本申请涉及针对靶标C4.4a的N，N-二烷基耳他汀(auristatin)的新的结合剂-药物缀合物(ADC)，涉及这些ADC的活性代谢物，涉及用于制备这些ADC的方法，涉及这些ADC用于治疗和/或预防疾病的用途，以及涉及这些ADC用于生产药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防疾病，更具体地是过度增生性疾病和/或血管生成性疾病，例如，癌性疾病。此类治疗可以作为单一疗法或者与其它药物或进一步治疗性措施联用来实施。
癌性疾病是很多种组织中不受控制的细胞生长的结果。在很多情况下，新细胞穿透现有组织(侵袭性生长)，或者它们转移至远端器官。癌性疾病发生在很多种器官中，并且该疾病通常以组织特异性方式发展。因此，作为通用术语的名称“癌性疾病”描述一大群不同器官、组织和细胞类型的定义的疾病。
早期肿瘤可能能够通过手术和放疗措施除去。转移的肿瘤通常仅可通过化疗剂施用姑息性治疗。在该情况下目标是实现改善生命质量和延长剩余寿命的最佳组合。
例如，目前胃肠外给药的大部分化疗剂通常不是针对肿瘤组织或肿瘤细胞目标导向的，由于其全身性给药，而是在体内非特定分布，因此包括在不希望接触该药物的位置，例如健康细胞、组织和器官。这可能导致不希望的副作用，以及甚至导致一般毒性的严重影响，然后该毒性通常极大限制了药物治疗有用的剂量的范围，或必须完全停止用药。
因此，一方面，这些化疗剂在肿瘤细胞或立即包围组织中的改进的且选择性的可用性和相关的效果提高，以及另一方面，毒性副作用的最小化，已成为多年来新化疗剂的发展中的焦点。至今人们已作出很多尝试以发展将药物引入靶细胞的有效方法。但是，例如优化药物和细胞内目标的关联以及使相邻细胞的药物细胞间分布最小化仍然构成棘手的问题。
例如，单克隆抗体适用于肿瘤组织和肿瘤细胞的靶向定位。近年来，已看到此类用于临床治疗癌性疾病的抗体的重要性显著普遍提高，这是基于此类的试剂的活性，所述试剂例如曲妥珠单抗(赫赛汀)、利妥昔单抗(Rituxan)、西妥昔单抗(爱必妥)和贝伐单抗(阿伐他汀)，该试剂后来已被批准用于治疗单独的具体肿瘤疾病[参见例如G.P.Adams和L.M.Weiner，Nat.Biotechnol.23，1147-1157(2005)]。因此，对所谓的免疫缀合物(例如，前述ADC)的兴趣也已显著增加，其中针对肿瘤相关抗原的内化抗体通过连接单元(“接头”)与细胞毒性剂共价结合。在将ADC引入至肿瘤细胞中并随后切割缀合物之后，细胞毒性剂本身或另一种由细胞毒性剂形成的具有细胞毒性活性的代谢物在肿瘤细胞内释放，在肿瘤细胞中能够直接地且选择性地发挥其作用。与癌性疾病的常规化疗相比，以该方式可以将对正常组织的破坏保持在极大接近极限内[参见例如J.M.Lambert，Curr.Opin.Pharmacol.5，543-549(2005)；A.M.Wu and P.D.Senter，Nat.Biotechnol.23，1137-1146(2005)；P.D.Senter，Curr.Opin.Chem.Biol.13，235-244(2009)；L.Ducry and B.Stump，Bioconjugate Chem.21，5-13(2010)]。
除了抗体，例如小分子药物领域的结合剂也可以用作选择性地与具体目标位置(“靶标”)(例如受体)结合的结合剂[参见例如E.Ruoslahti等人，Science 279，377-380(1998)；D.Karkan等人，PLoS ONE 3(6)，e2469(2008年6月25日)]。还已知细胞毒性药物和定位配体(addressing ligand)的缀合物在配体和药物之间存在确定的切割点用于药物的释放。例如，在肽链中可能存在这种类型的“预定的断裂点”，该肽链可在特定位点通过位于作用位置的特异性酶而选择性地被切割[参见例如R.A.Firestone和L.A.Telan，美国专利申请US 2002/0147138]。
肿瘤组织和肿瘤细胞的特别合适的靶向定位是针对抗原C4.4a的单克隆抗体。C4.4a(基因：LYPD3)最早被描述为大鼠胰腺肿瘤细胞中的转移相关的细胞表面蛋白(M.等人，Oncogene 1998，17(15)：1989-2002)。人C4.4a分离自它的胎盘cDNA文库(Würfel，J.等人.Gene 2001，262：35-41)。C4.4a表现出与uPA受体的结构同源性，且含有2个LY6结构域，所述LY6结构域表现出典型的三指折叠模式，且经由9个二硫桥连接(Jacobsen B.和Ploug M.，Current Medicinal Chemistry 2008，15：2559-2573)。C4.4a经由糖磷脂酰肌醇(GPI)锚定在细胞中。所述蛋白被高度糖基化，且含有众多N-和O-糖基化位点。C4.4a在肺癌、大肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、头和颈肿瘤和黑素瘤的肿瘤细胞中表现出强表达。RNA分析已经证实了C4.4a在约50％的原发性肺肿瘤中和在约75％的肺癌转移灶中的表达，尽管没有检测到在健康肺组织中的表达(Würfel J.等人，Gene 2001，262：35-41)。C4.4a可以用作非小细胞肺癌的预后标志物：高C4.4a表达水平与预后不良相关(Hansen L.等人，Lung Cancer 2007，58：260-266)。对于大肠癌而言也是如此。C4.4a被从肿瘤细胞表面清除，且可以用作预后血清标志物(K.Konishi等人，Cancer Science 2010)。黑素瘤的详细表达分析已经证实，C4.4a在约60％的原发性恶性黑素瘤中表达，并在100％的淋巴结和皮肤转移灶中表达(Seiter S.等人，J Invest Dermatol.2001，116(2)：344-347)。与邻近的正常组织相比，在乳腺癌组织中观察到C4.4a基因表达的增量调节(Fletcher G.C.，Br.J.Cancer 2003，88(4)：579-585)。C4.4a是肿瘤治疗的一种理想靶蛋白，因为健康组织中的C4.4a表达被限制在皮肤角质形成细胞和食道内皮细胞以及胎盘细胞(Würfel J.等人，Gene 2001，262：35-41)。WO01/23553描述了C4.4a抑制剂(例如抗-C4.4a抗体)的用途，这是一种能够抑制C4.4a表达或活性的癌症治疗。
C4.4a的精确功能是未知的。在伤口愈合的过程中，它在迁移性角质形成细胞中被增量调节(Hansen L.等人，Biochem J.2004，380：845-857)。有人认为，C4.4a在肿瘤细胞侵袭中起作用，据推测是通过与细胞外基质的相互作用(M.等人，Oncogene 1998，17(15)：1989-2002；Paret C.等人，British Journal of Cancer 2007，97：1146-1156)。潜在的配体是层粘连蛋白1和5以及半乳糖凝集素3(Paret C.，Int.J.Cancer 2005，115：724-733)。
耳他汀E(AE)和单甲基耳他汀E(MMAE)是多拉司他汀的合成类似物，是线性假肽的特定集合，所述线性假肽最初从海洋源分离并且其在某些情况下对于肿瘤细胞具有极有效的细胞毒性活性[关于综述，参见例如G.R.Pettit，Prog.Chem.Org.Nat.Prod.70，1-79(1997)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design 10，529-544(1995)；G.R.Pettit等人，Anti-Cancer Drug Design 13，243-277(1998)]。
但是，MMAE具有较高全身毒性的缺点。为了提高肿瘤选择性，MMAE更具体地与可酶促切割的缬氨酸-瓜氨酸接头结合以ADC方式使用，用于更靶向的肿瘤治疗[WO 2005/081711-A2；S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。在蛋白水解性裂解以后，MMAE优选地从对应的ADC在细胞内释放。
但是，当以抗体-药物缀合物(ADC)的形式使用时，MMAE与抗体和药物之间的连接单元(接头)不相容，所述连接单元不具有可酶促切割的预定断裂点[S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。
单甲基耳他汀F(MMAF)是具有C-末端苯丙氨酸单元的耳他汀衍生物，与MMAE相比，其仅具有中等抗增殖活性。这极可能可归因于游离羧基，该羧基的极性和电荷对该化合物进入细胞的能力有不利的影响。在这种连接中，MMAF的甲基酯(MMAF-OMe)已被描述为具有细胞进入能力的中性电荷的前药衍生物，与MMAF相比，对于各种增加了多个数量级的癌细胞系MMAF-OMe具有体外细胞毒性[S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.17，114-124(2006)]。可假定该作用由MMAF本身产生，所述MMAF在摄取前药进入细胞后，通过细胞内的酯水解而快速释放。
但是，基于简单酯衍生物的药物化合物通常经受由于非特异性酯水解造成的化学不稳定性的风险，该非特异性酯水解不依赖于作用的目标位点，例如通过存在于血浆中的酯酶来进行水解；这种非特异性水解可大大限制了此类化合物在治疗中的可用性。
已经在WO 2005/081711-A2中公开了单甲基耳他汀F(MMAF)及其各种酯衍生物和酰胺衍生物。在WO 01/18032-A2中描述了其它具有C-末端酰胺取代的苯丙氨酸单元的其它耳他汀类似物。WO 02/088172-A2和WO 2007/008603-A1要求保护MMAF类似物，所述MMAF类似物涉及苯丙氨酸的侧链改性，而WO 2007/008848-A2要求保护其中苯丙氨酸的羧基已经被改性的MMAF类似物。最近，已经在WO 2009/117531-A1中描述了通过C-末端连接的耳他汀缀合物[也参见S.O.Doronina等人，Bioconjugate Chem.19，1960-1963(2008)]。
此外，耳他汀衍生物诸如MMAE和MMAF也是被许多肿瘤细胞表达的转运蛋白等蛋白的底物，并且这可能导致对这些药物的抗性的发展。
本发明解决的问题是这样的问题：提供新的结合剂-药物缀合物(ADC)，其通过新的N，N-二烷基耳他汀衍生物与创新的合适接头和结合剂的组合而表现出非常有吸引力的活性谱，例如，以它们的特异性肿瘤效应和/或在细胞内形成的代谢物作为转运蛋白等蛋白的底物的潜力减小的方式，并且它们因此适合用于治疗和/或预防例如过度增生性和/或血管生成性疾病，诸如癌性疾病。
本发明提供了通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
n是1-50的数字，
AK是结合剂，
基团§-G-L1-B-L2-§§是接头，
其中
§表示与基团AK的连接位点，且
§§表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的化合物是式(Ia)和(I)的化合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，符合以下所示式并且由式(Ia)和(I)所涵盖的化合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，以及下文作为工作实施例所确定的并且由式(Ia)和(I)所涵盖的化合物和它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，在一定程度上下文所示并且由式(Ia)和(I)所涵盖的化合物并非已经存在的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物。
根据它们的结构，本发明的化合物可以不同的立体异构体形式存在，即以构型异构体的形式或者在适当的情况下作为构象异构体(对映异构体和/或非对映异构体，包括阻转异构体的情况下的异构体)存在。因此，本发明包括对映异构体和非对映体及其各自的混合物。可以通过已知的方式从此类对映异构体和/或非对映体的混合物中分离立体异构体均一的组分；为此目的，优选使用色谱法，更优选HPLC色谱法在非手性相或手性相上分离。
当本发明的化合物可以互变异构体形式存在时，本发明包括所有的互变异构体形式。
本发明也包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。本发明的化合物的同位素变体在这里被理解为是指这样的化合物：其中在本发明的化合物内至少一个原子已经被替换为相同原子序数的另一原子，但是所述另一原子的原子质量不同于在自然界中通常存在或优势存在的原子质量。可以掺入本发明化合物中的同位素的例子是：氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，诸如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。本发明化合物的特定同位素变体(如特别是其中已经掺入一种或多种放射性同位素的那些)可能是有用的，例如，用于检查在体内的作用机理或药物在体内的分布；由于比较而言容易的可制备性和可检测性，用3H或14C同位素标记的化合物特别适用于这些目的。另外，由于化合物的更大代谢稳定性，同位素(例如氘)的掺入例如可以导致某些治疗益处，例如导致体内半衰期的延长或导致必需的活性剂量的降低；因此，本发明化合物的这种改性也可以任选构成本发明的优选实施方案。通过技术人员已知的方法，例如根据在下面描述的方法和在工作实施例中重写的操作，通过使用各自的反应试剂和/或起始化合物的相应的同位素改性，可以制备本发明化合物的同位素变体。
在本发明范围内，优选的盐是本发明化合物生理上可接受的盐。本发明还包括这样的盐：尽管该盐本身不适合于药物应用，但可将其用于例如分离或纯化本发明的化合物。
本发明化合物的生理上可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，其例子是以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸。
本发明化合物生理上可接受的盐还包括常规碱的盐，例如，(仅为示例性并优选)碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和衍生自氨或含有1-16个C原子的有机胺的铵盐，所述有机胺包括例如(仅为示例性并优选)乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙基胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄基胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸和1，2-乙二胺。
在本发明范围内，的溶剂合物是这些形式的本发明化合物，所述化合物通过与溶剂分子配位而形成的固态或液态形式的复合物。水合物是溶剂合物的一种具体形式，其中与水发生配位。在本发明范围内，的溶剂合物优选为水合物。
另外，本发明还包括本发明化合物的前药。本文中术语“前药”指这样的化合物：该化合物本身可为生物活性或无生物活性的，但其在体内停留过程中转化为本发明的化合物(例如通过代谢或水解)。
在本发明范围内，除非另有说明，取代基定义如下：
在本发明范围内，(C1-C4)-烷基是具有1-4个碳原子的直链或支链烷基残基。作为例子且优选地，可以提及下述的：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、1-甲基丙基和叔丁基。
在本发明范围内，烷二基是具有指定的特定碳原子数目的直链α，ω-二价烷基残基。作为例子且优选地，可以提及下述的：亚甲基、乙烷-1，2-二基(1，2-亚乙基)、丙烷-1，3-二基(1，3-亚丙基)、丁烷-1，4-二基(1，4-亚丁基)、戊烷-1，5-二基(1，5-亚戊基)、己烷-1，6-二基(1，6-亚己基)、庚烷-1，7-二基(1，7-亚己基)、辛烷-1，8-二基(1，8-亚辛基)、壬烷-1，9-二基(1，9-亚壬基)、癸烷-1，10-二基(1，10-亚癸基)。
在本发明范围内，(C3-C7)-环烷基和3-7元碳环分别是具有3-7个碳原子的单环饱和环烷基。作为例子且优选地，可以提及下述的：环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
在R19的定义中的α-氨基酸的侧基不仅包括天然存在的α-氨基酸的侧基，而且包括这些α-氨基酸的同系物和异构体的侧基。所述α-氨基酸在这里可以是L或D构型，或者可以呈现为L和D形式的混合物。可以给出的侧基的例子如下：甲基(丙氨酸)、丙烷-2-基(缬氨酸)、丙烷-1-基(正缬氨酸)、2-甲基丙烷-1-基(亮氨酸)、1-甲基丙烷-1-基(异亮氨酸)、丁-1-基(正亮氨酸)、叔丁基(2-叔丁基甘氨酸)、苯基(2-苯基甘氨酸)、苄基(苯丙氨酸)、对羟基苄基(酪氨酸)、吲哚-3-基甲基(色氨酸)、咪唑-4-基甲基(组氨酸)、羟基甲基(丝氨酸)、2-羟基乙基(高丝氨酸)、1-羟基乙基(苏氨酸)、巯基甲基(半胱氨酸)、甲硫基甲基(S-美司坦)、2-巯基乙基(高半胱氨酸)、2-甲硫基乙基(蛋氨酸)、氨甲酰基甲基(天冬酰胺)、2-氨甲酰基乙基(谷氨酰胺)、羧甲基(天冬氨酸)、2-羧基乙基(谷氨酸)、4-氨基丁-1-基(赖氨酸)、4-氨基-3-羟基丁-1-基(羟基赖氨酸)、3-氨基丙烷-1-基(鸟氨酸)、2-氨基乙基(2、4-二氨基丁酸)、氨基甲基(2、3-二氨基丙酸)、3-胍基丙烷-1-基(精氨酸)、3-脲基丙烷-1-基(瓜氨酸)。在R19的定义中优选的α-氨基酸侧基是甲基(丙氨酸)、丙烷-2-基(缬氨酸)、2-甲基丙烷-1-基(亮氨酸)、苄基(苯丙氨酸)、咪唑-4-基甲基(组氨酸)、羟基甲基(丝氨酸)、1-羟基乙基(苏氨酸)、4-氨基丁-1-基(赖氨酸)、3-氨基丙烷-1-基(鸟氨酸)、2-氨基乙基(2、4-二氨基丁酸)、氨基甲基(2、3-二氨基丙酸)、3-胍基丙烷-1-基(精氨酸)。L构型在每种情况下是优选的。
在本发明范围内，4-7元杂环是具有共计4-7个环原子的单环饱和杂环，其含有一个或两个选自系列N、O、S、SO和/或SO2的环杂原子，且经由环碳原子或任选的环氮原子连接。优选的是，具有一个或两个选自系列N、O和/或S的环杂原子的5-7元杂环，更优选的是具有一个或两个选自系列N和/或O的环杂原子的5或6元杂环。作为例子，可以提及下述的：氮杂环丁基、氧杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、硫杂环戊烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、硫代吗啉基、六氢氮杂环庚三烯基和六氢-1，4-二氮杂环庚三烯基。优选的是，吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基和吗啉基。
在分别可以由A、B、D、G、L1、L2、L4、R1、R2、R3、R4和R5代表的基团的式中，符号#6、＊、＊＊、#3、#1、#2、##1、##2、##3、##4、＊＊＊、＊＊＊＊、#4、#5、#6、#7、#8或#9所在的线的端点不是碳原子或CH2基团，而是与在每种情况下指定的、A、B、D、G、L1、L2、L4、R1、R2、R3、R4或R5所键合的原子形成的键的一部分。
在本发明范围内，所有多次出现的基团具有其彼此独立的定义。如果本发明化合物中的基团是经取代的，除非另有说明，所述基团可一次或多次被取代。优选用一种取代基或两种相同的或不同的取代基进行取代。特别优选用一种取代基进行取代。
在本发明范围内，除非另外指出，使用的术语具有下述定义：
术语“接头”在最宽的含义上被理解为这样的化学单元：其包含使结合剂与药物共价连接的共价键或一系列原子。术语“接头”优选地被理解为，在本发明意义上使结合剂与药物共价连接的一系列原子。此外，可以由例如二价化学单元(诸如烷基二基、芳基二基、杂芳基二基、杂环基二基、二羰基酸酯、二羰基酸酰胺)来代表接头。
术语“结合剂”在最宽的含义上被理解为结合靶分子的分子，所述靶分子存在于要用结合剂-药物缀合物定位的特定靶细胞群体上。术语“结合剂”应当以它的最宽解释进行理解，且包括，例如，凝集素、能够结合特定糖链的蛋白或磷脂结合蛋白。这样的结合剂包括，例如，高分子量蛋白(结合蛋白)、多肽或肽(结合肽)、非肽(例如适体(US5,270,163)(综述文章参见Keefe AD.，等人，Nat.Rev.Drug Discov.2010；9：537-550)或维生素)和所有其它的结合细胞的分子或物质。结合蛋白是，例如，抗体和抗体片段或抗体模拟物例如，亲和体(affibodies)、adnectins、anticalins、DARPins、亲和体(avimers)、纳米抗体(nanobodies)(综述文章参见Gebauer M.等人，Curr.Opinion in Chem.Biol.2009；13：245-255；Nuttall S.D.等人，Curr.Opinion in Pharmacology 2008；8：608-617)。结合肽是，例如，配体-受体对的配体，诸如配体-受体对VEGF/KDR中的VEGF，诸如配体-受体对转铁蛋白/转铁蛋白受体中的转铁蛋白，或细胞因子/细胞因子受体，诸如配体受体对TNFα/TNFα受体中的TNFα。
根据本发明的优选结合剂是(更具体地是人单克隆的)抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a。在抗-C4.4a抗体的情况下，n(即每个抗体分子的毒性基团(toxophor)分子的数目)优选地是在1-10的范围内，更优选2-8。
“靶分子”在最宽的含义上被理解为这样的分子：其存在于靶细胞群体中，且可以是蛋白(例如生长因子的受体)或非肽分子(例如糖或磷脂)。优选地，它是受体或抗原。
术语“细胞外的”靶分子描述了附着于细胞且位于细胞外侧上的靶分子，或者位于细胞外侧上的靶分子的一部分，即结合剂可以结合完整细胞的细胞外靶分子。细胞外靶分子可以锚定在细胞膜中，或者可以是细胞膜的一部分。技术人员已知鉴别细胞外靶分子的方法。对于蛋白而言，这可以通过跨膜结构域的确定和蛋白在膜中的取向来实现。在蛋白数据库(例如SwissProt)中一般地记录了该数据。
术语“癌症靶分子”描述了这样的靶分子：与相同组织类型的非癌细胞相比，其在一种或多种癌细胞类型上的存在倍增。与相同组织类型的非癌细胞相比，癌症靶分子优选地选择性地存在于一种或多种癌细胞类型上，其中“选择性地”描述了与相同组织类型的非癌细胞相比，在癌细胞上的至少2倍积累(“选择性的癌症靶分子”)。癌症靶分子的应用允许用本发明的缀合物对癌细胞进行选择性治疗。
结合剂可以经由键连接至接头。从文献中已知将有机分子与抗体共价联接(缀合)的多种可能性。结合剂的连接可以借助于结合剂的杂原子而发生。本发明的可以用于连接的结合剂杂原子是硫(在一个实施方案中，经由结合剂的巯基)、氧(根据本发明，借助于结合剂的羧基或羟基)和氮(在一个实施方案中，经由结合剂的伯胺或仲胺基团或酰胺基)。根据本发明优选的是，经由抗体的半胱氨酸残基的一个或多个硫原子，和/或经由抗体的赖氨酸残基的一个或多个NH基团，将毒性基团缀合至抗体。这些杂原子可以存在于天然的结合剂中，或者可以借助于化学或分子生物学方法引入。根据本发明，结合剂与毒性基团的连接对结合剂与靶分子的结合活性几乎没有影响。在一个优选实施方案中，所述连接对结合剂与靶分子的结合活性没有影响。
