其中一条链包括一个至少19个连续核苷酸的序列，该序列与在根萤叶甲属组蛋白靶基因内的靶核苷酸序列是至少部分互补的，并且其中该干扰rna分子(i)与seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸片段，或其互补体具有至少85％一致性；或(ii)包括seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47的至少一个19个连续核苷酸片段，或其互补体；或(iii)包括编码由seqidno:2、seqidno:6、seqidno:28、seqidno:32、seqidno:37、seqidno:42、或seqidno:47编码的氨基酸序列的核苷酸序列的至少一个19个连续核苷酸的片段，或其互补体，其中该干扰rna分子下调在靶标根萤叶甲属昆虫中的组蛋白靶基因。在另一个实施例中，通过根萤叶甲属昆虫摄食该组合物来实现接触。在其他实施例中，由该靶标mrna编码的组蛋白蛋白质的产生被减少。在其他实施例中，该组蛋白蛋白质是h4组蛋白或h2b组蛋白。在其他实施例中，该组蛋白蛋白质包括与seqidno:9、seqidno:10、seqidno:35、seqidno:40、seqidno:45、或seqidno:50具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％一致性的氨基酸。在其他实施例中，该组蛋白蛋白质包括seqidno:9或seqidno:10。在其他实施例中，该干扰rna通过表达该干扰rna的转基因生物体与根萤叶甲属昆虫接触。在其他实施例中，该转基因生物体是一种转基因植物、转基因细菌或转基因内寄生菌。在其他实施例中，通过将可接受的农用载体中的干扰rna局部地施用至根萤叶甲属昆虫摄食的植物或植物部分来使该干扰rna与该根萤叶甲属昆虫接触。在一些实施例中，减少可从组蛋白基因转录的靶标mrna在根萤叶甲属昆虫中的水平的干扰rna对该根萤叶甲属昆虫而言是致死的。在一些实施例中，该根萤叶甲属昆虫选自下组，该组由以下各项组成：巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)，西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)，黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)，黄瓜条根萤叶甲(带状黄瓜甲虫)，黄瓜十一星叶甲(西方斑点黄瓜甲虫)，斯格尼根萤叶甲(3斑叶甲)，南美叶甲(菊花甲虫)以及墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。在一些实施例中，本发明涵盖一种赋予植物或其部分对根萤叶甲属昆虫耐受性的方法，该方法包括向该植物或其部分中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物，其中本发明的dsrna分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物对于该根萤叶甲属昆虫是有毒的，从而赋予该植物或其部分对该根萤叶甲属昆虫的耐受性。在其他实施例中，通过转化一种植物细胞并且自该转化的植物细胞产生该转基因植物来进行该引入步骤。在仍其他实施例中，通过共同培育两种植物来进行该引入步骤。在其他实施例中，本发明涵盖一种减少被根萤叶甲属昆虫摄食的植物的根损害的方法，该方法包括向该植物的细胞中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物，其中本发明的dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物对于根萤叶甲属昆虫是有毒的，从而减少对该植物的根损害。在其他实施例中，通过转化一种植物细胞并且自该转化的植物细胞产生该转基因植物来进行该引入步骤。在仍其他实施例中，通过共同培育两种植物来进行该引入步骤。在仍其他的实施例中，本发明涵盖一种产生对根萤叶甲属昆虫具有毒性的转基因植物细胞的方法，该方法包括向植物细胞中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物，从而产生与对照植物细胞相比，对该根萤叶甲属昆虫具有毒性的转基因植物细胞。在一些实施例中，本发明涵盖多个由这一方法产生的转基因植物细胞。在其他实施例中，使该多个转基因植物细胞在包括天然日光的条件下生长。在其他实施例中，通过转化一种植物细胞并且自该转化的植物细胞产生该转基因植物来进行该引入步骤。在仍其他实施例中，通过共同培育两种植物来进行该引入步骤。在一些实施例中，本发明涵盖一种产生对根萤叶甲属昆虫摄食损害具有增强的耐受性的转基因植物的方法，该方法包括向植物中引入一种本发明的干扰rna分子、dsrna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物，从而产生与对照植物相比，对根萤叶甲属昆虫摄食损害具有增强的耐受性的转基因植物。在其他实施例中，通过转化一种植物细胞并且自该转化的植物细胞产生该转基因植物来进行该引入步骤。