包含DR5‑结合结构域的多价分子的制作方法

相关申请的交叉引用本申请要求美国专利申请号62/149,139(2015年4月17日提交；未决)和62/107,871(2015年1月26日提交；未决)的优先权，其每一篇申请均通过引用以其整体并入本文。序列表的引用根据37c.f.r.1.821以及下面的条款，本申请包括一个或多个序列表，所述序列表以计算机可读介质(文件名：1301.0118pct_sequence_listing_st25.txt，其生成于2015年5月18日，大小为215,084字节)公开，并且通过引用将所述文件以其整体并入本文。
背景技术：
：：本发明涉及多价dr5结合分子，其包括抗-dr5抗体的结合结构域(一个或多个)，尤其是抗-人dr5抗体的结合结构域(一个或多个)。本发明的dr5结合分子包括具有两个、三个或四个dr5-结合结构域的二价和四价分子，每一个结合结构域均能结合人dr5。尤其地，本发明涉及多价dr5结合分子，其包括双抗体，更具体而言，包括两条或多条多肽链的共价结合的复合物的双抗体。本发明尤其涉及这样的多价dr5结合分子，其包括抗-dr5抗体dr5mab1和/或dr5mab2片段，和/或这样的抗体的人源化和嵌合形式。相关技术的描述：i.死亡受体5(“dr5”)健康动物保持对肿瘤细胞的连续免疫监督。通过各种生长因子、细胞因子和激素的相互作用，这样的动物可介导遇到的受损细胞的程序化死亡(凋亡)。获得对这种细胞死亡过程的抗性的受损细胞和获得以不受控制的方式进行复制的能力的受损细胞可变成肿瘤细胞并导致癌症(abdulghani,j.等(2010)“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108；andera,l.(2009)“signalingactivatedbythedeathreceptorsofthetnfrfamily,”biomed.pap.med.fac.univ.palackyolomoucczech.repub.153(3):173-180；carlo-stella,c.等(2007)“targetingtrailagonisticreceptorsforcancertherapy,”clin,cancer13(8):2313-2317；chaudhari,b.r.等(2006)“followingthetrailtoapoptosis,”immunologicres.35(3):249-262)。能够选择性靶向细胞死亡途径以便对正常细胞不发挥作用同时提高杀死癌症细胞的这种途径效率的方法在癌症治疗中特别令人感兴趣。肿瘤坏死因子(tnf)超家族的成员——包括fas配体、tnf和tnf-相关的凋亡诱导配体(trail)——已经被鉴别为癌症生物疗法的靶标(walczak,h.(2013)“deathreceptor–ligandsystemsincancer,celldeath,andinflammation,”coldspringharb.perspect.biol.2013；5:a008698；1-19页；falschlehner,c.等(2007)“trailsignalling:decisionsbetweenlifeanddeath,”intl.j.biochem.cellbiol.39:1462-1475；abdulghani,j.等(2010)“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108)。trail是由效应淋巴细胞表达的细胞因子。响应细胞因子，尤其是在trail基因启动子中具有应答元件的干扰素-γ，trail表达于免疫效应细胞诸如天然杀伤细胞、巨噬细胞、树突细胞和细胞毒性t细胞的表面上(allen,j.e.等(2012)“regulationofthehumantrailgene,”cancerbiol.ther.13(12):1143-1151)。其表达水平在新分离的淋巴细胞中极其低，并且，仅小部分的天然杀伤(nk)细胞表达可检测的trail。据信，trail在调节涉及干扰素的固有免疫应答、增强针对肿瘤细胞的宿主应答和改变微环境以增强抗原呈递和促进nk细胞和其它免疫系统细胞的组织渗入中发挥作用。trail-诱导的凋亡和由常规化疗和放疗诱导的凋亡之间的一个重要区别是后者很大程度上依赖于例如p53肿瘤抑制蛋白的细胞损伤识别(dimberg,l.y.等(2013)“onthetrailtosuccessfulcancertherapy？predictingandcounteractingresistanceagainsttrail-basedtherapeutics,”oncogene32:1341-1350)。依赖于p53来引起凋亡应答造成了癌症治疗中的问题，因为由于失活突变在一半以上的所有癌症细胞中发生p53的丢失(hollstein,m.等(1994)“databaseofp53genesomaticmutationsinhumantumorsandcelllines,”nucleicacidsres.22:3551-3555)。trail是ii型蛋白质，具有281个氨基酸残基，并且与tnf-α和fasl(cd95l)具有同源性(chaudhari,b.r.等(2006)“followingthetrailtoapoptosis,”immunologicres.35(3):249-262)。trail由细胞外tnf-样结构域、细胞外柄、跨膜螺旋和胞质结构域组成。trail结合两种不同类型的受体：触发trail-诱导的凋亡的死亡受体(dr)和抑制该途径的诱杀型受体。至今，已经识别对trail特异的两种人死亡受体：trail-r1(也称为dr4)和trail-r2(也称为dr5)。另外，已经鉴别三种公认的诱杀型受体：trail-r3(dcr1)、trail-r4(dcr2)和护骨蛋白(chaudhari,b.r.等(2006)“followingthetrailtoapoptosis,”immunologicres.35(3):249-262；carlo-stella,c.等(2007)“targetingtrailagonisticreceptorsforcancertherapy,”clin,cancer13(8):2313-2317；allen,j.e.等(2012)“regulationofthehumantrailgene,”cancerbiol.ther.13(12):1143-1151)。trail-r1(dr4)以非常低的水平表达于大部分人组织中，包括脾、胸腺、肝、外周血白细胞、激活的t细胞、小肠和一些肿瘤细胞系。相比之下，trail-r2(dr5)普遍分布于正常和肿瘤细胞系中，但是在脾、外周血白细胞、激活的淋巴细胞和肝细胞中更丰富(abdulghani,j.等(2010)“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108)。dr4和dr5是一次跨膜(single-pass)i型膜蛋白，并且由位于染色体8p上的两个基因编码。dr4和dr5各包含胞外区——其包括富含半胱氨酸的结构域(crds)、跨膜结构域和位于受体胞质部分内的死亡结构域。已经鉴别了dr5的两个剪接突变体——长dr5(dr5(l))和短dr5(dr5(s))。这些突变体在定位于受体的crd和其跨膜结构域之间的29个氨基酸的一段序列中有差异。在trail结合之后，dr4和dr5能够转导凋亡信号(vanroosmalen,i.a.m.等(2014)“twodeath-inducinghumantrailreceptorstotargetincancer:similarordistinctregulationandfunction？,”biochem.pharamcol.91:447-456)。当trail结合于dr4或dr5时，受体同源三聚化(homotrimerize)，使得受体的死亡结构域能够征募衔接蛋白fas-缔合的死亡结构域和胱天蛋白酶8(胱天蛋白酶原8)的失活的、未切割形式或胱天蛋白酶10(胱天蛋白酶原10)的未切割形式。受体、具有死亡结构域的fas-缔合的蛋白质和胱天蛋白酶原8或胱天蛋白酶原10一起形成死亡诱导信号复合物(disc)。在disc处，在依赖二聚化和切割的过程中，胱天蛋白酶原8被激活。然后，激活的胱天蛋白酶8切割下游底物，最终导致效应胱天蛋白酶3的切割和激活。胱天蛋白酶3的激活引发分子激活事件的级联，最终导致死亡底物的产生(schneider-brachert,w.等(2013)“membranetraffickingofdeathreceptors:implicationsonsignalling,”int.j.mol.sci.14:14475-14503；falschlehner,c.等(2009)“trailandothertrailreceptoragonistsasnovelcancertherapeutics,”在以下:therapeutictargetsofthetnfsuperfamily(grewal,i.s.,ed.)landesbioscienceandspringerscience+businessmedia,ny；195-206页；falschlehner,c.等(2007)“trailsignalling:decisionsbetweenlifeanddeath,”intl.j.biochem.cellbiol.39:1462-1475；guicciardi,m.e.等(2009)“lifeanddeathbydeathreceptors,”fasebj.23:1625-1637；kischkel,f.c.等(2000)“apo2l/trail-dependentrecruitmentofendogenousfaddandcaspase-8todeathreceptors4and5,”immunity12:611-620；dimberg,l.y.等(2013)“onthetrailtosuccessfulcancertherapy？predictingandcounteractingresistanceagainsttrail-basedtherapeutics,”oncogene32:1341-1350；buchsbaum,d.j.等(2007)“trail-receptor-antibodiesasapotentialcancertreatment,”futureoncol.3(4):405-409；buchsbaum,d.j.等(2006)“trailreceptor-targetedtherapy,”futureoncol.2(4):493-508；andera,l.(2009)“signalingactivatedbythedeathreceptorsofthetnfrfamily,”biomed.pap.med.fac.univ.palackyolomoucczech.repub.153(3):173-180；chan,f.k.-m.(2007)“threeisbetterthanone:pre-ligandreceptorassemblyintheregulationoftnfreceptorsignaling,”cytokine37(2):101-107)。三种诱杀型受体或者充当诱饵或者转导抗凋亡信号(carlo-stella,c.等(2007)“targetingtrailagonisticreceptorsforcancertherapy,”clin,cancer13(8):2313-2317；mahmood,z.等(2010)“deathreceptors:targetsforcancertherapy,”exper.cell.res.316:887-899；oikonomou,e.等(2013)“thetrailofoncogenestoapoptosis,”intl.junionbiochem.molec.biol.39(4):343-354)。除了这样的“外在”途径之外，trail还可通过“内在”途径介导细胞死亡(carlo-stella,c.等(2007)“targetingtrailagonisticreceptorsforcancertherapy,”clin,cancer13(8):2313-2317；buchsbaum,d.j.等(2006)“trailreceptor-targetedtherapy,”futureoncol.2(4):493-508；buchsbaum,d.j.等(2007)“trail-receptor-antibodiesasapotentialcancertreatment,”futureoncol.3(4):405-409)。内在途径由促细胞凋亡蛋白质bid的切割激活而介导，所述bid然后结合其他促细胞凋亡蛋白质，以形成介导细胞色素c从线粒体释放的复合物。这样的释放触发了胱天蛋白酶释放和导致细胞死亡的激活的级联(kandasamy,k.等(2003)“involvementofproapoptoticmoleculesbaxandbakintumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand(trail)-inducedmitochondrialdisruptionandapoptosis:differentialregulationofcytochromecandsmac/diablorelease,”cancerres.63:1712-1721；rudner,j.等(2005)“typeiandtypeiireactionsintrail-inducedapoptosis–resultsfromdose-responsestudies,”oncogene24:130-140)。然而，分子途径是复杂的。根据细胞类型，配体信号的相对强度和持续时间，以及向trail受体下游发信号的细胞内蛋白的存在、不存在或激活状态，用trail进行治疗可刺激凋亡，或者在极少数情况下刺激细胞增殖(abdulghani,j.等(2010)“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108；andera,l.(2009)“signalingactivatedbythedeathreceptorsofthetnfrfamily,”biomed.pap.med.fac.univ.palackyolomoucczech.repub.153(3):173-180)。而且，对于诱导凋亡，某些癌症具有dr偏爱(即，dr4或dr5)，然而其他肿瘤类型并不(vanroosmalen,i.a.m.等(2014)“twodeath-inducinghumantrailreceptorstotargetincancer:similarordistinctregulationandfunction？,”biochem.pharamcol.91:447-456)。ii.trail蛋白和抗-dr抗体的治疗用途由于trail在其识别和杀伤受损细胞的能力方面是高度选择性的，同时对正常细胞不起作用，所以，可溶性重组trail已经被声明在癌症(例如，结直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤；肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌和直肠癌)治疗中具有潜在的效用(见，micheau,o.等(2013)“deathreceptorsastargetsincancer,”br.j.pharmacol.169:1723-1744)；falschlehner,c.等(2009)“trailandothertrailreceptoragonistsasnovelcancertherapeutics,”在以下中:therapeutictargetsofthetnfsuperfamily(grewal,i.s.,ed.)landesbioscienceandspringerscience+businessmedia,ny；195-206页；buchsbaum,d.j.等(2006)“trailreceptor-targetedtherapy,”futureoncol.2(4):493-508；wajant,h.等(2013)“engineeringdeathreceptorligandsforcancertherapy,”canc.lett.332:163-174；buchsbaum,d.j.等(2007)“trail-receptor-antibodiesasapotentialcancertreatment,”futureoncol.3(4):405-409；abdulghani,j.等(2010)(“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108；finnberg,n.等(2008)“traildeathreceptorsastumorsuppressorsanddrugtargets,”cellcycle7(11):1525-1528；hellwig,c.t.等(2012)“trailsignalingandsynergymechanismsusedintrail-basedcombinationtherapies,”molec.cancerther.11(1):3-13；henson,e.s.等(2008)“theroleoftraildeathreceptorsinthetreatmentofhematologicalmalignancies,”leukemia&lymphoma49(1):27-35；huang,y.等(2007)“traildeathreceptorsandcancertherapeutics,”toxicol.appl.pharmacol.224:284-289；humphreys,r.c.等(2008)“trailreceptors:targetsforcancertherapy,”在以下中:programmedcelldeathincancerprogressionandtherapykhosravi-far,r.和white,e.(eds.)springer,ny；127-158页；koschny,r.等(2007)“thepromiseoftrail–potentialandrisksofanovelanticancertherapy,”j.molec.med.85:923-935；kruyt,f.a.e.(2008)“trailandcancertherapy,”cancerlett.263:14-25；kuijlen,j.m.a.等(2010)“review:ontrailformalignantgliomatherapy？,”neuropathol.appl.neurobiol.36:168-182；mellier,g.等(2010)(“trailingdeathincancer,”molec.aspectsmed.31:93-112；rahman,m.等(2009)“thetrailtotargetedtherapyofbreastcancer,”adv.cancerres.103:43-73；voelkel-johnson,c.(2011)“trail-mediatedsignalinginprostate,bladderandrenalcancer,”nat.rev.urol.8:417-427)。由于提供更大的选择性，已经提议了可能能够模仿trail的信号传导的抗-dr4和抗-dr5单克隆抗体(buchsbaum,d.j.等(2006)“trailreceptor-targetedtherapy,”futureoncol.2:493-508；kelley,s.k.等(2004)“targetingdeathreceptorsincancerwithapo2l/trail,”curr.opin.pharmacol.4:333-339；papenfuss,k.等(2008)“deathreceptorsastargetsforanti-cancertherapy,”j.cell.mol.med.12:2566-2585；debruyn,m.等(2013)“antibody-basedfusionproteinstotargetdeathreceptorsincancer,”cancerlett.332:175-183)。已经报道了马帕木单抗(mapatumumab)——一种抗-dr4激动剂抗体(人类基因组科学公司(humangenomesciences))——的三个ii期临床研究在患有非霍奇金淋巴瘤(nhl)、结直肠癌(crc)和非小细胞肺癌(nsclc)的患者中显示治疗作用(greco,f.a.等(2008)“phase2studyofmapatumumab,afullyhumanagonisticmonoclonalantibodywhichtargetsandactivatesthetrailreceptor-1,inpatientswithadvancednon-smallcelllungcancer,”lungcancer61:82-90；trarbach,t.等(2010)“phaseiitrialofmapatumumab,afullyhumanagonisticmonoclonalantibodythattargetsandactivatesthetumournecrosisfactorapoptosis-inducingligandreceptor-1(trail-r1),inpatientswithrefractorycolorectalcancer,”br.j.cancer102:506-512；falschlehner,c.等(2009)“trailandothertrailreceptoragonistsasnovelcancertherapeutics,”在以下中:therapeutictargetsofthetnfsuperfamily(grewal,i.s.,ed.)landesbioscienceandspringerscience+businessmedia,ny；195-206页)。tra-8/cs-1008——一种人源化抗-dr5抗体(daiichisankyo(东京，日本))——被报道在体外针对星形细胞瘤和白血病细胞和在体内针对移植的乳腺癌细胞已经显示高的抗肿瘤活性(buchsbaum,d.j.等(2003)“antitumorefficacyoftra-8anti-dr5monoclonalantibodyaloneorincombinationwithchemotherapyand/orradiationtherapyinahumanbreastcancermodel,”clin.cancerres.9:3731-3741；ichikawa,k.等(2001)“tumoricidalactivityofanovelanti-humandr5monoclonalantibodywithouthepatocytecytotoxicity,”nat.med.7:954-960；saleh,m.n.等(2008)“aphaseistudyofcs-1008(humanizedmonoclonalantibodytargetingdeathreceptor5ordr5),administeredweeklytopatientswithadvancedsolidtumorsorlymphomas,”2008ascoannualmeetingproceedings,j.clin.oncol.26(20s):摘要3537)。mdra-6(igg1-k)——一种鼠科抗-人抗-dr5单克隆抗体(河南大学(henanuniversity))——已经被报道能够经trail外在途径诱导jurkat细胞的凋亡(du,y.-w.等(2011)“anovelagonisticanti-humandeathreceptor5monoclonalantibodywithtumoricidalactivityinducescaspase-andmitochondrial-dependentapoptosisinhumanleukemiajurkatcells,”cancerbiother.radiopharmaceut.26(2):143-152)。嵌合dr-5-靶向抗体lby135(novartis)已被报道已经以10nm或更少的ic50在一组40个人克隆癌细胞系的50％中诱导了凋亡，并已经在小鼠中的人结直肠癌异种移植模型中验证了体内抗肿瘤活性(li,j.等(2008)“lby135,anovelanti-dr5agonisticantibodyinducestumorcell-specificcytotoxicactivityinhumancolontumorcelllinesandxenografts,”drugdev.res.69:69-82；sharma,s.等(2008)“phaseitrialoflby135,amonoclonalantibodyagonisttodr5,aloneandincombinationwithcapecitabineinadvancedsolidtumors,”2008ascoannualmeetingproceedings.j.clin.oncol.26(15s):3538)。处于临床开发中的另外的抗-dr抗体包括：阿泊单抗(apomab)(camidge,d.等(2007)“aphaseisafetyandpharmacokineticstudyofapomab,ahumandr5agonistantibody,inpatientswithadvancedcancer,”2007ascoannualmeetingproceedings(post-meetingedition),j.clin.oncol.25(18s):3582；johnstone,r.w.等(2008)“thetrailapoptoticpathwayincanceronset,progressionandtherapy,”nat.rev.cancer8:782-798)；amg655(lorusso,p.等(2007)“first-in-humanstudyofamg655,apro-apoptotictrailreceptor-2agonist,inadultpatientswithadvancedsolidtumors.”2007ascoannualmeetingproceedingsparti.j.clin.oncol.25(18s):3534)；可那木单抗(conatumumab)(bajaj,m.等(2011)“conatumumab:anovelmonoclonalantibodyagainstdeathreceptor5forthetreatmentofadvancedmalignanciesinadults,”expertopin.biol.ther.11(11):1519-1524)；来沙木单抗(lexatumumab)——一种抗-dr5激动剂抗体(人类基因组科学公司(humangenomesciences))(plummer,r.等(2007)“phase1andpharmacokineticstudyoflexatumumabinpatientswithadvancedcancers,”clin.cancerres.13:6187-6194)；曲兹妥单抗(drozitumab)(kang,z.等(2011)“drozitumab,ahumanantibodytodeathreceptor5,haspotentantitumoractivityagainstrhabdomyosarcomawiththeexpressionofcaspase-8predictiveofresponse,”clin.cancerres.17(10):3181-3192；zinonos,i.等(2014)“doxorubicinovercomesresistancetodrozitumabbyantagonizinginhibitorofapoptosisproteins(iaps),”anticancerres.34(12):7007-7020；xiang,h.等(2013)“deathreceptor5agonisticantibodypro95780:preclinicalpharmacokineticsandconcentration-effectrelationshipsupportclinicaldoseandregimenselection,”cancerchemother.pharmacol.72(2):405-415；stern,h.m.等(2010)“developmentofimmunohistochemistryassaystoassessgalnt14andfut3/6inclinicaltrialsofdulanerminanddrozitumab,”clin.cancerres.16(5):1587-1596)和kmtr2(nagane,m.等(2010)“predominantantitumoreffectsbyfullyhumananti-trail-receptor2(dr5)monoclonalantibodiesinhumangliomacellsinvitroandinvivo,”neuro.oncol.12(7):687-700；motoki,k.等(2005)“enhancedapoptosisandtumorregressioninducedbyadirectagonistantibodytotumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligandreceptor2,”clin.cancerres.11(8):3126-3135)。抗-dr抗体的用途在以下文献中有评论：falschlehner,c.等(2009)(“trailandothertrailreceptoragonistsasnovelcancertherapeutics,”在以下中:therapeutictargetsofthetnfsuperfamily(grewal,i.s.,ed.)landesbioscienceandspringerscience+businessmedia,ny；195-206页)；hellwig,c.t.等(2012)(“trailsignalingandsynergymechanismsusedintrail-basedcombinationtherapies,”molec.cancerther.11(1):3-13)；huang,y.等(2007)(“traildeathreceptorsandcancertherapeutics,”toxicol.appl.pharmacol.224:284-289)；humphreys,r.c.等(2008)(“trailreceptors:targetsforcancertherapy,”在以下中:programmedcelldeathincancerprogressionandtherapykhosravi-far,r.andwhite,e.(eds.)springer,ny；127-158页)；kruyt,f.a.e.(2008)(“trailandcancertherapy,”cancerlett.263:14-25)；mellier,g.等(2010)(“trailingdeathincancer,”molec.aspectsmed.31:93-112)；oldenhuis,c.n.a.m.等(2008)(“targetingtraildeathreceptors,”curr.opin.pharmacol.8:433-439)；papenfuss,k.等(2008)(“deathreceptorsastargetsforanti-cancertherapy,”j.cell.mol.med.12(6b):2566-2585)；micheau,o.等(2013)(“deathreceptorsastargetsincancer,”br.j.pharmacol.169:1723-1744；和vanroosmalen,i.a.m.等(2014)(“twodeath-inducinghumantrailreceptorstotargetincancer:similarordistinctregulationandfunction？,”biochem.pharamcol.91:447-456)。当前的数据表明，这样的药剂耐受良好，并且，血浆半衰期小于12天，然而，这种疗法的潜在应用受限于这样的实事：一些原发性癌细胞抵抗trail凋亡，甚至在与化学疗法联合治疗之后(buchsbaum,d.j.等(2007)“trail-receptor-antibodiesasapotentialcancertreatment,”futureoncol.3(4):405-409；还参见dimberg,l.y.等(2013)“onthetrailtosuccessfulcancertherapy？predictingandcounteractingresistanceagainsttrail-basedtherapeutics,”oncogene32:1341-1350；falschlehner,c.等(2009)“trailandothertrailreceptoragonistsasnovelcancertherapeutics,”在以下中:therapeutictargetsofthetnfsuperfamily(grewal,i.s.,ed.)landesbioscienceandspringerscience+businessmedia,ny；195-206页；maksimovic-ivanic,d.等(2012)“resistancetotrailandhowtosurmountit,”immunol.res.52:157-168)。尽管这样的抗体疗法的前景，但研究已经显示，一些抗-dr单克隆抗体对于临床应用还未显示足够的选择性。这可反映这样的实事：在九个报道的变体中，trail的仅一种特异性同种型显示这样的选择性(allen,j.e.等(2012)“regulationofthehumantrailgene,”cancerbiol.ther.13(12):1143-1151)。已经在体外观察到通过一些rtrail和抗-dr单克隆抗体在正常人细胞诸如肝细胞或角质形成细胞中诱发凋亡(jo,m.等(2000)“apoptosisinducedinnormalhumanhepatocytesbytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand,”nat.med.6:564-567；lawrence,d,等(2001)“differentialhepatocytetoxicityofrecombinantapo2l/trailversions,”nat.med.7:383-385；mori,e.等(2004)“humannormalhepatocytesaresusceptibletoapoptosissignalmediatedbybothtrail-r1andtrail-r2,”cell.deathdiffer.11:203-207；qin,j.等(2001)“avoidingprematureapoptosisofnormalepidermalcells,”nat.med.7:385-386)。当用较高剂量(20mg/kg)的来自人类基因组科学公司(humangenomesciences)的来沙木单抗(lexatumummab)抗-dr5激动剂抗体时，在少数患者中报道了随着增加的血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和胆红素的肝毒性(plummer,r.等(2007)“phase1andpharmacokineticstudyoflexatumumabinpatientswithadvancedcancers,”clin.cancerres.13:6187-6194)。抗-dr抗体公开在美国专利号8,790,663；8,715,668；8,703,712；8,461,311；8,409,570；8,372,396；8,329,180；8,173,128；8,097,704；8,067,001；8,030,023；8,029,783；7,981,421；7,897,730；7,893,216；7704502和7,476,383中；公开在美国专利公布号2014/0370019；2014/0308288；2014/0105898；2014/0004120；2014/0010812；2013/0324433；2013/0280282；2013/0243780；2013/0064838；2012/0184718；2012/0087922；2012/0070432；2011/0070248；2010/0080806；2009/0317384；2009/0317396；2009/0208483；2009/0175854和2009/0136503中；公开在欧洲专利公布号ep2021370；ep1790663；ep2059533；ep1506285；ep1576179；ep2636736；ep2684896；ep2636736；ep2569336；ep2046836；ep2480230；ep2368910；ep2350641；ep2292794；ep2287285；ep2292794和ep2021370中；和公开在wipo专利公布号wo2014/159562；wo2014/161845；wo2014/050779；wo2014/035474；wo2014/009358；wo2013/163229和wo2013/148877中。也已经报道了双特异性抗体分子，其具有能够结合肿瘤抗原的scfv结构域和能够结合于死亡受体或结合于fas的可溶性trail(strail)或fas(cd95)配体(fasl)结构域(见，wajant,h.等(2013)“engineeringdeathreceptorligandsforcancertherapy,”canc.lett.332:163-174)。肿瘤选择性抗体片段与strail和sfasl的这种遗传融合产生了高度选择性的抗癌疗法，其具有有利的抗癌特征。然而，应用的融合蛋白的大小是非靶向可溶性配体的两倍。因此，该途径似乎受限于融合蛋白扩散通过多细胞以进入到实体肿瘤中的相对困难(debruyn,m.等(2013)“antibody-basedfusionproteinstotargetdeathreceptorsincancer,”cancerlett.332:175-183)。能够结合于dr5的双特异性抗体分子公开在美国专利公布号2014/0370019；2014/0308288；2013/0243780；2012/0184718和2009/0175854；公开在欧洲专利公布号ep1790663；ep2059533；ep2684896和ep2350641中；和公开在wipo公布号wo2014/159562；wo2014/161845；wo2014/050779；wo2014/009358和wo2013/148877中。除了其在癌症治疗中的潜力之外，trail也已经被提议作为潜在的疗法用于治疗细菌病原体(benedict,c.a.等(2012)“trail:notjustfortumorsanymore？,”j.exp.med.209(11):1903-1906)。trail在哮喘气道的结构变化中也可发挥作用，因为其由各种炎性细胞，包括嗜伊红粒细胞，表达(chaudhari,b.r.等(2006)“followingthetrailtoapoptosis,”immunologicres.35(3):249-262)。可溶性trail制剂的应用的一个缺点是其相对短的体内半衰期(大约30分钟；walczak,h.等(1999)“tumoricidalactivityoftumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligandinvivo,”nat.med.5:157-163)。另外，可溶性重组trail能够结合于trail受体(从而促进癌症治疗)和结合于trail诱杀型受体(从而推定不提供治疗益处)。trail在心血管疾病中也可发挥作用(martin-ventura,j.l.等(2007)“trailandvascularinjury,”frontiersinbioscience12:3656-3667)和在炎症中发挥作用(walczak,h.(2013)“deathreceptor–ligandsystemsincancer,celldeath,andinflammation,”coldspringharb.perspect.biol.2013；5:a008698；1-19页)。而利用trail疗法的临床试验已经在患者中显示低毒性，当trail激动剂被用作单一疗法时已观察到令人沮丧的小的治疗效果(dimberg,l.y.等(2013)“onthetrailtosuccessfulcancertherapy？predictingandcounteractingresistanceagainsttrail-basedtherapeutics,”oncogene32:1341-1350)。该结论反映这样的观察：发现已经进化成肿瘤细胞的相当部分的受损细胞是抵抗trail的。这样的经历已经得出了这样的结论：trail疗法可非常有益，但仅针对小部分患者(dimberg,l.y.