术语“抗体”根据本发明在它的最宽的含义上进行理解，且包括免疫球蛋白分子，例子是完整的或改性的单克隆抗体、多克隆抗体或多特异性抗体(例如双特异性抗体)。免疫球蛋白分子优选地包括具有4条通常通过二硫桥连接的多肽链的分子，所述4条多肽链为2个重链(H链)和2个轻链(L链)。每个重链包含重链的可变结构域(缩写为VH)和重链的恒定结构域。重链的恒定结构域可以包括，例如，3个结构域CH1、CH2和CH3。每个轻链包含可变结构域(缩写为VL)和恒定结构域。轻链的恒定结构域包含一个结构域(缩写为CL)。所述VH和VL结构域可以进一步细分成具有高变异性的区域(也称为互补性决定区，缩写为CDR)，和具有低序列变异性的区域(“框架区”，缩写为FR)。每个VH和VL区域通常由3个CDR和至多4个FR组成。例如，从氨基端至羧基端按照下述次序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗体可以得自适合于所述抗体的任意物种，例如，兔、美洲驼(llama)、骆驼、小鼠或大鼠。在一个实施方案中，所述抗体具有人或鼠起源。抗体可以是例如人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
术语“单克隆的”抗体是指，已经从基本上同质的抗体的群体得到的抗体，即除了可能以小量发生的天然存在的突变以外为相同的群体的单个抗体。单克隆抗体会高特异性地识别单个抗原结合位点。术语“单克隆抗体”不表示特定生产方法。
术语“完整的”抗体表示这样的抗体：其不仅包含抗原结合域，而且包含轻链和重链的恒定结构域。所述恒定结构域可以是天然存在的结构域或其变体，在所述变体中，一个或多个氨基酸位置已经改变。
术语“改性的完整的”抗体表示这样的完整抗体：其已经经由其氨基端或羧基端借助于共价键(例如肽键)与另一种非源自抗体的多肽或蛋白融合。此外，通过在确定的位置引入反应性的半胱氨酸，可以将抗体改性，从而促进与毒性基团的偶联(参见Junutula等人.Nat Biotechnol.2008Aug；26(8)：925-32)。
术语“人”抗体是指这样的抗体：其可以从人类得到，或者是合成的人抗体。“合成的”人抗体是这样的抗体：其部分地或者作为整体可从计算机合成序列(其基于人抗体序列的分析)得到。人抗体可以由例如核酸编码，所述核酸已经分离自具有人起源的抗体序列文库。这样的抗体的一个例子可以参见：等人，Nature Biotech.2000，18：853-856。
术语“人源化的”或“嵌合的”抗体描述了由非人序列组分和人序列组分组成的抗体。在这些抗体中，人免疫球蛋白(受体)的序列的一部分被非人免疫球蛋白(供体)的序列组分替代。在许多情况下，供体为鼠免疫球蛋白。对于人源化抗体，受体中的CDR的氨基酸被供体的氨基酸替代。在某些情况下，框架的氨基酸也被供体的对应氨基酸替代。在某些情况下，所述人源化抗体含有这样的氨基酸：其既不存在于受体中也不存在于供体中，且其在抗体优化过程中插入。在嵌合抗体的情况下，例如，供体免疫球蛋白的可变结构域，或者整个Fab部分(换而言之，VL-CL和VH+CH1)，与人抗体的恒定区融合。
术语互补性决定区(CDR)在这里用于表示抗体可变结构域中的、与抗原结合所必需的那些氨基酸。每个可变区通常具有3个CDR区域，被鉴别为CDR1、CDR2和CDR3。每个CDR区域可以包含根据Kabat的定义的氨基酸和/或根据Chotia定义的高变环的氨基酸。根据Kabat的定义包括，例如，可变轻链的大约氨基酸位置24-34(CDR1)、50-56(CDR2)和89-97(CDR3)的区域，和可变重链的大约氨基酸位置31-35(CDR1)、50-65(CDR2)和95-102(CDR3)的区域(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immulological Interest，第5版Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))。根据Chotia的定义包括，例如，可变轻链的大约氨基酸位置26-32(CDR1)、50-52(CDR2)和91-96(CDR3)的区域，和可变重链的大约氨基酸位置26-32(CDR1)、53-55(CDR2)和96-101(CDR3)的区域(Chothia和Lesk；J Mol Biol 196：901-917(1987))。在某些情况下，CDR可以包含来自如Kabat和Chotia定义的一个CDR区域的氨基酸。
根据重链的恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体分成不同的类别。存在5大类完整抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且它们中的许多可以进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别相对应的重链的恒定结构域被鉴别为[alpha/α]、[delta/δ]、[epsilon/ε]、[gamma/γ]和[mu/μ]。抗体的三维结构和亚基结构是已知的。
术语抗体/免疫球蛋白的“功能片段”或“结合抗原的抗体片段”被定义为这样的抗体/免疫球蛋白的片段(例如IgG的可变结构域)：其进一步包括抗体/免疫球蛋白的抗原结合域。抗体的“抗原结合域”通常包括抗体的一个或多个高变区，例如CDR1、CDR2和/或CDR3区域。但是，抗体的“框架”或“支架”区域也可以在抗体与抗原的结合方面起作用。框架区形成CDR的支架。抗原结合域优选地至少包括可变轻链的氨基酸4-103和可变重链的氨基酸5-109，更优选可变轻链的氨基酸3-107和可变重链的氨基酸4-111，特别优选的是完整可变轻链和重链，即VL的氨基酸1-109和VH的氨基酸1-113(根据WO97/08320编号)。
本发明的“功能片段”或“结合抗原的抗体片段”非最终性地包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双体、单结构域抗体(DAb)、直链抗体、抗体的单个链(单链Fv，缩写为ScFv)；和多特异性抗体，诸如双和三特异性抗体，例如，由抗体片段C形成。A.K Borrebaeck编(1995)Antibody Engineering(Breakthroughs in Molecular Biology)，Oxford University Press；R.Kontermann和S.Duebel，编(2001)Antibody Engineering(Springer Laboratory Manual)，Springer Verlag)。除了“多特异性的”或“多功能的”抗体以外的抗体是具有相同结合位点的那些抗体。多特异性抗体可以对抗原的不同表位是特异性的，或者可以对超过一种抗原的表位是特异性的(参见，例如WO93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt，等人，1991，J.Immunol.147：60 69；美国专利号4,474,893；4,7 14,68 1；4,925,648；5,573,920；5,601,819；或Kostelny等人，1992，J.Immunol.148：1547 1553)。可以构建F(ab’)2或Fab分子，从而可以减少或者完全阻止Ch1和CL结构域之间发生的分子间二硫键相互作用的数目。
“功能片段”或“结合抗原的抗体片段”可以经由其氨基端或羧基端借助于共价键(例如肽键)与另一种非源自抗体的多肽或蛋白融合。此外，通过在确定的位置引入反应性的半胱氨酸，可以将抗体和抗原结合片段改性，从而促进与毒性基团的偶联(参见Junutula等人.Nat Biotechnol.2008Aug；26(8)：925-32)。
通过本领域普通技术人员已知的方法，可以制备多克隆抗体。通过本领域普通技术人员已知的方法，可以制备单克隆抗体(和Milstein，Nature，256，495-497，1975)。通过本领域普通技术人员已知的方法，可以制备人和人源化的单克隆抗体(Olsson等人，Meth Enzymol.92，3-16或Cabilly等人US 4,816,567或Boss等人US 4,816,397)。
本领域普通技术人员知晓用于制备人抗体及其片段的不同方法，例如，借助于转基因小鼠(N Lonberg和D Huszar，Int Rev Immunol.1995；13(1)：65-93)或噬菌体展示技术(Clackson等人，Nature.1991Aug 15；352(6336)：624-8)。可以从重组抗体文库得到本发明的抗体，所述重组抗体文库由例如大量抗体(其从大量健康志愿者编译成)的氨基酸序列组成。借助于已知的重组DNA技术，也可以生产抗体。抗体的核酸序列可以通过常规测序得到，或者可从公众可接近的数据库得到。
“分离的”抗体或结合剂已经经过纯化，以除去细胞的其它组分。可能干扰诊断或治疗用途的细胞污染组分是，例如，细胞的酶、激素或其它肽或非肽组分。一种优选的抗体或结合剂是这样的：其与抗体或结合剂相比已经被纯化至超过95％的程度(例如通过Lowry方法、紫外-可见光光谱法或通过SDS毛细管凝胶电泳来确定)，其纯化使得可能确定氨基端或内部氨基酸序列的至少15个氨基酸，或者其已经被纯化至同质性，所述同质性通过在还原或非还原条件下的SDS-PAGE来确定(可以借助于考马斯蓝染色或优选地通过银着色来确定检测)。但是，通常通过一个或多个纯化步骤来制备抗体。
术语“特异性结合”或“特异性地结合”表示结合预定的抗原/靶分子的抗体或结合剂。抗体或结合剂的特异性结合通常描述了具有至少10-7M(作为Kd值；即优选具有小于10-7M的Kd值的那些)的亲和力的抗体或结合剂，与不是预定抗原/靶分子或密切相关的抗原/靶分子的非特异性抗原/靶分子(例如牛血清白蛋白或酪蛋白)相比，所述抗体或结合剂对预定抗原/靶分子的亲和力高至少2倍。
对癌细胞抗原特异性的抗体可以由本领域普通技术人员借助于他或她熟悉的方法(例如重组表达)来制备，或者可以商业获得(例如从Merck KGaA，德国)。在癌症治疗中已知的商购可得抗体的例子是爱必妥(西妥昔单抗，Merck KGaA)，阿伐他汀(贝伐单抗，Roche)和赫赛汀(曲妥珠单抗，Genentech)。曲妥珠单抗是IgG1κ型重组人源化单克隆抗体，其在基于细胞的测定(Kd＝5nM)中以高亲和力结合人表皮生长受体的细胞外结构域。所述抗体在CHO细胞中重组生产。
式(I)的化合物代表式(Ia)的化合物的亚组。
本发明的一个优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-50的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合剂(优选抗-C4.4a抗体)，其经由所述结合剂的硫原子键合至基团G，
AK2是结合剂(优选抗-C4.4a抗体)，其经由所述结合剂的氮原子键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的硫原子的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的一个优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-50的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合剂(优选抗-C4.4a抗体)，其经由所述结合剂的硫原子键合至基团G，
AK2是结合剂(优选抗-C4.4a抗体)，其经由所述结合剂的氮原子键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的硫原子的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-20的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R18是氢，
R19是氢、甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或甲基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
R27是氢，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-20的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R18是氢，
R19是氢、甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或甲基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
R27是氢，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是哌啶-1，4-二基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是哌啶-1，4-二基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、1-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK2，
其中
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
本发明的优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK2，
其中
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
本发明的优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1，
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
本发明的优选主题是如上面指出的通式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1，
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢，
R9是氢或苄基，
R35是甲基。
本发明另外提供了式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键，
L6是键，
R29是氢，
R30是氢，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C2-C6)-烷二基，
且
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键或直链(C2-C6)-烷二基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
本发明的优选主题是如上面指出的式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键或直链(C2-C6)-烷二基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
本发明另外提供了式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基、下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C2-C10)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或(C2-C4)-烷二基，
L6是键，
R29是氢或(C1-C4)-烷基，
R30是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R29和R30与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R31是氢或(C1-C4)-烷基，
R32是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R31和R32与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L1B是直链(C2-C10)-烷二基，
且
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
R18是氢，
R19是甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R27是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHCH2苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R35是甲基或羟基。
本发明的优选主题是如上面指出的式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
本发明的优选主题是如上面指出的式(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2 4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
本发明的优选主题是选自下述集合的式(XXXa)和(XXXI)的化合物：
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐，
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，
以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物。
本发明另外提供了通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
n是1-50的数字，
AK是结合剂，
基团§-G-L1-B-L2-§§是接头，
其中
§表示与基团AK的连接位点，且
§§表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4 1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基。
本发明的优选主题是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-50的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是结合剂，其经由所述结合剂的硫原子键合至基团G，
AK2是结合剂，其经由所述结合剂的氮原子键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的硫原子的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D具有上面指出的定义。
本发明的优选主题是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，
其中
n是1-50的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，且经由硫原子键合至基团G，
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，且经由氮原子键合至基团G，
G、L1、B、L2和D具有上面指出的定义。
本发明的优选主题是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-20的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
Q1是4-6元碳环或哌啶-1，4-二基，
Q2是环戊基或环己基，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R18是氢，
R19是氢、甲基、丙烷-2-基、2-甲基丙烷-1-基或1-甲基丙烷-1-基，
R20是氢或甲基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基。
本发明的特别优选的主题是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体，其包含在表2中列出的抗体的6个CDR序列、在表2中列出的抗体的可变轻链和可变重链、或者在表2中列出的抗体的轻链和重链，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体，其包含在表2中列出的抗体的6个CDR序列、在表2中列出的抗体的可变轻链和可变重链、或者在表2中列出的抗体的轻链和重链，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢，甲基、乙基、正丙基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代。
本发明的特别优选的主题是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是1-10的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代。
本发明另外提供了式(XXX)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物
其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子。
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基
Q1是3-7元碳环或4-7元氮杂杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元氮杂杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R27是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢或羟基，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基。
在本发明范围内，另外还特别优选的是式(XXX)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
R14是氢，
R15是氢，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R23是甲基，
R24是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是1-羟基乙基、苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢，
R4是苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)苯基的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物，其中
n＝1-20，更优选地n＝1-10，且非常优选地n＝2-8。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2
其中
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10或D02-6的轻链和重链，且其经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子连接至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2
其中