在仍其他实施例中，通过共同培育两种植物来进行该引入步骤。在一些实施例中，本发明涵盖一种为玉米种植者提供控制玉米作物中的根萤叶甲属昆虫有害生物种群的手段的方法，该方法包括(a)向该种植者销售或为其提供包括一种本发明的干扰rna、核酸分子、核酸构建体、嵌合核酸分子、人工植物微小rna前体分子、和/或组合物的转基因玉米种子；并且(b)向该种植者做广告宣传该转基因玉米种子产生控制根萤叶甲属昆虫种群的转基因玉米植物。实例通过参考以下具体的实例可以进一步描述本发明。这些实例仅仅是出于说明性目的而提供的，并且并不旨在进行限制，除非另外指明。实例1.鉴定西方玉米根萤叶甲中的组蛋白基因这一实例描述了来自根萤叶甲属昆虫的组蛋白基因和编码序列的克隆和测序。西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫；wcr)和黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫；scr)rna分离购买可商购的wcr和scr卵(特点作物公司(cropcharacteristics,inc)，法明顿，明尼苏达州)并且在大约30℃和周围相对湿度下孵育。收集新羽化的新生scr(大约100-200只)并且基本根据制造商的说明，用picopuretmrna分离试剂盒(生命科技公司(lifetechnologies)，卡尔斯巴德，加利福尼亚)提取总rna。通过分光光度法测量rna浓度并且通过吸光度比值a260/280和a260/230评估纯度。巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫；ncr)rna分离ncr卵获得自usdaarsncarl(布鲁金斯(brookings)，南达科他州)处的昆虫饲养工厂并且在约30℃和周围相对湿度下进行孵育。收集新羽化的新生虫(共约20只)并且基本根据制造商的说明，用picopuretmrna分离试剂盒(生命科技公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚)提取总rna。通过分光光度法测量rna浓度并且通过a260/280和a260/230比值评估纯度。西方玉米根萤叶甲焦磷酸测序文库制备和测序基本根据制造商的说明，在一个454平台(454生命科学公司(454lifesciences)，布兰福德，康涅狄格州)上通过焦磷酸测序对全身新生wcr转录组进行测序。将所得测定序列(read)(即，核酸序列的短片段)进行修整并使用mira组装器进行组装(参见例如，chevreux等人，2004，genomeres.[基因组研究]14:1147-1159，通过引用结合在此)。西方玉米根萤叶甲、黄瓜十一星叶甲食根亚种以及巴氏根萤叶甲illumina文库制备和测序在illuminahi-seq2000上对全身新生转录组进行测序，并且基本根据制造商的说明书构建100bp配对端文库。将这些生成的2x100hi-seq测定序列进行检索并且分块进行。将这些测定序列在支持mpi的sge集群上使用abyss版本1.3.5进行组装。针对每个样品进行一种k-mer扫描以优化介于r至r/2(其中r是读数长度，约2用于步骤)之间的组装。针对每个k-mer对来自abyss的unipaths进行检索，并且使用cd-hit-est版本4.6以98％百分比一致性进行去冗余化(de-redundified)。使用cap3与所需要的100个碱基重叠处理经去冗余化的unipath库。使用cd-hit-est将这些生成的组装品进行去冗余化。然后使用abyss-scaffold程序(独立于abyss工作流程，但利用其中的许多工具)将该数据支撑起来。通过弥补缺口(gapclosing)使用soapdenovogapcloser版本1.10完成组装。使用bwa将测定序列比对至最终组装，以保证测定序列的良好合并，并且观察到覆盖图和配对结构。鉴定来自根萤叶甲属的h2b和h4基因a.通过blastx(针对一种蛋白质数据库检索核苷酸翻译)至uniprotsprot，uniprottrembl，以及基因库nr数据库，针对三种根萤叶甲属种类中的每种对组装的连续序列(在此称为叠连群)进行比较。与具有1e-10或更低的期望值的组蛋白基因匹配的叠连群被认为是潜在的重要匹配。在三种种类的每一种中鉴定全长h2b和h4基因。该wcrh4和h2bcdna序列分别是seqidno:2和seqidno:6。通过桑格测序(使用标准方法)用正向和反向引物来确认wcrh2b和wcrh4序列来扩增每个基因的完整编码序列(表1)。表1.用于扩增wcrh2b和wcrh4的编码区的引物引物名称序列(5'→3')序列标识符wcr_h2b_fp01atgcctcctaagacgagtggseqidno:51wcr_h2b_rp01cttagaacttgtgtatttagseqidno:52wcr_h4_fp02atgactggacgtggaaagggseqidno:53wcr_h4_rp02accaccaaaaccgtacaaagseqidno:54实例2.干扰rna分子的构建这一实例描述了干扰rna分子的构建，这些干扰rna分子被设计成可从根萤叶甲属组蛋白基因转录的靶标mrna。