等(2013)“onthetrailtosuccessfulcancertherapy？predictingandcounteractingresistanceagainsttrail-basedtherapeutics,”oncogene32:1341-1350)。trail抗性的多种机制已经被鉴别(maksimovic-ivanic,d.等(2012)“resistancetotrailandhowtosurmountit,”immunol.res.52:157-168；dimberg,l.y.等(2013)“onthetrailtosuccessfulcancertherapy？predictingandcounteractingresistanceagainsttrail-basedtherapeutics,”oncogene32:1341-1350；thorburn,a.等(2008)“trailreceptor-targetedtherapeutics:resistancemechanismsandstrategiestoavoidthem,”drugresist.updat.11(1-2):17-24；whiteside,t.l.(2007)“theroleofdeathreceptorligandsinshapingtumormicroenvironment,”immunol.investig.36:25-46)。在假定的解释中是某些胱天蛋白酶(例如，胱天蛋白酶8)通过trail-抗性肿瘤细胞的表达降低的可能性，或者胱天蛋白酶抑制剂(例如，xiap、ciap)通过这样的细胞的表达增加的可能性，或者凋亡抑制剂(例如，bcl-2、mcl-1等)通过这样的细胞的表达增加的可能性(abdulghani,j.等(2010)“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108；buchsbaum,d.j.等(2006)“trailreceptor-targetedtherapy,”futureoncol.2(4):493-508)。可选地，trail抗性可反映肿瘤细胞的trail受体中的缺陷的存在，或者针对死亡受体诸如flip或诱杀型受体trail-r3和trail-r4非常具有选择性的抑制剂的表达增加。见，abdulghani,j.等(2010)(“trailreceptorsignalingandtherapeutics,”expertopin.ther.targets14(10):1091-1108)。鉴于这样的抗性，基于trail的疗法通常被建议仅用作被提供来与其他化学治疗剂协作的药剂(buchsbaum,d.j.等(2006)“trailreceptor-targetedtherapy,”futureoncol.2(4):493-508)。因此，尽管存在所有的现有技术进步，但是仍需要能够为患有癌症或其他疾病和病况的患者提供改进的治疗价值的抗-dr5抗体和包括dr5-结合结构域的分子。本发明针对该目标和其他目标。发明概述：本发明涉及多价dr5结合分子，其包括抗-dr5抗体的结合结构域(一个或多个)，尤其是抗-人dr5抗体的结合结构域(一个或多个)。本发明的dr5结合分子包括具有两个、三个或四个dr5-结合结构域的二价和四价分子，每一个结合结构域均能结合人dr5。尤其地，本发明涉及多价dr5结合分子，其包括双抗体，更具体而言，包括两条或多条多肽链的共价结合的复合物的双抗体。本发明尤其涉及这样的多价dr5结合分子，其包括抗-dr5抗体dr5mab1和/或dr5mab2的片段和/或这样的抗体的人源化和嵌合形式。具体来说，本发明提供多价dr5结合分子，其是双特异性结合分子，能够同时结合人死亡受体5(dr5)的两个不同表位，其中多价dr5结合分子包括四个抗原-结合结构域，其各自能够结合人dr5。本发明还提供多价dr5结合分子，其是单特异性结合分子，能够结合于人dr5的表位，其中多价dr5结合分子包括四个抗原-结合结构域，其各自能够结合人dr5。本发明尤其关注所有这样的能够同时结合两个、三个或四个人dr5多肽的多价dr5结合分子的实施方式。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中多价dr5结合分子是含fc区的双抗体，所述双抗体是共价结合的复合物，其包括两对多肽，其中每一对均包括第一多肽链和第二多肽链。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中：(a)第一多肽链在n-末端到c-末端方向包括：(i)能够结合第一dr5表位的单克隆抗体的可变轻链(vl)结构域(vl1)；(ii)第一肽接头(接头1)；(iii)能够结合第二dr5表位的单克隆的可变重链(vh)结构域(vh2)；(iv)第二肽接头(接头2)；(v)异源二聚体促进结构域，其包括e-螺旋结构域或k-螺旋结构域；(vi)第三肽接头(接头3)；和(vii)iggfc区的多肽部分，其具有igg免疫球蛋白fc区的ch2和ch3结构域；和(b)第二多肽链在n-末端到c-末端方向包括：(i)能够结合于第二dr5表位的单克隆抗体的vl结构域(vl2)；(ii)第一肽接头(接头1)；(iii)能够结合于第一dr5表位的单克隆的vh结构域(vh1)；(iv)第二肽接头(接头2)；和(v)异源二聚体促进结构域，其包括e-螺旋结构域或k-螺旋结构域，其中第一多肽链的异源二聚体促进结构域和第二多肽链的异源二聚体促进结构域不同时是e-螺旋结构域或不同时是k-螺旋结构域；并且其中：(a)第一多肽链的vl1结构域和第二多肽链的vh1结构域形成抗原-结合结构域，其能够特异性结合于dr5的第一表位；(b)第一多肽链的vh2结构域和第二多肽链的vl1结构域形成抗原-结合结构域，其能够特异性结合dr5的第二表位；和(c)第一多肽链对的ch2-ch3部分形成iggfc区。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中：(i)接头1具有氨基酸序列seqidno:33，(ii)接头1具有氨基酸序列seqidno:47，(iii)e-螺旋结构域具有氨基酸序列seqidno:seqidno:41，(iv)k-螺旋结构域具有氨基酸序列seqidno:42，(v)接头3具有氨基酸序列seqidno:51，和(vi)ch2-ch3结构域具有氨基酸序列seqidno:1或seqidno:102，其中c-末端残基任选地被包括。本发明还关注所有这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中fc区包括一个或多个氨基酸修饰，所述修饰降低变异fc区对fcγr的亲和力或使fc区稳定。本发明还关注所有这样的dr5结合分子的实施方式，其中修饰包括以下的取代：l234a；l235a；或l234a和l235a。本发明尤其关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中vl1包括cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域，和vh1包括cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域，其中：(i)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab1的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6，并且cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab1的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:9、seqidno:10和seqidno:11；或(ii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:14、seqidno:15和seqidno:16，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；或(iii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是hdr5mab2vl-3的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:162、seqidno:15和seqidno:16，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是hdr5mab2vh-3的重链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；或(iv)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:55、seqidno:56和seqidno:57，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:59、seqidno:60和seqidno:61；或(v)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:63、seqidno:64和seqidno:65，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:67、seqidno:68和seqidno:69；或(vi)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:71、seqidno:72和seqidno:73，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:75、seqidno:76和seqidno:77；或(vii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:79、seqidno:80和seqidno:81，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:83、seqidno:84和seqidno:85；或(viii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:87、seqidno:88和seqidno:89，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:91、seqidno:92和seqidno:93；或(ix)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:95、seqidno:96和seqidno:97，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:99、seqidno:100和seqidno:101。本发明尤其关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中vl2包括cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域，和vh2包括cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域，其中：(i)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab1的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab1的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:9、seqidno:10和seqidno:11；或(ii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:14、seqidno:15和seqidno:16，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；或(iii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:162、seqidno:15和seqidno:16，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；或(iv)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:55、seqidno:56和seqidno:57，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:59、seqidno:60和seqidno:61；或(v)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:63、seqidno:64和seqidno:65，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:67、seqidno:68和seqidno:69；或(vi)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:71、seqidno:72和seqidno:73，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:75、seqidno:76和seqidno:77；或(vii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:79、seqidno:80和seqidno:81，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:83、seqidno:84和seqidno:85；或(viii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:87、seqidno:88和seqidno:89，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:91、seqidno:92和seqidno:93；或(ix)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr，并分别具有氨基酸序列：seqidno:95、seqidno:96和seqidno:97，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:99、seqidno:100和seqidno:101。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中vl1和vl2包括相同的cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域，和其中vh1和vh2包括相同的cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域，尤其涉及这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中：(i)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab1的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab1的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:9、seqidno:10和seqidno:11；或(ii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:14、seqidno:15和seqidno:16，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；或(iii)cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:162、seqidno:15和seqidno:16，和cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中vl1和vl2不包括相同的cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域，和其中vh1和vh2不包括相同的cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域，尤其涉及这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中：(i)vl1的cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab1的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6，和vh1的cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab1的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:9、seqidno:10和seqidno:11；和vl2的cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:14、seqidno:15和seqidno:16，和vh2的cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；或(ii)vl1的cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab2的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:14、seqidno:15和seqidno:16，和vh1的cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab2的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:19、seqidno:20和seqidno:21；和vl2的cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域是dr5mab1的轻链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:4、seqidno:5和seqidno:6，和vh2的cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域是dr5mab1的重链cdr并分别具有氨基酸序列：seqidno:9、seqidno:10和seqidno:11。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中：(a)(i)vl1具有氨基酸序列seqidno:3和vh1具有氨基酸序列seqidno:8；或(ii)vl1具有氨基酸序列seqidno:13和vh1具有氨基酸序列seqidno:18；或(iii)vl1具有氨基酸序列seqidno:23和vh1具有氨基酸序列seqidno:31；或(iv)vl1具有氨基酸序列seqidno:25和vh1具有氨基酸序列seqidno:31；或(vi)vl1具有氨基酸序列seqidno:27和vh1具有氨基酸序列seqidno:31；或(vii)vl1具有氨基酸序列seqidno:29和vh1具有氨基酸序列seqidno:31；或(viii)vl1具有氨基酸序列seqidno:54和vh1具有氨基酸序列seqidno:58；或(ix)vl1具有氨基酸序列seqidno:62和vh1具有氨基酸序列seqidno:66；或(x)vl1具有氨基酸序列seqidno:70和vh1具有氨基酸序列seqidno:74；或(xi)vl1具有氨基酸序列seqidno:78和vh1具有氨基酸序列seqidno:82；或(xii)vl1具有氨基酸序列seqidno:86和vh1具有氨基酸序列seqidno:90；或(xiii)vl1具有氨基酸序列seqidno:94和vh1具有氨基酸序列seqidno:98；并且其中：(b)(i)vl2具有氨基酸序列seqidno:3和vh2具有氨基酸序列seqidno:8；或(ii)vl2具有氨基酸序列seqidno:13和vh2具有氨基酸序列seqidno:18；或(iii)vl2具有氨基酸序列seqidno:23和vh2具有氨基酸序列seqidno:31；或(iv)vl2具有氨基酸序列seqidno:25和vh2具有氨基酸序列seqidno:31；或(vi)vl2具有氨基酸序列seqidno:27和vh2具有氨基酸序列seqidno:31；或(vii)vl2具有氨基酸序列seqidno:29和vh2具有氨基酸序列seqidno:31；或(viii)vl2具有氨基酸序列seqidno:54和vh2具有氨基酸序列seqidno:58；或(ix)vl2具有氨基酸序列seqidno:62和vh2具有氨基酸序列seqidno:66；或(x)vl2具有氨基酸序列seqidno:70和vh1具有氨基酸序列seqidno:74；或(xi)vl2具有氨基酸序列seqidno:78和vh1具有氨基酸序列seqidno:82；或(xii)vl2具有氨基酸序列seqidno:86和vh1具有氨基酸序列seqidno:90；或(xiii)vl2具有氨基酸序列seqidno:94和vh2具有氨基酸序列seqidno:98。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中vl1和vl2具有相同的氨基酸序列和其中vh1和vh2具有相同的氨基酸序列。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中vl1和vl2不具有相同的氨基酸序列和其中vh1和vh2不具有相同的氨基酸序列。本发明还关注这样的多价dr5结合分子的实施方式，其中多价dr5结合分子是含fc区的双抗体，所述双抗体是共价结合的复合物，其包括两对多肽，其中：(i)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:116或seqidno:120和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:118；或(ii)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:122或seqidno:126和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:124；或(iii)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:128或seqidno:132和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:130；或(iv)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:134或seqidno:138和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:136；或(v)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:140或seqidno:144和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:142；或(vi)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:146或seqidno:150和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:148；或(vii)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:152或seqidno:156和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:154；或(vi)第一多肽链具有氨基酸序列seqidno:158或seqidno:162和第二多肽链具有氨基酸序列seqidno:160。本发明还关注组合物，其包括任意上述多价dr5结合分子和赋形剂。本发明还关注这样的组合物，其进一步包括组蛋白脱乙酰酶抑制剂。本发明还关注促进细胞死亡的方法，包括使细胞暴露于任意上述多价dr5结合分子。尤其地，其中细胞是肿瘤细胞。本发明还关注这样的促进细胞死亡的方法，其进一步包括使细胞暴露于组蛋白脱乙酰酶抑制剂。本发明还关注这样的实施方式，其中任意上述多价dr5结合分子被用于治疗癌症。本发明还关注这样的实施方式，其中任意上述多价dr5结合分子联合组蛋白脱乙酰酶抑制剂用于治疗癌症。本发明还关注这样的实施方式，其中任意上述多价dr5结合分子被可检测地标记，并且被用于癌症的诊断或预后。本发明尤其关注任意上述多价dr5结合分子在癌症治疗或诊断或预后中的这样的用途，其中癌症通过癌细胞的存在来表征，所述癌细胞选自如下的细胞：肾上腺肿瘤、aids-有关的癌症、软组织腺泡状肉瘤、星形细胞肿瘤、膀胱癌、骨癌、脑和脊髓癌、转移性脑肿瘤、乳腺癌、颈动脉体肿瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、脊索瘤、嫌色细胞肾细胞癌、透明细胞癌、结肠癌、结直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、成纤维细胞性小圆细胞肿瘤、室管膜瘤、尤文氏肿瘤、骨外黏液样软骨肉瘤、不完全性骨纤维生成、骨纤维发育不良、胆囊或胆管癌、胃癌、妊娠滋养层疾病、生殖细胞肿瘤、头颈癌、肝细胞癌、胰岛细胞肿瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、白血病、脂瘤/良性脂肪瘤、脂肪肉瘤/恶性脂肪瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、多发性内分泌瘤形成、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、成神经细胞瘤、神经内分泌肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、儿科癌症(pediatriccancer)、末梢神经鞘肿瘤、嗜铬细胞瘤(phaeochromocytoma)、垂体肿瘤、前列腺癌、后眼色素层(posteriousuveal)黑素瘤、罕见的血液疾病、肾转移性癌、杆状(rhabdoid)肿瘤、横纹肌肉瘤(rhabdomysarcoma)、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、滑膜肉瘤、睪丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移性癌和子宫癌。本发明尤其关注任意上述多价dr5结合分子在癌症治疗或诊断或预后中的这样的用途，其中癌是结直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤；肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌或直肠癌。本发明尤其关注任意上述多价dr5结合分子在癌症治疗或诊断或预后中的这样的用途，其中癌是急性髓样白血病(aml)、慢性骨髓性白血病(cml)、急性b成淋巴细胞白血病(b-all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、毛细胞白血病(hcl)、母细胞性浆细胞样(blasticplasmacytoid)树突细胞赘生物(bpdcn)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)——包括套细胞白血病(mcl)和小淋巴细胞淋巴瘤(sll)、霍奇金淋巴瘤、系统性肥大细胞增生病或伯基特淋巴瘤。附图简述图1提供具有两个表位结合位点的、由两条多肽链组成的代表性共价结合的双抗体分子的示意图，所述多肽链各具有e-螺旋或k-螺旋异源二聚体促进结构域。识别相同表位的vl和vh结构域利用相同的阴影显示。在某些实施方式中，表位是相同抗原的不同表位，导致双特异性分子，其对于各表位是单价的，但对于抗原(例如，dr5)是二价的。在某些实施方式中，表位是相同的表位(例如，相同的vl结构域cdr和vh结构域cdr被用于各链上)，导致二价的单特异性分子。图2提供具有两个表位结合位点的、由两条多肽链组成的代表性共价结合的双抗体分子的示意图，每条多肽链各具有ch2和ch3结构域，以便有关的链形成包括天然产生的fc区的全部或部分的fc区。识别相同表位的vl和vh结构域利用相同的阴影显示。在某些实施方式中，表位是相同抗原的不同表位，导致双特异性分子，其对于各表位是单价的，但对于抗原(例如，dr5)是二价的。在某些实施方式中，表位是相同的表位(例如，相同的vl结构域cdr和vh结构域cdr被用于各链上)，导致二价的单特异性分子。图3提供示意图，其显示代表性四价双抗体分子，其由两对多肽链组成(即，一共四条多肽链)。各对中的一条多肽具有ch2和ch3结构域，以便有关的链形成包括天然产生的fc区的全部或部分的fc区。识别相同表位的vl和vh结构域利用相同的阴影显示。两对多肽链可以是相同的。在其中vl和vh结构域识别不同表位(如所示)的这样的实施方式中，所得分子是双特异性的，并对于各结合的位点是二价的。在其中vl和vh结构域识别相同表位(例如，相同的vl结构域cdr和相同的vh结构域cdr被用于各链上)的这样的实施方式中，所得分子是单特异性的，并且对于单一表位是四价的。可选地，两对多肽可以是不同的。在其中各对多肽的vl和vh结构域识别不同表位(如所示)的这样的实施方式中，所得分子是四特异性的，并且对于各结合的位点是单价的。在其中表位是相同抗原的所有表位的实施方式中，所得分子对于抗原(例如，dr5)是四价的。在某些实施方式中，表位是相同表位(例如，相同的3个cdrl和相同的3个cdrh结构域被用于各链上)，所得分子是单特异性和四价的。图4a和4b提供也是由两对多肽链(即，总共四条多肽链)组成的可选四价双抗体分子的示意图。各对中的一条多肽具有ch2和ch3结构域，以便有关的链形成包括天然产生的fc区的全部或部分的fc区。识别相同表位的vl和vh结构域利用相同的阴影显示。两对多肽链可以是相同的。在其中vl和vh结构域识别不同表位(如所示)的这样的实施方式中，所得分子是双特异性的，并且对于各结合表位是二价的。在其中vl和vh结构域识别相同表位(例如，相同的vl结构域cdr和相同的vh结构域cdr被用于两条链上)的这样的实施方式中，所得分子是单特异性的，并且对于单一表位是四价的。可选地，两对多肽可以是不同的。在其中vl和vh结构域识别不同表位的这样的实施方式中，所得分子是四特异性的，并且对于各结合的位点是单价的。在其中表位是相同抗原的所有表位的实施方式中，所得分子对于抗原(例如，dr5)是四价的。在图4a中的构建体的双抗体部分显示含有fc的双抗体，其包含包括半胱氨酸残基的肽异源二聚体促进结构域。图4b显示含有fc的双抗体，其包含包括半胱氨酸残基和接头(具有任选的半胱氨酸残基)的e-螺旋和k-螺旋异源二聚体促进结构域。图5显示抗-人dr5单克隆抗体dr5mab1和dr5mab2结合人dr5和结合食蟹猴(cynomolgusmonkey)的dr5的能力。图6，版图a-h显示mab1(版图a和e)、dr5mab2(版图b和f)、dr5mab3(版图c和g)和dr5mab4(版图d和h)对人dr5(版图a-d)和对食蟹猴dr5(版图e-h)的结合动力学。图7a-7b显示dr5mab1差别地结合于肿瘤细胞的能力。图7a显示正常结肠(版图a和g)、肝(版图b和h)、肺(版图c和i)、胰(版图d和j)、肾(版图e和k)和心(版图f和l)组织的组织学染色。图7a、版图a-f显示用标记的dr5mab1(5μg/ml)孵育的组织的结果。图7a、版图g-l显示用标记的同种型对照mab(5μg/ml)孵育的组织的结果。图7b显示肿瘤性结肠(版图a和c)和肿瘤性肺(版图b和d)的组织学染色。图7b、版图a-b显示用标记的dr5mab1(5μg/ml)孵育的组织的结果。图7b、版图c-d显示用标记的同种型对照mab(5μg/ml)孵育的组织的结果。图8a-8b显示dr5mab2差别地结合于肿瘤细胞的能力。图8a显示用标记的dr5mab2(5μg/ml)孵育的正常结肠(版图a)、肾(版图b)、肺(版图c)、心(版图d)、肝(版图e)和胰(版图f)组织的组织学染色。图8b显示肿瘤性结肠(版图a和b)和肿瘤性肺(版图c和d)的组织学染色。图8b、版图a和c显示用标记的dr5mab2(5μg/ml)孵育的组织的结果。图8b、版图b和d显示用标记的同种型对照mab(5μg/ml)孵育的组织的结果。图9a-9k显示dr5mab2xcd3mab2双抗体介导786o肾细胞腺癌细胞(图9a)、a498肾癌细胞(图9b)、aspc1胰腺癌细胞(图9c)、lncap雄激素敏感性人前列腺腺癌细胞(图9d)、sw48结直肠癌腺癌细胞(图9e)、a549腺癌人肺泡基底上皮细胞(图9f)、skmes人肺癌细胞(图9g)、du145人前列腺癌细胞(图9h)、a375人恶性黑素瘤细胞(图9i)、skbr3人her2-过表达乳腺癌细胞(图9j)和jimt人乳腺癌细胞(图9k)的细胞毒性的能力。这样的靶细胞以效应物与靶细胞比为20:1或30:1在外周血单核细胞(pbmc)的存在下被孵育24小时。靶细胞的细胞毒性百分比通过测量乳酸脱氢酶(ldh)通过受损细胞向介质的释放来测定。图10a-10f显示dr5mab1和dr5mab2的预想不到的优势。优势通过比较具有dr5mab1、dr5mab2、dr5mab3或dr5mab4的vl和vh结构域的dr5xcd3双抗体介导肿瘤细胞的细胞毒性的能力来评估。应用的靶肿瘤细胞为：a549腺癌人肺泡基底上皮细胞(图10a)、skmes人肺癌细胞(图10b)、du145人前列腺癌细胞(图10c)、a375人恶性黑素瘤细胞(图10d)和skbr3人her2-过表达乳腺癌细胞(图10e)和jimt人乳腺癌细胞(图10f)。图11显示dr5mab2xcd3mab2双抗体及其人源化衍生物：hdr5mab2(2.2)xcd3mab2、hdr5mab2(2.3)xcd3mab2、hdr5mab2(2.4)xcd3mab2或hdr5mab2(2.5)xcd3mab2同时结合于dr5和cd3的能力。图12显示dr5mab2xcd3mab2双抗体及其人源化衍生物：hdr5mab2(2.2)xcd3mab2、hdr5mab2(2.3)xcd3mab2、hdr5mab2(2.4)xcd3mab2或hdr5mab2(2.5)xcd3mab2介导colo205结直肠癌细胞的细胞毒性的能力。图13显示用dr5mab1、dr5mab2、交联dr5mab1、交联dr5mab2或在没有交联情况下dr5mab1和dr5mab2的组合处理的colo205细胞的生长抑制曲线。交联dr5mab1、交联dr5mab2和在没有交联情况下dr5mab1和dr5mab2的组合能够抑制colo205细胞的生长。图14a-14c显示交联dr5mab1和交联dr5mab2均诱导凋亡，如通过提高的核小体的产生(图14a)、提高的切割的parp(图14b)和提高的活化胱天蛋白酶3(图14c)所测量的。图15a-15b显示代表性四价dr5结合分子(dr5的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双特异性四价双抗体，命名为“dr5mab2xdr5mab1fc双抗体”)不结合正常组织。图15a显示正常结肠(版图a和g)、肝(版图b和h)、肺(版图c和i)、胰(版图d和j)、肾(版图e和k)和心(版图f和l)组织的组织学染色。图15a、版图a-f显示用标记的四价dr5结合分子(dr5mab2xdr5mab1fc双抗体，0.625μg/ml)孵育的组织结果。图15a、版图g-l显示用标记的对照双抗体(4-4-20xcd3mab2，0.625μg/ml)孵育的组织结果。图15b显示另外的正常肝样品的代表性组织学染色。图15b，上面版图，显示用标记的四价dr5结合分子(dr5mab2xdr5mab1fc双抗体，0.625μg/ml)孵育的组织结果。图15b，下面版图，显示用标记的对照双抗体(4-4-20xcd3mab2，0.625μg/ml)孵育的组织结果。图16显示代表性四价dr5结合分子(dr5的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双特异性四价双抗体)有力地结合肿瘤组织。图16显示肿瘤性乳房(版图a和e)、肿瘤性结肠(版图b和f)、肿瘤性肺(版图c和g)和肿瘤性前列腺组织(版图d和h)的组织学染色。图16，版图a-d，显示用标记的四价dr5结合分子(dr5mab2xdr5mab2fc双抗体，0.625μg/ml)孵育的组织结果。图16，版图e-h，显示用标记的对照双抗体(4-4-20xcd3mab2，0.625μg/ml)孵育的组织结果。图17a-17c显示colo205(图17a)、a498(图17b)和skmes(图17c)细胞的生长抑制曲线，所述细胞经六个不同代表性四价dr5结合分子(dr5的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的单特异性或双特异性四价双抗体)——包括含有具有对fcγr降低的结合和降低的效应物功能活性的fc区变体的两个分子——处理。所有四价dr5结合分子在这些细胞中均具有潜在的细胞毒性，并且比trail-his阳性对照更有效。图18显示代表性四价dr5结合分子(dr5的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的单特异性或双特异性四价双抗体)诱导凋亡，如通过提高的核小体的产生所测量的。图19显示用以下分子处理的colo205细胞的生长抑制曲线：不同dr5结合分子，其包括三个不同代表性四价dr5结合分子(dr5的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的单特异性或双特异性四价双抗体)；和两个不同抗-dr5抗体(dr5mab8(kmtr2)；和dr5mab4(可那木单抗)，具有和不具有交联)。测试的各dr5结合分子包括fc区变体，其具有对fcγr降低的结合和降低的效应物功能活性。四价dr5结合分子的细胞毒性活性与交联无关，并比抗-dr5抗体dr5mab4和dr5mab8更有效。图20显示以下分子对癌干细胞样(cslc)reca0201细胞的细胞毒性活性：若干不同dr5结合分子，其包括三个不同代表性四价dr5结合分子(dr5的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的单特异性或双特异性四价双抗体)；和两个不同抗-dr5抗体(dr5mab8(kmtr2)和dr5mab4(可那木单抗))。测试的各dr5结合分子包括fc区变体，其具有对fcγr降低的结合和降低的效应物功能活性。所有四价dr5结合分子在这些细胞中均具有潜在的细胞毒性，并且比抗-dr5抗体dr5mab4和dr5mab8更有效。图21显示在植入有colo205细胞的小鼠中，肿瘤体积随时间的变化。在第零天，雌性hcd16afoxn1小鼠(n＝7/组)被皮下(sc)植入colo205细胞。然后，用以下物质每周处理小鼠两次：代表性四价dr5结合分子(单特异性四价dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa)，0.5、0.05、0.005mg/kg)；两个不同dr5抗体(dr5mab4(aa)，5mg/kg；dr5mab8(aa)，0.5、0.05、0.005mg/kg)或媒介物。肿瘤体积显示为组平均值±sem。发明详述本发明涉及多价dr5结合分子，其包括抗-dr5抗体的结合结构域(一个或多个)，尤其是抗-人dr5抗体的结合结构域(一个或多个)。本发明的dr5结合分子包括具有两个、三个或四个dr5-结合结构域的二价和四价分子，每一个结合结构域均能结合人dr5。尤其地，本发明涉及多价dr5结合分子，其包括双抗体，更具体而言，涉及包括两条或多条多肽链的共价结合的复合物的双抗体。本发明尤其涉及这样的多价dr5结合分子，其包括抗-dr5抗体dr5mab1和/或dr5mab2的片段和/或这样的抗体的人源化和嵌合形式。i.抗体及其结合结构域本发明的抗体是免疫球蛋白分子，其能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点特异性结合于靶标，诸如碳水化合物、多核苷酸、脂类、多肽等。如本文中使用的，术语“抗体”指单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、多克隆抗体、骆驼化抗体、单链fvs(scfv)、单链抗体、fab片段、f(ab’)片段、二硫键连接的双特异性fvs(sdfv)、内抗体和任意以上的表位-结合片段。