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且其经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
且
n、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是通式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2
其中
AK2是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10、M31-B01或D02-6的轻链和重链，且其经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
n、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是通式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1
其中
AK1是抗体，其包含抗体B01-3、B01-10或D02-6的6个CDR序列、抗体B01-3、B01-10或D02-6的可变轻链和可变重链、或者抗体B01-3、B01-10或D02-6的轻链和重链，且其经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子连接至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
且
n、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
且
n、AK、Cys、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是直链(C1-C10)-烷二基或下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基、叔丁氧羰基或苄氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个取代基取代，所述取代基彼此独立地选自甲基、羟基和苄基，
且
n、AK、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是直链(C2-C6)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
且
n、AK、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)和(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
L2是直链(C3-C5)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
且
n、AK1、Cys、D、R16和R17具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)和(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
n、AK、Cys、G、L1、L2、D、R16、R17和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
＃＃1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键
R16是氢，
R17是氢，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
n、AK、Cys、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
n、AK、Cys、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢，
R17是氢，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
n、AK、Cys、G、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK1或AK2
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢，
R17是氢，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
且
D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK1或AK2，
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK1，
其中
AK1是抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C3-C5)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢，
R17是氢，
L2是直链(C3-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是键、直链(C3-C5)-烷二基、下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
L1A是直链(C3-C6)-烷二基，
B1是下式的基团
其中
##5表示与基团L1A的连接位点，
##6表示与基团L1B的连接位点，
L5是键或乙烷-1，2-二基，
L6是键或下式的基团
其中
##7表示与羰基的连接位点，
##8表示与L1B的连接位点，
R33是氢、(C1-C4)-烷基羰基或叔丁基氧基羰基，
R34是氢或甲基，
R29是氢或甲基，
R30是氢或甲基，
R31是氢或甲基，
R32是氢或甲基，
L1B是直链(C3-C6)-烷二基，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
R28是氢、(C1-C4)-烷基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是4-7元杂环，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
R36是氢、(C1-C4)-烷基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
或者
R36和R37与它们所键合的原子一起形成吡咯烷环，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
L1是直链(C3-C5)-烷二基或下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
B是下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是哌啶-1，4-二基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
R23是甲基，
R24是氢，
R36是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
R37是氢或甲基，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是数字2或3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
R3是氢或甲基，
R4是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R3和R4与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#7表示与相邻氮原子的连接位点，
#8表示与基团T1的连接位点，
T1是式-C(＝O)-OR7、-C(＝O)-NR8R9、-C(＝O)-NH-NH-R10或-CH2-O-R11的基团，
其中
R7是氢、甲基、乙基、正丙基、叔丁基、苄基或金刚烷基甲基，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基、乙基、正丙基或苄基，
或者
R8和R9与它们所键合的氮原子一起形成4-7元杂环，
R10是苯甲酰基，
R11是苄基，其可以在苯基中被甲氧基羰基或羧基取代，
R5是氢、甲基或下式的基团
其中
#9表示与-CHC(R26)-T2的连接位点，
R12是苯基，其可以被甲氧基羰基、羧基或式-S(O)2OH的基团取代，
R13是苯基，其可以被甲氧基羰基或羧基取代，
R26是氢，
T2是苯基、苄基、1H-吲哚-3-基或1H-吲哚-3-基甲基，
且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
在其中存在N-O部分的环A是下式的杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
在其中存在N-O部分的环A是下式的杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R8是氢，
R9是氢，
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
在其中存在N-O部分的环A是下式的杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R8是氢，
R9是氢，
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-OR7或-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R7是氢，
R8是氢，
R9是氢，
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-NR8R9的基团，
其中
R8是氢，
R9是氢，
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢或甲基，
R2是异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、苯基、苄基、1-羟基乙基、4-羟基苄基、4-羟基-3-硝基苄基、4-羟基-3-氨基苄基、1-苯基乙基、二苯基甲基、1H-咪唑-4-基甲基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、4-羟基苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
R35是羟基，
且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(Ia)、(XXXa)和(XXXI)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
R35是甲基，
且
n、AK、Cys、G、L1、B、L2、D和R35具有上面指出的定义。
另外，在本发明范围内，还特别优选的是式(XXXa)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
Cys是L-半胱氨酸残基，其经由侧链的硫原子键合至琥珀酰亚胺的碳原子。
在本发明范围内，还优选的是式(I)和(XXX)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基、1-苯基乙基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的任选地被取代的单环或二环杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R6是氢、羟基或苄氧基，
n、AK、Cys、G、L1、L2和B具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还特别优选的是式(I)和(XXX)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
或者
R1和R2与它们所键合的碳原子一起形成下式的(1S，2R)-2-苯基环丙烷-1，1-二基基团
其中
#4表示与相邻氮原子的连接位点，
#5表示与羰基的连接位点，
在其中存在N-O部分的环A是下式的杂环
其中
#6表示与羰基的连接位点，
n、AK、Cys、G、L1、L2和B具有上面指出的定义。
本发明的另一个特别优选的主题是，式(I)的化合物，其中
D是下式的基团
其中
T1是-C(＝O)-OH或-C(＝O)-NH2，且
n、AK、G、L1、B、L2、#3、R3和R4具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是式(I)的化合物，其中
n＝1-20，更优选地n＝1-10，且非常优选地n＝2-8。
在本发明范围内，还优选的是式(I)和(XXX)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键，
n、AK、Cys、G、L1、L2、D、R16和R17具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还特别优选的是式(I)和(XXX)的化合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3和L4是键，
n、AK、Cys、G、L1、L2、D、R16和R17具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还优选的是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK1，
其中
AK1是结合剂，其经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或(C2-C4)-烷二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
Q1是4-7元杂环，
R14是氢或(C1-C4)-烷基，
R15是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R14和R15与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
R16是氢或(C1-C4)-烷基，
R17是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成5或6元杂环，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环。
在本发明范围内，还优选的是通式(I)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
AK是AK2，
其中
AK2是结合剂，其经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，G是羰基，
L1是键、直链(C1-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
P是O或NH，
Q2是3-7元碳环或4-7元杂环，
R18是氢或(C1-C4)-烷基，
R19是氢或天然α-氨基酸或其同系物或异构体的侧基，
R20是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R19和R20与它们所键合的原子一起形成吡咯烷基环，
R21是氢或(C1-C4)-烷基，
R22是氢或(C1-C4)-烷基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成3-7元碳环，
R23是(C1-C4)-烷基，
R24是氢或(C1-C4)-烷基，
L2是直链(C2-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
其中(C2-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环。
在本发明范围内，特别优选的是式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8的数字，
AK是AK1或AK2，
其中
AK1是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
AK2是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G在AK＝AK1时，是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
或者
在AK＝AK2时，是羰基，
L1是键、直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是数字2或3，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C2-C6)-烷二基可以被1或2个甲基取代基取代，
B是键或下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键或乙烷-1，2-二基，
L4是键或下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是甲基，
R28是氢、甲基羰基或叔丁基氧基羰基，
Q1是哌啶-1，4-二基，
R16是氢或甲基，
R17是氢或甲基，
或者
R16和R17与它们所键合的原子一起形成哌嗪基环，
R21是氢或甲基，
R22是氢或甲基，
或者
R21和R22与它们所键合的原子一起形成环丙基环，
R23是甲基，
R24是氢，
L2是直链(C2-C6)-烷二基或者是下式的基团
其中
p是2-6的数字，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
在其中存在N-O部分的环A是
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-NR8R9的基团，
R8是氢或甲基，
R9是氢、甲基或乙基，
R35是甲基。
在本发明范围内，特别优选的是式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK1，
其中
AK1是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是戊烷-1，5-二基，
B是下式的基团
其中
＊表示与L1的连接位点，
＊＊表示与L2的连接位点，
L3是键，
L4是键，
R16是氢，
R17是氢，
L2是丙烷-1，3-二基，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
在其中存在N-O部分的环A是
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-NR8R9的基团，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
在本发明范围内，特别优选的是式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK1，
其中
AK1是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
G是下式的基团
其中
#1表示与结合剂的半胱氨酸残基的连接位点，
#2表示与基团L1的连接位点，
L1是键，
B是键，
L2是己烷-1，6-二基，
且D具有上面指出的定义。
在本发明范围内，特别优选的是式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK2，
其中
AK2是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是戊烷-1，5-二基，
D是下式的基团
其中
#3表示与氮原子的连接位点，
R1是氢，
R2是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
在其中存在N-O部分的环A是
其中
#6表示与羰基的连接位点，
R3是氢，
R4是4-羟基苄基或1H-吲哚-3-基甲基，
T1是式-C(＝O)-NR8R9的基团，
R8是氢，
R9是氢，
R35是甲基。
在本发明范围内，特别优选的是式(Ia)的结合剂-药物缀合物以及它们的盐、溶剂合物和所述盐的溶剂合物，其中
n是2-8、优选2-5的数字，
AK是AK2，
其中
AK2是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G，
G是羰基，
L1是键，
B是键，
L2是下式的基团
其中
p是数字3，
##3表示与基团B的连接位点，
##4表示与氮原子的连接位点，
且D具有上面指出的定义。
在本发明范围内，还特别优选的是选自下述化合物的药物-结合剂缀合物：
其中在每种情况下
n是2-8、优选2-5的数字，
AK1是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的半胱氨酸残基的硫原子键合至基团G，
且
AK2是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由结合剂的赖氨酸残基的NH侧基键合至基团G。
在本发明范围内，更特别优选的是选自下述化合物的结合剂-药物缀合物：
其中在每种情况下
n是2-8、优选2-5的数字，
且
AK是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a。
在这些式中，AK1F、AK1B和AK2B可以被其它人或人源化的抗-C4.4a抗体替换。
在本发明范围内，更特别优选的是选自下述化合物的结合剂-药物缀合物：
其中
n是数字2-8，优选2-5，
且
AK1是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由半胱氨酸残基键合至毒性基团-接头单元，
AK2是人或人源化抗体或结合抗原的抗体片段，其结合C4.4a，且经由赖氨酸残基键合至毒性基团-接头单元。
在本发明范围内，更特别优选的是选自下述化合物的结合剂-药物缀合物：
其中
n是数字2-8，优选2-5，
且
AK1B和AK2B是B01-3。
在残基的各种组合和优选组合中单独指出的残基的定义也任意被其它组合的残基定义替代，所述替代独立于指出的各种残基组合。
特别优选的是2个或更多个上述优选范围的组合。
本发明另外提供了一种制备式(Ia)的本发明化合物的方法，其特征在于，将结合剂的溶液(优选地在缓冲液例如PBS缓冲液中)
[A]与合适的还原剂例如二硫苏糖醇或三(2-羧基乙基)膦盐酸盐混合，随后与式(IIa)的化合物反应
其中D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义，
得到式(I-A)的化合物
其中n、AK2、D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义，
或者
[B]与式(IIIa)的化合物反应
其中D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义，
以得到式(Ia-B)的化合物
其中n、AK2、D、L1、B、L2和R35各自具有上面指出的定义。
本发明另外提供了一种制备式(I)的本发明化合物的方法，其特征在于，将结合剂在PBS缓冲液中的溶液