构建wcr组蛋白h2b和组蛋白h4dsrna将全长h2b和h4基因从cdna进行扩增，从分离自全身新羽化的新生虫的mrna使用标准方法进行该cdna的逆转录。使用含有t7启动子序列(表2)的引物来扩增这些基因的全长编码区，随后进行体外转录，使用标准方法以合成dsrna(还称为干扰rna分子)。将该rna通过用相同体积的5m乙酸铵沉淀进行纯化，随后用至少2体积的70％乙醇进行洗涤，并且然后用重蒸馏的水将该干燥rna球粒进行重悬浮。表2.用于扩增wcrh2b和wcrh4的编码区并且掺入t7启动子序列以促进体外转录的引物实例3.dsrna对抗玉米根萤叶甲的活性这一实例描述了测试本发明的干扰rna分子对抗玉米根萤叶甲属昆虫的生物活性。在实验室生物测定中，针对对抗玉米根萤叶甲昆虫的毒性测试上述含有dsrna的干扰rna分子。使用rna处理的人工食物法进行生物测定。简言之，将修改自marrone等人，1985，j.econ.entomol.[经济昆虫学杂志]78:290-293的食物的熔化的人工食物倾倒进24孔板的每个孔中并允许凝固。将干扰rna分子稀释至适当浓度，这样使得将60μl的溶液添加至每个孔中的食物的表面，最终覆盖浓度为100ngdsrna/cm2。向每个孔中加入一只根萤叶甲属幼虫并且将每个24孔板维持在大约28℃和16:8光照:黑暗光周期下。在侵染后第9天和第12天记录死亡率。在所有生物测定中，将被设计成靶向绿色荧光蛋白(gfp)的含有dsrna的干扰rna分子用作阴性对照。将该生物测定重复两次。对包括被设计为玉米根萤叶甲h2b和h4mrna的完整编码序列的双链rna的干扰rna分子进行对抗西方玉米根虫幼虫的测试。示于表3中的这些结果表明被设计成可从根萤叶甲属昆虫组蛋白基因转录的靶标mrna的干扰rna分子对玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)具有高毒性。在这些生物测定中，12天后，wcr组蛋白2b/wcr组蛋白2b*(seqidno:7/seqidno:8)和wcr组蛋白4/wcr组蛋白4*(seqidno:3/seqidno:4)分别产生89％和98％死亡率。表3.处理后12天，dsrna对抗玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)的活性实例4.干扰rna分子对抗黄瓜十一星叶甲食根亚种的活性这一实例描述了测试本发明的干扰rna分子对抗黄瓜十一星叶甲食根亚种的生物活性。在实验室生物测定中，针对对抗黄瓜十一星叶甲食根亚种的毒性测试上述干扰rna分子。使用rna处理的人工食物法进行生物测定。简言之，将修改自marrone等人，1985，j.econ.entomol.[经济昆虫学杂志]78:290-293的食物的熔化的人工食物倾倒进48孔板的每个孔中并允许凝固。将dsrna分子稀释至适当浓度，这样使得将20μl的溶液添加至每个孔中的食物的表面，具有在3x稀释步骤中从0.5μg/孔低至0.00022μg/孔的8种浓度的浓度系列的最终覆盖浓度。向每个孔中加入一只根萤叶甲属幼虫并且将每个48孔板维持在大约25℃和16:8光照:黑暗光周期下。在侵染后第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、和14天记录死亡率。在所有生物测定中，将被设计成靶向绿色荧光蛋白(gfp)的dsrna用作阴性对照。对包括被设计成玉米根萤叶甲h2b和h4mrna的编码序列的双链rna的干扰rna分子进行对抗南方玉米根虫幼虫的测试。示于表4中的这些结果表明包括被设计成可从根萤叶甲属昆虫组蛋白基因转录的靶标mrna的dsrna的干扰rna分子对黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)具有高毒性。在这些生物测定中，14天后，wcr组蛋白2b/wcr组蛋白2b*(seqidno:7/seqidno:8)和wcr组蛋白4/wcr组蛋白4*(seqidno:3/seqidno:4)分别产生69.7％和84.8％的死亡率。该阳性对照被设计成靶向高度表达的来自南方玉米根虫的基因。lt50是在处理时杀死半数测试的种群所需要的时间(天数)。lc50是在第14天杀死半数测试的种群所需要的浓度(以μg/孔)。通过将曲线分析应用于用abbott氏公式校正的数据获得lt50和lc50的估计值。表4.处理后14天，dsrna对抗黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)的活性干扰rna在第14天的死亡率％在0.5μg/孔的lt50在第14天的lc50gfp8.33nanascr阳性对照100.005.60.0209wcr组蛋白2b72.22120.0855wcr组蛋白486.1111.50.0444实例5.含有组蛋白dsrna的干扰rna分子在玉米植物中的表达该实例描述了将一种表达干扰rna分子的构建体引入植物细胞。载体构建被设计为发夹rna(hprna)的表达载体由含有启动子、正义链、用作环序列的内含子、反义链、以及终止子的盒组成。将两种盒设计为靶向wcrh2b或wcrh4基因；一种盒(seqidno:59)包含dvh2b(seqidno:7)和dvh2b*(seqidno:8)的正义链和反义链。