具体地，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性片段，所述免疫球蛋白分子即含有抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子可以具有任意类型(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)、类别(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亚类。除了他们在诊断中的已知用途之外，已经显示抗体可用作治疗剂。过去几十年间已经见证了对抗体治疗潜力的兴趣的复兴，并且，抗体已经变成生物技术类药物的主流类别中的一类(chan,c.e.等(2009)“theuseofantibodiesinthetreatmentofinfectiousdiseases,”singaporemed.j.50(7):663-666)。接近200种基于抗体的药物已经被批准应用或进行开发。术语“单克隆抗体”指同源抗体群，其中单克隆抗体包括在选择性结合抗原中涉及的氨基酸(天然产生的和非天然产生的)。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一表位(或抗原位点)。术语“单克隆抗体”不仅包括完整的单克隆抗体和全长单克隆抗体，而且还包括其片段(诸如fab、fab'、f(ab')2fv)、单链(scfv)、其突变体、包括抗体部分的融合蛋白、人源化单克隆抗体、嵌合单克隆抗体和包括需要的结合抗原的特异性和能力的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任意其他修饰的构型。对于抗体的来源或其被制造的方式(例如，通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物等)，不意图是限制性的。在“抗体”的定义下，术语包括全部免疫球蛋白以及上述片段等。制造单克隆抗体的方法在本领域中是已知的。可以被应用的一种方法是以下方法：kohler,g.等(1975)“continuousculturesoffusedcellssecretingantibodyofpredefinedspecificity,”nature256:495-497或其改进。通常，单克隆抗体在小鼠、大鼠或兔子中开发。通过用免疫原性量的含有期望表位的细胞、细胞提取物或蛋白制剂免疫动物产生抗体。免疫原可以是但不限于初级细胞、培养的细胞系、癌细胞、蛋白、肽、核酸或组织。用于免疫的细胞可被培养一段时间(例如，至少24小时)，然后他们被用作免疫原。细胞本身或与非变性佐剂诸如ribi组合可被用作免疫原(见，例如，jennings,v.m.(1995)“reviewofselectedadjuvantsusedinantibodyproduction,”ilarj.37(3):119-125)。通常，当被用作免疫原时，细胞应该保持完整，并优选能存活。相比于破裂的细胞，完整的细胞可允许抗原被免疫动物更好地检测。使用变性或烈性(harsh)佐剂例如弗氏佐剂可破坏细胞，因此，其应用受阻。免疫原可以周期性间隔被多次施用，诸如两周一次或一周一次，或者可以维持在动物中的生存力这样的方式被施用(例如，在组织重组体中)。可选地，对于期望的致病表位是免疫特异性的现有单克隆抗体和任意其他等价抗体可被测序并通过本领域中已知的任意手段重组产生。在一个实施方式中，这样的抗体被测序，并且，多核苷酸序列然后被克隆到载体中，用于表达或繁殖。编码感兴趣的抗体的序列可以在宿主细胞中被维持在载体中，并且，宿主细胞然后可被扩张和冷冻，用于将来应用。这样的抗体的多核苷酸序列可被用于遗传操作，以产生本发明的多特异性(例如，双特异性、三特异性和四特异性)分子以及亲和力优化抗体、嵌合抗体、人源化抗体或犬源化(canonized)抗体，以提高抗体的亲和力或其他特点。人源化抗体的一般原则涉及保持抗体的抗原结合部分的基本序列，同时用人抗体序列交换抗体的非人剩余部分。天然抗体(诸如igg抗体)由与两条重链复合的两条轻链组成。各轻链含有可变结构域(vl)和恒定结构域(cl)。各重链含有可变结构域(vh)和三个恒定结构域(ch1、ch2和ch3)和位于ch1和ch2结构域之间的铰链结构域。因此，天然产生的免疫球蛋白(例如，igg)的基本结构单元于是具有两条轻链和两条重链的四聚体，通常被表示为约150,000da的糖蛋白。各链的氨基-末端(“n”)部分包括最初与抗原识别有关的约100至110或更多氨基酸的可变结构域。各链的羧基-末端(“c”)部分限定了恒定区，其中轻链具有单一恒定结构域和重链通常具有三个恒定结构域和铰链区。因此，igg分子的轻链的结构是n-vl-cl-c和igg重链的结构是n-vh-ch1-h-ch2-ch3-c(其中h是铰链区和n和c分别代表多肽的n-末端和c-末端)。igg分子的可变结构域由互补决定区(cdr)组成，其包含与表位和非cdr区段接触的残基，所述非cdr区段被称为框架区段(fr)，一般维持cdr环的结构和决定cdr环的位置，以便允许这样的接触(尽管某些框架残基也可接触抗原)。因此，vl和vh结构域具有结构n-fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4-c。作为(或可用作)抗体轻链的第一、第二和第三cdr的多肽在本文中分别被命名cdrl1结构域、cdrl2结构域和cdrl3结构域。类似地，作为(或可用作)抗体重链的第一、第二和第三cdr的多肽在本文中分别被命名cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域。因此，术语cdrl1结构域、cdrl2结构域、cdrl3结构域、cdrh1结构域、cdrh2结构域和cdrh3结构域针对这样的多肽：其在并入到蛋白质中时导致该蛋白质能够结合于特异性表位，无论这样的蛋白质是否是具有轻链和重链的抗体或双抗体或单链结合分子(例如，scfv、bite等)或是另一种类型的蛋白质。本发明还包括包含本发明抗-dr5抗体的单链可变结构域片段(“scfv”)的多价dr5结合分子。通过利用短连接肽链接轻链和/或重链可变结构域制备单链可变结构域片段。bird等(1988)(“single-chainantigen-bindingproteins,”science242:423-426)描述了在一个可变结构域的羧基末端和另一个可变结构域的氨基末端之间桥接大约3.5nm的连接肽的实例。已经设计和使用了其它序列的接头(bird等(1988)“single-chainantigen-bindingproteins,”science242:423-426)。接头进而可被修饰用于另外的功能，诸如连接药物或连接至固体支持物。可经重组或经合成产生单链变体。对于合成产生scfv，可使用自动合成仪。对于重组产生scfv，可将含有编码scfv的多核苷酸的合适质粒引入到合适的宿主细胞——真核细胞诸如酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞或原核细胞诸如大肠埃希氏菌(e.coli)中。编码感兴趣的scfv的多核苷酸可通过常规操作诸如多核苷酸的连接而制备。产生的scfv可利用本领域中已知的标准蛋白纯化技术分离。本发明还尤其包括包含本发明的抗-dr5抗体的人源化变体的多价dr5结合分子。术语“人源化”抗体指这样的嵌合分子，其通常利用重组技术而制备，具有衍生自非人物种的免疫球蛋白的抗原结合位点并保留基于人免疫球蛋白的结构和/或序列的分子的免疫球蛋白结构。本发明的抗-人dr5抗体包括抗体dr5mab1或dr5mab2的人源化、嵌合的或犬源化(caninized)衍生物。这样的抗体的可变结构域的多核苷酸序列可被用于遗传操作，以产生这样的衍生物和提高这样的抗体的亲和力或其他特性。人源化抗体的一般原则涉及保留抗体的抗原结合部分的基本序列，同时用人抗体序列替换抗体的非人剩余部分。人源化单克隆抗体有四个一般步骤。它们是：(1)测定起始抗体轻链和重链可变结构域的核苷酸和预测的氨基酸序列；(2)设计人源化抗体，即，决定在人源化过程中使用哪个抗体框架区；(3)实际的人源化方法/技术；和(4)人源化抗体的转染和表达。见，例如，美国专利号4,816,567；5,807,715；5,866,692；和6,331,415。抗原结合位点可包括融合到恒定结构域上的完整的可变结构域或仅包括移植到可变结构域中适当的框架区上的互补决定区(cdr)。抗原结合位点可以是野生型的或通过一个或多个氨基酸取代被修饰。这排除了恒定区在人个体中作为免疫原，但仍存在针对外源可变结构域的免疫应答的可能性(lobuglio,a.f.等(1989)“mouse/humanchimericmonoclonalantibodyinman:kineticsandimmuneresponse,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)86:4220-4224)。另一方法不仅致力于提供人衍生的恒定区，而且也致力于修饰可变结构域，以便将他们尽可能接近地重塑成人形式。已知重链和轻链的可变结构域均含有针对所讨论的抗原可以变化并决定结合能力的三个互补决定区(cdr)，侧翼为在给定物种中相对保守并推定为cdr提供支架材料(scaffolding)的四个框架区(fr)。当针对特定抗原制备非人抗体时，通过将衍生自非人抗体的cdr移植到存在于待被修饰的人抗体中的fr上，可变结构域可被“重塑”或“人源化”。已经由以下文献报道了该方法在各种抗体中的应用：sato,k.等(1993)cancerres53:851-856.riechmann,l.等(1988)“reshapinghumanantibodiesfortherapy,”nature332:323-327；verhoeyen,m.等(1988)“reshapinghumanantibodies:graftinganantilysozymeactivity,”science239:1534-1536；kettleborough,c.a.等(1991)“humanizationofamousemonoclonalantibodybycdr-grafting:theimportanceofframeworkresiduesonloopconformation,”proteinengineering4:773-3783；maeda,h.等(1991)“constructionofreshapedhumanantibodieswithhiv-neutralizingactivity,”humanantibodieshybridoma2:124-134；gorman,s.d.等(1991)“reshapingatherapeuticcd4antibody,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)88:4181-4185；tempest,p.r.等(1991)“reshapingahumanmonoclonalantibodytoinhibithumanrespiratorysyncytialvirusinfectioninvivo,”bio/technology9:266-271；co,m.s.等(1991)“humanizedantibodiesforantiviraltherapy,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)88:2869-2873；carter,p.等(1992)“humanizationofananti-p185her2antibodyforhumancancertherapy,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)89:4285-4289；和co,m.s.等(1992)“chimericandhumanizedantibodieswithspecificityforthecd33antigen,”j.immunol.148:1149-1154。在一些实施方式中，人源化抗体保存所有cdr序列(例如，人源化小鼠抗体，其含有来自小鼠抗体的所有六个cdr)。在其他实施方式中，人源化抗体具有一个或多个cdr(一、二、三、四、五或六个)，其相对于原始的抗体被改变，其相对于原始的抗体在序列上不同。已经描述了一些包含衍生自非人免疫球蛋白的抗原结合位点的“人源化”抗体分子，所述抗体分子包括嵌合抗体，其具有啮齿动物或修饰的啮齿动物v区及其融合至人恒定结构域的相关的互补决定区(cdr)(见，例如，winter等(1991)“man-madeantibodies,”nature349:293-299；lobuglio等(1989)“mouse/humanchimericmonoclonalantibodyinman:kineticsandimmuneresponse,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)86:4220-4224(1989),shaw等(1987)“characterizationofamouse/humanchimericmonoclonalantibody(17-1a)toacoloncancertumor-associatedantigen,”j.immunol.138:4534-4538；和brown等(1987)“tumor-specificgeneticallyengineeredmurine/humanchimericmonoclonalantibody,”cancerres.47:3577-3583)。其它参考文献描述在与适当的人抗体恒定结构域融合之前移植到人支撑框架区(fr)中的啮齿动物cdr(见，例如，riechmann,l.等(1988)“reshapinghumanantibodiesfortherapy,”nature332:323-327；verhoeyen,m.等(1988)“reshapinghumanantibodies:graftinganantilysozymeactivity,”science239:1534-1536；和jones等(1986)“replacingthecomplementarity-determiningregionsinahumanantibodywiththosefromamouse,”nature321:522-525)。另外的参考文献描述由重组修饰的(veneered)啮齿动物框架区支撑的啮齿动物cdr。见，例如，欧洲专利公布号519,596。这些“人源化”分子被设计，以最小化对啮齿动物抗-人抗体分子的不期望的免疫应答，其限制那些部分在人接受者中的治疗应用的持续时间和效应。其它还可利用的人源化抗体的方法由以下文献公开：daugherty等(1991)“polymerasechainreactionfacilitatesthecloning,cdr-grafting,andrapidexpressionofamurinemonoclonalantibodydirectedagainstthecd18componentofleukocyteintegrins,”nucl.acidsres.19:2471-2476和美国专利号6,180,377；6,054,297；5,997,867；和5,866,692。ii.fcγ受体(fcγr)两条重链的ch2和ch3结构域相互作用以形成fc区，其是被细胞fc受体(fcγr)识别的结构域。如本文中使用的，术语“fc区”被用于限定igg重链的c-末端区域。示例性人igg1的ch2-ch3结构域的氨基酸序列是(seqidno:1)：示例性人igg2的ch2-ch3结构域的氨基酸序列是(seqidno:164)：示例性人igg3的ch2-ch3结构域的氨基酸序列是(seqidno:168)：示例性人igg4的ch2-ch3结构域的氨基酸序列是(seqidno:103)：遍及本说明书，igg重链中的残基的编号是如kabat等,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest(免疫学关注的蛋白质的序列),第五版，publichealthservice,nh1,md(1991)中的eu索引的编号，其通过参考明确并入本文。“kabat中的eu索引”指人igg1eu抗体的编号。来自免疫球蛋白的成熟重链和轻链的可变结构域的氨基酸通过氨基酸在链中的位置被命名。kabat描述了很多抗体的氨基酸序列、鉴别了各亚组的氨基酸一致性序列并分配残基号给各氨基酸。通过参考保守的氨基酸比对所讨论的抗体与kabat中的一致性序列中的一条，kabat的编号方案可延伸到不包括在他的纲要中的抗体。用于分配残基号的这种方法已经成为领域中的标准，并容易鉴别在不同抗体中处于相等位置的氨基酸，所述抗体包括嵌合或人源化变体。例如，在人抗体轻链的位置50的氨基酸占据了与小鼠抗体轻链的位置50处的氨基酸相等的位置。已经在抗体恒定区中的一些不同位置处(例如，fc位置，包括但不限于位置270、272、312、315、356和358，如通过kabat中列出的eu索引所编号的)观察到了多态性，因此在示出的序列和现有技术中的序列之间可以存在一些轻微的差别。人免疫球蛋白的多态形式已经被很好地表征了。目前，18种gm异型是已知的：g1m(1、2、3、17)或g1m(a、x、f、z)、g2m(23)或g2m(n)、g3m(5、6、10、11、13、14、15、16、21、24、26、27、28)或g3m(b1、c3、b3、b0、b3、b4、s、t、g1、c5、u、v、g5)(lefranc、等、“thehumaniggsubclasses:molecularanalysisofstructure,functionandregulation.”pergamon、oxford、43-78页(1990)；lefranc,g.等,1979,hum.genet.:50,199-211)。具体考虑本发明的抗体可以被并入任意免疫球蛋白基因的任意异型、同种异型或单元型，并且不限于本文提供的序列的异型、同种异型或单元型。此外，在一些表达系统中，ch3结构域的c-末端氨基酸残基(上面粗体的)可以被翻译后去除。因此，ch3结构域的c-末端残基在本发明多价dr5结合分子中是任选的氨基酸残基。下面提供示例性多价dr5结合分子，其缺少seqidno:1的c-末端残基。而且，本发明尤其包括这样的构建体，其包括c-末端残基。在fc受体(fcγr)与fc区连接之后，激活和抑制信号通过fc受体(fcγr)转导。这些正好相反的功能是由于不同的受体同种型之间的结构差异造成的。受体的胞质信号传导结构域中的两个不同的结构域——称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)或基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(itims)——是造成不同应答的原因。募集不同胞质酶到这些结构中控制了fcγr-介导的细胞应答的结果。含有itam的fcγr复合物包括fcγri、fcγriia、fcγriiia，然而，含itim的复合物仅包括fcγriib。人嗜中性粒细胞表达fcγriia基因。通过免疫复合物或特异性抗体交联fcγriia聚类用于使itam与促进itam磷酸化的受体相关的激酶聚集。itam磷酸化充当syk激酶的停泊位点，syk激酶的激活导致下游底物(例如，pi3k)的激活。细胞激活导致促炎性介质的释放。fcγriib基因在b淋巴细胞上表达；其细胞外结构域与fcγriia是96％一致的，并且以不能区分的方式结合igg复合物。itim在fcγriib的胞质结构域中的存在限定了fcγr的这种抑制性亚类。最近，确定了这种抑制的分子基础。当与激活fcγr共连接时，fcγriib中的itim被磷酸化的，并且吸引肌醇聚磷酸盐5’-磷酸酶(ship)的sh2结构域，肌醇聚磷酸盐5’-磷酸酶(ship)水解由于含itam的fcγr介导的酪氨酸激酶激活而释放的磷酸肌醇信使，从而防止细胞内ca++的流入。因此fcγriib的交联抑制对fcγr连接的激活应答并抑制细胞应答。b-细胞激活、b-细胞增殖和抗体分泌因此被中止。iii.多价抗体、多价双抗体和双抗体抗体结合抗原的表位的能力取决于抗体的vl和vh结构域的存在和氨基酸序列。抗体轻链和抗体重链的相互作用，尤其地，其vl和vh结构域的相互作用形成天然抗体的两个表位结合位点之一。天然抗体能够结合于仅一种表位种类(即，他们是单特异性的)，尽管他们可以结合该种类的多个拷贝(即，显示双效价或多效价)。本发明的结合结构域以“免疫特异性”方式结合于表位。如本文中使用的，抗体、双抗体或其他表位结合分子被认为“免疫特异性地”结合另一分子的区域(即，表位)——如果相对于可选的表位，它以更大的持续时间和/或以更大的亲和力与该表位更频繁、更快速地反应或缔合(associate)。例如，免疫特异性地结合于病毒表位的抗体是以比其免疫特异性地结合其他病毒表位或非病毒表位更大的亲和力、抗体亲抗原性、更快速地和/或以更大的持续时间结合该病毒表位的抗体。通过阅读该定义还应该理解，例如，免疫特异性地结合第一靶标的抗体(或部分或表位)可以或可以不特异性或优先结合第二靶标。因此，“特异性结合”不一定要求(尽管其可以包括)排他性结合。一般而言，但不一定，结合是表示“特异性”结合。两个分子被认为能够以“物理特异性”方式彼此结合——如果这样的结合显示受体结合于其各自的配体的特异性。通过产生能同时结合两种分开且不同的抗原(或相同抗原的不同表位)的基于多特异性抗体的分子和/或通过产生针对相同表位和/或抗原具有较高效价(即，两个以上结合位点)的基于抗体的分子，可增强抗体的功能性。为了提供比天然抗体具有更大能力的分子，已经开发了各种重组双特异性抗体形式(见，例如，pct公布号wo2008/003116、wo2009/132876、wo2008/003103、wo2007/146968、wo2009/018386、wo2012/009544、wo2013/070565)，其大部分利用接头肽融合进一步结合的蛋白质(例如，scfv、vl、vh等)至抗体(iga、igd、ige、igg或igm)核心或至抗体核心内，或者融合多个抗体结合部分，例如，两个fab片段或scfv。可选的形式利用接头肽融合结合蛋白(例如，scfv、vl、vh等)至二聚化结构域诸如ch2-ch3结构域或可选的多肽(wo2005/070966、wo2006/107786awo2006/107617a、wo2007/046893)。通常，这样的方法涉及妥协和权衡。例如，pct公布号wo2013/174873、wo2011/133886和wo2010/136172公开了接头的使用可在治疗情形中引起问题并教导三特异性抗体，其中cl和ch1结构域由其各自的天然位置被交换并且vl和vh结构域已经被多样化(wo2008/027236；wo2010/108127)，以允许他们结合一个以上抗原。因此，这些文件中公开的分子牺牲结合特异性以获取结合另外的抗原种类的能力。pct公布号wo2013/163427和wo2013/119903公开了修饰ch2结构域以含有融合蛋白加合物，其包括结合结构域。文件指出，ch2结构域在介导效应物功能中可能发挥最小的作用。pct公布号wo2010/028797、wo2010028796和wo2010/028795公开了重组抗体，其fc区已经被另外的vl和vh结构域取代，以便形成三价结合分子。pct公布号wo2003/025018和wo2003012069公开了重组双抗体，其单独的链含有scfv结构域。pct公布号wo2013/006544公开了多价fab分子，其作为单一多肽链被合成，然后经历蛋白酶解，以产生异源二聚结构。因此，这些文件中公开的分子牺牲所有或一些介导效应物功能的能力以获取结合另外的抗原种类的能力。pct公布号wo2014/022540、wo2013/003652、wo2012/162583、wo2012/156430、wo2011/086091、wo2008/024188、wo2007/024715、wo2007/075270、wo1998/002463、wo1992/022583和wo1991/003493公开了添加另外的结合结构域或功能集团至抗体或抗体部分(例如，添加双抗体至抗体的轻链或添加另外的vl和vh结构域至抗体的轻链和重链或添加异源融合蛋白或彼此链接多个fab结构域)。因此，这些文件中公开的分子牺牲天然抗体结构以获取结合另外的抗原种类的能力。现有技术已经另外注意到产生在能够结合两个或多个不同表位种类(即，除了双效价或多效价之外显示双特异性或多特异性)方面不同于这样的天然抗体的双抗体的能力(见，例如，holliger等(1993)“’diabodies’:smallbivalentandbispecificantibodyfragments,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)90:6444-6448；us2004/0058400(hollinger等)；us2004/0220388(mertens等)；alt等(1999)febslett.454(1-2):90-94；lu,d.等(2005)“afullyhumanrecombinantigg-likebispecificantibodytoboththeepidermalgrowthfactorreceptorandtheinsulin-likegrowthfactorreceptorforenhancedantitumoractivity,”j.biol.chem.280(20):19665-19672；wo02/02781(mertens等)；olafsen,t.等(2004)“covalentdisulfide-linkedanti-ceadiabodyallowssite-specificconjugationandradiolabelingfortumortargetingapplications,”proteineng.des.sel.17(1):21-27；wu,a.等(2001)“multimerizationofachimericanti-cd20singlechainfv-fvfusionproteinismediatedthroughvariabledomainexchange,”proteinengineering14(2):1025-1033；asano等(2004)“adiabodyforcancerimmunotherapyanditsfunctionalenhancementbyfusionofhumanfcdomain,”摘要3p-683,j.biochem.76(8):992；takemura,s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588；baeuerle,p.a.等(2009)“bispecifict-cellengagingantibodiesforcancertherapy,”cancerres.69(12):4941-4944)。双抗体的设计是基于被称为单链可变结构域片段(scfv)的抗体衍生物。这样的分子通过利用短连接肽连接轻链和/或重链可变结构域而制备。bird等(1988)(“single-chainantigen-bindingproteins,”science242:423-426)描述了连接肽的实例，其在一个可变结构域的羧基末端和另一个可变结构域的氨基末端之间桥接大约3.5nm。已经设计和使用了其它序列的接头(bird等(1988)“single-chainantigen-bindingproteins,”science242:423-426)。接头进而可被修饰用于另外的功能，诸如连接药物或连接至固体支持物。可经重组或经合成产生单链变体。对于合成产生scfv，可使用自动合成仪。对于重组产生scfv，可将含有编码scfv的多核苷酸的合适质粒引入到合适的宿主细胞——真核细胞诸如酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞或原核细胞诸如大肠埃希氏菌中。编码感兴趣的scfv的多核苷酸可通过常规操作诸如多核苷酸的连接而制备。产生的scfv可利用本领域中已知的标准蛋白纯化技术分离。提供非单特异性双抗体提供了相对于抗体的明显的优势，包括但不限于：共连接和共定位表达不同表位的细胞的能力和通过结合相同抗原的不同表位形成分子间和/或分子内相互作用的能力。因此，双价双抗体具有广泛的应用，包括疗法和免疫诊断。在各种应用中，双特异性在设计和工程化双抗体方面具有大的灵活性，提供对多聚抗原的增强的抗体亲抗原性、不同抗原的交联和对特定细胞类型的直接靶向，这取决于靶标抗原两者的存在。由于其增加的效价、低离解速率和从循环中快速清除(对于小尺寸的双抗体，为～50kda或以下)，本领域中已知的双抗体分子在肿瘤成像领域还显示特别的用途(fitzgerald等(1997)“improvedtumourtargetingbydisulphidestabilizeddiabodiesexpressedinpichiapastoris,”proteineng.10:1221)。尤其重要的是共连接不同的细胞，例如，交联细胞毒性t细胞与肿瘤细胞(staerz等(1985)“hybridantibodiescantargetsitesforattackbytcells,”nature314:628-631和holliger等(1996)“specifickillingoflymphomacellsbycytotoxict-cellsmediatedbyabispecificdiabody,”proteineng.9:299-305；marvin等(2005)“recombinantapproachestoigg-likebispecificantibodies,”actapharmacol.sin.26:649-658)。然而，上述优势是以显著的成本获得的。这样的非单特异性双抗体的形成要求成功组装两个或多个有区别的和不同的多肽(即，这样的形成要求双抗体通过不同多肽链种类的异源二聚化而形成)。该事实与单特异性双抗体不同，其通过一致的多肽链的同源二聚化而形成。由于至少两个不同的多肽(即，两个多肽种类)必须被提供以形成非单特异性双抗体并且由于这样的多肽的同源二聚化导致失活分子(takemura,s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588)，这样的多肽的产生必须以防止相同种类的多肽之间的共价结合的方式完成(即，以便防止同源二聚化)(takemura,s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588)。因此，本领域已经教导了这样的多肽的非共价缔合(见，例如olafsen等(2004)“covalentdisulfide-linkedanti-ceadiabodyallowssite-specificconjugationandradiolabelingfortumortargetingapplications,”prot.engr.des.sel.17:21-27；asano等(2004)“adiabodyforcancerimmunotherapyanditsfunctionalenhancementbyfusionofhumanfcdomain,”摘要3p-683,j.biochem.76(8):992；takemura,s.等(2000)“constructionofadiabody(smallrecombinantbispecificantibody)usingarefoldingsystem,”proteineng.13(8):583-588；lu,d.等(2005)“afullyhumanrecombinantigg-likebispecificantibodytoboththeepidermalgrowthfactorreceptorandtheinsulin-likegrowthfactorreceptorforenhancedantitumoractivity,”j.biol.chem.280(20):19665-19672)。然而，本领域已经认识到由非共价缔合的多肽组成的双特异性双抗体是不稳定的，并易于解离成非功能单体(见，例如lu,d.等(2005)“afullyhumanrecombinantigg-likebispecificantibodytoboththeepidermalgrowthfactorreceptorandtheinsulin-likegrowthfactorreceptorforenhancedantitumoractivity,”j.biol.chem.280(20):19665-19672)。面对这样的挑战，本领域已经成功地开发了稳定的、共价结合的异源二聚非单特异性双抗体，称为(dualaffinityre-targetingreagents_(双亲和力再靶向剂))双抗体；见，例如美国专利公布号2013-0295121；2010-0174053和2009-0060910；欧洲专利公布号ep2714079；ep2601216；ep2376109；ep2158221和pct公布号wo2012/162068；wo2012/018687；wo2010/080538；和moore,p.a.等(2011)“applicationofdualaffinityretargetingmoleculestoachieveoptimalredirectedt-cellkillingofb-celllymphoma,”blood117(17):4542-4551；veri,m.c.等(2010)“therapeuticcontrolofbcellactivationviarecruitmentoffcgammareceptoriib(cd32b)inhibitoryfunctionwithanovelbispecificantibodyscaffold,”arthritisrheum.62(7):1933-1943；johnson,s.等(2010)“effectorcellrecruitmentwithnovelfv-baseddual-affinityre-targetingproteinleadstopotenttumorcytolysisandinvivob-celldepletion,”j.mol.biol.399(3):436-449)。这样的双抗体包括两个或多个共价复合的多肽并涉及将一个或多个半胱氨酸残基工程化到每个应用的多肽种类中，其允许形成二硫键，从而共价结合两条多肽链。例如，将半胱氨酸残基添加至这样的构建体的c-末端已经被证明允许多肽链之间的二硫键合，稳定了产生的异源二聚体，而不干扰二价分子的结合特性。最简单的双特异性双抗体的两个多肽中的每一个包括三个结构域。第一多肽包括(在n-末端至c-末端方向)：(i)第一结构域，其包括第一免疫球蛋白的轻链可变结构域(vl1)的结合区；(ii)第二结构域，其包括第二免疫球蛋白的重链可变结构域(vh2)的结合区；和(iii)第三结构域，其含有半胱氨酸残基(或含半胱氨酸的结构域)和异源二聚体促进结构域，其用于促进与双抗体的第二多肽的异源二聚化和彼此共价结合双抗体的第一和第二多肽。第二多肽含有(在n-末端至c-末端方向)：(i)第一结构域，其包括第二免疫球蛋白的轻链可变结构域(vl2)的结合区；(ii)第二结构域，其包括第一免疫球蛋白的重链可变结构域(vh1)的结合区；和(iii)第三结构域，其含有半胱氨酸残基(或含半胱氨酸的结构域)和互补性异源二聚化促进结构域，其与第一多肽链的异源二聚化促进结构域复合，以促进与第一多肽链的异源二聚化。第二多肽的第三结构域的半胱氨酸残基(或含半胱氨酸的结构域)用于促进双抗体的第二多肽链与第一多肽链的共价结合。这样的分子是稳定的、有潜力的，并且具有同时结合两个或多个不同抗原或相同抗原上的两个不同表位的能力。在一个实施方式中，第一和第二多肽的第三结构域各含半胱氨酸残基，其用于经二硫键将多肽结合在一起。图1提供这样的双抗体的示意图，其利用e-螺旋/k-螺旋异源二聚化结构域和含半胱氨酸的接头用于共价结合。如提供在图2-4中的，多肽中的一个或两个可另外具有ch2-ch3结构域的序列，以便两个双抗体多肽之间的复合形成fc区，其能够结合细胞(诸如b淋巴细胞、树突细胞、天然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜伊红粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞)的fc受体。如以下详述，这样的多肽链的ch2和/或ch3结构域不需要在序列上等同的，并且有利地被修饰，以促进两条多肽链之间的复合。已经描述了这样的分子的许多变化(见，例如美国专利公布号2013-0295121；2010-0174053和2009-0060910；欧洲专利公布号ep2714079；ep2601216；ep2376109；ep2158221和pct公布号wo2012/162068；wo2012/018687；wo2010/080538)。这些含fc区的双抗体可包括两对多肽链。第一多肽包括(在n-末端到c-末端方向)：(i)第一结构域，其包括第一免疫球蛋白的轻链可变结构域(vl1)的结合区；(ii)第二结构域，其包括第二免疫球蛋白重链可变结构域(vh2)的结合区；(iii)第三结构域，其包含半胱氨酸残基(或含半胱氨酸的结构域)和异源二聚化促进结构域，所述异源二聚化促进结构域用于促进与双抗体的第二多肽的异源二聚化和用于共价彼此结合双抗体的第一和第二多肽；和(iv)ch2-ch3结构域。第二多肽包含(在n-末端到c-末端方向)：(i)第一结构域，其包括第二免疫球蛋白轻链可变结构域(vl2)的结合区；(ii)第二结构域，其包括第一免疫球蛋白重链可变结构域(vh1)的结合区；和(iii)第三结构域，其包含半胱氨酸残基(或含半胱氨酸的结构域)和异源二聚化促进结构域，所述异源二聚化促进结构域能够与第一多肽链的第三结构域相互作用，以促进异源二聚化和两条多肽链之间的共价结合。在此，两个第一多肽彼此复合，以形成fc区。图3和4a-4b提供这样的双抗体的三种变型的示意图，其利用不同异源二聚体促进结构域。其它含fc区的双抗体可包括三个多肽链。这样的双抗体的第一多肽包含三个结构域：(i)含vl1的结构域、(ii)含vh2的结构域和(iii)含有ch2-ch3序列的结构域。这样的双抗体的第二多肽包含：(i)含vl2的结构域、(ii)含vh1的结构域和(iii)促进异源二聚化和与双抗体的第一多肽链共价结合的结构域。这样的双抗体的第三多肽包括ch2-ch3序列。因此，这样的双抗体的第一和第二多肽链缔合在一起，以形成能够结合表位的vl1/vh1结合位点以及能够结合第二表位的vl2/vh2结合位点。这样的更复杂的双抗体还具有含半胱氨酸的结构域，其用于形成共价结合的复合物。因此，第一和第二多肽经二硫键彼此结合，在其各自的第三结构域中包括半胱氨酸残基。值得注意的是，第一和第三多肽链彼此复合以形成fc区，其经二硫键被稳定。可选的构建体在本领域中是已知的，用于这样的应用，其中期望四价分子而不需要fc，包括但不限于四价串联抗体，也称为“tandabs”(见，例如美国专利公布号2005-0079170、2007-0031436、2010-0099853、2011-0206672013-0189263；欧洲专利公布号ep1078004、ep2371866、ep2361936和ep1293514；pct公布号wo1999/057150、wo2003/025018和wo2013/013700)，其通过同源二聚化两个各具有vh1、vl2、vh2和vl2结构域的一致的链而形成。iv.本发明的抗-人dr5结合分子本发明的优选的多价dr5结合分子能够结合人dr5的连续或不连续(例如，构象的)部分(表位)。本发明的dr5结合分子还将优选显示结合一种或多种非人物种——尤其是鼠科、啮齿动物、犬科动物和灵长类物种——的dr5分子的能力。人dr5前体的氨基酸序列(ncbi序列np_003833.4)(seqidno:2)是：在dr5的440个氨基酸残基(seqidno:2)中，残基1-55是信号序列，残基57-94是第一富含半胱氨酸的结构域(crd)，残基97-137是第二富含半胱氨酸的结构域(crd)，残基138-178是第三富含半胱氨酸的结构域(crd)，残基211-231是跨膜结构域和残基232-440是胞质结构域(含有受体的死亡结构域)。本发明包括多价dr5结合分子，其具有至少两个，和优选地，至少四个dr5结合位点。dr5结合位点可结合相同dr5表位或不同dr5表位。因此，本发明的多价dr5结合分子可以是单特异性的，仅结合dr5的一个表位，或者他们可以是多特异性的，结合dr5的不同表位。本发明的示例性多价dr5结合分子包括双特异性分子(例如，双特异性抗体、非单特异性双抗体等)，其具有至少一个结合“第一dr5表位”的“第一结合位点”和至少一个结合“第二dr5表位”的“第二结合位点”。这样的分子对于所述第一dr5表位和第二dr5表位是双特异性的，并且对于dr5至少是二价的。针对dr5显示较高效价的双特异性多价dr5结合分子可以通过添加一个或多个另外的第一结合位点和/或第二结合位点而产生。本发明的示例性多价dr5结合分子还包括多特异性分子，其具有至少三个或至少四个或更多不同结合位点，所述结合位点各自结合不同dr5表位。这样的分子对于所述dr5表位是多特异性的，和对于dr5是多价的。本发明的一个示例性双特异性多价dr5结合分子具有两个结合第一dr5表位的第一结合位点和两个结合第二dr5表位的第二结合位点。这样的dr5结合分子对于所述第一和第二dr5表位是双特异性的，和对于dr5是四价的。