[A]与合适的还原剂例如二硫苏糖醇或三(2-羧基乙基)膦盐酸盐混合，随后与式(II)的化合物反应
其中D、L1、B和L2各自具有上面指出的定义，
得到式(I-A)的化合物
其中n、AK1、D、L1、B和L2各自具有上面指出的定义，
或者
[B]与式(III)的化合物反应
其中D、L1、B和L2各自具有上面指出的定义，
得到式(I-B)的化合物
其中n、AK2、D、L1、B和L2各自具有上面指出的定义。
半胱氨酸偶联：
根据技术人员已知的方法，参见例如Ducry等人，Bioconj.Chem.2010，21，5和其中的参考文献，Klussman等人，Bioconj.Chem.2004，15(4)，765-773，进行抗体的部分还原，以及随后(部分地)还原的抗体与式(II)或(IIa)的化合物的缀合。抗体的温和还原优选地如下实现：将2-6当量的TCEP加给抗体，所述抗体存在于合适的缓冲溶液、优选磷酸盐缓冲液中，并在15-40℃之间的温度(优选在室温)搅拌30-180分钟。这之后如下进行缀合：将式(II)或(IIa)的化合物在DMSO、乙腈或DMF中的溶液加入(部分地)还原的抗体在PBS缓冲液中的溶液中，随后在0℃至+40℃(更具体地+10℃至+30℃)的温度反应30分钟至6小时(更具体地1-2小时)的时段。
赖氨酸偶联：
首先，通过常规肽化学方法，制备式(III)或(IIa)的化合物或可比较的活化的羧基组分。然后将它们溶解于惰性溶剂诸如DMSO或DMF中，例如，并加给抗体，所述抗体优选地存在于中性pH的磷酸盐缓冲液中。将该溶液在15-40℃之间的温度(优选室温)搅拌1-16h。
使用下面的路线图(路线图1和2)，通过实施例阐明了上述的制备方法：
路线图1
[a)：1.AK(抗体)，TCEP，PBS缓冲液，室温；2.加入在DMSO中的马来酰亚胺衍生物，RT]。
路线图2
[a)：AK(抗体)，PBS缓冲液，在室温与接头-药物组分的活化的羧基衍生物混合]。
可以如下制备式(II)的化合物，其中L1和B是键：
将式(IV)的化合物
其中D具有上面指出的定义，
在惰性溶剂中用式(V)的化合物进行还原胺化
其中
L2A具有上面定义的L2的定义，但是其烷基链长度缩短了1个碳原子，
pG1是氨基保护基，例如，(9H-芴-9-基甲氧基)羰基、叔丁氧基羰基或苄氧基羰基，
得到式(VI)的化合物
其中D、L2和pG1具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基pG1，并使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯反应，得到式(II-A)的化合物
其中D和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B1)的基团
其中＊、＊＊、R14和R15各自具有上面指出的条件，
通过技术人员已知的方法，从式(VI)的化合物消除保护基PG1，并使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与式(VII)的化合物反应
其中L1具有上面指出的定义，
得到式(II-B)的化合物
其中D、L1和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B2)的基团
其中＊、＊＊、L3、R16和R17各自具有上面指出的条件：
将式(IV)的化合物在惰性溶剂中用式(VIII)的化合物进行还原胺化
其中
L2A具有上面定义的L2的定义，但是其烷基链长度缩短了1个碳原子，
得到式(IX)的化合物
其中D和L2具有上面指出的定义，
和使该化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(X)的化合物反应，
其中L1和L3各自具有上面指出的定义，
得到式(II-C)的化合物
其中D、L1、L2和L3各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B3)的基团
其中＊、＊＊、L3、R16和R17各自具有上面指出的条件，且
L4A是下式的基团
其中
＊＊＊表示与羰基的连接位点，
＊＊＊＊表示与L2的连接位点，
R25是氢或甲基，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱和合适的偶联剂存在下与式(XI-A)或(XI-B)的化合物反应
其中R25和PG1各自具有上面指出的定义，且
PG2是合适的羧基-保护基，更具体地是苄基，
得到化合物(XII-A)或(XII-B)
或者
(XII-B)，
其中D、pG1、pG2和L2具有上面指出的定义，
随后，通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG2，并使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(X)的化合物反应，最后，通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，得到式(II-D-A)或(II-D-B)的化合物
或者
其中D、L1、L2和L3具有上面指出的定义。
可以如下制备式(II)的化合物，其中B是式(B4)的基团
其中＊、＊＊各自具有上面指出的条件，且
Q1A是N-连接的4-7元杂环，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱和合适的偶联剂存在下与式(XXI)的化合物反应
其中PG1和Q1A各自具有上面指出的定义，
得到式(XXII)的化合物
其中pG1、Q1A、D和L2具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基pG1，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XXIII)的化合物反应
其中L1具有上面指出的定义，
得到式(II-D)的化合物
其中Q1A、D、L1和L2具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1和B是键：使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与N-羟基琥珀酰亚胺反应，得到式(III-A)的化合物
其中D和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1是键，且B是式(B5A)的基团
其中＊、＊＊和P各自具有上面指出的定义，且
Q2A是3-7元碳环，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XIII)的化合物反应
其中P、Q2A和PG2各自具有上面指出的定义，
得到式(XIV)的化合物
其中D、P、Q2A、L2和PG2各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG2，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与N-羟基琥珀酰亚胺反应，得到式(III-B)的化合物
其中D、P、Q2A和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1是键，且B是式(B6)的基团
其中＊、＊＊、R18、R19和R20各自具有上面指出的定义，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XV)的化合物反应
其中R18、R19、R20和PG2各自具有上面指出的定义，
得到式(XVI)的化合物
其中D、R18、R19、R20、L2和PG2各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG2，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与N-羟基琥珀酰亚胺反应，得到式(III-C)的化合物
其中D、R18、R19、R20和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中L1是键，且B是式(B7)的基团
其中＊、＊＊、R21和R22各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从式(VI)的化合物消除保护基PG1，并使得到的去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下与式(XVII)的化合物反应
其中R21和R22各自具有上面指出的定义，
得到式(III-D)的化合物
其中D、R21、R22和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中B是式(B8)的基团
其中＊、＊＊、R23和R24各自具有上面指出的定义，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XVIII)的化合物反应
其中R23、R24和PG1各自具有上面指出的定义，
得到式(XIX)的化合物
其中D、R23、R24、L2和PG1各自具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基PG1，随后使去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的偶联剂和合适的碱存在下与式(XX)的化合物反应
其中
L1A是直链(C1-C10)-烷二基或者是下式的基团
其中
m是2-6的数字，
##1表示与基团G的连接位点，
##2表示与基团B的连接位点，
其中(C1-C10)-烷二基可以被1-4个甲基取代基取代，
且
其中烷二基链的彼此处于1，2、1，3或1，4关系的2个碳原子(包括位于它们之间的任何碳原子)可以桥连以形成(C3-C6)-环烷基环或苯基环，
得到式(III-E)的化合物
其中D、R23、R24、L1A和L2各自具有上面指出的定义。
可以如下制备式(III)的化合物，其中B是式(B5B)的基团
其中＊和＊＊各自具有上面指出的定义，且
Q2B是N-连接的4-7元杂环，
使式(IX)的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱和合适的偶联剂存在下与式(XXIV)的化合物反应
其中PG1和Q2B各自具有上面指出的定义，
得到式(XXV)的化合物
其中pG1、Q2B、D和L2具有上面指出的定义，
通过技术人员已知的方法，从该化合物消除保护基pG1，
并随后将去保护的化合物在惰性溶剂中在有合适的碱存在下用式(XX)的化合物转化成式(III-F)的化合物
其中Q2B、D、L1A和L2具有上面指出的定义。
任选地在有作为催化剂的酸和/或除水剂存在下，在溶剂中进行反应(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VIII)→(IX)，所述溶剂是还原胺化的常规溶剂，且在反应条件下是惰性的。这样的溶剂包括，例如，醇类诸如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，醚类诸如四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，或其它溶剂诸如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺或者水。也可能使用这些溶剂的混合物。优选的是，使用1，4-二噁烷/水混合物作为溶剂，并加入乙酸或稀盐酸作为催化剂。
适合用于该反应的还原剂具体地是，硼氢化物复合物，例如，硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、四正丁基硼氢化铵或硼烷-吡啶复合物。优选的是，使用氰基硼氢化钠或硼烷-吡啶复合物。
通常在0℃至+120℃的温度范围，优选地在+50℃至+100℃，进行反应(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VIII)→(IX)。所述反应可以在常压、增压或减压(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
通过标准的肽化学方法[参见例如M.Bodanszky，Principles of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1993；M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984；H.-D.Jakubke和H.Jeschkeit，Peptide，Proteine，Verlag Chemie，Weinheim，1982]，进行上述的偶联反应(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)和(XXII)+(XXIII)→(II-D)(分别从胺组分和羧酸组分形成酰胺)。
用于这些偶联反应的惰性溶剂的例子是：醚类诸如二乙基醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，烃类诸如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、环己烷或石油馏分，卤代烃类诸如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用N，N-二甲基甲酰胺。
用于这些偶联的合适的活化剂/缩合剂的例子包括：碳二亚胺类诸如N，N′-二乙基碳二亚胺、N，N′-二丙基碳二亚胺、N，N′-二异丙基碳二亚胺、N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，光气衍生物类诸如N，N′-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸异丁酯，1，2-噁唑鎓化合物类诸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓3-硫酸盐或2-叔丁基-5-甲基异噁唑鎓高氯酸盐，酰基氨基化合物类诸如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉，磷化合物类诸如丙烷膦酸酸酐、氰基膦酸二乙酯、双(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，或脲鎓化合物类诸如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)、2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TPTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓-四氟硼酸盐(TCTU)，上述试剂任选地与其它助剂诸如1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)相组合，以及，作为碱，碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾，或叔胺碱诸如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N，N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N，，N-二甲基氨基吡啶。
在本发明范围内，作为用于这样的偶联反应的活化剂/缩合剂，优选的是，使用与1-羟基苯并三唑(HOBt)和N，N-二异丙基乙胺相组合的N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，或者同样与N，N-二异丙基乙胺相组合的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)。
通常在-20℃至+60℃的温度范围，优选地在0℃至+40℃，进行偶联反应(IX)+(X)→(II-C)、(XII-A)或(XII-B)+(X)→(II-D-A)或(II-D-B)、(IX)+(XIII)→(XIV)、(IX)+(XV)→(XVI)和(XXII)+(XXIII)→(II-D)。所述反应可以在常压、增压或减压(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
与上述的酰胺偶联反应类似地进行酯化反应(IX)+(XVIII)→(XII)和(IX)+(X1-A)或(XI-B)→(XII-A)或(XII-B)、(IX)+(XXIV)→(XXV)以及(IX)+(XXI)→(XXII)。优选地，使用N-(3-二甲基氨基异丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和4-二甲基氨基吡啶，在+50℃至100℃的温度，在常压下，在二氯甲烷中进行这些反应。
如果有用或需要的话，在上述方法步骤中，任选地存在于化合物中的官能团(具体而言，诸如氨基、羟基和羧基)还可以以暂时受保护的形式存在。在这些情况下，根据肽化学中已知的常规方法引入和除去这样的保护基[参见，例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1999；M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，Berlin，1984]。当存在两个或更多个受保护的基团时，任选地也可在单釜式反应中同时将所述受保护的基团释放，或者也可以在分开的反应步骤中释放。
优选使用叔丁氧基羰基(Boc)，苄氧基羰基(Z)或(9H-芴-9-基甲氧基)羰基(Fmoc)作为氨基保护基PG1；对于羟基或羧基官能团，优选使用叔丁基或苄基作为保护基PG2。叔丁基或叔丁氧基羰基基团的消除通常是在惰性溶剂中通过使用强酸处理来完成，所述强酸包括例如盐酸、氢溴酸或三氟乙酸，所述惰性溶剂包括例如乙醚、1，4-二噁烷、二氯甲烷或乙酸；任选地，该反应还可在不加入惰性溶剂的情况下进行。在苄基或苄氧基羰基作为保护基的情况下，该基团优选在存在合适的钯催化剂的条件下通过氢解来除去，所述钯催化剂包括例如负载在活性炭上的钯。(9H-芴-9-基甲氧基)羰基通常使用仲胺碱(例如二乙基胺或哌啶)来除去。
反应(VI)→(II-A)在溶剂中进行，所述溶剂在反应条件下为惰性的，例如，醚类诸如四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，醇类诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)或水。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用1，4-二噁烷和水的混合物。
对于反应(VI)→(II-A)而言合适的碱是，例如，碱金属碳酸盐诸如碳酸钾、碳酸钠或碳酸锂，碱金属碳酸氢盐诸如碳酸氢钠或碳酸氢钾，或碱金属烷醇盐诸如甲醇钠、乙醇钠或叔丁醇钾。优选的是，使用碳酸氢钠。
反应(VI)→(II-A)在0℃至+50℃的温度范围内进行，优选地在+10℃至+30℃。所述反应可以在常压下、在增压下或在减压下(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
反应(VI)+(VII)→(II-B)在溶剂中进行，所述溶剂在反应条件下为惰性的，例如，醚类诸如四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，醇类诸如甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)或水。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用DMF。
对于反应(VI)+(VII)→(II-B)而言合适的碱是，例如，叔胺碱类诸如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N，N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N，N-二甲基氨基吡啶。优选的是，使用N，N-二异丙基乙胺。
反应(VI)+(VII)→(II-B)在0℃至+50℃的温度范围内进行，优选地在+10℃至+30℃。所述反应可以在常压下、在增压下或在减压下(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
反应(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)和(XVI)→(III-C)以及(VI)+(XVII)→(III-D)、(XIX)+(XX)→(III-E)和(XXV)+(XX)→(III-F)在溶剂中进行，所述溶剂在反应条件下为惰性的。合适的溶剂的例子是：醚类诸如二乙基醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、1，4-二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷或双(2-甲氧基乙基)醚，烃类诸如苯、甲苯、二甲苯、戊烷、己烷、庚烷、环己烷或石油馏分，卤代烃类诸如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或偶极非质子溶剂类诸如丙酮、甲基乙基酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲亚砜(DMSO)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N，N′-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。也可以使用这样的溶剂的混合物。优选的是，使用N，N-二甲基甲酰胺。
对于这些反应而言合适的碱是，例如，叔胺类诸如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N，N-二异丙基乙胺、吡啶或4-N，N-二甲基氨基吡啶。优选的是，使用N，N-二异丙基乙胺，任选地加入4-N，N-二甲基氨基吡啶。
反应(IX)→(III-A)、(XIV)→(III-B)和(XVI)→(III-C)以及(VI)+(XVII)→(III-D)和(XIX)+(XX)→(III-E)在0℃至+50℃的温度范围内进行，优选地在+10℃至+30℃。所述反应可以在常压下、在增压下或在减压下(例如0.5-5巴)下进行；通常在常压下进行。
式(II)、(III)、(I-A)和(I-B)的化合物分别属于式(IIa)、(IIIa)、(Ia-A)和(Ia-B)的化合物，其中R35是甲基。与如上所述的式(II)和(III)的化合物的制备类似地，进行化合物(IIa)和(IIIa)的制备。
通过例如下述合成路线图(路线图3-13、18)解释了上述方法：
路线图3
[a)：1.水/二噁烷，1N HCl，100℃；2.H2，Pd/C，甲醇，室温；b)：NaHCO3，H2O，二噁烷，室温]。
路线图4
[a)：二异丙基乙胺，DMF，室温]。
路线图5
[a)：水/二噁烷，1N HCl，100℃；b)：HATU，二异丙胺，DMF，室温]。
路线图6
[a)：1.EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温；2.H2，甲醇，室温；b)：1.EDCI，HOBt，二异丙胺，DMF，室温；2.二氯甲烷，室温]。