另一种盒(seqidno:60)含有dvh4(seqidno:3)和dvh4*(seqidno:4)的正义链和反义链。正义链和反义链序列被限制性内切核酸酶位点侧接以促进克隆。将生成的表达盒(seqidno:59和seqidno:60)分开地克隆进适用于植物转化的二元载体中。在植物转化过程中，设计含有在左边缘与右边缘之间的第二盒的每个完整的二元载体以表达作为选择性标记的磷酸甘露糖异构酶(pmi)。该质粒还包含用于在细菌中进行选择的选择性标记。农杆菌制备使用本领域的普通技术人员已知的标准分子生物学技术将含有发夹盒的每个生成的质粒转化进根癌土壤杆菌中。为了制备用于细胞转化的农杆菌，将农杆菌在28℃和220rpm下于液体ypc培养基中培养过夜。将以上描述的载体转化进玉米中。基本如描述于negrotto等人，2000，plantcellreports[植物细胞报告]19:798-803中的进行未成熟的玉蜀黍胚的农杆菌转化。对于这个实例，所有的培养基组分基本上如在以上奈格图等人所说明。然而，本领域内已知的各种培养基成分可以被代替。转化、选择、和再生之后，测试植物的pmi基因和发夹dsrna干扰rna分子的存在。将来自pcr测定的阳性植物转移至温室中，并针对至少玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)的抗性进行了测试。全植物测定将生长于4”盆中的玉米植物中的每株植物用约200只新生玉米根虫幼虫侵染。对于每个测定，将3株植物用作未侵染对照。这包括在生物测定中被侵染的试验植物、表达wcr蛋白性状的纯合植物(阳性对照),和阴性对照植物为代表的单拷贝事件。这些植物在测定过程中作为用于生长条件的对照。侵染后10-14天收集数据。评价主要是比较侵染的测试植物与未侵染的和侵染的那些对照植物的主观量度。做出的一种关键视觉评价是植物是否显示出倒伏迹象，倒伏是指示由摄食根系的大量玉米根虫造成的严重损害的情况。“+”表明无明显的根损害；“-”表明强壮的支柱根，摄食次生根的一些迹象；“–”表明缺乏强壮的支柱根或缺乏次生根生长，其可能是来自摄食损害；‘---’表明显著更小的根质量，具有可能的在至少2-3个支柱根上的根损害。表5.用西方玉米根虫侵染的转基因玉米的视觉评估植物#事件+------无dsrna20002组蛋白2bdsrna158340组蛋白4dsrna157530表5中的数据表明相比阴性对照植物，表达靶向编码h2b或h4的基因的dsrna的转基因玉米植物经受更少的根损害。应当理解的是，在此描述的实例和实施例仅是出于说明性的目的，并且根据其说明书的不同修改或变化将提示本领域的技术人员并且将会包含在本申请以及随附的权利要求书的范围的精神和范围之内。在本说明书中提到的所有公开和专利申请对于本发明所涉及领域的技术人员的技术水平是指示性的。所有这些公开物和专利申请均通过引用结合在此，其程度如同每个单独的公开物或专利申请被确切地并单独地指明通过引用而被结合。序列表<110>syngentaparticipationsagdonohue,kevinliu,renshuichen,jengshong<120>鞘翅目有害生物的生物控制<130>80291-wo-reg-org-p-1<150>62/096491<151>2014-12-23<160>60<170>patentinversion3.5<210>1<211>399<212>dna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>1aattgagtaattccaggacaactgaactgattgtaccatgactggacgtggaaagggtgg60taaaggtttgggcaaaggtggcgctaaacgtcaccgtaaagtattacgtgacaacatcca120aggtattaccaagcctgctataagaagattagctcgtcgcggaggtgtaaaacgtatctc180tggtttaatctatgaggaaacgcgaggtgtattgaaagtatttttggaaaacgttattag240agatgccgttacctatactgagcacgccaaaaggaaaacagtaactgctatggatgttgt300atatgcacttaaacgacaaggtcgtactttgtacggttttggtggttaattgctattaat360ttccatccttaaaaaaaacggttcttttcagaaccacgt399<210>2<211>309<212>dna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>2atgactggacgtggaaagggtggtaaaggtttgggcaaaggtggcgctaaacgtcaccgt60aaagtattacgtgacaacatccaaggtattaccaagcctgctataagaagattagctcgt120cgcggaggtgtaaaacgtatctctggtttaatctatgaggaaacgcgaggtgtattgaaa180gtatttttggaaaacgttattagagatgccgttacctatactgagcacgccaaaaggaaa240acagtaactgctatggatgttgtatatgcacttaaacgacaaggtcgtactttgtacggt300tttggtggt309<210>3<211>309<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>3augacuggacguggaaagggugguaaagguuugggcaaagguggcgcuaaacgucaccgu60aaaguauuacgugacaacauccaagguauuaccaagccugcuauaagaagauuagcucgu120cgcggagguguaaaacguaucucugguuuaaucuaugaggaaacgcgagguguauugaaa180guauuuuuggaaaacguuauuagagaugccguuaccuauacugagcacgccaaaaggaaa240acaguaacugcuauggauguuguauaugcacuuaaacgacaaggucguacuuuguacggu300uuugguggu309<210>4<211>309<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh4mrna的反义链<400>4uacugaccugcaccuuucccaccauuuccaaacccguuuccaccgcgauuugcaguggca60uuucauaaugcacuguuguagguuccauaaugguucggacgauauucuucuaaucgagca120gcgccuccacauuuugcauagagaccaaauuagauacuccuuugcgcuccacauaacuuu180cauaaaaaccuuuugcaauaaucucuacggcaauggauaugacucgugcgguuuuccuuu240ugucauugacgauaccuacaacauauacgugaauuugcuguuccagcaugaaacaugcca300aaaccacca309<210>5<211>478<212>dna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>5tcggggkagktttcactttgattttcaaagagtaagcgtcattttgtttttgcgatgcct60cctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaagcagggaaagcccagaagaacatttcaaaa120accgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagytatgctatttacatttataaagta180ctcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagtaaggctatgagtatcatgaacagt240tttgtaaatgatatttttgaaagaatcgcagctgaagcttctcgtttagctcattataat300aaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaaccgcagtacgtttattacttcctgga360gaattagctaaacacgctgtcagtgaaggtaccaaagctgttactaaatacacaagttct420aagtaatcaagaabtttcatctattaattataacmaaacggttcttttcagaaccaac478<210>6<211>369<212>dna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>6atgcctcctaagacgagtggtaaagctgctaaaaaagcagggaaagcccagaagaacatt60tcaaaaaccgataagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagytatgctatttacatttat120aaagtactcaaacaagtgcatcctgataccggtatttccagtaaggctatgagtatcatg180aacagttttgtaaatgatatttttgaaagaatcgcagctgaagcttctcgtttagctcat240tataataaacgttctacaattacaagcagagaaattcaaaccgcagtacgtttattactt300cctggagaattagctaaacacgctgtcagtgaaggtaccaaagctgttactaaatacaca360agttctaag369<210>7<211>369<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>7augccuccuaagacgagugguaaagcugcuaaaaaagcagggaaagcccagaagaacauu60ucaaaaaccgauaagaaaaagaagcgaaagaggaaggaaagyuaugcuauuuacauuuau120aaaguacucaaacaagugcauccugauaccgguauuuccaguaaggcuaugaguaucaug180aacaguuuuguaaaugauauuuuugaaagaaucgcagcugaagcuucucguuuagcucau240uauaauaaacguucuacaauuacaagcagagaaauucaaaccgcaguacguuuauuacuu300ccuggagaauuagcuaaacacgcugucagugaagguaccaaagcuguuacuaaauacaca360aguucuaag369<210>8<211>369<212>rna<213>人工序列<220><223>dvh2bmrna的反义链<400>8uacggaggauucugcucaccauuucgacgauuuuuucgucccuuucgggucuucuuguaa60aguuuuuggcuauucuuuuucuucgcuuucuccuuccuuucrauacgauaaauguaaaua120uuucaugaguuuguucacguaggacuauggccauaaaggucauuccgauacucauaguac180uugucaaaacauuuacuauaaaaacuuucuuagcgucgacuucgaagagcaaaucgagua240auauuauuugcaagauguuaauguucgucucuuuaaguuuggcgucaugcaaauaaugaa300ggaccucuuaaucgauuugugcgacagucacuuccaugguuucgacaaugauuuaugugu360ucaagauuc369<210>9<211>103<212>prt<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>9metthrglyargglylysglyglylysglyleuglylysglyglyala151015lysarghisarglysvalleuargaspasnileglnglyilethrlys202530proalaileargargleualaargargglyglyvallysargileser354045glyleuiletyrglugluthrargglyvalleulysvalpheleuglu505560asnvalileargaspalavalthrtyrthrgluhisalalysarglys65707580thrvalthralametaspvalvaltyralaleulysargglnglyarg859095thrleutyrglypheglygly100<210>10<211>122<212>prt<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>10metproprolysthrserglylysalaalalyslysalaglylysala151015glnlysasnileserlysthrasplyslyslyslysarglysarglys202530glutyralailetyriletyrlysvalleulysglnvalhisproasp354045thrglyileserserlysalametserilemetasnserphevalasn505560aspilephegluargilealaalaglualaserargleualahistyr65707580asnlysargserthrilethrserarggluileglnthralavalarg859095leuleuleuproglygluleualalyshisalavalsergluglythr100105110lysalavalthrlystyrthrserserlys115120<210>11<211>19<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>11augacuggacguggaaagg19<210>12<211>19<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>12ugacuggacguggaaaggg19<210>13<211>19<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>13gacuggacguggaaagggu19<210>14<211>19<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>14uuuguacgguuuugguggu19<210>15<211>19<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>15augccuccuaagacgagug19<210>16<211>19<212>rna<213>玉米根萤叶甲（diabroticavirgifera）<400>16ugccu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