优选地，本发明的多特异性多价(例如，双特异性的、二价的)dr5结合分子能够同时结合不同dr5表位。这样的结合可以是分子内的(即，结合单一dr5多肽上的不同dr5表位)和/或分子间的(即，结合分开的dr5多肽上的不同dr5表位)。本发明的示例性多价dr5结合分子还包括单特异性分子(例如，双特异性抗体、单特异性双抗体等)，其具有至少两个，优选至少四个结合位点，所述结合位点结合相同dr5表位。这样的分子对于所述dr5表位是单特异性的，和对于dr5至少是二价的，优选四价。将注意到，当存在结合相同dr5表位的多于两个结合位点时，多价dr5结合分子将保持相对于表位的单特异性，但将显示对dr5更高的效价。本发明的一个示例性单特异性多价dr5结合分子具有四个结合位点，其结合相同dr5表位，并且对于所述dr5表位是单特异性的，和对于dr5是四价的。优选地，本发明的单特异性多价(例如，单特异性的、二价的)dr5结合分子能够同时结合dr5表位。这样的结合是分子间的(即，结合分开的dr5多肽上的相同dr5表位)。本发明的多价dr5结合分子可具有本文公开的一个或多个抗-dr5抗体的vl和/或vh结构域。本发明优选的多价dr5结合分子具有抗-人dr5单克隆抗体“dr5mab1”和/或“dr5mab2”和/或“hdr5mab2”的vl和/或vh结构域，和更优选具有这样的抗-人dr5单克隆抗体的vl结构域的cdrl中的1个、2个或所有3个和/或vh结构域的cdrh中的1个、2个或所有3个。具体抗-dr5结合分子的氨基酸序列和编码其的多核苷酸提供在下面。本发明还包括这些序列的较小变化，包括例如可被引入以促进亚克隆的c-末端和/或n-末端氨基酸残基的氨基酸取代。a.抗-人dr5抗体dr5mab1dr5mab1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:3)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab1的cdrl1(seqidno:4)：rasksvsssgysymhdr5mab1的cdrl2(seqidno:5)：lssnldsdr5mab1的cdrl3(seqidno:6)：qhsrdlpptdr5mab1的vl结构域优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:7)编码(编码cdrl残基的多核苷酸以下划线显示)：dr5mab1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:8)显示如下(cdrh残基以下划线显示)，c-末端氨基酸可以以丙氨酸取代，以促进该vh结构域的亚克隆：dr5mab1的cdrh1(seqidno:9)：gfdfsrywmsdr5mab1的cdrh2(seqidno:10)：einpdsntinytpslkddr5mab1的cdrh3(seqidno:11)：rayygnpawfaydr5mab1的vh结构域优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:12)编码(编码cdrh残基的多核苷酸以下划线显示)：b.抗-人dr5抗体dr5mab21.鼠科抗-人抗体dr5mab2dr5mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:13)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab2的cdrl1(seqidno:14)：kasqdvntavadr5mab2的cdrl2(seqidno:15)：wastrhtdr5mab2的cdrl3(seqidno:16)：qqhyitpwtdr5mab2的vl结构域优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:17)编码(编码cdrl残基的多核苷酸以下划线显示)：dr5mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:18)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab2的cdrh1(seqidno:19)：gytfteyilhdr5mab2的cdrh2(seqidno:20)：wfypgnnnikynekfkddr5mab2的cdrh3(seqidno:21)：heqgpgyfdydr5mab2的vh结构域优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:22)编码(编码cdrh残基的多核苷酸以下划线显示)：2.人源化抗-人dr5抗体dr5mab2以形成“hdr5mab2”上述鼠科抗-人dr5抗体dr5mab2被人源化，以显示人源化抗-人dr5抗体以便在施用至人接受者时降低其抗原性的能力。人源化产生四个人源化vl结构域，在本文中命名为“hdr5mab2vl-2”、“hdr5mab2vl-3”、“hdr5mab2vl-4”和“hdr5mab2vl-5”以及一个人源化vh结构域，在本文中命名为“hdr5mab2vh-2”。任意人源化vl结构域均可以与人源化vh结构域配对。因此，包括与人源化vh结构域配对的人源化vl结构域中的一个的任意抗体一般被称为“hdr5mab2”，并且，具体人源化vl/vh结构域的组合是指参考vl结构域。hdr5mab2vl-2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:23)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：hdr5mab2vl-2优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:24)编码：hdr5mab2vl-3的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:25)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：hdr5mab2vl-3优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:26)编码：hdr5mab2vl-4的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:27)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：hdr5mab2vl-4优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:28)编码：hdr5mab2vl-5的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:29)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：hdr5mab2vl-5优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:30)编码：hdr5mab2vl-3、hdr5mab2vl-4和hdr5mabvl-5的vl结构域的cdrl1具有氨基酸序列rasqdvntava(seqidno:165)。hdr5mab2vh-2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:31)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：hdr5mab2vh-2优选通过具有如下显示的序列的多核苷酸(seqidno:32)编码：c.另外的抗-人dr5抗体除了新的抗-人dr5抗体dr5mab1和dr5mab2以外，一些另外的抗-人dr5抗体在本领域中是已知的，包括：曲兹妥单抗(在本文中命名为“dr5mab3”)、可那木单抗(在本文中命名为“dr5mab4”)、芬妥木单抗(tigatumumab)(在本文中命名为“dr5mab5”)、lby135-1(在本文中命名为“dr5mab6”)、lby135-2(在本文中命名为“dr5mab7”)和kmtr2(在本文中命名为“dr5mab8”)。尤其考虑本发明的多价dr5结合分子可包括来自dr5mab1、dr5mab2、hdr5mab2、dr5mab3、dr5mab4、dr5mab5、dr5mab6、dr5mab7和dr5mab8中的一个或多个的vl和/或vh结构域的cdr。可选地或任选地，本发明多价dr5结合分子可包括来自dr5mab1、dr5mab2、hdr5mab2、dr5mab3、dr5mab4、dr5mab5、dr5mab6、dr5mab7和dr5mab8中的一个或多个的至少一个抗原结合部分。在一个实施方式中，本发明多价dr5结合分子包括来自dr5mab1和/或dr5mab2的至少一个抗原结合部分。1.曲兹妥单抗(“dr5mab3”)曲兹妥单抗(“dr5mab3”)的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:54)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab3的cdrl1(seqidno:55)：sgdslrsyyasdr5mab3的cdrl2(seqidno:56)：gannrpsdr5mab3的cdrl3(seqidno:57)：nsadssgnhvv曲兹妥单抗(“dr5mab3”)的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:58)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab3的cdrh1(seqidno:59)：gftfddyamsdr5mab3的cdrh2(seqidno:60)：inwqggstgyadsvkgdr5mab3的cdrh3(seqidno:61)：ilgagrgwyfdy2.可那木单抗(“dr5mab4”)可那木单抗(“dr5mab4”)的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:62)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab4的cdrl1(seqidno:63)：rasqgisrsyladr5mab4的cdrl2(seqidno:64)：gassratdr5mab4的cdrl3(seqidno:65)：qqfgsspwt可那木单抗(“dr5mab4”)的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:66)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab4的cdrh1(seqidno:67)：ggsissgdyfwsdr5mab4的cdrh2(seqidno:68)：hihnsgttyynpslksdr5mab4的cdrh3(seqidno:69)：drggdyyygmdv3.芬妥木单抗(“dr5mab5”)芬妥木单抗(“dr5mab5”)的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:70)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab5的cdrl1(seqidno:71)：kasqdvgtavadr5mab5的cdrl2(seqidno:72)：wastrhtdr5mab5的cdrl3(seqidno:73)：qqyssyrt芬妥木单抗(“dr5mab5”)的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:74)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab5的cdrh1(seqidno:75)：gftfssyvmsdr5mab5的cdrh2(seqidno:76)：tissggsytyypdsvkgdr5mab5的cdrh3(seqidno:77)：rgdsmittdy4.lby135-1(“dr5mab6”)lby135-1(“dr5mab6”)的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:78)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab6的cdrl1(seqidno:79)：qdvntaiadr5mab6的cdrl2(seqidno:80)：wastrhtdr5mab6的cdrl3(seqidno:81)：qqwssnpltlby135-1(“dr5mab6”)的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:82)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab6的cdrh1(seqidno:83)：gytftdytihdr5mab6的cdrh2(seqidno:84)：wfypgggyikynekfkddr5mab6的cdrh3(seqidno:85)：heegiyfdy5.lby135-2(“dr5mab7”)lby135-2(“dr5mab7”)的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:86)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab7的cdrl1(seqidno:87)：kasqdvntaiadr5mab7的cdrl2(seqidno:88)：wastrhtdr5mab7的cdrl3(seqidno:89)：qqhyttpftlby135-2(“dr5mab7”)的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:90)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab7的cdrh1(seqidno:91)：gytftdytihdr5mab7的cdrh2(seqidno:92)：wfypgggyikynekfkddr5mab7的cdrh3(seqidno:93)：heegiyfdy6.kmtr2(“dr5mab8”)kmtr2(“dr5mab8”)的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:94)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：dr5mab8的cdrl1(seqidno:95)：rasqsvssyladr5mab8的cdrl2(seqidno:96)：dasnratdr5mab8的cdrl3(seqidno:97)：qqrsnwpltkmtr2(“dr5mab8”)的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:98)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：dr5mab8的cdrh1(seqidno:99)：gytftnykindr5mab8的cdrh2(seqidno:100)：wmnpdtdstgypqkfqgdr5mab8的cdrh3(seqidno:101)：sygsgsyyrdyyygmdvd.具有工程化fc区的多价dr5结合分子在传统免疫功能中，抗体-抗原复合物与免疫系统的细胞的相互作用导致各种应答，范围从效应物功能诸如抗体依赖性细胞毒性、肥大细胞脱粒和吞噬至免疫调节信号诸如调节淋巴细胞增殖和抗体分泌。所有这些相互作用均通过抗体或免疫复合物的fc区与造血细胞上的具体细胞表面受体的结合发起。通过抗体和免疫复合物触发的各种细胞应答由三个fc受体：fcγri(cd64)、fcγrii(cd32)和fcγriii(cd16)的结构异质性造成。fcγri(cd64)、fcγriia(cd32a)和fcγriii(cd16)是激活(即，免疫系统增强)受体；fcγriib(cd32b)是抑制(即，免疫系统抑制)受体。示例性igg1fc区的氨基酸序列(seqidno:1)在上面示出。fc区的修饰通常导致改变的表型，例如改变的血清半衰期、改变的稳定性、改变的对细胞酶的易感性或改变的效应物功能。就效应物功能而言可期望修饰本发明的抗体，以便增强例如抗体在治疗癌中的有效性。在某些情况下，期望降低或消除效应物功能，例如在抗体的作用机制涉及阻断或对抗但不是杀伤携带靶标抗原的细胞的情况下。当针对不期望的细胞诸如肿瘤和外源细胞时，提高的效应物功能通常是期望的，其中fcγr以低水平表达，例如具有低水平fcγriib的肿瘤-特异性b细胞(例如，非霍奇金淋巴瘤、cll和伯基特淋巴瘤)。在所述实施方式中，具有赋予的或改变的效应物功能活性的本发明的分子用于治疗和/或预防疾病、病症或感染，其中增强的效应物功能活性的功效是期望的。在某些实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括fc区，其对野生型fc区的氨基酸序列(seqidno:1)具有一个或多个修饰(例如，取代、缺失或插入)，这降低fc区的亲和力和抗体亲抗原性，因此，降低本发明的分子对一个或多个fcγr受体的亲和力和抗体亲抗原性。在其他实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括fc区，其对野生型fc区的氨基酸具有一个或多个修饰，这提高fc区的亲和力和抗体亲抗原性，因此，提高本发明的分子对一个或多个fcγr受体的亲和力和抗体亲抗原性。在其他实施方式中，多价dr5结合分子包括变异fc区，其中相对于不包括fc区或包括野生型fc区的分子，所述变体赋予或介导提高的adcc活性和/或对fcγriia提高的结合。在可选实施方式中，分子包括变异fc区，其中相对于不包括fc区或包括野生型fc区的分子，所述变体赋予或介导降低的adcc活性(或其它效应物功能)和/或对fcγriib提高的结合。在一些实施方式中，本发明包括多价dr5结合分子，其包括变异fc区，所述变异fc区相对于包括野生型fc区的可比较的分子不显示对任何fcγr的可检测的结合。在其他实施方式中，本发明包括多价dr5结合分子，其包括变异fc区，所述变异fc区仅结合单一fcγr，优选fcγriia、fcγriib或fcγriiia之一。可选地，本发明的多价dr5结合分子包括fc区，其固有地显示对fcγr降低的亲和力和/或吸引力和/或降低的adcc活性(相对于所利用的通过野生型igg1fc区显示的结合，例如，来自igg2(seqidno:154)或igg4(seqidno:103)的fc区。亲和力和/或抗体亲抗原性的任意这样的变化均优选通过在细胞中体外测量对fcγr可检测的结合程度或fcγr相关活性而评估，所述细胞当亲本分子(没有修饰的fc区)的结合活性不能在细胞中被检测到时表达低水平fcγr。在其他实施方式中，修饰的分子在表达非fcγr受体靶抗原的细胞中显示可检测的结合，所述细胞以以下浓度表达非fcγr受体靶抗原：30,000至20,000个分子/细胞、20,000至10,000个分子/细胞、10,000至5,000个分子/细胞、5,000至1,000个分子/细胞、1,000至200个分子/细胞或200个分子/细胞或更少(但至少10、50、100或150个分子/细胞)。本发明的多价dr5结合分子可包括对激活和/或抑制性fcγ受体改变的亲和性。在一个实施方式中，多价dr5结合分子包括变异fc区，其相对于具有野生型fc区的可比较的分子，对fcγriib具有提高的亲和力和对fcγriiia和/或fcγriia具有降低的亲和力。在另一实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其相对于具有野生型fc区的可比较的分子，对fcγriib具有降低的亲和力和对fcγriiia和/或fcγriia具有提高的亲和力。在另外的实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其相对于具有野生型fc区的可比较的分子，对fcγriib具有降低的亲和力和对fcγriiia和/或fcγriia具有降低的亲和力。在另外的实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其相对于具有野生型fc区的可比较的分子，对fcγriib具有不改变的亲和力和对fcγriiia和/或fcγriia具有降低的(或提高的)亲和力。在某些实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其对fcγriiia和/或fcγriia具有改变的亲和力，以便免疫球蛋白具有增强的效应物功能，例如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。效应细胞功能的非限制性实例包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体依赖性吞噬、吞噬、调理、调理吞噬、细胞结合、莲座(rosetting)、c1q结合和互补依赖性细胞介导的细胞毒性。在优选的实施方式中，相对于包括野生型fc区的可比较的分子，亲和力或效应物功能的改变为至少2-倍、优选至少4-倍、至少5-倍、至少6-倍、至少7-倍、至少8-倍、至少9-倍、至少10-倍、至少50-倍或至少100-倍。在本发明的其他实施方式中，相对于包括野生型fc区的分子，变异fc区以至少65％、优选至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％、200％、225％或250％更大亲和力免疫特异性地结合一个或多个fcr。这样的测量可以是体内或体外测定，并且在优选的实施方式中是体外测定诸如elisa或表面等离子共振测定。在不同实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其激动(agonize)fcγr受体的至少一种活性或对抗fcγr受体的至少一种活性。在优选的实施方式中，分子包括这样的变异fc区：其对抗fcγriib的一种或多种活性，例如，b细胞受体-介导的信号传导、b细胞的激活、b细胞增殖、抗体产生、b细胞的细胞内钙流入、细胞周期进程、fcγriib-介导的对fcεri信号传导的抑制、fcγriib的磷酸化、ship募集、ship磷酸化和与shc的缔合或一个或多个下游分子(例如，map激酶、jnk、p38或akt)在fcγriib信号转导途径中的活性。在另一实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其激动fcεri的一种或多种活性，例如，肥大细胞激活、钙动员、脱粒、细胞因子产生或5-羟色胺释放。在某些实施方式中，分子包括fc区，其包括来自两个或多个igg同种型(例如，igg1、igg2、igg3和igg4)的区域。由于其铰链和/或fc区的氨基酸序列的差异，各种igg同种型显示不同的物理和功能性质，包括血清半衰期、补体结合、fcγr结合亲和性和效应物功能活性(例如，adcc、cdc等)，例如如在以下文献中描述的：flesch和neppert(1999)j.clin.lab.anal.14:141-156；chappel等(1993)j.biol.chem.33:25124-25131；chappel等(1991)proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)88:9036-9040；或brüggemann等(1987)j.exp.med166:1351-1361。这种类型的变异fc区可以单独使用或与氨基酸修饰组合使用，以影响fc-介导的效应物功能和/或结合活性。在组合中，相对包括野生型fc区的本发明分子，氨基酸修饰和igg铰链/fc区可展示类似的功能(例如，对fcγriia提高的亲和力)并可另外或更优选协同作用，以修饰本发明分子中的效应物功能。在其他实施方式中，相对于不包括fc区或包括相同同种型的野生型fc区的本发明分子，氨基酸修饰和iggfc区可展示相反的功能(例如，分别对fcγriia提高的和降低的亲和力)并可发挥作用，以选择性缓和或降低本发明分子的特异性功能。在优选的具体实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其中相对于野生型fc区，所述变异fc区包括至少一个氨基酸修饰，以便所述分子对fcr具有改变的亲和力，条件是基于fc-fcr相互作用的晶体学和结构分析所述变异fc区在直接接触fcγr的位置不具有取代，所述分析诸如由sondermann等(2000)nature406:267-73公开的。fc区中直接接触fcγr的位置的实例是氨基酸残基234-239(铰链区)、氨基酸残基265-269(b/c环)、氨基酸残基297-299(c’/e环)和氨基酸残基327-332(f/g环)。在一些实施方式中，本发明的分子包括变异fc区，其包括至少一个残基的修饰，所述残基基于结构和晶体学分析不直接接触fcγr，例如不在fc-fcγr结合位点内。变异fc区在本领域中是悉知的，并且，任意已知fc变体均可以用于本发明以赋予或修饰由包括fc区(或其部分)的本发明分子显示的效应物功能，如在功能上测定的，例如在nk依赖性或巨噬细胞依赖性测定。例如，被鉴别为改变效应物功能的fc区变体公开在抗体工程技术工艺(antibodyengineeringtechnologyart)中，并且，其中公开的任何变体均可用于本发明的分子。在某些实施方式中，本发明的多价dr5结合分子包括变异fc区，其在一个或多个区域内具有一个或多个氨基酸修饰，相对于抑制性fcγr(诸如fcγriib)，所述修饰(一个或多个)改变(相对于野生型fc区)变异fc区与激活fcγr(诸如fcγriia或fcγriiia)的亲和力比：尤其优选的是本发明的dr5结合分子，其具有变异fc区(相对于野生型fc区)，其中fc变体的亲和性比大于1。这样的分子在提供疾病、病症或感染的疗法或预防疗法或其症状的改善方面具有特别的用途，其中期望由fcγr介导的效应细胞功能(例如，adcc)的增强的功效，例如癌或感染性疾病。相比之下，亲和性比小于1的fc变体介导效应细胞功能的降低的功效。根据其亲和性比是否大于或小于1，表1列出了示例性单、双、三、四和五倍突变。在具体实施方式中，在变异fc区中，任意氨基酸修饰(例如，取代)在位置235、240、241、243、244、247、262、263、269、298、328或330中的任意位置，并优选在一个或多个以下残基处：a240、i240、l241、l243、h244、n298、i328或v330。在不同的具体实施方式中，在变异fc区中，任意氨基酸修饰(例如，取代)在位置268、269、270、272、276、278、283、285、286、289、292、293、301、303、305、307、309、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438或439的任意位置，并优选一个或多个以下残基：h280、q280、y280、g290、s290、t290、y290、n294、k295、p296、d298、n298、p298、v298、i300或l300。在优选的实施方式中，在以改变的亲和力结合fcγr的变异fc区中，任意氨基酸修饰(例如，取代)在位置255、256、258、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、300、301、303、305、307、309、312、320、322、326、329、330、332、331、333、334、335、337、338、339、340、359、360、373、376、416、419、430、434、435、437、438或439的任意位置。优选，变异fc区具有任意以下残基：a256、n268、q272、d286、q286、s286、a290、s290、a298、m301、a312、e320、m320、q320、r320、e322、a326、d326、e326、n326、s326、k330、t339、a333、a334、e334、h334、l334、m334、q334、v334、k335、q335、a359、a360或a430。在不同实施方式中，在以降低的亲和力结合fcγr(通过其fc区)的变异fc区中，任意氨基酸修饰(例如，替换)在位置252、254、265、268、269、270、278、289、292、293、294、295、296、298、300、301、303、322、324、327、329、333、335、338、340、373、376、382、388、389、414、416、419、434、435、437、438或439的任意位置处。在不同实施方式中，在以增强的亲和力结合fcγr(通过其fc区)的变异fc区中，任意氨基酸修饰(例如，取代)在位置280、283、285、286、290、294、295、298、300、301、305、307、309、312、315、331、333、334、337、340、360、378、398或430的任意位置处。在不同实施方式中，在以增强的亲和力结合fcγriia的变异fc区中，任意以下残基：a255、a256、a258、a267、a268、n268、a272、q272、a276、a280、a283、a285、a286、d286、q286、s286、a290、s290、m301、e320、m320、q320、r320、e322、a326、d326、e326、s326、k330、a331、q335、a337或a430。优选的变体包括一个或多个修饰，所述修饰在位置：228、230、231、232、233、234、235、239、240、241、243、244、245、247、262、263、264、265、266、271、273、275、281、284、291、296、297、298、299、302、304、305、313、323、325、326、328、330或332中的任意位置处。特别优选的变体包括一个或多个选自组a-ai的修饰：仍然更优选的变体包括一个或多个选自组1-105的修饰：在一个实施方式中，本发明的多价dr5结合分子将包括变异fc区，其在fc区具有至少一个修饰。在某些实施方式中，变异fc区包括选自以下的至少一个取代：l235v、f243l、r292p、y300l、v305i和p396l，其中所述编号是kabat中的eu索引的编号。在具体实施方式中，变异fc区包括：a)选自以下的至少一个取代：f243l、r292p、y300l、v305i和p396l；(b)选自以下的至少两个取代：(1)f243l和p396l；(2)f243l和r292p；和(3)r292p和v305i；(c)选自以下的至少三个取代：(1)f243l、r292p和y300l；(2)f243l、r292p和v305i；(3)f243l、r292p和p396l；和(4)r292p、v305i和p396l；(d)选自以下的至少四个取代：(1)f243l、r292p、y300l和p396l；和(2)f243l、r292p、v305i和p396l；或(e)选自以下的至少五个取代：(1)f243l、r292p、y300l、v305i和p396l；和(2)l235v、f243l、r292p、y300l和p396l。在另外的具体实施方式中，变异fc区包括如下取代：(a)f243l、r292p和y300l；(b)l235v、f243l、r292p、y300l和p396l；或(c)f243l、r292p、y300l、v305i和p396l。在其他实施方式中，本发明包括本领域中已知的任意fc变体的用途，诸如在以下文献中公开的那些：jefferis,b.j.等(2002)“interactionsitesonhumanigg-fcforfcgammar:currentmodels,”immunol.lett.82:57-65；presta,l.g.等(2002)“engineeringtherapeuticantibodiesforimprovedfunction,”biochem.soc.trans.30:487-90；idusogie,e.e.等(2001)“engineeredantibodieswithincreasedactivitytorecruitcomplement,”j.immunol.166:2571-75；shields,r.l.等(2001)“highresolutionmappingofthebindingsiteonhumanigg1forfcgammari,fcgammarii,fcgammariii,andfcrnanddesignofigg1variantswithimprovedbindingtothefcgammar,”j.biol.chem.276:6591-6604；idusogie,e.e.等(2000)“mappingofthec1qbindingsiteonrituxan,achimericantibodywithahumaniggfc,”j.immunol.164:4178-84；reddy,m.p.等(2000)“eliminationoffcreceptor-dependenteffectorfunctionsofamodifiedigg4monoclonalantibodytohumancd4,”j.immunol.164:1925-1933；xu,d.等(2000)“invitrocharacterizationoffivehumanizedokt3effectorfunctionvariantantibodies,”cell.immunol.200:16-26；armour,k.l.等(1999)“recombinanthumaniggmoleculeslackingfcgammareceptoribindingandmonocytetriggeringactivities,”eur.j.immunol.29:2613-24；jefferis,r.等(1996)“modulationoffc(gamma)randhumancomplementactivationbyigg3-coreoligosaccharideinteractions,”immunol.lett.54:101-04；lund,j.等(1996)“multipleinteractionsofiggwithitscoreoligosaccharidecanmodulaterecognitionbycomplementandhumanfcgammareceptoriandinfluencethesynthesisofitsoligosaccharidechains,”j.immunol.157:4963-4969；hutchins等(1995)“improvedbiodistribution,tumortargeting,andreducedimmunogenicityinmicewithagamma4variantofcampath-1h,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)92:11980-84；jefferis,r.等(1995)“recognitionsitesonhumaniggforfcgammareceptors:theroleofglycosylation,”immunol.lett.44:111-17；lund,j.等(1995)“oligosaccharide-proteininteractionsiniggcanmodulaterecognitionbyfcgammareceptors,”fasebj.9:115-19；alegre,m.l.等(1994)“anon-activating"humanized"anti-cd3monoclonalantibodyretainsimmunosuppressivepropertiesinvivo,”transplantation57:1537-1543；lund等(1992)“multiplebindingsitesonthech2domainofiggformousefcgammar11,”mol.immunol.29:53-59；lund等(1991)“humanfcgammariandfcgammariiinteractwithdistinctbutoverlappingsitesonhumanigg,”j.immunol.147:2657-2662；duncan,a.r.等(1988)“localizationofthebindingsiteforthehumanhigh-affinityfcreceptoronigg,”nature332:563-564；美国专利号5,624,821；5,885,573；6,194,551；7,276,586；和7,317,091；和pct公开出版物wo00/42072和pctwo99/58572。在一些实施方式中，本发明的分子进一步包括一个或多个糖基化位点，以便一个或多个碳水化合物部分共价连接于分子。优选，与未修饰的分子相比，在fc区具有一个或多个糖基化位点和/或一个或多个修饰的本发明的分子赋予或具有增强的抗体介导的效应物功能，例如增强的adcc活性。在一些实施方式中，本发明进一步包括这样的分子，其包括一个或多个氨基酸修饰，已知所述氨基酸直接或间接与fc区的碳水化合物部分相互作用，包括但不限于位置241、243、244、245、245、249、256、258、260、262、264、265、296、299和301处的氨基酸。直接或间接与fc区的碳水化合物部分相互作用的氨基酸在本领域中是已知的，见，例如jefferis等,1995immunologyletters,44:111-7，其通过引用以其整体并入本文。在另一实施方式中，本发明包括这样的分子，其已经通过将一个或多个糖基化位点引入到分子的一个或多个位点而被修饰，优选不改变分子的功能，例如与靶抗原或fcγr的结合活性。糖基化位点可以被引入到本发明分子的可变区和/或恒定区。如本文中使用的，“糖基化位点”包括抗体中的任意特异性氨基酸序列，低聚糖(即，碳水化合物，其含有两个或多个连接在一起的单糖)将与所述氨基酸序列特异性和共价连接。低聚糖侧链通常经n-或o-键连接至抗体的骨架。n-连接的糖基化指将低聚糖部分连接至天冬酰胺残基的侧链。o-连接的糖基化指将低聚糖部分连接至羟基氨基酸，例如丝氨酸、苏氨酸。本发明的分子可包括一个或多个糖基化位点，包括n-连接的和o-连接的糖基化位点。本领域中已知的对于n-连接的或o-连接的糖基化的任意糖基化位点均可以根据本发明使用。可根据本发明方法使用的示例性n-连接的糖基化位点是氨基酸序列：asn-x-thr/ser，其中x可以是任意氨基酸，和thr/ser表示苏氨酸或丝氨酸。利用本发明所属领域中已知的方法，这样的位点或多个位点可以被引入到本发明的分子中(见例如，invitromutagenesis,recombinantdna:ashortcourse,j.d.watson等,w.h.freemanandcompany,newyork,1983,第8章，106-116页，其通过引用以其整体并入本文。用于将糖基化位点引入本发明分子的示例性方法可包括：修饰或突变分子的氨基酸序列，以便获得期望的asn-x-thr/ser序列。在一些实施方式中，本发明包括通过添加或删除糖基化位点改变发明分子的碳水化合物含量的方法。改变抗体(以及包括抗体结构域的分子)的碳水化合物含量的方法是本领域中悉知的，并包括在本发明中，见，例如美国专利号6,218,149；ep0359096b1；美国公布号us2002/0028486；wo03/035835；美国公布号2003/0115614；美国专利号6,218,149；美国专利号6,472,511；其均通过引用以其整体并入本文。在其他实施方式中，本发明包括通过删除分子的一个或多个内源碳水化合物部分改变本发明分子的碳水化合物含量的方法。在具体实施方式中，本发明包括通过修饰临近297的位置改变抗体的fc区的糖基化位点。在具体实施方式中，本发明包括修饰位置296，以便位置296而不是位置297被糖基化。也可通过技术诸如通过将一个或多个半胱氨酸残基引入到fc区中修饰效应物功能，从而允许在该区域中发生链间二硫键形成，从而产生同源二聚抗体，其可具有改进的内在化能力和/或提高的补体-介导的细胞杀伤和adcc(caron,p.c.等(1992)“engineeredhumanizeddimericformsofiggaremoreeffectiveantibodies,”j.exp.med.176:1191-1195；shopes,b.(1992)“ageneticallyengineeredhumaniggmutantwithenhancedcytolyticactivity,”j.immunol.148(9):2918-2922。具有增强的抗肿瘤活性的同源二聚抗体还可利用异源双功能交联剂被制备，如以下文献中描述的：wolff,e.a.等(1993)“monoclonalantibodyhomodimers:enhancedantitumoractivityinnudemice,”cancerresearch53:2560-2565。可选地，抗体可被工程化，其具有双fc区，并且，从而可具有增强的补体分解和adcc能力(stevenson,g.t.