路线图7
[a)：1.EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温；2.H2，甲醇，室温；b)：HATU，二异丙胺，DMF，室温]。
路线图8
[a)：EDCI，二氯甲烷，室温]。
路线图9
[a)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.H2，甲醇，室温；b)：EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温]。
路线图10
[a)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.二氯甲烷，室温；b)：EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温]。
路线图11
[a)：二异丙基乙胺，DMF，室温]。
路线图12
[a)：1.EDCI，DMAP，二氯甲烷，室温；2.二氯甲烷，室温；b)：二异丙胺，DMAP，二氯甲烷，室温]。
路线图13
[a)：DMAP，二异丙胺，二氯甲烷，室温]。
路线图18
[a)：1.水/二噁烷，1N HCl，100℃；2.H2，Pd/C，甲醇，室温；b)：HATU，二异丙基乙胺，室温]。
与从文献已知的方法类似地，根据常规肽化学方法，且如实验部分中所述，从商购可得的氨基酸结构单元或由文献已知的那些结构单元，可以制备式(IV)的化合物(参见，例如，Pettit等人，Synthesis 1996，719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004，60，9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994，50，5345.Pettit等人，J.Org.Chem.1994，59，1796)。下面的合成路线图(路线图14-16)作为示例解释了制备。
路线图14
[a)：盐酸羟胺，KOH，MeOH，0℃→室温；b)：BrCH2(CH2)2CH2Br，K2CO3，丙酮，回流]。
路线图15
[a)：1.二异丙基乙胺，BEP，二氯甲烷，-10℃→室温；2.MeOH]。
路线图16
[a)：1.二异丙基乙胺，BEP，DMF，室温；2.二氯甲烷；b)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.二氯甲烷，室温；c)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.哌啶，DMF，室温]。
式(XI)、(XIII)、(XV)、(XVII)和(XXI)的化合物(如果合适，包括其手性或非对映异构体形式)是市售可得的或如文献中所述的此类化合物，或者其可通过对本领域技术人员显而易见的方式，以与文献中公开的方法类似的方法进行制备。在关于起始化合物和中间体的制备的部分中，实验部分还给出了许多关于起始原料制备的详尽的说明和文献信息。
式(V)、(VII)、(VIII)、(X)、(XVIII)、(XX)和(XXIII)的化合物(如果合适，包括其手性或非对映异构体形式)是从文献中已知的，或者其可通过对本领域技术人员显而易见的方式，以与文献中公开的方法类似的方法进行制备。在关于起始化合物和中间体的制备的部分中，实验部分还给出了许多关于起始原料制备的详尽的说明和文献信息。
可替换地，制备顺序的各个步骤可以以不同的次序进行。在下面的合成路线图(路线图17、19和20)中作为示例解释了该方案。
路线图17
[a)：硼烷-吡啶复合物，乙酸，MeOH；b)：1.HOBt，EDCI，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.TFA，二氯甲烷，室温；c)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；d)：1.Pd/C，MeOH，室温；2.NaHCO3，二噁烷，水]。
路线图19
[a)：1.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.TFA，二氯甲烷，室温；3.((H3C)3C(C＝O))2O，DMF，二异丙基乙胺；b)：二异丙基乙胺，BEP，DMF，室温；c)：1.H2，Pd/C(10％)，甲醇，室温；2.HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；3.TFA，二氯甲烷，室温]。
路线图20
[a)：硼烷-吡啶复合物，乙酸，MeOH；b)：1.HOBt，EDCI，二异丙基乙胺，DMF，室温；2.TFA，二氯甲烷，室温；c)：1.H2，Pd/C，MeOH，室温；2.NaHCO3，二噁烷，水；d)：HATU，二异丙基乙胺，DMF，室温；]。
在一个实施方案中，所述结合剂结合存在于癌细胞上的靶分子。在一个优选实施方案中，所述结合剂结合癌症靶分子。
在另一个优选实施方案中，所述靶分子是选择性的癌症靶分子。
在一个特别优选的实施方案中，所述靶分子是蛋白。
在一个实施方案中，所述靶分子是细胞外靶分子。在一个优选实施方案中，所述细胞外靶分子是蛋白。
癌症靶分子是技术人员已知的。其例子列出在下面。
癌症靶分子的例子如下：
(1)EGF受体(NCBI参照序列NP_005219.2)
序列(1210个氨基酸)：
＞gi|29725609|ref|NP_005219.2|表皮生长因子受体异形体a前体[智人]MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDFQNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA
细胞外结构域标有下划线。
(2)间皮素(SwissProt索引Q13421-3)
序列(622个氨基酸)：
＞sp|Q13421-3|间皮素OS的MSLN_HUMAN异形体2＝智人GN＝MSLN
MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISS
LSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPL
DLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEA
DVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPSTW
SVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKT
ACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELY
PQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRFVK
GRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKA
RLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQ
KLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQEALSGT
PCLLGPGPYLTYLALLLASTLA
间皮素由氨基酸296-598编码。氨基酸37-286编码“巨核细胞-增强因子”。间皮素通过GPI锚而锚定在细胞膜中，且在细胞外局部化。
(3)碳酸酐酶IX(SwissProt索引Q16790)
序列(459个氨基酸)：
＞sp|Q16790|CAH9_HUMAN碳酸酐酶9 OS＝智人 GN＝CA9 PE＝1SV＝2
MAPLCPSPWLPLLIPAPAPGLTVQLLLSLLLLVPVHPQRLPRMQEDSPLGGGSSGEDDPL
GEEDLPSEEDSPREEDPPGEEDLPGEEDLPGEEDLPEVKPKSEEEGSLKLEDLPTVEAPG
DPQEPQNNAHRDKEGDDQSHWRYGGDPPWPRVSPACAGRFQSPVDIRPQLAAFCPALRPL
ELLGFQLPPLPELRLRNNGHSVQLTLPPGLEMALGPGREYRALQLHLHWGAAGRPGSEHT
VEGHRFPAEIHVVHLSTAFARVDEALGRPGGLAVLAAFLEEGPEENSAYEQLLSRLEEIA
EEGSETQVPGLDISALLPSDFSRYFQYEGSLTTPPCAQGVIWTVFNQTVMLSAKQLHTLS
DTLWGPGDSRLQLNFRATQPLNGRVIEASFPAGVDSSPRAAEPVQLNSCLAAGDILALVF
GLLFAVTSVAFLVQMRRQHRRGTKGGVSYRPAEVAETGA
细胞外结构域标有下划线。
(4)C4.4a(NCBI参照序列NP_055215.2；同义词LYPD3)
序列(346个氨基酸)：
＞gi|93004088|ref|NP_055215.2|含有ly6/PLAUR结构域的蛋白3前体[智人]
MDPARKAGAQAMIWTAGWLLLLLLRGGAQALECYSCVQKADDGCSPNKMKTVKCAPGVDVCTEAVGAVETIHGQFSLAVRGCGSGLPGKNDRGLDLHGLLAFIQLQQCAQDRCNAKLNLTSRALDPAGNESAYPPNGVECYSCVGLSREACQGTSPPVVSCYNASDHVYKGCFDGNVTLTAANVTVSLPVRGCVQDEFCTRDGVTGPGFTLSGSCCQGSRCNSDLRNKTYFSPRIPPLVRLPPPEPTTVASTTSVTTSTSAPVRPTSTTKPMPAPTSQTPRQGVEHEASRDEEPRLTGGAAGHQDRSNSGQYPAKGGPQQPHNKGCVAPTAGLAALLLAVAAGVLL
成熟的、细胞外结构域标有下划线(SEQ ID NO：1)。
(5)CD52(NCBI参照序列NP_001794.2)
＞gi|68342030|ref|NP_001794.2|阿仑单抗(CAMPATH)-1抗原前体[智人]
MKRFLFLLLTISLLVMVQIQTGLSGQNDTSQTSSPSASSNISGGIFLFFVANAIIHLFCFS
(6)Her2(NCBI参照序列NP_004439.2)
＞gi|54792096|ref|NP_004439.2|受体酪氨酸-蛋白激酶erbB-2异形体a[智人]
MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKVKVLGSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENTSPKANKEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLTSTVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLLNWCMQIAKGMSYLEDVRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPIKWMALESILRRRFTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDSECRPRFRELVSEFSRMARDPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDAEEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEGAGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYVNQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLERPKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTPQGGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV
(7)CD20(NCBI参照序列NP_068769.2)
＞gi|23110987|ref|NP_068769.2|B-淋巴细胞抗原CD20[智人]
MTTPRNSVNGTFPAEPMKGPIAMQSGPKPLFRRMSSLVGPTQSFFMRESKTLGAVQIMNGLFHIALGGLLMIPAGIYAPICVTVWYPLWGGIMYIISGSLLAATEKNSRKCLVKGKMIMNSLSLFAAISGMILSIMDILNIKISHFLKMESLNFIRAHTPYINIYNCEPANPSEKNSPSTQYCYSIQSLFLGILSVMLIFAFFQELVIAGIVENEWKRTCSRPKSNIVLLSAEEKKEQTIEIKEEVVGLTETSSQPKNEEDIEIIPIQEEEEEETETNFPEPPQDQESSPIENDSSP
(8)淋巴细胞活化抗原CD30(SwissProt ID P28908)
＞gi|68348711|ref|NP_001234.2|肿瘤坏死因子受体超家族成员8异形体1前体[智人]
MRVLLAALGLLFLGALRAFPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSRARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK
(9)淋巴细胞粘附分子CD22(SwissProt ID P20273)
＞gi|157168355|ref|NP_001762.2|B-细胞受体CD22异形体1前体[智人]
MHLLGPWLLLLVLEYLAFSDSSKWVFEHPETLYAWEGACVWIPCTYRALDGDLESFILFHNPEYNKNTSKFDGTRLYESTKDGKVPSEQKRVQFLGDKNKNCTLSIHPVHLNDSGQLGLRMESKTEKWMERIHLNVSERPFPPHIQLPPEIQESQEVTLTCLLNFSCYGYPIQLQWLLEGVPMRQAAVTSTSLTIKSVFTRSELKFSPQWSHHGKIVTCQLQDADGKFLSNDTVQLNVKHTPKLEIKVTPSDAIVREGDSVTMTCEVSSSNPEYTTVSWLKDGTSLKKQNTFTLNLREVTKDQSGKYCCQVSNDVGPGRSEEVFLQVQYAPEPSTVQILHSPAVEGSQVEFLCMSLANPLPTNYTWYHNGKEMQGRTEEKVHIPKILPWHAGTYSCVAENILGTGQRGPGAELDVQYPPKKVTTVIQNPMPIREGDTVTLSCNYNSSNPSVTRYEWKPHGAWEEPSLGVLKIQNVGWDNTTIACAACNSWCSWASPVALNVQYAPRDVRVRKIKPLSEIHSGNSVSLQCDFSSSHPKEVQFFWEKNGRLLGKESQLNFDSISPEDAGSYSCWVNNSIGQTASKAWTLEVLYAPRRLRVSMSPGDQVMEGKSATLTCESDANPPVSHYTWFDWNNQSLPYHSQKLRLEPVKVQHSGAYWCQGTNSVGKGRSPLSTLTVYYSPETIGRRVAVGLGSCLAILILAICGLKLQRRWKRTQSQQGLQENSSGQSFFVRNKKVRRAPLSEGPHSLGCYNPMMEDGISYTTLRFPEMNIPRTGDAESSEMQRPPPDCDDTVTYSALHKRQVGDYENVIPDFPEDEGIHYSELIQFGVGERPQAQENVDYVILKH
(10)骨髓细胞表面抗原CD33(SwissProt ID P20138)
＞gi|130979981|ref|NP_001763.3|骨髓细胞表面抗原CD33异形体1前体[智人]
MPLLLLLPLLWAGALAMDPNFWLQVQESVTVQEGLCVLVPCTFFHPIPYYDKNSPVHGYWFREGAIISRDSPVATNKLDQEVQEETQGRFRLLGDPSRNNCSLSIVDARRRDNGSYFFRMERGSTKYSYKSPQLSVHVTDLTHRPKILIPGTLEPGHSKNLTCSVSWACEQGTPPIFSWLSAAPTSLGPRTTHSSVLIITPRPQDHGTNLTCQVKFAGAGVTTERTIQLNVTYVPQNPTTGIFPGDGSGKQETRAGVVHGAIGGAGVTALLALCLCLIFFIVKTHRRKAARTAVGRNDTHPTTGSASPKHQKKSKLHGPTETSSCSGAAPTVEMDEELHYASLNFHGMNPSKDTSTEYSEVRTQ
(11)跨膜糖蛋白NMB(SwissProt ID Q14956)
＞gi|52694752|ref|NP_001005340.1|跨膜糖蛋白NMB异形体a前体[智人]
MECLYYFLGFLLLAARLPLDAAKRFHDVLGNERPSAYMREHNQLNGWSSDENDWNEKLYPVWKRGDMRWKNSWKGGRVQAVLTSDSPALVGSNITFAVNLIFPRCQKEDANGNIVYEKNCRNEAGLSADPYVYNWTAWSEDSDGENGTGQSHHNVFPDGKPFPHHPGWRRWNFIYVFHTLGQYFQKLGRCSVRVSVNTANVTLGPQLMEVTVYRRHGRAYVPIAQVKDVYVVTDQIPVFVTMFQKNDRNSSDETFLKDLPIMFDVLIHDPSHFLNYSTINYKWSFGDNTGLFVSTNHTVNHTYVLNGTFSLNLTVKAAAPGPCPPPPPPPRPSKPTPSLATTLKSYDSNTPGPAGDNPLELSRIPDENCQINRYGHFQATITIVEGILEVNIIQMTDVLMPVPWPESSLIDFVVTCQGSIPTEVCTIISDPTCEITQNTVCSPVDVDEMCLLTVRRTFNGSGTYCVNLTLGDDTSLALTSTLISVPDRDPASPLRMANSALISVGCLAIFVTVISLLVYKKHKEYNPIENSPGNVVRSKGLSVFLNRAKAVFFPGNQEKDPLLKNQEFKGVS
(12)粘附分子CD56(SwissProt ID P13591)
＞gi|94420689|ref|NP_000606.3|神经细胞粘附分子1异形体1[智人]
MLQTKDLIWTLFFLGTAVSLQVDIVPSQGEISVGESKFFLCQVAGDAKDKDISWFSPNGEKLTPNQQRISVVWNDDSSSTLTIYNANIDDAGIYKCVVTGEDGSESEATVNVKIFQKLMFKNAPTPQEFREGEDAVIVCDVVSSLPPTIIWKHKGRDVILKKDVRFIVLSNNYLQIRGIKKTDEGTYRCEGRILARGEINFKDIQVIVNVPPTIQARQNIVNATANLGQSVTLVCDAEGFPEPTMSWTKDGEQIEQEEDDEKYIFSDDSSQLTIKKVDKNDEAEYICIAENKAGEQDATIHLKVFAKPKITYVENQTAMELEEQVTLTCEASGDPIPSITWRTSTRNISSEEKTLDGHMVVRSHARVSSLTLKSIQYTDAGEYICTASNTIGQDSQSMYLEVQYAPKLQGPVAVYTWEGNQVNITCEVFAYPSATISWFRDGQLLPSSNYSNIKIYNTPSASYLEVTPDSENDFGNYNCTAVNRIGQESLEFILVQADTPSSPSIDQVEPYSSTAQVQFDEPEATGGVPILKYKAEWRAVGEEVWHSKWYDAKEASMEGIVTIVGLKPETTYAVRLAALNGKGLGEISAASEFKTQPVQGEPSAPKLEGQMGEDGNSIKVNLIKQDDGGSPIRHYLVRYRALSSEWKPEIRLPSGSDHVMLKSLDWNAEYEVYVVAENQQGKSKAAHFVFRTSAQPTAIPANGSPTSGLSTGAIVGILIVIFVLLLVVVDITCYFLNKCGLFMCIAVNLCGKAGPGAKGKDMEEGKAAFSKDESKEPIVEVRTEEERTPNHDGGKHTEPNETTPLTEPEKGPVEAKPECQETETKPAPAEVKTVPNDATQTKENESKA
(13)表面分子CD70(SwissProt ID P32970)
＞gi|4507605|ref|NP_001243.1|CD70抗原[智人]
MPEEGSGCSVRRRPYGCVLRAALVPLVAGLVICLVVCIQRFAQAQQQLPLESLGWDVAELQLNHTGPQQDPRLYWQGGPALGRSFLHGPELDKGQLRIHRDGIYMVHIQVTLAICSSTTASRHHPTTLAVGICSPASRSISLLRLSFHQGCTIASQRLTPLARGDTLCTNLTGTLLPSRNTDETFFGVQWVRP
(14)表面分子CD74(SwissProt ID P04233)
＞gi|10835071|ref|NP_004346.1|HLA II类组织相容性抗原γ链异形体b[智人]
MHRRRSRSCREDQKPVMDDQRDLISNNEQLPMLGRRPGAPESKCSRGALYTGFSILVTLLLAGQATTAYFLYQQQGRLDKLTVTSQNLQLENLRMKLPKPPKPVSKMRMATPLLMQALPMGALPQGPMQNATKYGNMTEDHVMHLLQNADPLKVYPPLKGSFPENLRHLKNTMETIDWKVFESWMHHWLLFEMSRHSLEQKPTDAPPKESLELEDPSSGLGVTKQDLGPVPM
(15)B-淋巴细胞抗原CD19(SwissProt ID P15391)
＞gi|296010921|ref|NP_001171569.1|B-淋巴细胞抗原CD19异形体1前体[智人]
MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLAGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR
(16)表面蛋白粘蛋白-1(SwissProt ID P15941)
＞gi|65301117|ref|NP_002447.4|粘蛋白-1异形体1前体[智人]
MTPGTQSPFFLLLLLTVLTVVTGSGHASSTPGGEKETSATQRSSVPSSTEKNALSTGVSFFFLSFHISNLQFNSSLEDPSTDYYQELQRDISEMFLQIYKQGGFLGLSNIKFRPGSVVVQLTLAFREGTINVHDVETQFNQYKTEAASRYNLTISDVSVSDVPFPFSAQSGAGVPGWGIALLVLVCVLVALAIVYLIALAVCQCRRKNYGQLDIFPARDTYHPMSEYPTYHTHGRYVPPSSTDRSPYEKVSAGNGGSSLSYTNPAVAATSANL
(17)表面蛋白CD138(SwissProt ID P18827)
＞gi|29568086|ref|NP_002988.3|多配体聚糖-1前体[智人]
MRRAALWLWLCALALSLQPALPQIVATNLPPEDQDGSGDDSDNFSGSGAGALQDITLSQQTPSTWKDTQLLTAIPTSPEPTGLEATAASTSTLPAGEGPKEGEAVVLPEVEPGLTAREQEATPRPRETTQLPTTHQASTTTATTAQEPATSHPHRDMQPGHHETSTPAGPSQADLHTPHTEDGGPSATERAAEDGASSQLPAAEGSGEQDFTFETSGENTAVVAVEPDRRNQSPVDQGATGASQGLLDRKEVLGGVIAGGLVGLIFAVCLVGFMLYRMKKKDEGSYSLEEPKQANGGAYQKPTKQEEFYA
