一种抑癌142aa多肽及其载体和应用的制造方法与工艺

本发明涉及生物工程技术领域，具体是一种抑癌142aa多肽及其载体和应用。

背景技术：
据统计，全球每年约有1百万的肝癌病例被报道，并有约74.5万的肝癌患者死亡。我国是肝癌的高发地区，全球55％的肝癌发生在我国，其死亡率在肿瘤性疾病中居第三位已成为危害人类健康的主要疾病，肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是肝癌的主要类型，约占肝癌病例的90％。因此，加强治疗肝癌的研究，探索新的治疗途径具有十分重要的意义。在肝癌的进展过程中，某些基因的表达发生变化，是癌症发生发展的关键基因，成为癌症治疗的潜在靶点。多肽药物是目前生物医药领域最具成长性的崭新领域，以其高效、安全、特异性强等特点逐渐用于癌症，传染病等预防和治疗。基因的功能最终要通过其表达产物——蛋白质来实现，生物体的一切活动或功能都离不开蛋白质的物质基础。发现和鉴定具有重要功能的蛋白质，可为新药的开发带来决定性的影响。并且多肽类药物具有分子量小，在人体内不结存，无副作用，免疫原性小，活性好等优点成为一个研究的热点。

技术实现要素：
发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种多肽，具有抑癌效应，满足生物医药使用需求。本发明的另一目的是提供一种表达上述多肽的载体。本发明还有一目的是提供上述多肽的用途。技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种抑癌142aa多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。所述的抑癌142aa多肽的编码基因，其DNA序列如SEQIDNO.2所示。含有所述的抑癌142aa多肽的编码基因的载体。所述的抑癌142aa多肽在制备抗癌药物中的应用。在本发明人的前期研究发现，肝癌组织中的表达蛋白缺少某段多肽序列后减缓了肿瘤生长的速度，故推测此多肽具有抑癌效应。所以，在本发明中利用基因重组技术，将142个氨基酸(aminoacid)多肽对应的DNA序列重组到pcDNA3.1真核表达载体。经酶切和序列分析证明重组成功后，将此真核表达重组多肽转染到肿瘤细胞，免疫印迹证明多肽的蛋白表达，实现了多肽的重组。将表达多肽序列的重组真核载体转染到肿瘤细胞中，证明其独特的抑制肿瘤生长和减缓肿瘤发生的抗肿瘤效应。发明为肿瘤治疗开发新的靶点提供实验依据，对于应用于肿瘤的临床治疗具有十分重要的开发应用前景。有益效果：与现有技术相比，本发明基于肿瘤发生特点和治疗难点，通过抗肿瘤基因治疗途径发明一段含有142个氨基酸的多肽，将多肽编码序列克隆到pcDNA3.1真核表达载体，经酶切和序列分析证明重组成功后，将此真核表达重组多肽转染到肿瘤细胞，免疫印迹证明多肽的蛋白表达，对多肽的抗肿瘤功能进行研究，细胞学和小鼠体内实验表明此多肽具有抑制肿瘤细胞活性和抑制小鼠成瘤模型的发生与生长的重要抗癌功能，具有很好的药物用途。附图说明图1是免疫印迹检测结果图；图2是免疫沉淀实验结果图；图3是重组多肽对p27表达影响结果图；图4是CCK-8实验结果图；图5是克隆形成实验结果图；图6是细胞周期流式分析结果图；图7是裸鼠成瘤结果图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。实施例1重组肽的克隆载体构建提取人肝癌细胞HepG2的Prdx1的mRNA，体外逆转录成cDNA(环状DNA)，以此为模板，分别连接上下游引物5’-GGATCCAGATGGTAGGCTCCCCTGGTCCTCTA-3’,5’-CTCGAGTCACTGGGGCAGAGGGGG-3’。通过PCR扩增得到142aa的目的片段，并与pGEMT-easy载体(市售)连接...