等(1989)“achimericantibodywithdualfcregions(bisfabfc)preparedbymanipulationsattheigghinge,”anti-cancerdrugdesign3:219-230)。e.包括双抗体的多价dr5结合分子1.包括缺失fc区的双抗体的多价dr5结合分子本发明的一个实施方式涉及多价dr5结合分子，其包括或由如下组成：能够结合第一表位(“表位1”)和第二表位(“表位2”)的双特异性双抗体，其中第一表位是人dr5的表位和第二表位是dr5的不同表位。优选地，这样的双抗体包括，而且，最优选地，由如下组成：第一多肽链和第二多肽链，其序列允许多肽链彼此共价结合，以形成共价缔合的复合物，所述复合物能够同时结合第一dr5表位和第二dr5表位。因此，这样的双抗体可结合单一dr5多肽上的第一和第二表位(即，分子内地结合)，或它们可结合一个dr5多肽上的第一表位和另一dr5多肽上的第二表位(即，分子间地结合)。优选地，这样的双抗体交联在细胞表面上排列的dr5分子。在一个实施方式中，这样的双特异性双抗体的第一多肽链在n-末端到c-末端方向包括n-末端、能够结合第一或第二表位(即，vl表位1或vl表位2)的第一单克隆抗体的vl结构域、第一间插间隔肽(接头1)、能够结合第二表位(如果这样的第一多肽链包含vl表位1)或第一表位(如果这样的第一多肽链包含vl表位2)的第二单克隆抗体的vh结构域、任选地含有半胱氨酸残基的第二间插间隔肽(接头2)、异源二聚体促进结构域和c-末端(图1)。标记“vl1”和“vh1”分别表示第一单克隆抗体的可变轻链结构域和可变重链结构域。类似地，标记“vl2”和“vh2”分别表示第二抗体的可变轻链结构域和可变重链结构域。双特异性双抗体的该实施方式的第二多肽链在n-末端到c-末端方向包括n-末端、能够结合第一或第二表位(即，vl表位1或vl表位2并且是不被选择包括在双抗体的第一多肽链中的vl结构域)的单克隆抗体的vl结构域、间插接头肽(接头1)、能够结合第二表位(如果这样的第二多肽链包含vl表位1)或结合第一表位(如果这样的第二多肽链包含vl表位2)的单克隆抗体的vh结构域、任选地含有半胱氨酸残基的间隔肽(接头2)、异源二聚体促进结构域和c-末端(图1)。第一多肽链的vl结构域与第二多肽链的vh结构域相互作用，以形成第一功能抗原结合位点，其对dr5是特异性的(即，第一或第二表位)。同样的，第二多肽链的vl结构域与第一多肽链的vh结构域相互作用，以形成第二功能抗原结合位点，其对dr5也是特异性的(即，第二表位或第一表位)。因此，对第一和第二多肽链的vl和vh结构域的选择是协同的，以便双抗体的两条多肽链共同地包括能够结合dr5的第一表位和dr5的第二表位二者的vl和vh结构域(即，它们包括vl表位1/vl表位1和vl表位2/vh表位2)。最优选地，间插连接肽(接头1，其分开这样的vl和vh结构域)的长度被选择，以基本上或完全防止多肽链的vl和vh结构域彼此结合。因此，第一多肽链的vl和vh结构域基本上或完全不能彼此结合。同样的，第二多肽链的vl和vh结构域基本上或完全不能彼此结合。优选的间插间隔肽(接头1)具有序列(seqidno:33)：gggsgggg。第二间插间隔肽(接头2)将任选地含有1个、2个、3个或更多个半胱氨酸。优选的含半胱氨酸的间隔肽(接头2)具有序列为seqidno:34:ggcggg。可选地，接头2不包括半胱氨酸，并且如下所述的含半胱氨酸的异源二聚体促进结构域被使用。任选地，含半胱氨酸的接头2和含半胱氨酸的异源二聚体促进结构域均被使用。异源二聚体促进结构域可以是一条多肽链上的gvepksc(seqidno:35)vepksc(seqidno:36)或aepksc(seqidno:169)和另一条多肽链上的gfnrgec(seqidno:37)或fnrgec(seqidno:38)(us2007/0004909)。然而，更优选地，这样的双抗体的异源二聚体促进结构域由一个、两个、三个或四个具有相反电荷的串联重复的螺旋结构域形成，所述螺旋结构域包括具有至少六个、至少七个或至少八个带电的氨基酸残基序列(apostolovic,b.等(2008)“ph-sensitivityofthee3/k3heterodimericcoiledcoil,”biomacromolecules9:3173–3180；arndt,k.m.等(2001)“helix-stabilizedfv(hsfv)antibodyfragments:substitutingtheconstantdomainsofafabfragmentforaheterodimericcoiled-coildomain,”j.molec.biol.312:221-228；arndt,k.m.等(2002)““comparisonofinvivoselectionandrationaldesignofheterodimericcoiledcoils,”structure10:1235-1248；boucher,c.等(2010)“proteindetectionbywesternblotviacoiled–coilinteractions,”analyticalbiochemistry399:138-140；cachia,p.j.等(2004)“syntheticpept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(seqidno:37)或fnrgec(seqidno:38)。含有四链双抗体的代表性肽示于图4a。可选地，或者另外，可应用这样的肽：其包括具有相反电荷的串联螺旋结构域，诸如“e-螺旋”螺旋结构域(seqidno:39:evaalek-evaalek-evaalek-evaalek或seqidno:41:evaaek-evaalek-evaalek-evaalek)；和“k-螺旋”结构域(seqidno:40:kvaalke-kvaalke-kvaalke-kvaalke或seqidno:42:kvaake-kvaalke-kvaalke-kvaalke)。含有螺旋结构域的代表性四链双抗体示于图4b。可用于本发明的含fc区的双抗体分子的另外的或可选的接头包括：astkg(seqidno:47)、dkthtcppcp(seqidno:48)、lepkss(seqidno:49)和apssspme(seqidno:50)、ggc和ggg。seqidno:49可用于替代ggg或ggc以易于克隆。另外，seqidno:47可以紧随seqidno:49后面，以形成可选接头(lepkssdkthtcppcp；seqidno:51)。如提供在图3和图4a-4b中，本发明的双抗体可包括四个不同链。这样的双抗体的第一和第三多肽链包含三个结构域：(i)含vl1的结构域、(ii)含vh2的结构域、(iii)异源二聚体促进结构域和(iv)含有ch2-ch3序列的结构域。第二和第四多肽含有：(i)含vl2的结构域、(ii)含vh1的结构域和(iii)异源二聚体促进结构域，其中异源二聚体促进结构域促进第一/第三链与第二/第四链的二聚化。第三和第四多肽链的vl和/或vh结构域和第一和第二多肽链的vl和/或vh结构域可以相同或不同，以便允许单特异性、双特异性或四特异性的四价结合。本发明含fc区的代表性四链双抗体的多肽链的一般结构提供在表2中：本发明的对dr5四价的含fc区的代表性四价双抗体的第一和第二多肽链的结构(即，具有四个抗原-结合结构域，其各自能够结合人dr5)提供在表3中。每一个含fc区的双抗体包括两对共价结合的第一和第二多肽链，以便：(a)所述第一多肽链的vl1结构域和所述第二多肽链的vh1结构域形成抗原-结合结构域，其能够特异性结合dr5的第一表位；(b)所述第一多肽链的所述vh2结构域和所述第二多肽链的所述vl1结构域形成抗原-结合结构域，其能够特异性结合dr5的第二表位；和(c)第一多肽链对的ch2-ch3部分形成iggfc区。如本文所述的，fc区(即，igg重链的ch2-ch3结构域)可以是变异fc区，其具有对fcγr改变的亲和力和/或改变的效应物功能和/或改变的血清半衰期。在一些实施方式中，fc区是缺少c-末端残基的变体。本发明的含fc区的双抗体的fc区可以是完整的fc区(例如，完整的iggfc区)或仅是完整的fc区的片段。尽管本发明的含fc区的双抗体的fc区可具有结合于一个或多个fc受体(例如，fcγr(一个或多个))的能力，但更优选这样的fc区将导致对fcγria(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriiia(cd16a)或fcγriiib(cd16b)的改变的结合(相对于由野生型fc区显示的结合)或将基本上消除这样的fc区结合于抑制性受体(一个或多个)的能力。因此，本发明的含fc区的双抗体的fc区可包括完整的fc区的ch2结构域中的一些或全部和/或ch3结构域中的一些或全部，或可包括变体ch2和/或变体ch3序列(相对于完整的fc区的ch2或ch3结构域，其可包括，例如，一个或多个插入和/或一个或多个缺失)。这样的fc区可包括非fc多肽部分或可包括非天然的完整的fc区的部分，或可包括非天然产生的取向的ch2和/或ch3结构域(诸如，例如，两个ch2结构域、或两个ch3结构域、或在n-末端至c-末端方向，连接至ch2结构域的ch3结构域等)。尤其地，对于本发明的含fc区的双抗体的多肽链的ch2-ch3结构域，优选具备对fcγria(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriiia(cd16a)或fcγriiib(cd16b)降低的(或基本上没有的)结合(相对于通过野生型igg1fc区(seqidno:1)显示的结合)。fc变体和能够介导这种改变的结合的突变体形式如上所述。在具体实施方式中，本发明的含fc区的双抗体的多肽链的ch2-ch3结构域包括iggfc区，其几乎不介导或不介导adcc效应物功能。在优选的实施方式中，这样的双抗体的第一和/或第三多肽链的ch2-ch3结构域包括任意1个、2个或3个如下取代：l234a、l235a、d265a、n297q和n297g。在另一个实施方式中，人igg1fc区变体包含n297q取代、n297g取代、l234a和l235a取代或d265a取代，因为这些突变消除fcr结合。包括l234a/l235a取代的示例性人igg1的ch2-ch3结构域的氨基酸序列是(seqidno:102)：可选地，利用这样的ch2-ch3结构域，其内在地显示对fcγriiia(cd16a)降低的(或基本上没有的)结合和/或降低的效应物功能(相对于通过野生型igg1fc区(seqidno:1)显示的结合)。在具体实施方式中，本发明的含fc区的双抗体包括igg2fc区(seqidno:164)或igg4fc区(seqidno:103)，其任选地缺少c-末端个氨基酸残基。在使用igg4fc区的情况下，本发明还包括引入稳定化突变，诸如s228p，如通过kabat中列出的eu索引所编号的(lu等,(2008)“theeffectofapointmutationonthestabilityofigg4asmonitoredbyanalyticalultracentrifugation,”jpharmaceuticalsciences97:960-969)，以降低链交换的发生。本领域中已知的其他稳定化突变可以被引入到igg4fc区中(peters,p等,(2012)“engineeringanimprovedigg4moleculewithreduceddisulfidebondheterogeneityandincreasedfabdomainthermalstability,”j.biol.chem.,287:24525-24533；pct专利公布号：wo2008/145142)。由于n297g、n297q、l234a、l235a和d265a取代消除效应物功能，所以，在期望效应物功能的情况下，这些取代优选不被应用。如上述，在一些实施方式中，fc区缺少c-末端氨基酸残基。这样的多肽链的ch2和/或ch3结构域在序列上不需要是一致的，并且有利地被修饰以促进两条多肽链之间的复合。例如，氨基酸取代(优选取代以包括形成“杵”的大侧基的氨基酸例如色氨酸)可被引入ch2或ch3结构域，以便空间干扰将防止与类似的突变结构域的相互作用并将迫使突变的结构域与其中互补或适应性突变已经被工程化的结构域，即，“臼”，配对(例如，用甘氨酸取代)。这样的突变组可被工程化到任意对的包括形成fc区的ch2-ch3结构域的多肽中。蛋白质工程化以利于相对于同源二聚化支持异源二聚化的方法在本领域中是悉知的，尤其是关于工程化免疫球蛋白样分子，这些方法都包括在本文中(见例如ridgway等(1996)“‘knobs-into-holes’engineeringofantibodych3domainsforheavychainheterodimerization,”proteinengr.9:617-621,atwell等(1997)“stableheterodimersfromremodelingthedomaininterfaceofahomodimerusingaphagedisplaylibrary,”j.mol.biol.270:26-35和xie等(2005)anewformatofbispecificantibody:highlyefficientheterodimerization,expressionandtumorcelllysis,”j.immunol.methods296:95-101；其均通过引用以其整体并入本文)。优选“杵”被工程化到一条第一多肽链的ch2-ch3结构域中和“臼”被工程化到第三多肽链的ch2-ch3结构域中。因此，“杵”将有助于防止第一多肽链经其ch2和/或ch3结构域而同源二聚化。由于第三多肽链优选包含“臼”取代，其将与包括“杵”的第一多肽链异源二聚化以及与其本身同源二聚化。优选的杵通过修饰天然iggfc区以包含修饰t366w而产生。优选的臼通过修饰天然iggfc区以包含修饰t366s、l368a和y407v而产生。为避免从最终的异源二聚体含fc区的双抗体纯化同源二聚体，一条链的ch2和ch3结构域的蛋白质a结合位点优选通过含有“臼”取代的第三多肽上的位置435(h435r)处的氨基酸取代而被突变。因此，含有“臼”取代的第三多肽链的同源二聚体将不结合蛋白质a，而异源二聚体将保持其经第一多肽链上的蛋白质a结合位点结合蛋白质a的能力。本发明的含fc区的双抗体的第一多肽链的ch2和ch3结构域的优选的序列将具有“携带杵的”序列(seqidno:52)：本发明的具有两条多肽链的、含fc区的双抗体的第二多肽链的(或具有三条多肽链的含fc区的双抗体的第三多肽链)的ch2和ch3结构域的优选序列将具有“携带臼的”序列(seqidno:53)：如将注意到的，seqidno:52和seqidno:53的ch2-ch3结构域包括在位置234用丙氨酸进行的取代和在位置235用丙氨酸进行的取代，因此形成fc区，其显示对fcγria(cd64)、fcγriia(cd32a)、fcγriib(cd32b)、fcγriiia(cd16a)或fcγriiib(cd16b)降低的(或基本上没有的)结合(相对于通过野生型fc区(seqidno:1)显示的结合)。c-末端残基任选地被包括。优选第一多肽链将具有“携带杵的”ch2-ch3序列诸如seqidno:52的序列。然而，如将被认识到的，“携带臼的”ch2-ch3结构域(例如，seqidno:53)可被应用于第一多肽链中，在这种情况下，“携带杵的”ch2-ch3结构域(例如，seqidno:52)会被应用于本发明的具有的两条多肽链、含fc区的双抗体的第二多肽链(或具有三个或四个多肽链的含fc区的双抗体的第三多肽链)中。seqidno:52和/或seqidno:53的c-末端残基任选地被包括。v.参考抗体a.参考抗-人cd3抗体cd3是t细胞共受体，由四条不同的链组成(wucherpfennig,k.w.等(2010)“structuralbiologyofthet-cellreceptor:insightsintoreceptorassembly,ligandrecognition,andinitiationofsignaling,”coldspringharb.perspect.biol.2(4)：a005140；pages1-14)。在哺乳动物中，复合物包含cd3γ链、cd3δ链和两条cd3ε链。这些链与被称为t细胞受体(tcr)的分子缔合，以在t淋巴细胞中产生激活信号。在不存在cd3的情况下，tcr不正确地组装，并被降解(thomas,s.等(2010)“molecularimmunologylessonsfromtherapeutict-cellreceptorgenetransfer,”immunology129(2)：170–177)。发现cd3结合于所有成熟t细胞而几乎没有其它细胞类型的膜(见，janeway,c.a.等(2005)，在以下中:immunobiology:theimmunesysteminhealthanddisease,”6thed.garlandsciencepublishing,ny,pp.214-216；sun,z.j.等(2001)“mechanismscontributingtotcellreceptorsignalingandassemblyrevealedbythesolutionstructureofanectodomainfragmentofthecd3ε:γheterodimer,”cell105(7)：913-923；kuhns,m.s.等(2006)“deconstructingtheformandfunctionofthetcr/cd3complex,”immunity.2006feb；24(2)：133-139)。如下所述，为了阐释本发明，产生了双特异性抗-人cd3x抗-人dr5结合分子。用于这样的构建体的抗-人cd3抗体在本文中命名为“cd3mab2”。cd3mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:104)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：cd3mab2的cdrl1(seqidno:105)：rsstgavttsnyancd3mab2的cdrl2(seqidno:106)：gtnkrapcd3mab2的cdrl3(seqidno:107)：alwysnlwvcd3mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:108)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：cd3mab2的cdrh1(seqidno:109)：tyamncd3mab2的cdrh2(seqidno:110)：rirskynnyatyyadsvkcd3mab2的cdrh3(seqidno:111)：hgnfgnsyvswfay在一些cd3构建体中，变体vh结构域被用于cd3mab2。变体vh结构域具有d65g取代，因此，其具有如下显示的氨基酸序列(seqidno:112)(cdrh残基以下划线显示)：取代导致cdrh2具有氨基酸序列(seqidno:113)rirskynnyatyyadsvk。取代的位置(d65g)以双下划线显示。本文中使用的第二抗-cd3抗体是抗体莫罗单抗(muromonab)-cd3“okt3”(xu等(2000)“invitrocharacterizationoffivehumanizedokt3effectorfunctionvariantantibodies,”cell.immunol.200:16-26)；norman,d.j.(1995)“mechanismsofactionandoverviewofokt3,”ther.drugmonit.17(6)：615-620；canafax,d.m.等(1987)“monoclonalantilymphocyteantibody(okt3)treatmentofacuterenalallograftrejection,”pharmacotherapy7(4)：121-124；swinnen,l.j.等(1993)“okt3monoclonalantibodiesinduceinterleukin-6andinterleukin-10:apossiblecauseoflymphoproliferativedisordersassociatedwithtransplantation,”curr.opin.nephrol.hypertens.2(4)：670-678)。okt3的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:166)显示如下(cdrl残基以下划线显示)：okt3的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:167)显示如下(cdrh残基以下划线显示)：b.参考抗-荧光素抗体抗-荧光素抗体4-4-20(gruber,m.等(1994)“efficienttumorcelllysismediatedbyabispecificsinglechainantibodyexpressedinescherichiacoli,”j.immunol.152(11):5368-5374；bedzyk,w.d.等(1989)“comparisonofvariableregionprimarystructureswithinananti-fluoresceinidiotypefamily,”j.biol.chem.264(3)：1565-1569)被用于对照双抗体中。抗-荧光素抗体4-4-20的可变轻链和可变重链结构域的氨基酸序列如下：抗-荧光素抗体4-4-20的可变轻链结构域的氨基酸序列(seqidno:114)(cdrl残基被加以下划线)：抗-荧光素抗体4-4-20的可变重链结构域的氨基酸序列(seqidno:115)(cdrh残基被加以下划线)：vi.示例性多价dr5结合分子如上所述的多价dr5结合分子——具有至少两个和优选地，至少四个dr5结合位点——可具有各种结构。尤其地，包括免疫球蛋白的抗原结合部分的结构包括但不限于基于igg型双特异性抗体，并且，包括双抗体的分子是优选的。具体地，包括双抗体的多价dr5结合分子的非限制性实例被提供。然而，可选的结构，包括上述那些结构(见例如图1-4)或以另外方式对于本领域技术人员而言是显而易见的结构也包括在本发明中。a.dr5xdr5含fc区的双特异性双抗体，其对于dr5是四价的1.dr5mab1xdr5mab2含fc区的双抗体由两对多肽链组成的、对于dr5是四价的、含fc区的示例性双特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域和dr5mab2的vl和vh结构域。一个含fc区的双抗体被命名“dr5mab1xdr5mab2fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:116)：在seqidno:116中，氨基酸残基1-111对应于dr5mab1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:3)，残基112-119对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基120-238对应于dr5mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:18)，残基239-243对应于astkg接头(seqidno:47)，残基244-271对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基272-277对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基278-287对应于接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，其来源于igg1铰链结构域，和残基288-503对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:116的多核苷酸是seqidno:117：dr5mab1xdr5mab2fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:118)：在seqidno:118中，氨基酸残基1-107对应于dr5mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:13)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-236对应于dr5mab1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:8)，除了seqidno:8的c-末端丝氨酸残基已经被丙氨酸残基取代，残基237-241对应于astkg接头(seqidno:47)，和残基242-269对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:118的多核苷酸是seqidno:119：另外的命名为“dr5mab1xdr5mab2fc双抗体(aa)”的含fc区的双抗体与dr5mab1xdr5mab2fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:120)：编码seqidno:120的多核苷酸是seqidno:121：dr5mab1xdr5mab2fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:118(通过seqidno:119编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低的/消除的结合和/或降低的/消除的效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:116或120的氨基酸残基288-504将被seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)取代，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。2.dr5mab2xdr5mab1含fc区的双抗体由两对多肽链组成的，对dr5是四价的、含fc区的示例性双特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域和dr5mab1的vl和vh结构域。一个含fc区的双抗体命名为“dr5mab2xdr5mab1fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:122)：在seqidno:122中，氨基酸残基1-107对应于dr5mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:13)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-236对应于dr5mab1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:8)，除了seqidno:8的c-末端丝氨酸残基已经被丙氨酸残基取代，残基237-241对应于astkg接头(seqidno:47)，残基242-269对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基270-275对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基276-285对应于来源于igg1铰链结构域的接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，和残基286-501对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:122的多核苷酸是seqidno:123：dr5mab2xdr5mab1fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:124)：在seqidno:124中，氨基酸残基1-111对应于dr5mab1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:3)，残基112-119对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基120-238对应于dr5mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:18)，残基239-243对应于astkg接头(seqidno:47)，残基244-271对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:124的多核苷酸是seqidno:125：另外的含fc区的双抗体被命名为“dr5mab2xdr5mab1fc双抗体(aa)”，其与dr5mab2xdr5mab1fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(加粗的)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:126)：编码seqidno:126的多核苷酸是seqidno:127：dr5mab1xdr5mab2fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:124(通过seqidno:125编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:122或126的氨基酸残基286-502将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。b.对dr5是二价的dr5xdr5双特异性双抗体1.dr5mab1xdr5mab2双抗体对缺少fc区的dr5特异的、由两条多肽链组成的示例性双特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域和dr5mab2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:116的氨基酸残基1-271。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:118。对包括fc区的dr5双特异的、由两条多肽链组成的其他示例性双特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域和dr5mab2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:116或seqidno:120。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:118和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有氨基酸序列seqidno:1或seqidno:102，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。2.dr5mab2xdr5mab1双抗体对缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性双特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域和dr5mab1的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:122的氨基酸残基1-269。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:124。对含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性双特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域和dr5mab1的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:122或seqidno:126。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:124和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。c.对dr5是四价的dr5xdr5单特异性含fc区的双抗体1.dr5mab1xdr5mab1含fc区的双抗体dr5是四价的、由两对多肽链组成的示例性单特异性含fc区的双抗体对被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域。一个含fc区的双抗体命名为“dr5mab1xdr5mab1fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:128)：在seqidno:128中，氨基酸残基1-111对应于dr5mab1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:3)，残基112-119对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基120-240对应于dr5mab1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:8)，除了seqidno:8的c-末端丝氨酸残基已经被丙氨酸残基取代，残基241-245对应于astkg接头(seqidno:47)，残基246-273对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基274-279对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基280-289对应于来源于igg1铰链结构域的接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，和残基290-505对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:128的多核苷酸是seqidno:129：dr5mab1xdr5mab1fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:130)：在seqidno:130中，氨基酸残基1-111对应于dr5mab1的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:3)，残基112-119对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基120-240对应于dr5mab1的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:8)，除了seqidno:8的c-末端丝氨酸残基已经被丙氨酸残基取代，残基241-245对应于astkg接头(seqidno:47)，残基246-273对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:130的多核苷酸是seqidno:131：另外的含fc区的双抗体命名为“dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa)”，其与dr5mab1xdr5mab1fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:132)：编码seqidno:132的多核苷酸是seqidno:133：dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:130(由seqidno:131编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:128或132的氨基酸残基290-506将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。2.dr5mab2xdr5mab2含fc区的双抗体对dr5是四价的、由两对多肽链组成的示例性单特异性含fc区的双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域。第一含fc区的双抗体命名为“dr5mab2xdr5mab2fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:134)：在seqidno:134中，氨基酸残基1-107对应于dr5mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:13)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于dr5mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:18)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基268-273对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基274-283对应于来源于igg1铰链结构域的接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，和残基284-499对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:134的多核苷酸是seqidno:135：dr5mab2xdr5mab2fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:136)：在seqidno:136中，氨基酸残基1-107对应于dr5mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:13)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于dr5mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:18)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:136的多核苷酸是seqidno:137：另外的含fc区的双抗体命名为“dr5mab2xdr5mab2fc双抗体(aa)”，其与dr5mab2xdr5mab2fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:138)：编码seqidno:138的多核苷酸是seqidno:139：dr5mab2xdr5mab2fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:136(由seqidno:137编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:134或138的氨基酸残基284-500将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。3.hdr5mab2.2xhdr5mab2.2含fc区的双抗体对dr5是四价的、由两对多肽链组成的示例性单特异性含fc区的双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体hdr5mab2vl-2的vl结构域和抗-人dr5抗体hdr5mab2vh-2的vh结构域。