(18)整联蛋白αV(Genbank登记号：NP_002201.1)
＞gi|4504763|ref|NP_002201.1|整联蛋白α-V异形体1前体[智人]
MAFPPRRRLRLGPRGLPLLLSGLLLPLCRAFNLDVDSPAEYSGPEGSYFGFAVDFFVPSASSRMFLLVGAPKANTTQPGIVEGGQVLKCDWSSTRRCQPIEFDATGNRDYAKDDPLEFKSHQWFGASVRSKQDKILACAPLYHWRTEMKQEREPVGTCFLQDGTKTVEYAPCRSQDIDADGQGFCQGGFSIDFTKADRVLLGGPGSFYWQGQLISDQVAEIVSKYDPNVYSIKYNNQLATRTAQAIFDDSYLGYSVAVGDFNGDGIDDFVSGVPRAARTLGMVYIYDGKNMSSLYNFTGEQMAAYFGFSVAATDINGDDYADVFIGAPLFMDRGSDGKLQEVGQVSVSLQRASGDFQTTKLNGFEVFARFGSAIAPLGDLDQDGFNDIAIAAPYGGEDKKGIVYIFNGRSTGLNAVPSQILEGQWAARSMPPSFGYSMKGATDIDKNGYPDLIVGAFGVDRAILYRARPVITVNAGLEVYPSILNQDNKTCSLPGTALKVSCFNVRFCLKADGKGVLPRKLNFQVELLLDKLKQKGAIRRALFLYSRSPSHSKNMTISRGGLMQCEELIAYLRDESEFRDKLTPITIFMEYRLDYRTAADTTGLQPILNQFTPANISRQAHILLDCGEDNVCKPKLEVSVDSDQKKIYIGDDNPLTLIVKAQNQGEGAYEAELIVSIPLQADFIGVVRNNEALARLSCAFKTENQTRQVVCDLGNPMKAGTQLLAGLRFSVHQQSEMDTSVKFDLQIQSSNLFDKVSPVVSHKVDLAVLAAVEIRGVSSPDHIFLPIPNWEHKENPETEEDVGPVVQHIYELRNNGPSSFSKAMLHLQWPYKYNNNTLLYILHYDIDGPMNCTSDMEINPLRIKISSLQTTEKNDTVAGQGERDHLITKRDLALSEGDIHTLGCGVAQCLKIVCQVGRLDRGKSAILYVKSLLWTETFMNKENQNHSYSLKSSASFNVIEFPYKNLPIEDITNSTLVTTNVTWGIQPAPMPVPVWVIILAVLAGLLLLAVLVFVMYRMGFFKRVRPPQEEQEREQLQPHENGEGNSET
(19)畸胎癌衍生的生长因子1蛋白TDGF1(Genbank登记号：NP_003203.1)
＞gi|4507425|ref|NP_003203.1|畸胎癌衍生的生长因子1异形体1前体[智人]
MDCRKMARFSYSVIWIMAISKVFELGLVAGLGHQEFARPSRGYLAFRDDSIWPQEEPAIRPRSSQRVPPMGIQHSKELNRTCCLNGGTCMLGSFCACPPSFYGRNCEHDVRKENCGSVPHDTWLPKKCSLCKCWHGQLRCFPQAFLPGCDGLVMDEHLVASRTPELPPSARTTTFMLVGICLSIQSYY
(20)前列腺特异性的膜抗原PSMA(SwiSS Prot ID：Q04609)
＞gi|4758398|ref|NP_004467.1|谷氨酸盐羧肽酶2异形体1[智人]
MWNLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGFFLLGFLFGWFIKSSNEATNITPKHNMKAFLDELKAENIKKFLYNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQWKEFGLDSVELAHYDVLLSYPNKTHPNYISIINEDGNEIFNTSLFEPPPPGYENVSDIVPPFSAFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDMKINCSGKIVIARYGKVFRGNKVKNAQLAGAKGVILYSDPADYFAPGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGDPLTPGYPANEYAYRRGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMGGSAPPDSSWRGSLKVPYNVGPGFTGNFSTQKVKMHIHSTNEVTRIYNVIGTLRGAVEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGAAVVHEIVRSFGTLKKEGWRPRRTILFASWDAEEFGLLGSTEWAEENSRLLQERGVAYINADSSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHNLTKELKSPDEGFEGKSLYESWTKKSPSPEFSGMPRISKLGSGNDFEVFFQRLGIASGRARYTKNWETNKFSGYPLYHSVYETYELVEKFYDPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSIVLPFDCRDYAVVLRKYADKIYSISMKHPQEMKTYSVSFDSLFSAVKNFTEIASKFSERLQDFDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFYRHVIYAPSSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSKAWGEVKRQIYVAAFTVQAAAETLSEVA
(21)酪氨酸蛋白激酶EPHA2(Swiss Prot ID：P29317)
＞gi|32967311|ref|NP_004422.2|ephrin type-A受体2前体[智人]
MELQAARACFALLWGCALAAAAAAQGKEVVLLDFAAAGGELGWLTHPYGKGWDLMQNIMNDMPIYMYSVCNVMSGDQDNWLRTNWVYRGEAERIFIELKFTVRDCNSFPGGASSCKETFNLYYAESDLDYGTNFQKRLFTKIDTIAPDEITVSSDFEARHVKLNVEERSVGPLTRKGFYLAFQDIGACVALLSVRVYYKKCPELLQGLAHFPETIAGSDAPSLATVAGTCVDHAVVPPGGEEPRMHCAVDGEWLVPIGQCLCQAGYEKVEDACQACSPGFFKFEASESPCLECPEHTLPSPEGATSCECEEGFFRAPQDPASMPCTRPPSAPHYLTAVGMGAKVELRWTPPQDSGGREDIVYSVTCEQCWPESGECGPCEASVRYSEPPHGLTRTSVTVSDLEPHMNYTFTVEARNGVSGLVTSRSFRTASVSINQTEPPKVRLEGRSTTSLSVSWSIPPPQQSRVWKYEVTYRKKGDSNSYNVRRTEGFSVTLDDLAPDTTYLVQVQALTQEGQGAGSKVHEFQTLSPEGSGNLAVIGGVAVGVVLLLVLAGVGFFIHRRRKNQRARQSPEDVYFSKSEQLKPLKTYVDPHTYEDPNQAVLKFTTEIHPSCVTRQKVIGAGEFGEVYKGMLKTSSGKKEVPVAIKTLKAGYTEKQRVDFLGEAGIMGQFSHHNIIRLEGVISKYKPMMIITEYMENGALDKFLREKDGEFSVLQLVGMLRGIAAGMKYLANMNYVHRDLAARNILVNSNLVCKVSDFGLSRVLEDDPEATYTTSGGKIPIRWTAPEAISYRKFTSASDVWSFGIVMWEVMTYGERPYWELSNHEVMKAINDGFRLPTPMDCPSAIYQLMMQCWQQERARRPKFADIVSILDKLIRAPDSLKTLADFDPRVSIRLPSTSGSEGVPFRTVSEWLESIKMQQYTEHFMAAGYTAIEKVVQMTNDDIKRIGVRLPGHQKRIAYSLLGLKDQVNTVGIPI
(22)表面蛋白LC44A4(Genbank Accession No：NP_001171515)
＞gi|295849282|ref|NP_001171515.1|胆碱转运蛋白-样蛋白4异形体2[智人]
MGGKQRDEDDEAYGKPVKYDPSFRGPIKNRSCTDVICCVLFLLFILGYIVVGIVAWLYGDPRQVLYPRNSTGAYCGMGENKDKPYLLYFNIFSCILSSNIISVAENGLQCPTPQTVITSLQQELCPSFLLPSAPALGRCFPWTNVTPPALPGITNDTTIQQGISGLIDSLNARDISVKIFEDFAQSWYWILVALGVALVLSLLFILLLRLVAGPLVLVLILGVLGVLAYGIYYCWEEYRVLRDKGASISQLGFTTNLSAYQSVQETWLAALIVLAVLEAILLLMLIFLRQRIRIAIALLKEASKAVGQMMSTMFYPLVTFVLLLICIAYWAMTALYLATSGQPQYVLWASNISSPGCEKVPINTSCNPTAHLVNSSCPGLMCVFQGYSSKGLIQRSVFNLQIYGVLGLFWTLNWVLALGQCVLAGAFASFYWAFHKPQDIPTFPLISAFIRTLRYHTGSLAFGALILTLVQIARVILEYIDHKLRGVQNPVARCIMCCFKCCLWCLEKFIKFLNRNAYIMIAIYGKNFCVSAKNAFMLLMRNIVRVVVLDKVTDLLLFFGKLLVVGGVGVLSFFFFSGRIPGLGKDFKSPHLNYYWLPIMTSILGAYVIASGFFSVFGMCVDTLFLCFLEDLERNNGSLDRPYYMSKSLLKILGKKNEAPPDNKKRKK
(23)表面蛋白BMPR1B(SwissProt：O00238)
(24)运输蛋白LC7A5(SwissProt：Q01650)
(25)上皮前列腺抗原STEAP1(SwissProt：Q9UHE8)
(26)卵巢癌抗原MUC16(SwissProt：Q8WXI7)
(27)运输蛋白LC34A2(SwissProt：O95436)
(28)表面蛋白EMA5b(SwissProt：Q9P283)
(29)表面蛋白LYPD1(SwissProt：Q8N2G4)
(30)内皮缩血管肽受体B型EDNRB(SwissProt：P24530)
(31)环指蛋白RNF43(SwissProt：Q68DV7)
(32)前列腺癌相关的蛋白TEAP2(SwissProt：Q8NFT2)
(33)阳离子通道TRPM4(SwissProt：Q8TD43)
(34)补体受体CD21(SwissProt：P20023)
(35)B-细胞抗原受体复合物相关蛋白CD79b(SwissProt：P40259)
(36)细胞粘附抗原CEACAM6(SwissProt：P40199)
(37)二肽酶DPEP1(SwissProt：P16444)
(38)白介素受体IL20Rα(SwissProt：Q9UHF4)
(39)蛋白聚糖BCAN(SwissProt：Q96GW7)
(40)ephrin受体EPHB2(SwissProt：P29323)
(41)前列腺干细胞相关蛋白PSCA(Genbank Accession No：NP_005663.2)
(42)表面蛋白LHFPL3(SwissProt：Q86UP9)
(43)受体蛋白TNFRSF13C(SwissProt：Q96RJ3)
(44)B-细胞抗原受体复合物相关蛋白CD79a(SwissProt：P11912)
(45)受体蛋白CXCR5(SwissProt：P32302)
(46)离子通道P2X5(SwissProt：Q93086)
(47)淋巴细胞抗原CD180(SwissProt：Q99467)
(48)受体蛋白FCRL1(SwissProt：Q96LA6)
(49)受体蛋白FCRL5(SwissProt：Q96RD9)
(50)MHC II类分子Ia抗原HLA-DOB(Genbank Accession No：NP_002111.1)
(51)T-细胞蛋白VTCN1(SwissProt：Q7Z7D3)。
在本发明的一个优选主题中，癌症靶分子选自癌症靶分子(1)-(51)。
在本发明的另一个特别优选主题中，所述结合剂结合选自癌症靶分子(1)-(51)的细胞外癌症靶分子。
在本发明的另一个特别优选主题中，所述结合剂特异性地结合选自癌症靶分子(1)-(51)的细胞外癌症靶分子。
在本发明的一个特别优选主题中，所述癌症靶分子选自：EGF受体(NP_005219.2)、间皮素(Q13421-3)、C4.4a(NP_055215.2)和碳酸酐酶IX(CA IX；NP_001207.2)，更具体地是C4.4a(NP_055215.2)。
在本发明的另一个特别优选主题中，所述结合剂结合选自下述组的细胞外癌症靶分子：EGF受体(NP_005219.2)、间皮素(Q13421-3)、C4.4a(NP_055215.2)和碳酸酐酶IX(CA IX；Q16790))，更具体地是C4.4a(NP_055215.2)。
在本发明的另一个特别优选主题中，所述结合剂特异性地结合选自下述组的细胞外癌症靶分子：EGF受体(NP_005219.2)、间皮素(Q13421-3)、C4.4a(NP_055215.2)和碳酸酐酶IX(CA IX；Q16790))，更具体地是C4.4a(NP_055215.2)。
在一个优选实施方案中，所述结合剂在结合它在靶细胞上的细胞外靶分子以后，作为所述结合的结果，被靶细胞内化。这种效应是靶细胞摄入结合剂-药物缀合物(其可以是免疫缀合物或ADC)的效应。
在一个实施方案中，所述结合剂是结合蛋白。在一个优选实施方案中，结合剂是抗体、结合抗原的抗体片段、多特异性抗体或抗体模拟物。
优选的抗体模拟物是亲和体(affibodies)、adnectins、anticalins、DARPins、亲和体(avimers)或纳米抗体(nanobodies)。优选的多特异性抗体是双特异性的和三特异性抗体。
在一个优选实施方案中，所述结合剂是抗体或结合抗原的抗体片段，更优选地是分离的抗体或分离的结合抗原的抗体片段。
优选的结合抗原的抗体片段是Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段、双体、DAb、直链抗体和scFv。特别优选的是Fab、双体和scFv。
在一个特别优选的实施方案中，结合剂是抗体。特别优选的是单克隆抗体或其结合抗原的抗体片段。进一步特别优选的是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体或其结合抗原的抗体片段。
本领域普通技术人员使用已知的方法，例如，化学合成或重组表达，可以制备结合癌症靶分子的抗体或结合抗原的抗体片段。癌症靶分子的结合剂可以商业获得，或者可以由本领域普通技术人员使用已知的方法(例如，化学合成或重组表达)制备。在WO 2007/070538(参见第22页“抗体”)中描述了用于制备抗体或结合抗原的抗体片段的其它方法。技术人员知晓如何编辑诸如噬菌体展示文库等方法(例如Morphosys HuCAL Gold)并用于发现抗体或结合抗原的抗体片段(参见WO 2007/070538，第24ff页，和第70页的实施例1，第72页的实施例2)。在例如第26页(WO 2007/070538)描述了使用得自B-细胞的DNA文库制备抗体的其它方法。用于人源化抗体的方法描述于WO2007070538的第30-32页，并且更详细地描述于Queen，等人，Pros.Natl.Acad.Sci.USA 86：10029-10033，1989或WO 90/0786。此外，用于重组表达一般蛋白和特别是抗体的方法是技术人员已知的(参见，例如，Berger和Kimrnel(Guide to Molecular Cloning Techniq ues，Methods in Enzymology，第152卷，Academic Press，Inc.)；Sambrook，等人，(Molecular Cloning：A Laboratory Manual，(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Cold Spring Harbor，N.Y.；1989)第1-3卷)；Current Protocols in Molecular Biolony，(F.M.Ausabel等人.[编]，Current Protocols，Green Publishing Associates，Inc./John Wiley&Sons，Inc.)；Harlow等人，(MonocIonal Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(19881，Paul[编])；Fundamental Immunology，(Lippincott Williams&Wilkins(1998))；和Harlow，等人，(Using Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1998))。技术人员知晓蛋白/抗体的表达所必需的对应载体、启动子和信号肽。常规方法还描述于WO 2007/070538的第41-45页。用于制备IgG1抗体的方法描述于例如WO 2007/070538中的第74ff页的实施例6。允许确定抗体在与它的抗原结合以后的内化的方法是技术人员已知的，且描述于例如WO 2007/070538的第80页。技术人员能够使用在WO 2007/070538中描述的方法，所述方法已经被用于制备碳酸酐酶IX(Mn)抗体，其与具有不同靶分子特异性的抗体的制备类似。
EGFR抗体
结合癌症靶分子EGFR的抗体的例子是西妥昔单抗(INN编号7906)、帕尼单抗(INN编号8499)和尼妥珠单抗(INN编号8545)。西妥昔单抗(Drug Bank登录号DB00002)是在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中生产的一种嵌合的抗-EGFR1抗体，且由ImClone Systems Inc/Merck KgaA/Bristol-Myers Squibb Co.销售。西妥昔单抗被指示用于治疗转移性的、表达EGFR的、具有野生型K-Ras基因的结肠直肠癌。它具有10-10M的亲和力。
序列：
西妥昔单抗轻链(κ)：
DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
西妥昔单抗重链：
QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
帕尼单抗(INN编号8499)(Drug Bank登录号DB01269)是一种特异性地结合人EGF受体1的重组单克隆人IgG2抗体，且由Abgenix/Amgen销售。帕尼单抗源自转基因小鼠(XenoMouse)的免疫接种。这些小鼠能够生产人免疫球蛋白(轻链和重链)。选择一种特异性的B-细胞克隆，其生产针对EGFR的抗体，且该克隆被CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)永生化。这些细胞现在被用于生产100％人抗体。帕尼单抗被指示用于治疗表达EGFR的、转移性的结肠直肠癌，该癌对使用氟嘧啶、奥沙利铂和伊立替康的化学疗法治疗具有抗性。它具有10-11M的亲和力。
序列：
帕尼单抗轻链(κ)：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQHFDHLPLAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
帕尼单抗重链：
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSVSSGDYYWTWIRQSPGKGLEWIGHIYYSGNTNYNPSLKSRLTISIDTSKTQFSLKLSSVTAADTAIYYCVRDRVTGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
尼妥珠单抗(INN编号8545)(EP 00586002，EP 00712863)是特异性地结合人EGF受体1的人源化的单克隆IgG1抗体，且由YM BioScienecs Inc.(Mississauga加拿大)销售。它在非分泌性的NSO细胞(哺乳动物细胞系)中生产。尼妥珠单抗被批准用于治疗头和颈肿瘤、高度恶性星形细胞瘤和多形胶质母细胞瘤(不是在欧洲和美国)和胰腺癌(罕用药，EMA)。它具有10-8M的亲和力。
EGFR抗体的其它实施方案如下：
·扎芦木单抗/2F8/HuMax-EGFr，得自Genmab A/S(WO 02/100348，WO 2004/056847，INN编号8605)
·奈昔木单抗/11F8，ImClone/IMC-11F8，得自ImClone Systems Inc.[Eli Lilly和Co](WO 2005/090407(EP 01735348-A1，US 2007/0264253-A1，US 7,598,350，WO 2005/090407-A1)，INN编号9083)
·马妥珠单抗/抗-EGFR MAb，Merck KGaA/抗-EGFR MAb，Takeda/EMD 72000/EMD-6200/EMD-72000和EMD-55900/MAb 425/单克隆抗体425，得自Merck KGaA/Takeda(WO 92/15683，INN编号8103(马妥珠单抗))
·RG-7160/GA-201/GA201/R-7160/R7160/RG7160/RO-4858696/RO-5083945/RO4858696/RO5083945，得自Glycart Biotechnology AG(Roche Holding AG)(WO 2010/112413-A1，WO 2010/115554)
·GT-MAB 5.2-GEX/CetuGEX，得自Glycotope GmbH(WO 2008/028686-A2(EP 01900750-A1，EP 01911766-A1，EP 02073842-A2，US 2010/0028947-A1)
·ISU-101，得自Isu Abxis Inc(ISU Chemical Co Ltd)/Scancell(WO 2008/004834-A1)
·ABT-806/mAb-806/ch-806/抗-EGFR单克隆抗体806，得自Ludwig Institute for Cancer Research/Abbott/Life Science Pharmaceuticals(WO 02/092771，WO 2005/081854和WO 2009/023265)
·SYM-004(由2种嵌合IgG1抗体(992和1024)组成)，得自Symphogen A/S(WO 2010/022736-A2)
·MR1-1/MR1-1KDEL，得自IVAX Corp(Teva Pharmaceutical Industries Ltd)(Duke University)，(专利：WO2001/062931-A2)