第一含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:140)：在seqidno:140中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:23)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2的vh结构域的氨基酸序列vh-2(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基268-273对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基274-283对应于接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，其来源于igg1铰链结构域，和残基284-499对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，其缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:140的多核苷酸是seqidno:141：hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:142)：在seqidno:142中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:23)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2的vh结构域的氨基酸序列vh-2(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:142的多核苷酸是seqidno:143：另外的含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体(aa)”，其与hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:144)：编码seqidno:144的多核苷酸是seqidno:145：hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:142(由seqidno:143编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:140或144的氨基酸残基284-500将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。4.hdr5mab2.3xhdr5mab2.3含fc区的双抗体对dr5是四价的、由两对多肽链组成的示例性单特异性含fc区的双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体hdr5mab2vl-3的vl结构域和抗-人hdr5抗体hdr5mab2vh-3的vh结构域。第一含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.3xhdr5mab2.3fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:146)：在seqidno:146中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-3的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:25)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2vh-2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基268-273对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基274-283对应于接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，其来源于igg1铰链结构域，和残基284-499对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，其缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:146的多核苷酸是seqidno:147：hdr5mab2.3xhdr5mab2.3fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:148)：在seqidno:148中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-3的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:25)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2的vh结构域的氨基酸序列vh-2(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:148的多核苷酸是seqidno:149：另外的含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.3xhdr5mab2.3fc双抗体(aa)”，其与hdr5mab2.3xhdr5mab2.3fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:150)：编码seqidno:150的多核苷酸是seqidno:151：hdr5mab2.3xhdr5mab2.3fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:148(由seqidno:149编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:146或150的氨基酸残基284-500将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。5.hdr5mab2.4xhdr5mab2.4含fc区的双抗体对dr5是四价的、由两对多肽链组成的示例性单特异性含fc区的双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体hdr5mab2vl-4的vl结构域和抗-人hdr5抗体hdr5mab2vh-4的vh结构域。第一含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.4xhdr5mab2.4fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:152在seqidno:152中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-4的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:27)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2vh-2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基268-273对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基274-283对应于接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，其来源于igg1铰链结构域，和残基284-499对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，其缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:152的多核苷酸是seqidno:153：hdr5mab2xhdr5mab2fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:154)：在seqidno:154中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-4的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:17)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2vh-2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:154的多核苷酸是seqidno:155：另外的含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.4xhdr5mab2.4fc双抗体(aa)”，其与hdr5mab2.4xhdr5mab2.4fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:156)：编码seqidno:156的多核苷酸是seqidno:157：hdr5mab2xhdr5mab2fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:154(由seqidno:155编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:152或156的氨基酸残基284-500将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。6.hdr5mab2.5xhdr5mab2.5含fc区的双抗体对dr5是四价的、由两对多肽链组成的示例性单特异性含fc区的双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体hdr5mab2vl-5的vl结构域和抗-人hdr5抗体hdr5mab2vh-2的vh结构域。第一含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.5xhdr5mab2.5fc双抗体”，其包含野生型igg1fc区。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:158)：在seqidno:158中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-5的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:29)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2vh-2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)，残基268-273对应于lepkss接头(seqidno:49)，残基274-283对应于接头(dkthtcppcp；seqidno:48)，其来源于igg1铰链结构域，和残基284-499对应于野生型igg1fc区(seqidno:1，其缺少c-末端氨基酸残基)。编码seqidno:158的多核苷酸是seqidno:159：hdr5mab2xhdr5mab2fc双抗体的第二多肽链的氨基酸序列是(seqidno:160)：在seqidno:160中，氨基酸残基1-107对应于hdr5mab2vl-5的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:29)，残基108-115对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)，残基116-237对应于hdr5mab2vh-2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:31)，残基235-239对应于astkg接头(seqidno:47)，残基240-267对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。编码seqidno:160的多核苷酸是seqidno:161：另外的含fc区的双抗体命名为“hdr5mab2.5xhdr5mab2.5fc双抗体(aa)”，其与hdr5mab2.5xhdr5mab2.5fc双抗体一致，除了fc区是具有l234a/l235a双突变(未加下划线)的变体，其降低/消除对fcγriiia的结合和降低/消除效应物功能。该含fc区的双抗体的第一多肽链的氨基酸序列是(seqidno:162)：编码seqidno:162的多核苷酸是seqidno:163：hdr5mab2xhdr5mab2fc双抗体(aa)的第二多肽链也是seqidno:160(由seqidno:161编码)，如上面详细描述的。可选地，在期望对fcγriiia降低/消除结合和/或降低/消除效应物功能的情况下，可以使用igg2或igg4的ch2-ch3区。在这样的含fc区的双抗体中，seqidnos:158或162的氨基酸残基284-500将被取代以seqidno:164(igg2的ch2-ch3)或seqidno:103(igg4的ch2-ch3)，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。d.对于r5是二价的dr5xdr5单特异性双抗体1.dr5mab1xdr5mab1双抗体对于缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域和dr5mab1的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:128的氨基酸残基1-273。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:130。对于含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域和dr5mab1的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:128或seqidno:132。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:130和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。2.dr5mab2xdr5mab2双抗体对于缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域和dr5mab2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:134的氨基酸残基1-267。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:136。对于含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域和dr5mab2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括seqidno:134或seqidno:138。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:136和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。3.dr5mab2.2xdr5mab2.2双抗体对于缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-2的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:140的氨基酸残基1-267。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:142。对于含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-2的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括seqidno:140或seqidno:144。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:142和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。4.dr5mab2.3xdr5mab2.3双抗体对于缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-3的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:146的氨基酸残基1-267。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:148。对于含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-3的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括seqidno:146或seqidno:150。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:148和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。5.dr5mab2.4xdr5mab2.4双抗体对于缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-4的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:152的氨基酸残基1-267。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:154。对于含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-4的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括seqidno:152或seqidno:156。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:154和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。6.dr5mab2.5xdr5mab2.5双抗体对于缺少fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-5的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:158的氨基酸残基1-267。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括上述seqidno:160。对于含fc区的dr5是二价的、由两条多肽链组成的其他示例性单特异性双抗体被构建，其具有抗-人dr5抗体dr5mab2vl-5的vl和vh结构域和dr5mab2vh-2的vl和vh结构域。该双抗体的第一多肽链的氨基酸序列包括seqidno:158或seqidno:162。该双抗体的第二多肽链的氨基酸序列包括seqidno:160和进一步包括具有氨基酸残基lepkssdkthtcppcp的接头；seqidno:51和igg1fc区具有seqidno:1或seqidno:102的氨基酸序列，其任选地缺少c-末端氨基酸残基。e.另外的dr5xdr5双抗体在可选的实施方式中，本发明的dr5xdr5双抗体被构建，其具有人源化抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域和/或人源化dr5mab2的vl和vh结构域。在具体实施方式中，hdr5mab2vlvl-2(seqidno:23)、hdr5mab2vlvl-3(seqidno:25)、hdr5mab2vlvl-4(seqidno:27)或hdr5mab2vlvl-5(seqidno:29)的vl结构域替代seqidno:13被并入到上述构建体中，和/或hdr5mab2vh-2(seqidno:31)的vh结构域代替seqidno:18被并入到上述构建体中。可选地，或者另外，dr5mab1的人源化vl结构域替代seqidno:3被并入到上述构建体中和/或人源化vh结构域替代seqidno:8被并入到上述构建体中。尽管上述示例性多价dr5结合分子对于各结合结构域包括轻链(vl)的三个cdrl和重链(vh)的三个cdrh，应该认识到，本发明还包括这样的多价dr5结合分子，其具有：(1)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域的cdrl中的至少一个；(2)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域的cdrl中的至少两个；(3)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域的三个cdrl；(4)抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域的cdrh中的至少一个；(5)抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域的cdrh中的至少两个；(6)抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域的三个cdrh；(7)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域的cdrl中的至少一个和抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域的cdrh中的至少一个；(8)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域的cdrl中的至少两个和抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域的cdrh中的至少两个；(9)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域的三个cdrl和抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域的三个cdrh；(10)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl结构域；(11)抗-人dr5抗体dr5mab1的vh结构域；(12)抗-人dr5抗体dr5mab1的vl和vh结构域；(13)或可与抗-人dr5抗体dr5mab1竞争结合人dr5；或(14)与(1)-(13)中的任意竞争结合人dr5。类似地，还将认识到，本发明还包括这样的多价dr5结合分子，其具有：(15)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域的cdrl中的至少一个；(16)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域的cdrl中的至少两个；(17)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域的三个cdrl；(18)抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域的cdrh中的至少一个；(19)抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域的cdrh中的至少两个；(20)抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域的三个cdrh；(21)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域的cdrl中的至少一个和抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域的cdrh中的至少一个；(22)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域的cdrl中的至少两个和抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域的cdrh中的至少两个；(23)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域的三个cdrl和抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域的三个cdrh；(24)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl结构域；(25)抗-人dr5抗体dr5mab2的vh结构域；(26)抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域；(27)与抗-人dr5抗体dr5mab2竞争结合人dr5；或(28)或与(15)-(27)中的任意竞争结合人dr5。vii.生产方法多价dr5结合分子和其他dr5激动剂、拮抗剂和调谐剂可由多核苷酸和/或dr5mab1或dr5mab2抗体的序列通过本领域中已知的方法产生，所述方法例如，合成或重组。产生这样的肽激动剂、拮抗剂和调谐剂的一种方法涉及化学合成多肽，然后在适于获得天然构象的氧化条件下处理，也就是说，矫正二硫键键合。这可利用本领域技术人员悉知的方法完成(见例如kelley,r.f.等(1990)在以下中:geneticengineeringprinciplesandmethods,setlow,j.k.ed.,plenumpress,n.y.,vol.12,pp1-19；stewart,j.m等(1984)solidphasepeptidesynthesis,piercechemicalco.,rockford,il；还见美国专利号4,105,603；3,972,859；3,842,067；和3,862,925)。本发明的多肽可以利用固相肽合成被常规制备(merrifield,b.(1986)“solidphasesynthesis,”science232(4748)：341-347；houghten,r.a.(1985)“generalmethodfortherapidsolid-phasesynthesisoflargenumbersofpeptides:specificityofantigen-antibodyinteractionatthelevelofindividualaminoacids,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)82(15)：5131-5135；ganesan,a.(2006)“solid-phasesynthesisinthetwenty-firstcentury,”minirev.med.chem.6(1)：3-10)。仍然可选的，具有dr5mab1或dr5mab2的一个或多个cdr的完全人抗体或其与dr5mab1或dr5mab2竞争结合人dr5或其可溶性形式可以通过使用已经被工程化成表达特异性人免疫球蛋白的商售小鼠来获得。被设计以产生更多期望的(例如，完全人抗体)或更强大的免疫应答的转基因动物还可被用于产生人源化或人抗体。这样的技术的实例是xeno小鼠tm(abgenix,inc.,fremont,ca)和humab-和tc小鼠tm(两者均来自medarex,inc.,princeton,nj)。可选地，抗体可以重组制备，并利用本领域中已知的任意方法表达。抗体可以如下重组制备：首先分离从宿主动物制得的抗体、获得基因序列和利用基因序列在宿主细胞(例如，cho细胞)中重组表达抗体。可以应用的另外的方法是在植物{(例如，烟草)或转基因奶中表达抗体序列。用于在植物或奶中重组表达抗体的合适方法已经被公开(见，例如，peeters等(2001)“productionofantibodiesandantibodyfragmentsinplants,”vaccine19:2756；lonberg,n.等(1995)“humanantibodiesfromtransgenicmice,”int.rev.immunol13:65-93；和pollock等(1999)“transgenicmilkasamethodfortheproductionofrecombinantantibodies,”j.immunol方法s231:147-157)。用于制备抗体衍生物例如人源化抗体、单链抗体等的合适方法在本领域中是已知的。可选地，抗体可以通过噬菌体展示技术被重组制备(见，例如，美国专利号5,565,332；5,580,717；5,733,743；6,265,150；和winter,g.等(1994)“makingantibodiesbyphagedisplaytechnology,”annu.rev.immunol.12.433-455)。感兴趣的抗体或蛋白质可以通过edman降解法进行测序，这是本领域技术人员熟知的。由质谱或edman降解法产生的肽信息可用于设计探针或引物，其被用于克隆感兴趣的蛋白质。克隆感兴趣的蛋白质的可选方法是通过利用纯化的dr5或其部分“淘选”这样的细胞，所述细胞表达具有dr5mab1或dr5mab2的一个或多个cdr的或与dr5mab1或dr5mab2竞争结合人dr5的感兴趣的抗体或蛋白质。“淘选”程序可以如下进行：从表达dr5的组织或细胞获得cdna库、在第二细胞类型中过表达cdna和在dr5mab1或dr5mab2存在或不存在时，筛选第二细胞类型的转染的细胞用于特异性结合于dr5。用于通过“淘选”克隆编码细胞表面蛋白的哺乳动物基因的方法的详细描述可见于本领域(见，例如，aruffo,a.等(1987)“molecularcloningofacd28cdnabyahigh-efficiencycoscellexpressionsystem,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)84:8573-8577和stephan,j.等(1999)“selectivecloningofcellsurfaceproteinsinvolvedinorgandevelopment:epithelialglycoproteinisinvolvedinnormalepithelialdifferentiation,”endocrinol.140:5841-5854)。含有感兴趣的多核苷酸的载体可通过一些适当手段中的任意手段被引入到宿主细胞中，所述适当手段包括电穿孔；氯化钙、氯化铷、磷酸钙、deae-葡聚糖或其他物质进行转染；微弹轰击(microprojectilebombardment)；脂转染；和感染(例如，在载体是感染剂诸如痘苗病毒的情况下)。引入载体或多核苷酸的选择将常常取决于宿主细胞的特征。能够过表达异源dna的任何宿主细胞均可被使用，用于分离编码抗体、感兴趣的多肽或蛋白质的基因的目的。合适的哺乳动物宿主细胞的非的限制性实例包括但不限于cos、hela和cho细胞。优选地，相比于宿主细胞中相应内源抗体或感兴趣的蛋白质(如果存在)，宿主细胞以约高5-倍，更优选高10-倍，甚至更优选高20-倍的水平表达cdna。针对特异性结合于dr5筛选宿主细胞通过免疫分析或facs完成。过表达抗体或感兴趣的蛋白质的细胞可以被鉴别。本发明包括含有本发明抗体的氨基酸序列的多肽。本发明的多肽可通过本领域中已知的方法制备。通过上述重组方法(即，单一或融合多肽)或通过化学合成，可经蛋白水解或抗体的其他降解产生多肽。抗体的多肽，尤其地，上至约50个氨基酸的较短的多肽，通过化学合成常规制备。化学合成方法在本领域中是已知的，并且是商业上可得到的。例如，抗-dr5多肽可通过应用固相法的自动多肽合成仪产生。本发明包括对如下分子的修饰：dr5mab1或dr5mab2抗体和结合dr5和这样的分子的激动剂、拮抗剂和调谐剂的其多肽片段，包括功能上等同的抗体和不明显影响这样的分子的性质的融合多肽以及具有增强的或降低的活性的变体。多肽的修饰在本领域中是常规操作，因而不需要在本文详细描述。修饰的多肽的实例包括这样的多肽，其具有氨基酸残基的保守取代、未明显有害改变功能活性的氨基酸的一个或多个缺失或添加或使用化学类似物。可彼此保守取代的氨基酸残基包括但不限于：甘氨酸/丙氨酸；丝氨酸/苏氨酸；缬氨酸/异亮氨酸/亮氨酸；天冬酰胺/谷氨酰胺；天冬氨酸/谷氨酸；赖氨酸/精氨酸；和苯基丙氨酸/酪氨酸。这些多肽还包括糖基化和非糖基化多肽以及具有其它翻译后修饰的多肽，所述其它翻译后修饰，诸如例如，用不同糖进行糖基化、乙酰化和磷酸化。优选地，氨基酸取代应该是保守的，即，取代的氨基酸会具有与原始氨基酸类似的化学性质。这样的保守取代在本领域中是已知的，并且已经在上文提供实例。氨基酸修饰范围可从改变或修饰一个或多个氨基酸到区域诸如可变区的完全重新设计(redesign)。可变区中的变化可改变结合亲和力和/或特异性。修饰的其它方法包括利用本领域中已知的偶合技术，包括但不限于酶促手段、氧化取代和螯合。修饰可用于例如，连接免疫分析标记物诸如连接放射性部分用于放射免疫分析。修饰的多肽利用本领域中确定的方法制备，并且可利用本领域中已知的标准测定来筛选。本发明包括融合蛋白，其包括一个或多个多肽或本发明的dr5mab1或dr5mab2抗体。在一个实施方式中，融合多肽被提供，其包括轻链、重链、或轻链和重二者链。在另一个实施方式中，融合多肽包含异源免疫球蛋白恒定区。在另一个实施方式中，融合多肽包含由公开保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变结构域和重链可变结构域。为了本发明的目的，抗体融合蛋白包含特异性结合dr5的一个或多个多肽结构域和另外的氨基酸序列，其在天然分子中不与该氨基酸序列连接，所述氨基酸序列例如，来自另外的区域的异源序列或同源序列。viii.本发明的多价dr5结合分子的用途本发明包括组合物——包括药学组合物，其包括本发明的多价dr5结合分子(例如，包括来自抗-dr5抗体诸如dr5mab1和dr5mab2的抗原-结合结构域的多价dr5结合分子或其人源化衍生物)、衍生自这样的分子的多肽、包括编码这样的分子或多肽的序列的多核苷酸和本文描述的其他试剂。如上面所讨论的，通过trail细胞因子激活dr5导致肿瘤细胞的高度选择性的识别和杀伤。本发明的多价dr5结合分子具有充当激动剂的能力，模仿trail，因此导致dr5的激活。因此，包括来自抗-dr5抗体诸如dr5mab1和dr5mab2的抗原-结合结构域的多价dr5结合分子及其人源化衍生物可以是被用作trail的替代物，以便促进表达dr5的肿瘤细胞死亡。由于dr5普遍分布于肿瘤细胞系中，本发明的多价dr5结合分子提供对癌症的一般疗法。可以由这样的分子治疗的癌症包括由选自以下的细胞的癌症细胞的存在表征的癌症：肾上腺肿瘤、aids-有关的癌症、软组织腺泡状肉瘤、星形细胞肿瘤、膀胱癌、骨癌、脑和脊髓癌、转移性脑肿瘤、乳腺癌、颈动脉体肿瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、脊索瘤、嫌色细胞肾细胞癌、透明细胞癌、结肠癌、结直肠癌、皮肤良性纤维组织细胞瘤、成纤维细胞性小圆细胞肿瘤、室管膜瘤、尤文氏肿瘤、骨外黏液样软骨肉瘤、不完全性骨纤维生成、骨纤维发育不良、胆囊或胆管癌、胃癌、妊娠滋养层疾病、生殖细胞肿瘤、头颈癌、肝细胞癌、胰岛细胞肿瘤、卡波西氏肉瘤、肾癌、白血病、脂瘤/良性脂肪瘤、脂肪肉瘤/恶性脂肪瘤、肝癌、淋巴瘤、肺癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、脑膜瘤、多发性内分泌瘤形成、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、成神经细胞瘤、神经内分泌肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、乳头状甲状腺癌、甲状旁腺肿瘤、儿科癌症、末梢神经鞘肿瘤、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、前列腺癌、后眼色素层黑素瘤、罕见的血液疾病、肾转移性癌、杆状肿瘤、横纹肌肉瘤、肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、滑膜肉瘤、睪丸癌、胸腺癌、胸腺瘤、甲状腺转移性癌和子宫癌。尤其地，本发明的多价dr5结合分子可用于治疗结直肠癌、肝细胞癌、神经胶质瘤、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、成神经细胞瘤；肉瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌和直肠癌。在一些实施方式中，本发明的多价dr5结合分子可以用于促进肿瘤细胞的死亡，所述是肿瘤细胞人癌干细胞。已经猜测癌干细胞(csc)在肿瘤生长和转移中发挥作用(ghotra,v.p.等(2009)“thecancerstemcellmicroenvironmentandanti-cancertherapy,”int.j.radiat.biol.85(11)：955-962；gupta,p.b.等(2009)“cancerstemcells:mirageorreality？”nat.med.15(9):1010-1012；lawson,j.c.等(2009)“cancerstemcellsinbreastcancerandmetastasis,”breastcancerres.treat.118(2):241-254；hermann,p.c.等(2009)“pancreaticcancerstemcells--insightsandperspectives,”expertopin.biol.ther.9(10)：1271-1278；schatton,t.等(2009)“identificationandtargetingofcancerstemcells,”bioessays31(10):1038-1049；mittal,s.等(2009)“cancerstemcells:theotherfaceofjanus,”amer.j.med.sci.338(2):107-112；alison,m.r.等(2009)“stemcellsandlungcancer:futuretherapeutictargets？”expertopin.biol.ther.9(9):1127-1141；charafe-jauffret,e.等(2009)“breastcancerstemcells:toolsandmodelstorelyon,”bmccancer9:202；scopelliti,a.等(2009)“therapeuticimplicationsofcancerinitiatingcells,”expertopin.biol.ther.9(8):1005-1016；pct公开物wo2008/091908)。在这样的猜测下，csc包括各肿瘤内的小的不同细胞亚组，其能够无限期地自行更新并能够发展成复制能力相对受限的更成熟的肿瘤细胞(一个或多个)。已经猜测癌干细胞对化疗剂、辐射或其他毒性条件可能更有抗性，因此，在临床疗法之后可能存留，并稍后生长成次级肿瘤、转移或造成复发。已经建议csc可源于'正常'组织干细胞或源于更分化的组织祖细胞。如本文所显示的，本发明的多价dr5结合分子对于看起来像癌干细胞(即，癌干细胞样(cscl)细胞)的细胞是有细胞毒性的。因此，本发明的多价dr5结合分子可用于促进人癌干细胞的死亡。另外，组蛋白脱乙酰酶(hdac)抑制剂，诸如伏立诺他(vorinostat)据报道使肿瘤细胞对经dr5途径诱导的凋亡敏感(nakata等(2004)“histonedeacetylaseinhibitorsupregulatedeathreceptor5/trail-r2andsensitizeapoptosisinducedbytrail/apo2-linhumanmalignanttumorcells,”oncogene19:6261-71；butler等(2006)“thehistonedeacetylaseinhibitor,suberoylanilidehydroxamicacid,overcomesresistanceofhumanbreastcancercellstoapo2l/trail,”intjcancer.15:944-54；shankar等(2009)“suberoylanilidehydroxamicacid(zolinza/vorinostat)sensitizestrail-resistantbreastcancercellsorthotopicallyimplantedinbalb/cnudemice,”molcancerther.8:1596-605)。如本文所显示的，本发明的多价dr5结合分子促进细胞死亡的能力通过结合hdac抑制剂(例如，伏立诺他)治疗而得到放大。因此，将hdac抑制剂与多价dr5结合分子组合使用对于用作为单一药剂的多价dr5结合分子进行治疗不敏感的、表达dr5的癌症治疗是尤其有用的。除了它们在治疗中的用途以外，本发明的多价dr5结合分子可以被可检测地标记并用于癌症的诊断或用于肿瘤和肿瘤细胞成像。ix.药学组合物本发明的组合物包括原料药组合物，其可用于制备药学组合物(例如，不纯或非无菌组合物)和可用于制备单位剂型的药学组合物(即，适于施用给受试者或患者的组合物)。这样的组合物包括预防有效量的或治疗有效量的本发明的多价dr5结合分子或这样的药剂和药学上可接受的载体组合。优选地，本发明的组合物包括预防有效量的或治疗有效量的本发明的多价dr5结合分子和药学上可接受的载体。本发明尤其包括这样的药学组合物：其中多价dr5结合分子包括抗原-结合结构域，其来自抗-dr5抗体诸如：dr5mab1、dr5mab2抗体、人源化dr5mab1、人源化dr5mab2抗体或任意这样的抗体的dr5-结合片段。尤其地，包括的是这样的分子，其包括：dr5mab1的3个cdrl和3个cdrh；dr5mab2的3个cdrl和3个cdrh；和/或hdr5mab2vl-3的3个cdrh和3个cdrh。本发明包括组合物，所述组合物包括本发明的多价dr5结合分子和药学上可接受的载体。本发明还包括这样的药学组合物，其另外包括对特定癌抗原是特异性的第二治疗抗体(例如，肿瘤特异性单克隆抗体)和药学上可接受的载体。在具体实施方式中，术语“药学上可接受的”表示获得联邦政府或州政府管理机构的许可或列于美国药典(u.s.pharmacopeia)或其他通常获得认可的药典中，供用于动物，特别是用于人类。术语“载体”指与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如弗氏佐剂(完全和不完全)、赋形剂或媒介。这类药学载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药学组合物时，水是优选的载体。盐水溶液和含水右旋糖以及甘油溶液也可以用作液体载体，特别是对于可注射溶液而言。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉(driedskimmilk)、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。若需要，组合物也可以含有小量湿润剂或乳化剂或ph缓冲剂。这些组合物可以采用溶液、悬液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉剂、缓释制剂等形式。通常，本发明组合物的成分被单独提供或以单位剂型混合在一起，例如作为标明活性剂的量的密封容器中的冻干粉或无水浓缩物，所述密封容器如安瓿或小袋(sachette)。当通过输注施用组合物时，其可以用含有无菌的药学级水或盐水的输注瓶分配。如果通过注射施用所述组合物，则可以提供安瓿注射用无菌水或盐水，以便可以在施用前混合所述成分。可以将本发明的组合物配制为中性或盐形式。药学上可接受的盐包括但不限于用阴离子形成的盐以及用阳离子形成的盐，所述阴离子例如来源于盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的阴离子，并且所述阳离子例如来自氢氧化纳、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的阳离子。本发明也提供药学包装或试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器填充以本发明的多价dr5结合分子(以及更优选地，含fc区的四价双抗体，其包括dr5mab1和/或dr5mab2抗体和/或人源化dr5mab1和/或人源化dr5mab2抗体的cdr(尤其地，含e-螺旋/k-螺旋-fc区的四价双抗体)。尤其地，包括的是这样的分子，其包括：dr5mab1的3个cdrl和3个cdrh；dr5mab2的3个cdrl和3个cdrh；和/或hdr5mab2v-3的3个cdrh和3个cdrh，单独的或与这样的药学上可接受的载体一起。另外，用于治疗疾病的一种或多种其他预防剂或治疗剂也可以包括于所述药学包装或试剂盒中。本发明还提供了药学包装或试剂盒，其包含一个或多个容器，所述容器填充以本发明药学组合物的一种或多种成分。任选地与这类容器(一个或多多个)关联的可以是采用管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的布告(notice)，所述布告反映了管理机构许可制造、使用或销售，供施用于人类。本发明提供可用于上述方法的试剂盒。试剂盒可包括任意本发明的多价dr5结合分子。试剂盒可在一个或多个容器中进一步包括用于治疗癌症的一种或多种其他预防剂或治疗剂；和/或试剂盒可进一步包括结合与癌症相关的一个或多个癌抗原的一个或多个细胞毒性抗体。在某些实施方式中，其他预防剂或治疗剂是化疗剂。在其他实施方式中，预防剂或治疗剂是生物或激素治疗剂。x.施用方法通过向受试者施用有效量的本发明的融合蛋白或缀合分子或包括本发明的融合蛋白或缀合分子的药学组合物，可以提供本发明的组合物用来治疗、预防和改善与疾病、病症或感染相关的一种或多种症状。在优选的方面，这类组合物基本上是纯的(即，基本上不含限制其效果或产生不期望的副作用的物质)。在具体实施方式中，受试者是动物，优选哺乳动物，如非灵长类(例如牛、马、猫科动物、犬科动物、啮齿动物等)或灵长类(例如，猴子，如食蟹猴、人等)。在优选的实施方式中，受试者是人。各种递送系统是已知的，并且可以用于施用本发明的组合物，例如封装于脂质体、微粒、微胶囊、重组细胞中，重组细胞能表达抗体或融合蛋白、受体介导的内吞作用(见，例如，wu等(1987)“receptor-mediatedinvitrogenetransformationbyasolublednacarriersystem”j.biol.chem.262:4429-4432)、构建核酸作为逆转录病毒或其他载体的一部分等。施用本发明的分子的方法包括、但不限于肠胃外施用(例如皮内、肌肉、腹腔内、静脉内以及皮下)、硬膜外以及粘膜(例如鼻内和口腔途径)。在具体实施方式中，本发明的多价dr5-结合分子经肌肉、静脉内或皮下施用。组合物可以通过任何方便途径施用，例如通过输注或弹丸注射、通过上皮或黏膜皮肤被覆(lining)(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。给药可以是全身的或局部的。另外，也可以应用肺给药，例如通过使用吸入器或喷雾器，并且与雾化剂一起配制。见例如美国专利号6,019,968；5,985,320；5,985,309；5,934,272；5,874,064；5,855,913；5,290,540；和4,880,078；和pct公布号wo92/19244；wo97/32572；wo97/44013；wo98/31346；和wo99/66903，其各自通过引用以其整体并入本文。本发明也使得本发明的多价dr5结合分子被包装在密封容器中，比如指示分子的量的安瓿或小袋中。在一个实施方式中，这样的分子作为冻干无菌粉或无水浓缩物提供于密封容器中，并且可以用例如水或盐水重构至适当浓度用于施用于受试者。优选地，本发明的多价dr5结合分子作为冻干无菌粉提供于密封容器中，其单位剂量为至少5μg、更优选地至少10μg、至少15μg、至少25μg、至少50μg、至少100μg、或至少200μg。本发明冻干的多价dr5-结合分子应在它们的原容器中储存在2和8℃之间，并且分子应在重构之后的12小时，优选地6小时，5小时，3小时，或1小时内施用。在可选的实施方式中，这样的分子以液体形式提供在指示分子、融合蛋白或缀合分子的量和浓度的密封容器中。优选地，当以液体形式提供时，这样的多价dr5-结合分子提供在密封容器中，其中分子存在的浓度为至少1μg/ml，更优选地至少2.5μg/ml，至少5μg/ml，至少10μg/ml，至少50μg/ml，或至少100μg/ml。可通过标准临床技术测定本发明的组合物有效治疗、预防或改善与病症相关的一个或多个症状的量。制剂中采用的精确剂量还将取决于施用的路径和病况的严重性，并且应根据从业者的判断和每个患者的情况决定。有效的剂量可从源自体外或动物模型测试系统的剂量响应曲线推断。对于本发明包括的多价dr5结合分子，施用给患者的剂量优选通过接受受试者的体重(kg)确定。施用的剂量通常为至少约0.3ng/kg/天至约0.9ng/kg/天、至少约1ng/kg/天至约3ng/kg/天、至少约3ng/kg/天至约9ng/kg/天、至少约10ng/kg/天至约30ng/kg/天、至少约30ng/kg/天至约90ng/kg/天、至少约100ng/kg/天至约300ng/kg/天、至少约200ng/kg/天至约600ng/kg/天、至少约300ng/kg/天至约900ng/kg/天、至少约400ng/kg/天至约800ng/kg/天、至少约500ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约600ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约700ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约800ng/kg/天至约1000ng/kg/天、至少约900ng/kg/天至约1000ng/kg/天或至少约1,000ng/kg/天。计算的剂量将基于患者在基线处的体重施用。体重从基线或确定的稳定状态(plateau)重量的显著(≥10％)改变将提示重新计算剂量。在另一个实施方式中，患者被施用这样的治疗方案，其包括一个或多个剂量的这类预防有效量的或治疗有效量的本发明的多价dr5结合分子，其中治疗方案在2天内、3天内、4天内、5天内、6天内或7天内施用。在某些实施方式中，治疗方案包括间歇施用预防有效量或治疗有效量的本发明多价dr5结合分子的剂量(例如，在给定周的第1天、第2天、第3天和第4天施用剂量和不施用预防有效量或治疗有效量的多价dr5结合分子(并且，尤其地，含fc区的四价双抗体，其包括dr5mab1和/或dr5mab2抗体和/或人源化dr5mab1和/或人源化dr5mab2抗体的cdr(尤其地，含e-螺旋/k-螺旋-fc区的四价双抗体)。尤其包括的是施用(在相同周的第5、6和7天)分子，其包括：dr5mab1的3个cdrl和3个cdrh；dr5mab2的3个cdrl和3个cdrh；和/或hdr5mab2v-3的3个cdrh和3个cdrh。通常，有1个、2个、3个、4个、5个或更多个疗程。各疗程可以是相同的方案或不同方案。在另一个实施方式中，施用的剂量在方案(一个或多个)的前四分之一、前一半、或前三分之二或四分之三内上升(例如，在四疗程的第一、第二或第三方案内)，直到达到日预防有效量或治疗有效量的多价dr5-结合分子。表4提供针对典型疗程的上述不同给药方案的5个实例。本发明的多价dr5-结合分子的施用剂量和频率可通过更改比如，例如脂质化而增强分子的吸收和组织渗透来降低或改变。可计算施用至患者的本发明的多价dr5-结合分子的剂量，以用作单剂疗法。可选地，分子可用于结合其他治疗性组合物使用，并且施用至患者的剂量小于当所述分子作为单试剂疗法使用时的剂量。本发明的药学组合物可局部施用至需要治疗的区域；这可通过例如，但不限于下述方式实现：局部注入、通过注射、或通过植入物的手段，所述植入物是多孔的、非多孔的或胶状材料，包括膜，比如硅橡胶膜或纤维。优选地，当施用本发明的分子时，必须注意使用不吸收该分子的材料。本发明的组合物可在泡状体(vesicle)，尤其是脂质体中递送(见langer(1990)“newmethodsofdrugdelivery,”science249:1527-1533)；treat等,在以下中：liposomesinthetherapyofinfectiousdiseaseandcancer,lopez-berestein和fidler(eds.),liss,newyork,353-365页(1989)；lopez-berestein,ibid.,317-327页)。可以在控释或缓释系统递送本发明的组合物。可以使用本领域技术人员已知的任何技术产生包括一个或多个本发明的多价dr5-结合分子(一种或多种)的缓释制剂。见例如美国专利号4,526,938；pct公开物wo91/05548；pct公开物wo96/20698；ning等(1996)“intratumoralradioimmunotheraphyofahumancoloncancerxenograftusingasustained-releasegel,”radiotherapy&oncology39:179-189,song等(1995)“antibodymediatedlungtargetingoflong-circulatingemulsions,”pdajournalofpharmaceuticalscience&technology50:372-397；cleek等(1997)“biodegradablepolymericcarriersforabfgfantibodyforcardiovascularapplication,”pro.int’l.symp.control.rel.bioact.mater.24:853-854；和lam等(1997)“microencapsulationofrecombinanthumanizedmonoclonalantibodyforlocaldelivery,”proc.int’l.symp.controlrel.bioact.mater.24:759-760，其各通过引用以其整体并入本文。在一个实施方式中，泵可用于控释系统(见langer，上文；sefton,(1987)“implantablepumps,”crccrit.rev.biomed.eng.14:201-240；buchwald等(1980)“long-term,continuousintravenousheparinadministrationbyanimplantableinfusionpumpinambulatorypatientswithrecurrentvenousthrombosis,”surgery88:507-516；和saudek等(1989)“apreliminarytrialoftheprogrammableimplantablemedicationsystemforinsulindelivery,”n.engl.j.med.321:574-579)。在另一个实施方式中，聚合材料可用于实现分子的控释(见例如medicalapplicationsofcontrolledrelease,langer和wise(eds.),crcpres.,bocaraton,florida(1974)；controlleddrugbioavailability,drugproductdesignandperformance,smolen和ball(eds.),wiley,newyork(1984)；levy等(1985)“inhibitionofcalcificationofbioprostheticheartvalvesbylocalcontrolled-releasediphosphonate,”science228:190-192；during等(1989)“controlledreleaseofdopaminefromapolymericbrainimplant:invivocharacterization,”ann.neurol.25:351-356；howard等(1989)“intracerebraldrugdeliveryinratswithlesion-inducedmemorydeficits,”j.neurosurg.7(1)：105-112)；美国专利号5,679,377；美国专利号5,916,597；美国专利号5,912,015；美国专利号5,989,463；美国专利号5,128,326；pct公布号wo99/15154；和pct公布号wo99/20253)。缓释制剂所用的聚合物的实例包括但不限于聚(2-甲基丙烯酸羟乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、乙烯-乙烯基乙酸酯共聚物(poly(ethylene-co-vinylacetate))、聚(甲基丙烯酸)、聚乙醇酸交酯(plg)、聚酐、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚交酯(pla)、丙交酯-乙交酯共聚物(plga)以及聚原酸酯(polyorthoeste)。控释系统可接近治疗靶标(例如，肺)布置，因此仅仅需要全身剂量的一部分(见例如goodson,在medicalapplicationsofcontrolledrelease中，上文，卷2,115-138页(1984))。根据dunn等(见u.s.5,945,155)，使用可用作控释移植物的聚合物组合物。该特定方法基于聚合物系统中生物活性材料原位控释的治疗效果。移植可通常发生于患者身体内需要治疗的任何地方。可使用非聚合物持续递送系统，由此受试者身体内的非聚合物移植物被用作药物递送系统。一旦移植到身体中，移植物的有机溶剂会从组合物中消散、分散或渗漏到周围组织液中，并且非聚合物材料会逐渐凝结或沉淀，形成固体微孔基质(见u.s.5,888,533)。控释系统在langer(1990,“newmethodsofdrugdelivery,”science249:1527-1533)的综述中有论述。可以使用本领域技术人员已知的任何技术来生产包含本发明的一种或多种治疗剂的缓释制剂。见例如美国专利号4,526,938；国际公布号wo91/05548和wo96/20698；ning等(1996)“intratumoralradioimmunotheraphyofahumancoloncancerxenograftusingasustained-releasegel,”radiotherapy&oncology39:179-189,song等(1995)“antibodymediatedlungtargetingoflong-circulatingemulsions,”pdajournalofpharmaceuticalscience&technology50:372-397；cleek等(1997)“biodegradablepolymericcarriersforabfgfantibodyforcardiovascularapplication,”pro.int’l.symp.control.rel.bioact.mater.24:853-854；和lam等(1997)“microencapsulationofrecombinanthumanizedmonoclonalantibodyforlocaldelivery,”proc.int’l.symp.controlrel.bioact.mater.24:759-760，其各通过引用以其整体并入本文。在本发明的组合物是编码本发明的多价dr5-结合分子的核酸的情况下，核酸可体内施用，以通过如下方式促进其编码的多价dr5-结合分子的表达：通过将其构建为适当的核酸表达载体的一部分并且施用它从而其成为细胞内的，例如，通过使用逆转录病毒载体(见美国专利号4,980,286)，或通过直接注射，或通过使用微粒轰击(例如，基因枪；生物弹道技术(biolistic)，dupont)，或用脂质或细胞表面受体或转染试剂涂覆，或通过与已知进入核的同源框样肽一起施用(见例如joliot等(1991)“antennapediahomeoboxpeptideregulatesneuralmorphogenesis,”proc.natl.acad.sci.(u.s.a.)88:1864-1868)等。可选地，可以将核酸引入细胞内并通过同源重组整合到宿主细胞dna中，以进行表达。用治疗或预防有效量的本发明的多价dr5-结合分子治疗受试者可包括单一治疗或，优选地，可包括一系列治疗。在优选的实施例中，用这样的双抗体每周治疗受试者一次持续约1至10周，优选地2至8周，更优选地约3至7周，和甚至更优选地约4、5或6周。本发明的药学组合物可一天施用一次、一天两次或一天三次。可选地，药学组合物可一周施用一次、一周两次、每两周一次、一个月一次、每六周一次、每两个月一次、一年两次或每年一次。应当认识到，用于治疗的分子的有效剂量可以随着具体疗程增加或降低。xi.实施例已经一般性描述了本发明，通过参考下述实施例将更容易理解本发明，所述实施例通过示例的方式被提供而不旨在限制本发明，除非指出的。针对材料和方法二者的许多更改可以被实践而不背离本公开的范围，这对于本领域技术人员来说是明显的。a.实施例1：抗-人dr5单克隆抗体dr5mab1和dr5mab2的表征两个单克隆抗体由于能够免疫特异性结合于人dr5而被分离，并被授予命名“dr5mab1”和“dr5mab2”。如上面所讨论的，发现这些抗体的cdr不同。为了确定抗体是否结合至不同dr5表位，制备了人dr5-fc融合蛋白，并将其涂覆至固定的表面。将dr5mab1(1μg/ml)生物素化，并用对照igg或用dr5mab2(10μg/ml)孵育，并且，通过测量固定的生物素化抗体的量评估igg或dr5mab2抗体与dr5mab1竞争结合(至人dr5-fc融合蛋白)的能力。另外，评估igg或dr5mab1抗体与生物素化dr5mab2竞争结合的能力。该实验的结果显示于表5中。该实验的结果表明，生物素化抗体能够结合dr5蛋白质，即使在存在过量非生物素化抗体的情况下。因此，结果显示dr5mab1和dr5mab2结合于dr5的不同表位。为了进一步表征dr5mab1和drmab2抗体，评估其阻碍dr5和trail配体之间结合的能力。因此，生物素化dr5mab1、生物素化dr5mab2或生物素化dr5-fc融合物(各为2μg/ml)分别用固定的dr5-fc融合物(1μg/ml)在缓冲液或组氨酸标记的trail(20μg/ml)存在下孵育。评估固定的生物素化抗体的量。该实验的结果显示于表6。结果显示，结合至固定的dr5-fc的dr5mab1或dr5mab2的量不受到组氨酸标记的trail的存在的影响，因此表明dr5mab1和dr5mab2均不阻碍dr5的trail配体结合位点。另外，两个抗体都不能结合组氨酸标记的trail配体。b.实施例2：抗-人dr5单克隆抗体dr5mab1和dr5mab2的物种特异性为了评估抗-人dr5单克隆抗体dr5mab1和dr5mab2的物种特异性，比较抗体结合人dr5的能力与其结合食蟹猴(macacafascicularis)dr5的能力。该实验的结果显示于图5。结果显示，两种抗体都能够结合食蟹猴dr5，但是，他们各显示对人dr5较高的结合亲和力。利用biacore分析研究结合动力学，如示于图6。双特异性dr5xcd3双抗体用his-标记的dr5孵育，并且通过biacore分析测量结合动力学。应用的双抗体为dr5mab1xcd3mab2(图6，版图a和e)、dr5mab2xcd3mab2(图6，版图b和f)、dr5mab3xcd3mab2(图6，版图c和g)和dr5mab4xcd3mab2(图6，版图d和h)。图6，版图a-d显示人dr5的结果。图6，版图e-h显示食蟹猴dr5的结果。计算的ka、kd和kd示于表7。结果显示相对于参考抗体dr5mab3和dr5mab4，dr5mab1和dr5mab2显示改变的结合动力学。c.实施例3：抗-人dr5单克隆抗体dr5mab1和dr5mab2的肿瘤细胞特异性研究抗-人dr5单克隆抗体dr5mab1和dr5mab2的肿瘤细胞特异性。使正常组织与dr5mab1或与同种型对照(5μg/ml)接触，并将染色的程度可视化。如示于图7a，版图a-l，dr5mab1和同种型对照均不能标记正常组织的细胞。相比之下，发现dr5mab1强烈地标记结肠癌组织(图7b，版图a)和肺癌组织(图7b，版图b)的细胞。相比之下，同种型对照不能标记任一组织(图7b，版图c-d)。因此，示于图7a-7b的结果表明dr5mab1能够特异性结合癌症细胞。类似地，使正常组织接触dr5mab2(5μg/ml)，并将染色的程度可视化。如示于图8a，版图a-f，dr5mab2不能标记正常组织的细胞。相比之下，发现dr5mab2强烈标记结肠癌组织(图8b，版图a)和肺癌组织(图8b，版图c)的细胞。相比之下，同种型对照不能标记任一组织(图8b，版图b和d)。因此，示于图8a-8b的结果表明dr5mab2能够特异性结合癌症细胞。d.实施例4：dr5mab2xcd3mab2双抗体的肿瘤细胞细胞毒性通过在靶肿瘤细胞和外周血单核细胞(pbmc)存在下以效应物与靶细胞比为30:1或20:1孵育双特异性dr5xcd3双抗体或对照双抗体24小时，评估本发明的dr5-结合分子介导细胞毒性的能力。通过测量乳酸脱氢酶(ldh)通过受损细胞向介质的释放，测量细胞毒性百分比。对于该研究，具有显示于图1的结构的示例性双特异性双抗体命名为“dr5mab2xcd3mab2”，其被构建成具有抗-人dr5抗体dr5mab2的vl和vh结构域和cd3mab2的vl和vh结构域(该双抗体对于dr5和cd3是单价的)。双抗体由两条多肽链组成。双抗体的第一多肽链包括：氨基酸残基1-107，其对应于dr5mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:13)；残基108-115，其对应于间插间隔肽(接头1)(seqidno:33)；残基116-240，对应于具有d65g取代的cd3mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:112)；残基241-245，其对应于astkg接头(seqidno:47)；和残基246-273，其对应于含有半胱氨酸的e-螺旋结构域(seqidno:41)。dr5mab2xcd3mab2双抗体的第二多肽链包括：氨基酸残基1-110，其对应于cd3mab2的vl结构域的氨基酸序列(seqidno:104)；残基111-118，其对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)；残基119-237，其对应于dr5mab2的vh结构域的氨基酸序列(seqidno:18)；残基238-242，其对应于astkg接头(seqidno:47)；和残基243-270，其对应于含有半胱氨酸的k-螺旋结构域(seqidno:42)。应用的对照双抗体含有抗-荧光素抗体4-4-20的vl和vh结构域(分别为seqidnos:114和115)和cd3mab2的vl和vh结构域(分别为seqidnos:102和108)，并被命名为抗-荧光素x抗-cd3对照双抗体“4-4-20xcd3mab2”。双抗体由两条多肽链组成。双抗体的第一多肽链包括：氨基酸残基1-112，其对应于抗-荧光素抗体4-4-20的vl结构域(seqidno:114)；残基113-120，其对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)；残基121-245，其对应于cd3mab2(seqidno:108)的vh结构域；残基246-251，其是含有半胱氨酸的间隔肽(ggcggg)(seqidno:34)；和残基252-280，其对应于e-螺旋结构域(seqidno:39)。4-4-20xcd3mab2双抗体的第二多肽链包括：氨基酸残基1-110，其对应于cd3mab2的vl结构域(seqidno:114)；残基111-118，其对应于间插间隔肽gggsgggg(接头1)(seqidno:33)；残基119-236，其对应于抗-荧光素抗体4-4-20的vh结构域(seqidno:115)；残基237-242，其是含有半胱氨酸的间隔肽(ggcggg)(seqidno:34)；和残基243-270，其对应于k-螺旋结构域(seqidno:40)。该研究的结果显示于图9a-9k。应用的靶肿瘤细胞是：786o肾细胞腺癌细胞(图9a)、a498肾癌细胞(图9b)、aspc1胰腺癌细胞(图9c)、lncap雄激素敏感性人前列腺腺癌细胞(图9d)、sw48结直肠癌腺癌细胞(图9e)、a549腺癌人肺泡基底上皮细胞(图9f)、skmes人肺癌症细胞(图9g)、du145人前列腺癌症细胞(图9h)、a375人恶性黑素瘤细胞(图9i)、skbr3人her2-过表达乳腺癌细胞(图9j)和jimt人乳腺癌细胞(图9k)。结果表明dr5mab2xcd3mab2双抗体能够介导对癌症细胞有效的细胞毒性攻击。e.实施例5：dr5mab1和dr5mab2的预想不到的优势将本发明的dr5结合分子dr5mab1和dr5mab2介导细胞毒性的能力与参考抗-dr5抗体：dr5mab3和dr5mab4介导细胞毒性的能力进行比较。为了进行这样的比较，基本如上所述制备具有显示于图1的结构的双特异性dr5xcd3双抗体，其含有这些抗-dr5抗体的vl和vh结构域和cd3mab2的vl和vh结构域。第一和第二制备的双抗体命名为“dr5mab1xcd3mab2”；“dr5mab2xcd3mab2”；“dr5mab3xcd3mab2”；和“dr5mab4xcd3mab2”。用这些双抗体之一或用对照双抗体(4-4-20xcd3mab2)在外周血单核细胞(pbmc)和靶肿瘤细胞存在下以效应物与靶细胞比为20:1孵育靶肿瘤细胞24小时。通过测量乳酸脱氢酶(ldh)通过受损细胞向介质的释放测量细胞毒性百分比。该研究的结果显示于图10a-10f。应用的靶肿瘤细胞为：a549腺癌人肺泡基底上皮细胞(图10a)、skmes人肺癌症细胞(图10b)、du145人前列腺癌症细胞(图10c)、a375人恶性黑素瘤细胞(图10d)、skbr人her2-过表达乳腺癌细胞(图10e)和jimt人乳腺癌细胞(图10f)。结果表明dr5mab1和dr5mab2的vl和vh结构域在诱发细胞毒性方面比参考dr5mab显著地和预想不到地更有效力。f.实施例6：dr5mab1和dr5mab2的双重和同时结合为了显示本发明的dr5xcd3双抗体同时结合dr5和结合cd3的能力，将可溶性人dr5(以组氨酸标记)涂覆至支撑物表面。然后用dr5mab2xcd3mab2双抗体或其以下人源化衍生物中的一种孵育支撑物：hdr5mab2(2.2)xcd3mab2、hdr5mab2(2.3)xcd3mab2、hdr5mab2(2.4)xcd3mab2或hdr5mab2(2.5)xcd3mab2。然后，提供缀合生物素的cd3，并测量固定至支撑物的cd3的量。该实验的结果显示于图11。发现所有的双抗体均能够同时结合dr5和cd3。g.实施例7：dr5mab2的人源化衍生物的细胞毒性为了显示本发明的人源化dr5mab2xcd3双抗体介导细胞毒性的能力，用全t细胞和已经被工程化成表达荧光素酶(luc)报告基因的靶colo206结直肠癌细胞(colo205-luc细胞)孵育dr5mab2xcd3mab2双抗体或其以下人源化衍生物中的一种：hdr5mab2(2.2)xcd3mab2,hdr5mab2(2.3)xcd3mab2、hdr5mab2(2.4)xcd3mab2或hdr5mab2(2.5)xcd3mab2(效应物与靶的比为10:1)。通过荧光素酶在细胞分解时的释放所引起的发光的增加测量细胞毒性。该研究的结果显示于图12。发现dr5mab2xcd3双抗体均能够介导结直肠癌细胞的细胞毒性。h.实施例8：单独、交联或组合的dr5mab的细胞毒性在一些细胞系中利用非放射性细胞增殖分析检验本发明的dr5结合分子dr5mab1和dr5mab2的细胞毒性。检验单独、交联或组合的dr5mab1和dr5mab2的活性。获自atcc的细胞系在标准组织培养条件下被培养。将各细胞系以～2×104细胞/孔(在96孔板中)铺板，和在补充以10％fbs的f12/dmem培养基中孵育过夜。单独的孔(三个重复)用0或1μg/ml的dr5mab1或dr5mab2±10μg/ml山羊抗-小鼠iggfc抗体(命名为“αmfc”)处理，所述山羊抗-小鼠iggfc抗体在dr5抗体之后1小时加入以与dr5mab交联，或所述孔用1μg/mldr5mab1和dr5mab2中的每种处理(总计2μg/ml抗-dr5抗体)和孵育两天。利用promegacelltiteraqeous非放射性细胞增殖分析(cat#g5430)测定细胞生存力，基本上按照制造商说明书中描述的通过mts的细胞降低分析可溶性甲瓒(formazan)的量，其是对培养物中的存活细胞数目的测量。简言之，mts/pms试剂被加入到孔中，并且在490nm(以650mm参考)的吸光度在moleculardevicesthermomax微板读取仪中读取。用测试制品处理的细胞的细胞生存力被归一化成阴性对照(仅培养基)，其被设成100％以产生“％培养基对照”。％抑制＝100％-％培养基对照，并且被提供在表8中，其中较大的值表示对生长的更大抑制，反映了测试制品的细胞毒性。类似的研究在抗-dr5mab浓度从～10-3nm至～102nm的范围进行。colo205细胞的数据提供在图13中，其是对本发明抗体敏感的细胞系的代表。结果表明dr5mab1和dr5mab2单独地均不能抑制检验的任意细胞系中细胞的生长，表明两个抗体单独地均不是激动剂。然而，当通过山羊抗-小鼠iggfc抗体交联时，dr5mab1和dr5mab2中的每个在一些细胞系中均显示有效的细胞毒性。尤其地，当用本发明交联的dr5mab处理时，colo205、sw48、sw948、a498和skmes细胞系的生长明显下降。令人惊讶地，也发现dr5mab1和dr5mab2的组合在不存在交联的情况下明显抑制若干细胞系(例如，colo205和sw948)的生长。因此，dr5mab1和dr5mab2的组合显示激动剂活性，而对于任一单独的抗体没有发现该活性。这些数据表明抗-dr5抗体的组合可用于在其中单一抗体是低效的治疗情形中激动dr5。i.实施例9：dr5mab1和dr5mab2的细胞毒性是凋亡研究了dr5mab1和dr5mab2的细胞毒性机制。具体地，对用dr5mab1或dr5mab2单独处理的或在αmfc存在下用dr5mab1或dr5mab2处理以交联dr5mab的colo205细胞应用三个不同的凋亡测量：(i)核小体富集(ii)parp切割和(iii)活化胱天蛋白酶3。对于所有测定，将colo205细胞以～104细胞/孔(在96孔板中)铺板，并在补充以10％fbs的f12/dmem培养基中孵育过夜。单独的孔用0或1μg/ml的dr5mab1或dr5mab2±10μg/mlαmfc(在dr5抗体之后1小时加入)处理(三个重复)并孵育四个小时。利用rochecelldeathdetection(细胞死亡检测)elisaplus分析(cat#1774425)测定核小体富集(图14a)，基本上按照制造商的说明书进行测定。简言之，在孵育之后，细胞在分解缓冲液中被溶解并使其澄清。在链酶抗生物素涂覆的elisa板中用抗-组蛋白-生物素/抗-dna-pod抗体混合物孵育澄清的溶解产物，然后，洗涤板，并加入abts试剂，并且，在405nm(以490nm参考)的吸光度在moleculardevicesthermomax微板读取仪中读取。利用下式计算富集因子(对释放到细胞质中的核小体的测量)：富集因子＝(正在死亡/已死亡细胞)样品的mu/相应阴性对照(未经抗体治疗的细胞)的mu，其中mu＝吸光度[10-3]，被绘图于图14a中。parp切割和活化胱天蛋白酶3(分别为图14b和14c)利用milliplexmaphumanlateapoptosismagneticbead3-plexkit-cellsignalingmultiplexassay(milliplexmap人后期凋亡磁珠3-plex试剂盒-细胞信号传导多元分析)(cat.#48-670)测定，基本上按照制造商的说明进行测定。简言之，在孵育之后，简言之，在孵育之后，在分解缓冲液中溶解细胞并使细胞澄清。澄清的溶解产物用参考磁珠缀合的初抗(primary)孵育，然后洗涤，并且用分别的生物素化次级抗体孵育。然后用链酶抗生物素-pe(sape)孵育板，然后洗涤板，将测定缓冲液添加至各孔中，并且在具有xy平台的luminexlx-100系统中读取板。结果绘制在图14b(切割的parp)和图14a(活化胱天蛋白酶3)中。对凋亡的所有三种测量结果在用交联dr5mab1或dr5mab2处理的细胞培养物中被提高，表明所见的细胞毒性是凋亡的结果。j.实施例10：四价dr5结合分子为了检验效价对dr5结合分子的影响，产生对dr5是四价的分子。在该实施例中，制备含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体。这些含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体中的若干在以下实施例中被表征。各多价dr5结合分子由两对多肽链组成。第一多肽链具有一般序列：[vl1结构域]—[gggsgggg]—[vh2结构域]—[astkg]—[evaacek(evaalek)3]—[lepkss]—[dkthtcppcp]—fc区(野生型或l234a/l235a双突变体)，起始自231eu编号)，其中vl1来自抗-dr5抗体，[gggsgggg]是seqidno:33，vh2来自抗-dr5抗体，[astkg]是seqidno:47，[evaacek(evaalek)3]是seqidno:41，[lepkss]是seqidno:49，[dkthtcppcp]是seqidno:48和fc区是seqidno:1(野生型)或seqidno:102(l234a/l235l突变体)和任选地缺少c-末端氨基酸残基。第二多肽链具有一般序列：[vl2结构域]—[gggsgggg]—[vh1结构域]—[astkg]—[kvaacke(kvaalke)3]，其中vl2来自抗-dr5抗体，[gggsgggg]是seqidno:33，vh1来自抗-dr5抗体，[astkg]是seqidno:47，[kvaacke(kvaalke)3]是seqidno:42。链组装如示于图4b。第一多肽链的vl1结构域与第二多肽链的vh1结构域相互作用，以形成第一功能抗原结合位点，其对dr5是特异性的。同样的，第二多肽链的vl2结构域与第一多肽链的vh2结构域相互作用，以形成第二功能抗原结合位点，其对dr5也是特异性的。因此，对第一和第二多肽链的vl和vh结构域的选择是协同的，以便双抗体的两条多肽链共同包括能够结合于dr5的至少一个表位的vl和vh结构域。具有所有相同的vl和vh结构域(例如，所有vl和vh结构域来自dr5mab1或来自dr5mab2)的分子是单特异性的(即，结合dr5的单一表位)并且对dr5是四价的。具有dr5mab1和dr5mab2的vl和vh结构域的分子是双特异性的(即，结合dr5的两个不同表位)，但是对dr5仍是四价的。提供示例性含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体，其包括dr5mab1和dr5mab2的vl和vh结构域。然而，应该理解，对dr5是四价的含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体可以利用任意抗-dr5抗体的vl和vh结构域制备。类似地，可以制备可选构建体诸如上面公开的那些，其包括一个或多个抗-dr5抗体的vl和vh结构域诸如本文公开的那些。每个含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体的第一和第二链的vl、vh和fc区以及seqidnos:(多肽)总结于表9中。还提供的是组装的分子的独特指示器(designator)。上面提供多肽链和编码其的多核苷酸的完整的序列。”虽然提供在表9中的若干分子是双特异性分子，也就是说，它们结合两个不同的dr5表位，所有的对于dr5均是四价的。k.实施例11：含有dr5mab1和dr5mab2的双特异性四价dr5结合分子的肿瘤细胞特异性研究了代表性双特异性四价dr5结合分子(dr5mab2xdr5mab1fc双抗体)的肿瘤细胞特异性。使正常组织与标记的dr5mab2xdr5mab1fc双抗体或与标记的对照双抗体(4-4-20xcd3mab2,在实施例4中描述)以0.625μg/ml接触，并使染色的程度可视化。如示于图15a-b，dr5mab2xdr5mab1fc双抗体和对照双抗体均不能标记正常组织的细胞。类似的结果见于正常组织包括肝的另外的样品，如示于图15b。相比之下，发现dr5mab2xdr5mab1fc双抗体强烈标记乳腺癌组织(图16，版图a)、结肠癌组织(图16，版图b)、肺癌组织(图16,版图c)和前列腺癌组织(图16,版图d)的细胞。相比之下，对照双抗体不能标记任一组织(图16,版图e-h)。组织学观察的总结提供于表10中。结果示于图15a-15b、16和表10，因此表明四价dr5结合分子(对于dr5的两个表位是双特异性的)能够特异性结合癌症细胞。l.实施例12：四价dr5结合分子的细胞毒性研究了本发明的四价dr5结合分子的细胞毒性。两个示例性双特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab2fc双抗体；和dr5mab2xdr5mab1fc双抗体)和四个示例性单特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab1fc双抗体；dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa)；dr5mab2xdr5mab2fc双抗体；和dr5mab2xdr5mab2fc双抗体(aa)，其中“aa”指l234a/l235a突变)的对一些细胞系的活性利用非放射性细胞增殖分析检验，基本上按照上述进行，除了不将交联抗体添加至任意测试样品。his-标记的trail(r&d系统)被用作阳性对照。用测试制品处理的细胞的细胞生存力被归一化至阴性对照(仅培养基)，其被设置成100％，以产生“％培养基对照”。％抑制＝100％-％培养基对照，并且被提供在表11中，其中较大的值表示对生长的更大抑制，反映了测试制品的细胞毒性。类似的研究在抗-dr5mab浓度从～10-3nm至～102nm的范围进行。图17显示若干应答的细胞系colo205(图17a)、a498(图17b)和skmes(图17c)的数据。结果表明，所有四价dr5结合分子在一些细胞系中具有有效的细胞毒性。事实上，所有四价dr5结合分子比trail本身更有效。尤其地，当用本发明的四价dr5结合分子处理时，colo205、sw48、sw948、a498、caki2和skmes的生长明显降低。具有l234a/l235afc区的四价dr5结合分子显示与具有野生型fc区的相对物分子类似或稍高的细胞毒性，表明具有对fcγr降低的结合和/或降低的效应物功能的fc区可被并入到四价dr5结合分子中，其中，对fcγr的结合和/或效应物功能不需要和/或期望。