·针对缺失突变体的抗体，EGFRvIII，得自Amgen/Abgenix(WO 2005/010151，US 7,628,986)
·SC-100，得自Scancell Ltd(WO 01/088138-A1)
·MDX-447/EMD 82633/BAB-447/H 447/MAb，EGFR，Medarex/Merck KgaA，得自Bristol-Myers Squibb(US)/Merck KGaA(DE)/Takeda(JP)、(WO 91/05871，WO 92/15683)
·抗-EGFR-Mab，得自Xencor(WO 2005/056606)
·DXL-1218/抗-EGFR单克隆抗体(癌症)，InNexus，得自InNexus Biotechnology Inc.，Pharmaprojects PH048638
在一个优选实施方案中，所述抗-EGFR抗体选自：西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗、扎芦木单抗、奈昔木单抗、马妥珠单抗、RG-716、GT-MAB 5.2-GEX、ISU-101、ABT-806、SYM-004、MR1-1、SC-100、MDX-447和DXL-1218。
在一个特别优选的实施方案中，所述抗-EGFR抗体选自：西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗、扎芦木单抗、奈昔木单抗和马妥珠单抗。
技术人员知晓可以用于借助于序列变异从上述抗体的CDR区域制备其它抗体的方法，这些其它抗体对靶分子具有类似的或更好的亲和力和/或特异性。
在另一个实施方案中，所述抗-EGFR抗体或结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗体或结合抗原的抗体片段，其包含下述抗体之一的轻链的3个CDR区域和重链的3个CDR区域：西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗、扎芦木单抗、奈昔木单抗、马妥珠单抗、RG-716、GT-MAB 5.2-GEX、ISU-101、ABT-806、SYM-004、MR1-1、SC-100、MDX-447和DXL-1218。
在另一个实施方案中，所述抗-EGFR抗体或结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗体或结合抗原的抗体片段，其包含下述抗体之一的轻链的3个CDR区域和重链的3个CDR区域：西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗、扎芦木单抗、奈昔木单抗、马妥珠单抗。
碳酸酐酶IX抗体
在WO 2007/070538-A2(例如权利要求1-16)中描述了结合癌症靶分子碳酸酐酶IX的抗体的例子。
在一个优选实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体或结合抗原的抗体片段选自：抗-碳酸酐酶IX抗体或结合抗原的抗体片段3ee9(在WO 2007/070538-A2中的权利要求4(a))、3ef2(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(b))、1e4(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(c))、3a4(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(d))、3ab4(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(e))、3ah10(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(f))、3bb2(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(g))、1aa1(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(h))、5a6(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(i))和5aa3(在WO2007/070538-A2中的权利要求4(j))。
在一个优选实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体或结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体3ee9的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体3ef2的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体1e4的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体3a4的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体3ab4的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体3ah10的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体3bb2的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体1aa1的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体5a6的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)，和
这样的抗-碳酸酐酶IX抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体5aa3的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列(得自WO 2007/070538-A2)。
在这里指出的CDR区域的序列公开在WO 2007/070538-A2的第128-130页的图2a-2c中。
在一个优选实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体或结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第137页的图4b中所指示的抗体3ee9的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第138页的图4c和第137页的图4b中所指示的抗体3ef2的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第136页的图4a中所指示的抗体1e4的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第136页的图4a中所指示的抗体3a4的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第136页的图4a中所指示的抗体3ab4的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第136页的图4a中所指示的抗体3ah10的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第137页的图4b中所指示的抗体3bb2的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第136页的图4a中所指示的抗体1aa1的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第137页的图4b中所指示的抗体5a6的可变轻链和可变重链的氨基酸序列，和
这样的抗体或抗原结合片段，其包含如在WO 2007/070538-A2中的第137页的图4b中所指示的抗体5aa3的可变轻链和可变重链的氨基酸序列。
在一个特别优选的实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体是得自WO 2007/070538-A2的抗体3ee9。
在一个特别优选的实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体或结合抗原的抗体片段包含：抗体3ee9的可变重链的CDR区域的氨基酸序列(VH3-CDR1：GFTFSSYGMS；VH3-CDR2：GISSLGSTTYYADSVKG；vH3-CDR3：TGSPGTFMHGDH，参见图2a，WO2007070538-A2中的第128页)和抗体3ee9的可变轻链的CDR区域的氨基酸序列(VLk1-CDR1：RASQDINNYLS；VLk1-CDR2：YGASNLQS；VLk1-CDR3：QQYYGRPT，参见图2b，WO2007070538-A2中的第129页)。
在一个特别优选的实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体或结合抗原的抗体片段包含：抗体3ee9的可变重链的氨基酸序列
(VH3：ELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVSGISSLGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGSPGTFMHGDHWGQGTLVTVSS，参见图4b，WO 2007070538-A2中的第137页)和抗体3ee9的可变轻链的氨基酸序列
(VLk1：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRaSQDINNYLSWYQQKPGKAPKILIYGASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYYGRPTTFGQGTKVEIKRT，参见图4b，WO 2007070538-A2中的第137页)。
在一个优选实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体3ee9是IgG抗体。
在一个特别优选的实施方案中，所述抗-碳酸酐酶IX抗体3ee9是IgG1抗体(3ee9-IgG1)，
其中重链的氨基酸序列包含下述序列：
QVELVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVSGISSLGSTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTGSPGTFMHGDHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
且轻链的氨基酸序列包含下述序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLSWYQQKPGKAPKLLIYGASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYYGRPTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
抗-碳酸酐酶IX抗体3ee9-IgG1：
本发明的另一个方面提供了抗-碳酸酐酶IX抗体3ee9-IgG1。
C4.4a抗体：
根据本发明特别优选的结合剂是抗-C4.4a抗体，更具体地是人或人源化的抗-C4.4a抗体。所述抗体优选地具有至少10-7M的亲和力(作为Kd值；换而言之，优选具有小于10-7M的Kd值的那些)，优选至少10-8M，更优选地在10-9M至10-11M的范围内。例如，借助于表面等离子体共振光谱法，可以确定Kd值。
本发明的抗体-药物缀合物同样表现出在这些范围内的亲和力。所述亲和力优选地基本上不受药物缀合影响(一般而言，所述亲和力降低小于1个数量级，换而言之，例如，至多从10-8M至10-7M)。
根据本发明使用的抗体优选地对于高选择性而言也是显著的。当本发明的抗体表现出的对靶蛋白的亲和力比对独立的其它抗原(例如人血清白蛋白)的亲和力高至少2倍、优选5倍、或更优选10倍时，存在高选择性(所述亲和力可以例如借助于表面等离子体共振光谱法来确定)。
此外，使用的本发明的抗体优选地是交叉反应性的。为了能够促进和更好地解释临床前研究，例如毒理学或活性研究(例如在异种移植小鼠中)，有利的是，根据本发明使用的抗体不仅结合人靶蛋白，而且结合研究所用的物种的物种靶蛋白。在一个实施方案中，根据本发明使用的抗体除了对人靶蛋白具有交叉反应性以外，还对至少一种其它物种的靶蛋白具有交叉反应性。对于毒理学和活性研究而言，优选的是，使用啮齿类动物、狗和非人灵长类动物科的物种。优选的啮齿动物物种是小鼠和大鼠。优选的非人灵长类动物是恒河猴、黑猩猩和长尾猕猴。
在一个实施方案中，根据本发明使用的抗体除了对人靶蛋白具有交叉反应性以外，还对选自下述物种的至少一种其它物种的靶蛋白具有交叉反应性：小鼠、大鼠和长尾猕猴(成束猴)。根据本发明使用的特别优选的抗体除了对人靶蛋白具有交叉反应性以外，还至少对小鼠靶蛋白具有交叉反应性。优选的是这样的交叉反应性抗体，其对其它非人物种的靶蛋白的亲和力与对人靶蛋白的亲和力相差不超过50倍，更具体地是不超过10倍。
抗-C4.4a抗体描述于例如WO 01/23553或WO 2011070088中。根据本发明可以使用这些抗体。
下面描述了C4.4a抗体和抗原结合片段的例子。在表1中指示了抗体的序列，每一行再现了在第1列中列出的抗体各自的可变轻链和可变重链各自的CDR氨基酸序列。在每种情况下，还指示了在第1列中指出的抗体的可变轻链和可变重链的氨基酸序列以及所述抗体的核酸序列。
在一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段会结合C4.4a的S1结构域S1(SEQ ID NO：1的氨基酸的位置1-85)。
在一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段与人C4.4a(SEQ ID NO：1)和鼠C4.4a(SEQ ID NO：2)具有交叉反应性。
在一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或其结合抗原的抗体片段在结合表达C4.4a的细胞以后被所述细胞内化。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段会与抗体M31-B01和/或与抗体M20-D02-S-A竞争对C4.4a的结合。抗体M31-B01和M20-D02-S-A会竞争对C4.4a的结合。针对B01-12的抗体B01-1借助于亲和力成熟从M31-B01制备，且与M31-B01竞争对C4.4a的结合。针对D02-13的抗体D02-1借助于亲和力成熟从M20-D02-S-A制备，且与M20-D02-S-A竞争对C4.4a的结合。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段包含在表1或表2中给出的至少1个、2个或3个CDR氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段包含在表1或表2中给出的抗体的至少1个、2个或3个CDR氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段包含在表1或表2中给出的抗体的可变轻链的至少1个、2个或3个CDR氨基酸序列和可变重链的至少1个、2个或3个CDR氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段与在表1或表2中给出的抗体的可变轻链的CDR氨基酸序列和可变重链的CDR氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％、90％或95％同一性。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段的CDR序列包含：
与CDR序列SEQ ID NO：297(CDR H1)、SEQ ID NO：298(CDR H2)和SEQ ID NO：299(CDR H3)一致的重链CDR序列，和与CDR序列SEQ ID NO：300(CDR L1)，SEQ ID NO：22(CDR L2)和SEQ ID NO：301(CDR L3)一致的轻链CDR序列，或者
与CDR序列SEQ ID NO：302(CDR H1)、SEQ ID NO：303(CDR H2)和SEQ ID NO：304(CDR H3)一致的重链CDR序列，和与CDR序列SEQ ID NO：305(CDR L1)、SEQ ID NO：306(CDR L2)和SEQ ID NO：307(CDR L3)一致的轻链CDR序列。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段与在表1或表2中给出的抗体的可变轻链和可变重链具有至少50％、60％、70％、80％、90％或95％同一性。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段包含在表1或表2中给出的抗体的可变轻链的3个CDR氨基酸序列和可变重链的3个CDR氨基酸序列。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段包含在表1或表2中给出的抗体的可变轻链和/或可变重链。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体或结合抗原的抗体片段包含在表1或表2中给出的抗体的可变轻链和可变重链。
在一个优选实施方案中，所述C4.4a抗体和所述结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：75-77代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：78-80代表的可变轻链的CDR序列(B01-10)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：5、9和13代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：17、21和25代表的可变轻链的CDR序列(M31-B01)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：6、10和14代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：18、22和26代表的可变轻链的CDR序列(M20-D02-S-A)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：7、11和15代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：19、23和27代表的可变轻链的CDR序列(M60-G03)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：8、12和16代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：20、24和28代表的可变轻链的CDR序列(36-H02)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：45-47代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：48-50代表的可变轻链的CDR序列(B01-3)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：55-57代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：58-60代表的可变轻链的CDR序列(B01-5)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：65-67代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：68-70代表的可变轻链的CDR序列(B01-7)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：85-87代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：88-90代表的可变轻链的CDR序列(B01-12)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：95-97代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：98-100代表的可变轻链的CDR序列(D02-4)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：105-107代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：108-110代表的可变轻链的CDR序列(D02-6)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：115-117代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：118-120代表的可变轻链的CDR序列(D02-7)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：125-127代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：128-130代表的可变轻链的CDR序列(D02-11)，
和这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：135-137代表的可变重链的CDR序列，且其包含由序列SEQ ID NO：138-140代表的可变轻链的CDR序列(D02-13)。