m.实施例13：四价dr5结合分子诱导凋亡研究了本发明的四价dr5结合分子诱导凋亡的能力。两个示例性双特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab2fc双抗体；和dr5mab2xdr5mab1fc双抗体)和两个示例性单特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab1fc双抗体；和dr5mab2xdr5mab2fc双抗体)的活性在colo205、a496、skmes、lncap、mda-mb-231和hs700t细胞系中检验。该研究利用核小体富集测定进行，基本上按照上述进行，除了不将交联抗体添加至测试样品。his-标记的trail(r&d系统)被用作阳性对照。富集因子(如上述计算的)绘图于图18。结果表明所有四价dr5结合分子均是凋亡的有效诱导物。实际上，所有四价dr5结合分子均具有与相同细胞系中的阳性对照中可见的类似的富集因子。n.实施例14：四价dr5结合分子的细胞毒性在细胞增殖分析中将本发明的多价dr5结合分子的细胞毒性与之前报道的抗体dr5mab8(kmtr2)和dr5mab4(可那木单抗)的细胞毒性进行比较。在具有或不具有交联的情况下，一个示例性双特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab2fc双抗体(aa))、两个示例性单特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa)和dr5mab2xdr5mab2fc双抗体(aa))、抗-dr5抗体dr5mab8(aa)(kmtr2)、和抗-dr5抗体dr5mab4(aa)(可那木单抗)(其中“aa”指l234a/l235a突变)对colo205的活性在浓度范围从大约10-3nm至大约102nm内进行检验，其利用非放射性细胞增殖分析，基本上按照上述进行，除了交联抗体仅被添加至dr5mab4的一个测试样品。his-标记的trail(r&d系统)被用作阳性对照。用测试制品处理的细胞的细胞生存力被归一化至阴性对照(仅培养基)，其被设置成100％，以产生“％培养基对照”。％抑制＝100％-％培养基对照，被绘图于图19。结果表明所有测试的四价dr5结合分子均具有有效的不依赖于交联的细胞毒性，并且比之前描述的抗-dr5抗体dr5mab8(kmtr2)和dr5mab4(可那木单抗)更有效。尤其地，四价dr5结合分子明显比甚至交联的dr5mab4更有效。o.实施例15：四价dr5结合分子对癌干细胞样(cscl)细胞的细胞毒性研究了本发明的多价dr5结合分子对癌干细胞样(cslc)细胞的细胞毒性。reca0201是cscl细胞，其分离自适度分化的直肠腺癌(突变的apc和kras；cd44hi,cd133+和a33+)。reca0201细胞是致瘤的，并且能够重演(recapitulate)肿瘤形态和体内多谱系分化或体外类器官形成。一个示例性双特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab2fc双抗体(aa))、两个示例性单特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa)和dr5mab2xdr5mab2fc双抗体(aa))、两个抗-dr5抗体(dr5mab8(aa)(kmtr2)和dr5mab4(aa)(可那木单抗)(其中“aa”指l234a/l235a突变)对reca0201细胞的细胞毒性活性在一定的浓度范围内利用非放射性细胞毒性测定检验。简言之，用基本表达的荧光素酶稳定转染的20,000个细胞reca0201结肠癌cscl细胞被铺板到每个孔中，并被暴露于指示浓度的测试制品。48小时后，通过利用promegasteady底物试剂在victorplate读取仪上测量荧光素酶测定细胞生存力水平，所述测定基本上按照制造商的描述进行。结果绘图于图20。如示于图20，四价dr5结合分子显示对csclreca0201细胞有效的细胞毒性。实际上，结果表明所有四价dr5结合分子比之前描述的抗-dr5抗体dr5mab8(kmtr2)和dr5mab4(可那木单抗)更有效，并且比trail本身更有效。p.实施例16：通过四价dr5结合分子在植入有colo205肿瘤细胞的小鼠中抑制肿瘤生长示例性单特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab1fc双抗体(aa))、和两个抗-dr5抗体(dr5mab8(aa)(kmtr2)和dr5mab4(aa)(可那木单抗))(其中“aa”指l234a/l235a突变)的抗-肿瘤活性在异种移植肿瘤模型中评估。简言之，在第0天，雌性hcd16afoxn1小鼠(n＝7/组)被皮下植入(sc)以5百万colo205细胞，所述细胞悬浮在200μl的与matrigel以1:1混合的ham’sf12培养基中。用测径器每3-4天测量肿瘤。在研究第3天，基于肿瘤尺寸使小鼠随机化，并用指示剂量水平的测试制品或媒介物(无菌盐水，含有0.5％牛血清白蛋白)每周治疗小鼠两次(静脉内(iv)注射)。在研究过程中监测肿瘤体积，并以组平均值±sem绘图于图21。发现四价dr5结合分子在研究过程中明显抑制肿瘤生长，并且发现肿瘤在0.5和0.05mg/kg治疗组中退化。q.组蛋白脱乙酰酶抑制剂与四价dr5结合分子协同作用组蛋白脱乙酰酶(hdac)抑制剂诸如伏立诺他已经被报道使肿瘤细胞对经dr5诱导的凋亡敏感。利用非放射性细胞增殖分析研究了dr5mab1、dr5mab2和若干四价dr5结合分子组合hdac抑制剂伏立诺他的细胞毒性活性。在这些研究中，检验dr5mab1、dr5mab2、两个示例性双特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab2fc双抗体和dr5mab2xdr5mab1fc双抗体)和两个示例性单特异性四价含e-螺旋/k-螺旋-fc区的双抗体(dr5mab1xdr5mab1fc双抗体和dr5mab2xdr5mab2fc双抗体)的活性。his-标记的trail(r&d系统)被用作阳性对照。对于第一研究，colo205细胞以～2×104细胞/孔(在96孔板中)被铺板，并在补充以10％fbs的f12/dmem培养基中孵育过夜。单独的孔(三个重复)用0或1μg/ml的dr5mab1或dr5mab2、10ng/ml四价dr5结合分子(比之前的细胞毒性研究中使用的少100倍)或his-标记的trail±0.1或1μm伏立诺他处理，并孵育一天。利用promegacelltiter-luminescent细胞生存力测定(cat#g5430)测定细胞生存力，基本上按照制造商的说明中描述的来测定存在的atp的量，所述atp是培养物中存活细胞数目的度量。简言之，将celltiter-试剂添加至孔中，并混合两分钟以引起分解，并且在perkinelmerenvision多标签板读取仪中读取发光。将用测试制品处理的细胞的细胞生存力归一化至相应的阴性对照(培养基±伏立诺他)，其被设置成100％并在表12中作为针对各测试试剂单独的对照的％或作为针对各测试试剂与伏立诺他组合的％对照被报告。对照的％值小于100％表示生存力降低，并反映测试制品单独的或与伏立诺他组合的细胞毒性。％培养基对照(10％fbs)§％培养基对照(1/10μm伏立诺他)净增(平均％生长抑制)＝％培养基对照(10％fbs)-％培养基对照(1/10μm伏立诺他)，并表示测试制品与伏立诺他组合比单独用伏立诺他处理的细胞提高的细胞毒性。第一研究的净增提供于表13中。结果表明hdac抑制剂伏立诺他与低剂量四价dr5结合分子协同作用，以增强其在对四价dr5结合分子敏感的细胞中的细胞毒性。然而，伏立诺他并不与非交联抗体dr5mab1和dr5mab2协同作用。对于第二研究，对一些细胞系，包括之前显示对多价dr5结合分子不敏感的若干细胞系，测试与伏立诺他组合的dr5mab1、dr5mab2和若干四价dr5结合分子。测定基本上按照上述进行，除了细胞用0或1μg/ml的dr5mab1或dr5mab2或四价dr5结合分子或his-标记的trail±1或10μm伏立诺他处理。对于该研究，生长抑制中的净增(如上述计算)报道于表14(与10μm伏立诺他组合的治疗)和表15(与1μm伏立诺他组合的治疗)中。结果表明hdac抑制剂伏立诺他与四价dr5结合分子协同作用，以增强其对细胞的细胞毒性活性，所述细胞包括对单独的四价dr5结合分子不敏感的细胞。尤其地，发现九个细胞系(mda-mb-175vii、skbr3、nci-n87、aspc1、hs700t、786o、calu3、skov3和pc3)对四价dr5结合分子与只1μm伏立诺他的组合有响应。发现另外三个细胞系(bt474、mda-mb-361、hs746t、hpafii、a549、es2和lncap)对四价dr5结合分子与10μm伏立诺他的组合有响应。本说明书提到的所有出版物和专利通过参考并入本文，如同好像具体和单独指出每个单个出版物或专利申请通过参考以其整体并入的程度。尽管已经结合其具体实施方式描述了本发明，但是应当理解，其能够被进一步更改并且本申请旨在覆盖大体上根据本发明原理的本发明的任何变型、用途或改变，并且包括与本公开的偏离，只要在本发明所属领域的已知或习惯实践内并且如可应用至本文之前所阐释的本质特征。序列表<110>宏观基因有限公司p•a•摩尔l•s•约翰逊李志恒k•沙哈<120>包含dr5-结合结构域的多价分子<130>1301.0118pct<150>62/149,139<151>2015-04-17<150>62/107,871<151>2015-01-26<160>168<170>patentin3.5版本<210>1<211>217<212>prt<213>智人<220><221>misc_feature<222>(1)..(218)<223>人野生型iggch2-ch3结构域<400>1alaprogluleuleuglyglyproservalpheleupheproprolys151015prolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysval202530valvalaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrptyr354045valaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglu505560glntyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhis65707580glnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlys859095alaleuproalaproileglulysthrileserlysalalysglygln100105110proarggluproglnvaltyrthrleuproproserarggluglumet115120125thrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrpro130135140seraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasn145150155160tyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleu165170175tyrserlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasnval180185190phesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrgln195200205lysserleuserleuserproglylys210215<210>2<211>440<212>prt<213>小家鼠<220><221>misc_feature<222>(1)..(440)<223>人死亡受体5前体蛋白<220><221>成熟肽<222>(1)..(440)<220><221>信号<222>(1)..(55)<400>2metgluglnargglyglnasnalaproalaalaserglyalaarglys151015arghisglyproglyproargglualaargglyalaargproglyleu202530argvalprolysthrleuvalleuvalvalalaalavalleuleuleu354045valseralagluseralaleuilethrglnglnaspleualaprogln505560glnargvalalaproglnglnlysargserserprosergluglyleu65707580cysproproglyhishisilesergluaspglyargaspcysileser859095cyslystyrglyglnasptyrserthrhistrpasnaspleuleuphe100105110cysleuargcysthrargcysaspserglygluvalgluleuserpro115120125cysthrthrthrargasnthrvalcysglncysglugluglythrphe130135140argglugluaspserproglumetcysarglyscysargthrglycys145150155160proargglymetvallysvalglyaspcysthrprotrpseraspile165170175glucysvalhislysgluserglythrlyshisserglyglualapro180185190alavalglugluthrvalthrserserproglythrproalaserpro195200205cysserleuserglyileileileglyvalthrvalalaalavalval210215220leuilevalalavalphevalcyslysserleuleutrplyslysval225230235240leuprotyrleulysglyilecysserglyglyglyglyaspproglu245250255argvalaspargserserglnargproglyalagluaspasnvalleu260265270asngluilevalserileleuglnprothrglnvalprogluglnglu275280285metgluvalglngluproalagluprothrglyvalasnmetleuser290295300proglyglusergluhisleuleugluproalaglualagluargser305310315320glnargargargleuleuvalproalaasngluglyaspprothrglu325330335thrleuargglncyspheaspaspphealaaspleuvalpropheasp340345350sertrpgluproleumetarglysleuglyleumetaspasngluile355360365lysvalalalysalaglualaalaglyhisargaspthrleutyrthr370375380metleuilelystrpvalasnlysthrglyargaspalaservalhis385390395400thrleuleuaspalaleugluthrleuglygluargleualalysgln405410415lysilegluasphisleuleuserserglylysphemettyrleuglu420425430glyasnalaaspseralametser435440<210>3<211>111<212>prt<213>小家鼠<220><221>misc_feature<222>(1)..(111)<223>抗-dr5抗体mab1轻链可变区<400>3aspilevalleuthrglnserproalaserleualavalserleugly151015glnargalathrilesercysargalaserlysservalserserser202530glytyrsertyrmethistrptyrglnglnlysproglyglnpropro354045lysvalleuilepheleuserserasnleuaspserglyvalproala505560argpheserglyserglyserglythraspphethrleuasnilehis65707580provalgluaspglyaspalaalathrtyrtyrcysglnhisserarg859095aspleuproprothrpheglyglyglythrlysleugluilelys100105110<210>4<211>15<212>prt<213>小家鼠<220><221>misc_feature<222>(1)..(15)<223>抗-dr5抗体mab1轻链可变区cdrl1<400>4argalaserlysservalserserserglytyrsertyrmethis151015<210>5<211>7<212>prt<213>小家鼠<220><221>misc_feature<222>(1)..(7)<223>抗-dr5抗体mab1轻链可变区cdrl2<400>5leuserserasnleuaspser15<210>6<211>9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<220><223>示例性hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体的第一多肽链<400>140aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcyslysalaserglnaspvalasnthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtrpalaserthrarghisthrglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspvalalathrtyrtyrcysglnglnhistyrilethrprotrp859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelysglyglyglysergly100105110glyglyglyglnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslys115120125proglyalaservallysvalsercyslysalaserglytyrthrphe130135140thrglutyrileleuhistrpvalargglnalaproglyglnglyleu145150155160glutrpmetglytrpphetyrproglyasnasnasnilelystyrasn165170175glulysphelysaspargvalthrilethralaasplysserthrser180185190thrvaltyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralaval195200205tyrtyrcysalaarghisgluglnglyproglytyrpheasptyrtrp210215220glyglnglythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglyglu225230235240valalaalacysglulysgluvalalaalaleuglulysgluvalala245250255alaleuglulysgluvalalaalaleuglulysleugluprolysser260265270serasplysthrhisthrcysproprocysproalaprogluleuleu275280285glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu290295300metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser305310315320hisgluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalglu325330335valhisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthr340345350tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn355360365glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalapro370375380ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln385390395400valtyrthrleuproproserarggluglumetthrlysasnglnval405410415serleuthrcysleuvallysglyphetyrproseraspilealaval420425430glutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrpro435440445provalleuaspseraspglyserphepheleutyrserlysleuthr450455460valasplysserargtrpglnglnglyasnvalphesercysserval465470475480methisglualaleuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleu485490495serprogly<210>141<211>1497<212>dna<213>人工序列<220><223>编码示例性hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体的第一多肽链的多核苷酸<400>141gatattcagatgacccagagtccctcatttctgtccgcctccgtcggtgaccgcgtgact60attacttgtaaagcttctcaggatgtcaacaccgccgtggcttggtaccagcagaagccc120ggtaaagcacctaagctgctgatctattgggccagcactcggcacaccggagtcccatct180aggttctctggcagtggatcagggacagactttaccctgacaattagctccctgcagccc240gaggatgtggctacttactattgtcagcagcactacatcactccttggaccttcggcggg300ggcacaaaactggaaatcaaaggaggcggatccggcggcggaggccaggtccagctggtg360cagagtggggcagaggtgaaaaagccaggggcatcagtgaaagtgtcttgtaaagcatca420ggttatacatttactgagtacatcctgcactgggtgcgacaggcaccaggacagggactg480gaatggatggggtggttctaccctggcaacaacaacattaagtacaacgagaagtttaaa540gaccgggtgaccatcacagcggataagtctaccagtacagtctatatggagctgagctcc600ctgagaagcgaagacaccgccgtctactattgcgctcgccacgaacagggtccaggttac660tttgattattgggggcagggaactctggtcacagtcagctccgcctccaccaagggcgaa720gtggccgcatgtgagaaagaggttgctgctttggagaaggaggtcgctgcacttgaaaag780gaggtcgcagccctggagaaactggagcccaaatcttctgacaaaactcacacatgccca840ccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaaccc900aaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagc960cacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgcc1020aagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcacc1080gtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagcc1140ctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacag1200gtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgc1260ctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccg1320gagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctac1380agcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtg1440atgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt1497<210>142<211>267<212>prt<213>人工序列<220><223>示例性hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体的第二多肽链<400>142aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcyslysalaserglnaspvalasnthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtrpalaserthrarghisthrglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspvalalathrtyrtyrcysglnglnhistyrilethrprotrp859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelysglyglyglysergly100105110glyglyglyglnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslys115120125proglyalaservallysvalsercyslysalaserglytyrthrphe130135140thrglutyrileleuhistrpvalargglnalaproglyglnglyleu145150155160glutrpmetglytrpphetyrproglyasnasnasnilelystyrasn165170175glulysphelysaspargvalthrilethralaasplysserthrser180185190thrvaltyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralaval195200205tyrtyrcysalaarghisgluglnglyproglytyrpheasptyrtrp210215220glyglnglythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglylys225230235240valalaalacyslysglulysvalalaalaleulysglulysvalala245250255alaleulysglulysvalalaalaleulysglu260265<210>143<211>800<212>dna<213>人工序列<220><223>编码示例性hdr5mab2.2xhdr5mab2.2fc双抗体的第二多肽链的多核苷酸<400>143gatattcagatgacccagagtccctcatttctgtccgcctccgtcggtgaccgcgtgact60attacttgtaaagcttctcaggatgtcaacaccgccgtggcttggtaccagcagaagccc120ggtaaagcacctaagctgctgatctattgggccagcactcggcacaccggagtcccatct180aggttctctggcagtggatcagggacagactttaccctgacaattagctccctgcagccc240gaggatgtggctacttactattgtcagcagcactacatcactccttggaccttcggcggg300ggcacaaaactggaaatcaaaggaggcggatccggcggcggaggccaggtccagctggtg360c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ab2.4fc双抗体的第一多肽链的多核苷酸<400>153cttggtaccagcagaagcccggtaaagcacctaagctgctgatctattgggccagcactc60ggcacaccggagtcccatctaggttctctggcagtggatcagggacagactttaccctga120caattagctccctgcagccagaggatatcgctacatactattgtcagcagcactacatca180ctccttggaccttcggcgggggcacaaaactggaaatcaaaggaggcggatccggcggcg240gaggccaggtccagctggtgcagagtggggcagaggtgaaaaagccaggggcatcagtga300aagtgtcttgtaaagcatcaggttatacatttactgagtacatcctgcactgggtgcgac360aggcaccaggacagggactggaatggatggggtggttctaccctggcaacaacaacatta420agtacaacgagaagtttaaagaccgggtgaccatcacagcggataagtctaccagtacag480tctatatggagctgagctccctgagaagcgaagacaccgccgtctactattgcgctcgcc540acgaacagggtccaggttactttgattattgggggcagggaactctggtcacagtcagct600ccgcctccaccaagggcgaagtggccgcatgtgagaaagaggttgctgctttggagaagg660aggtcgctgcacttgaaaaggaggtcgcagccctggagaaactggagcccaaatcttctg720acaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtct780tcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacat840gcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacg900gcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtacc960gtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagt1020gcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaag1080ggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaaga1140accaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagt1200gggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccg1260acggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcagggga1320acgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcc1380tctccctgtctccgggt1397<210>154<211>267<212>prt<213>人工序列<220><223>示例性hdr5mab2.4xhdr5mab2.4fc双抗体的第二多肽链<400>154aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspvalasnthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtrpalaserthrarghisthrglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspilealathrtyrtyrcysglnglnhistyrilethrprotrp859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelysglyglyglysergly100105110glyglyglyglnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslys115120125proglyalaservallysvalsercyslysalaserglytyrthrphe130135140thrglutyrileleuhistrpvalargglnalaproglyglnglyleu145150155160glutrpmetglytrpphetyrproglyasnasnasnilelystyrasn165170175glulysphelysaspargvalthrilethralaasplysserthrser180185190thrvaltyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralaval195200205tyrtyrcysalaarghisgluglnglyproglytyrpheasptyrtrp210215220glyglnglythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglylys225230235240valalaalacyslysglulysvalalaalaleulysglulysvalala245250255alaleulysglulysvalalaalaleulysglu260265<210>155<211>801<212>dna<213>人工序列<220><223>编码示例性hdr5mab2.4xhdr5mab2.4fc双抗体的第二多肽链的多核苷酸<400>155gatattcagatgacccagagtccctcatttctgtccgcctccgtcggtgaccgcgtgact60attacttgtcgggcttctcaggatgtcaacaccgccgtggcttggtaccagcagaagccc120ggtaaagcacctaagctgctgatctattgggccagcactcggcacaccggagtcccatct180aggttctctggcagtggatcagggacagactttaccctgacaattagctccctgcagcca240gaggatatcgctacatactattgtcagcagcactacatcactccttggaccttcggcggg300ggcacaaaactggaaatcaaaggaggcggatccggcggcggaggccaggtccagctggtg360cagagtggggcagaggtgaaaaagccaggggcatcagtgaaagtgtcttgtaaagcatca420ggttatacatttactgagtacatcctgcactgggtgcgacaggcaccaggacagggactg480gaatggatggggtggttctaccctggcaacaacaacattaagtacaacgagaagtttaaa540gaccgggtgaccatcacagcggataagtctaccagtacagtctatatggagctgagctcc600ctgagaagcgaagacaccgccgtctactattgcgctcgccacgaacagggtccaggttac660tttgattattgggggcagggaactctggtcacagtcagctccgcctccaccaagggcaaa720gtggccgcatgtaaggagaaagttgctgctttgaaagagaaggtcgccgcacttaaggaa780aaggtcgcagccctgaaagag801<210>156<211>499<212>prt<213>人工序列<220><223>示例性hdr5mab2.4xhdr5mab2.4fc双抗体l234a/l235a的第一多肽链<400>156aspileglnmetthrglnserproserpheleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspvalasnthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtrpalaserthrarghisthrglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspilealathrtyrtyrcysglnglnhistyrilethrprotrp859095thrpheglyglyglythrlysleugluilelysglyglyglysergly100105110glyglyglyglnvalglnleuvalglnserglyalagluvallyslys115120125proglyalaservallysvalsercyslysalaserglytyrthrphe130135140thrglutyrileleuhistrpvalargglnalaproglyglnglyleu145150155160glutrpmetglytrpphetyrproglyasnasnasnilelystyrasn165170175glulysphelysaspargvalthrilethralaasplysserthrser180185190thrvaltyrmetgluleuserserleuargsergluaspthralaval195200205tyrtyrcysalaarghisgluglnglyproglytyrpheasptyrtrp210215220glyglnglythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglyglu225230235240valalaalacysglulysgluvalalaalaleuglulysgluvalala245250255alaleuglulysgluvalalaalaleuglulysleugluprolysser260265270serasplysthrhisthrcysproprocysproalaproglualaala275280285glyglyproservalpheleupheproprolysprolysaspthrleu290295300metileserargthrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalser305310315320hisgluaspprogluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalglu325330335valhisasnalalysthrlysproargglugluglntyrasnserthr340345350tyrargvalvalservalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasn355360365glylysglutyrlyscyslysvalserasnlysalaleuproalapro370375380ileglulysthrileserlysalalysglyglnproarggluprogln385390395400valtyrthrleupro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