在一个优选实施方案中，所述C4.4a抗体和所述结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：81代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：82代表的可变轻链的氨基酸序列(B01-7)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：33代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：29代表的可变轻链的氨基酸序列(M31-B01)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：34代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：30代表的可变轻链的氨基酸序列(M20-D02S-A)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：35代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：31代表的可变轻链的氨基酸序列(M60-G03)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：36代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：32代表的可变轻链的氨基酸序列(M36-H02)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：51代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：52代表的可变轻链的氨基酸序列(B01-3)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：61代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：62代表的可变轻链的氨基酸序列(B01-5)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：71代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：72代表的可变轻链的氨基酸序列(B01-7)
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：91代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：92代表的可变轻链的氨基酸序列(B01-12)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：101代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：102代表的可变轻链的氨基酸序列(D02-4)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：111代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：112代表的可变轻链的氨基酸序列(D02-6)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：121代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：122代表的可变轻链的氨基酸序列(D02-7)，
这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：131代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：132代表的可变轻链的氨基酸序列(D02-11)，
和这样的抗体，其包含由序列SEQ ID NO：141代表的可变重链的氨基酸序列，且其包含由序列SEQ ID NO：142代表的可变轻链的氨基酸序列(D02-13)。
在另一个实施方案中，所述抗-C4.4a抗体包含在表2中给出的抗体的轻链和重链。
在一个优选实施方案中，所述抗-C4.4a抗体包含在表2中给出的抗体的轻链和重链。
在一个特别优选的实施方案中，所述C4.4a抗体选自：
这样的抗体，其包含由SEQ ID NO：346代表的轻链的氨基酸序列，且其包含由SEQ ID NO：347代表的重链的氨基酸序列(M31-B01)，
这样的抗体，其包含由SEQ ID NO：352代表的轻链的氨基酸序列，且其包含由SEQ ID NO：353代表的重链的氨基酸序列(B01-3)，
这样的抗体，其包含由SEQ ID NO：364代表的轻链的氨基酸序列，且其包含由SEQ ID NO：365代表的重链的氨基酸序列(B01-10)，和
这样的抗体，其包含由SEQ ID NO：382代表的轻链的氨基酸序列，且其包含由SEQ ID NO：383代表的重链的氨基酸序列(D02-6)。
表1：C4.4a抗体的序列
表2：C4.4a抗体的轻链和重链的序列
抗-C4.4a抗体IgG：
本发明的另一个方面提供了抗-C4.4a IgG1抗体，其包含在表2中给出的抗体的轻链和重链的氨基酸序列。
间皮素抗体
本发明的另一个方面提供了新的抗-间皮素抗体(MF-Ta)，其氨基酸序列包含由序列SEQ ID NO：398(HCDR1)、SEQ ID NO：399(HCDR2)和SEQ ID NO：400(HCDR3)代表的可变重链的CDR序列和由序列SEQ ID NO：401(LCDR1)、SEQ ID NO：402(LCDR2)和SEQ ID NO：403(LCDR3)代表的可变轻链的CDR序列。
在一个优选实施方案中，抗-间皮素抗体MF-Ta或结合抗原的抗体片段的氨基酸序列包含由序列SEQ ID NO：404代表的可变重链序列和由序列SEQ ID NO：405代表的可变轻链序列。在一个优选实施方案中，抗-间皮素抗体MF-Ta或结合抗原的抗体片段的氨基酸序列包含由核酸序列SEQ ID NO：406编码的可变重链序列和由核酸序列SEQ ID NO：407编码的可变轻链序列。
在一个特别优选的实施方案中，抗-间皮素抗体MF-Ta的氨基酸序列包含由序列SEQ ID NO：408代表的重链序列和由序列SEQ ID NO：409代表的轻链序列。
在一个特别优选的实施方案中，抗-间皮素抗体MF-Ta的氨基酸序列包含由核酸序列SEQ ID NO：410编码的重链序列和由核酸序列SEQ ID NO：411编码的轻链序列。
结合癌症靶分子间皮素的抗体的其它例子是技术人员已知的，且描述于例如WO 2009/068204中，并且可以用于本发明的结合剂-药物缀合物。
在结合剂-药物缀合物的一个实施方案中，所述结合剂是抗-间皮素抗体或结合抗原的抗体片段，其中所述抗体结合间皮素和表现出不变的结合。
在结合剂-药物缀合物的一个实施方案中，抗-间皮素抗体或结合抗原的抗体片段包含在WO 2009/068204-A1(表7；第61-63页)中描述的抗体的轻链的3个CDR区域的氨基酸序列和重链的3个CDR区域的氨基酸序列。
在一个优选实施方案中，所述间皮素抗体或结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MF-Ta的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MF-J(WO2009068204-A1；表7；第61页)的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MOR06640(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MF-226(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列，和
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MOR06626(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的轻链的3个CDR区域的序列和重链的3个CDR区域的序列。
在一个特别优选的实施方案中，所述间皮素抗体或结合抗原的抗体片段选自：
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MF-Ta的可变轻链序列和可变重链序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MF-J(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的可变轻链序列和可变重链序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MOR06640(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的可变轻链序列和可变重链序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MF-226(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的可变轻链序列和可变重链序列，
这样的抗-间皮素抗体或其结合抗原的抗体片段，其包含抗体MOR06626(WO 2009/068204-A1；表7；第61页)的可变轻链序列和可变重链序列。
其它抗体：
结合癌症靶分子Her2的抗体的一个例子是曲妥珠单抗(Genentech)。曲妥珠单抗是一种被用于治疗尤其是乳腺癌的人源化抗体。结合癌症靶分子CD20的抗体的一个例子是利妥昔单抗(Genentech)。利妥昔单抗(CAS编号：174722-31-7)是一种被用于治疗非霍奇金淋巴瘤的嵌合抗体。结合癌症靶分子CD52的抗体的一个例子是阿仑珠单抗(G酶)。阿仑珠单抗(CAS编号：216503-57-0)是一种被用于治疗慢性淋巴性白血病的人源化抗体。
除了曲妥珠单抗(INN 7637，CAS No：RN：180288-69-1)和帕妥珠单抗(Cas No：380610-27-5)以外，结合HER2的抗体的其它例子是在WO 2009/123894-A2、WO 200/8140603-A2或WO 2011/044368-A2中公开的抗体。抗-HER2缀合物的一个例子是曲妥珠单抗-emtansine(INN No.9295)。
结合癌症靶分子CD30且可以用于治疗癌症(例如霍奇金淋巴瘤)的抗体的例子是brentuximab、伊妥木单抗和在WO 2008/092117、WO 2008/036688或WO 2006/089232中公开的抗体。抗-CD30缀合物的一个例子是Brentuximab vedotine(INN No.9144)。
结合癌症靶分子CD22且可以用于治疗癌症(例如淋巴瘤)的抗体的例子是inotuzumab或依帕珠单抗。抗-CD22缀合物的例子是inotuzumab ozagamycin(INN No.8574)或抗-CD22-MMAE和抗-CD22-MC-MMAE(CAS RN：139504-50-0和474645-27-7)。
结合癌症靶分子CD33且可以用于治疗癌症(例如白血病)的抗体的例子是吉姆单抗或林妥珠单抗(INN 7580)。抗-CD33缀合物的一个例子是吉姆单抗-ozagamycin。
结合癌症靶分子NMB且可以用于治疗癌症(例如黑素瘤或乳腺癌)的抗体的一个例子是glembatumumab(INN 9199)。抗-NMB缀合物的一个例子是Glembatumumab vedotine(CAS RN：474645-27-7)。
结合癌症靶分子CD56且可以用于治疗癌症(例如多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、MCC或卵巢癌)的抗体的一个例子是lorvotuzumab。的一个例子抗-CD56缀合物is lorvotuzumab mertansine(CAS RN：139504-50-0)。
结合癌症靶分子CD70且可以用于治疗癌症(例如非霍奇金淋巴瘤或肾细胞癌)的抗体的例子公开于WO 2007/038637-A2或WO 2008/070593-A2。抗-CD70缀合物的一个例子是SGN-75(CD70MMAF)。
结合癌症靶分子CD74且可以用于治疗癌症(例如多发性骨髓瘤)的抗体的一个例子是米拉珠单抗。抗-CD74缀合物的一个例子是米拉珠单抗-多柔比星(CAS RN：23214-92-8)。
结合癌症靶分子CD19且可以用于治疗癌症(例如非霍奇金淋巴瘤)的抗体的一个例子公开于WO 2008/031056-A2。抗-CD19缀合物(SAR3419)的其它抗体和例子公开于WO 2008/047242-A2。
结合癌症靶分子粘蛋白-1且可以用于治疗癌症(例如非霍奇金淋巴瘤)的抗体的例子是clivatuzumab或在WO 2003/106495-A2、WO 2008/028686-A2中公开的抗体。抗-粘蛋白缀合物的例子公开于WO 2005/009369-A2。
结合癌症靶分子CD138及其缀合物且可以用于治疗癌症(例如多发性骨髓瘤)的抗体的例子公开于WO 2009/080829-A1、WO 2009/080830-A1。
结合癌症靶分子整联蛋白αV且可以用于治疗癌症(例如黑素瘤、肉瘤或癌)的抗体的例子是英妥木单抗(Cas RN：725735-28-4)、阿昔单抗(Cas-RN：143653-53-6)、埃达珠单抗(Cas-RN：892553-42-3)或在US 7,465,449、EP 19859-A1、WO 2002/012501-A1或WO 2006/062779-A2中公开的抗体。抗-整联蛋白αV缀合物的例子是英妥木单抗-DM4和在WO 2007/024536-A2中公开的其它ADC。
结合癌症靶分子TDGF1且可以用于治疗癌症的抗体的例子是在WO 02/077033-A1、US 7、318、924、WO 2003/083041-A2和WO 2002/088170-A2中公开的抗体。抗-TDGF1缀合物的例子公开于WO 2002/088170-A2。
结合癌症靶分子PSMA且可以用于治疗癌症(例如前列腺癌)的抗体的例子是在WO 97/35616-A1、WO 99/47554-A1和WO 01/009192-A1中公开的抗体。抗-PSMA缀合物的例子公开于WO 2009/026274-A1。
结合癌症靶分子EPHA2、可以用于制备缀合物且可以用于治疗癌症的抗体的例子公开于WO 2004/091375-A2。
结合癌症靶分子SLC44A4、可以用于制备缀合物且可以用于治疗癌症(例如胰腺癌或前列腺癌)的抗体的例子公开于WO 2009/033094-A2和US 2009/0175796-A1。
结合癌症靶分子HLA-DOB的抗体的一个例子是抗体lym-1(Cas-RN：301344-99-0)，其可以用于治疗癌症，例如非霍奇金淋巴瘤。抗-HLA-DOB缀合物的例子公开于例如WO 2005/081711-A2。
结合癌症靶分子VTCN1、可以用于制备缀合物且可以用于治疗癌症(例如卵巢癌、胰腺、肺或乳腺癌)的抗体的例子公开于WO 2006/074418-A2。
本发明的化合物具有有价值的药理学性能，且可以用于预防和治疗人类和动物的疾病。
本发明的式(Ia)的结合剂-药物缀合物(ADC)表现出对肿瘤细胞的较高的且特异性的细胞毒性活性，这可以基于在实验部分(C-1.至C-6.)中阐述的测定来证实。本发明的式(Ia)的结合剂-药物缀合物(ADC)的这种较高的且特异性的细胞毒性活性通过用接头对新的N，N-二烷基耳他汀衍生物和结合剂的适当组合来实现，所述接头不仅表现出酶促地、水解地或还原地可切割的预定断裂点(用于释放毒性基团)，而且没有这样的预定断裂点。更具体地，通过使用稳定接头，非常特异性地限制对肿瘤细胞的活性，所述接头不具有酶促地、水解地或还原地可切割的预定断裂点(用于释放毒性基团)，并且其在ADC被摄入肿瘤细胞中以后和在抗体的完全细胞内酶促断裂以后仍然保持完全或部分完整性。ADC和稳定接头之间的相容性预先假定，尤其是，可以以足够的效力形成在细胞内形成的代谢物，其能够到达它们的靶标，且能够在那里以足够的效能发挥它们对靶标的抗增殖活性，无需预先再次用转运蛋白等蛋白对肿瘤细胞实现。在本发明的式(Ia)的化合物已经被摄入以后，在细胞内形成的代谢物表现出降低的作为转运蛋白等蛋白的底物潜力，由此抑制它们在体循环中的再分布，并从而触发毒性基团自身的潜在副作用。
ADC与稳定接头化学试剂和与感兴趣的靶标之间的相容性，连同在相对较低的程度上代表转运蛋白等蛋白的底物的代谢物，会提供扩大的治疗窗。
更具体地，本发明的式(Ia)的结合剂-药物缀合物对表达C4.4a的肿瘤细胞表现出较高的且特异性的细胞毒性活性。同时，对不表达C4.4a的肿瘤细胞的活性显著更弱。
基于性质的这些概况，因此本发明化合物通常在一定程度上适合于治疗人和哺乳动物的过度增生性疾病。所述化合物在一方面能够抑制、阻断、减少或降低细胞增殖和细胞分裂，在另一方面，其可增加细胞凋亡。
可使用本发明化合物治疗的过度增生性疾病具体包括癌症和肿瘤疾病组。在本发明范围内，具体而言，所述疾病应理解为包括、但不限于以下疾病：乳腺癌和乳腺肿瘤(导管和小叶形式，也是原位的)、呼吸道肿瘤(小细胞癌和非小细胞癌，支气管癌)、脑肿瘤(例如，脑干的脑肿瘤和下丘脑的脑肿瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤以及神经外胚层肿瘤和松果体肿瘤)、消化器官的肿瘤(食道、胃、胆囊、小肠、大肠、直肠)、肝肿瘤(包括肝细胞癌、胆管细胞癌和混合的肝细胞和胆管细胞癌)、头部和颈部区域的肿瘤(喉、下咽、鼻咽、口咽、唇和口腔)、皮肤肿瘤(鳞状上皮癌、卡波西肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑色素瘤的皮肤癌)、软组织肿瘤(包括软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤)、眼睛的肿瘤(包括眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤)、内分泌腺和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺、胰腺和唾液腺)的肿瘤、泌尿道的肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤)以及生殖器官的肿瘤(女性的子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌，男性的前列腺癌和睾丸癌)。这些还包括呈固体形式的和作为循环血细胞的增殖性血液疾病，例如淋巴瘤、白血病和骨髓增生性疾病，例如，急性髓系白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和毛细胞白血病，以及艾滋病相关的淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和中枢神经系统的淋巴瘤。
抗-CA9结合剂-药物缀合物的优选过度增生性疾病
可以优选地使用本发明的化合物进行治疗的过度增生性疾病是过表达CA9的肿瘤、乳腺癌和乳腺肿瘤(例如导管和小叶形式，也是原位的)；呼吸道肿瘤(例如小细胞癌和非小细胞癌、支气管癌)，优选地包括非小细胞肺癌；脑肿瘤(例如脑干的脑肿瘤和下丘脑的脑肿瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤和/或神经外胚层肿瘤和松果体肿瘤)；消化器官的肿瘤(食道、胃、胆囊、小肠、大肠、直肠)，更优选地包括胃肿瘤和肠肿瘤；肝肿瘤(包括肝细胞癌、胆管细胞癌和混合的肝细胞和胆管细胞癌)；头部和颈部区域的肿瘤(例如喉、下咽、鼻咽、口咽、唇、口腔、舌和食道)；泌尿道的肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤)，更优选地包括肾和膀胱的肿瘤；和/或生殖器官的肿瘤(女性的子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌和/或男性的前列腺癌和睾丸癌)，更优选地包括子宫颈癌和子宫癌。
抗-EGFR结合剂-药物缀合物的优选过度增生性疾病
可以优选地使用本发明的化合物进行治疗的过度增生性疾病是过表达EGFR的肿瘤、呼吸道肿瘤(例如小细胞癌和非小细胞癌、支气管癌)，优选地包括非小细胞肺癌；消化器官的肿瘤(例如食道、胃、胆囊、小肠、大肠、直肠)，特别地包括肠肿瘤；内分泌腺和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺、胰腺和唾液腺)的肿瘤，优选地包括胰腺肿瘤；头部和颈部区域的肿瘤(例如喉、下咽、鼻咽、口咽、唇、口腔、舌和食道)；和/或神经胶质瘤。
抗-间皮素结合剂-药物缀合物的优选过度增生性疾病
可以优选地使用本发明的化合物进行治疗的过度增生性疾病是过表达间皮素的肿瘤、生殖器官的肿瘤(女性的子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌和/或男性的前列腺癌和睾丸癌)，优选地包括卵巢癌；内分泌腺和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺、胰腺和唾液腺)的肿瘤，优选地包括胰腺肿瘤；呼吸道肿瘤(例如小细胞癌和非小细胞癌、支气管癌)，优选地包括非小细胞肺癌；和/或间皮瘤。
抗-C4.4结合剂-药物缀合物的优选过度增生性疾病
可以优选地使用本发明的化合物进行治疗的过度增生性疾病是过表达C4.4a的肿瘤、鳞状上皮癌(例如子宫颈、外阴、阴道的鳞状上皮癌，肛门管、子宫内膜、输卵管、阴茎、阴囊的鳞状上皮癌，食道、乳房的鳞状上皮癌，膀胱的鳞状上皮癌，胆管的鳞状上皮癌，子宫内膜、子宫和卵巢的鳞状上皮癌)；乳腺癌和乳腺肿瘤(例如导管和小叶形式，也是原位的)；呼吸道肿瘤(例如小细胞癌和非小细胞癌、支气管癌)，优选地包括非小细胞肺癌、肺鳞状上皮癌和肺腺癌；头部和颈部区域的肿瘤(例如喉、下咽、鼻咽、口咽、唇、口腔、舌和食道的肿瘤，头颈区域的鳞状上皮癌)；泌尿道的肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管的肿瘤，膀胱的鳞状上皮癌)，更优选地包括肾和膀胱的肿瘤；皮肤肿瘤(鳞状上皮癌、卡波西肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑色素瘤的皮肤癌)，更优选地包括黑素瘤；内分泌腺和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺、胰腺和唾液腺)的肿瘤，优选地包括胰腺肿瘤；消化器官的肿瘤(例如食道、胃、胆囊、小肠、大肠、直肠)，特别地包括结肠直肠癌；和/或生殖器官的肿瘤(女性的子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌和/或男性的前列腺癌和睾丸癌)，更优选地包括子宫癌。
这些人类的确定地描述的疾病也可以与可比较的病原学一起发生在其它哺乳动物中，且可以用本发明的化合物进行治疗。
在本发明范围内，术语“治疗”或“处理”表示其常规含义，意在表示照顾和护理患者，目的在于对抗、减轻、减弱、缓解疾病或健康异常，改善由该疾病对生活状况造成的损害(例如，患有癌性疾病)。
本发明此外提供了本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的用途。
本发明此外提供了本发明的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病。
本发明此外提供了本发明的化合物在用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的方法中的用途。
本发明此外提供了一种用于治疗和/或预防疾病、尤其是上述疾病的方法，其中使用有效量的至少一种本发明的化合物。
本发明的抗-C4.4结合剂-药物缀合物被优选地用于治疗患者的癌症，其中要治疗的患者的癌细胞具有C4.4a表达。更优选地将治疗施用给这样的患者，其癌细胞中的C4.4a表达高于健康细胞。
一种为癌症治疗鉴别对抗-C4.4结合剂-药物缀合物具有有利应答的患者的方法包括，确定患者癌细胞中的C4.4a表达。在一个实施方案中，通过C4.4a基因表达分析，确定C4.4a表达。技术人员知晓基因表达分析的方法，例如，RNA检测、定量或定性聚合酶链式反应或荧光原位杂交(FISH)。在另一个优选实施方案中，借助于使用抗-C4.4a抗体的免疫组织化学，确定C4.4a表达。优选地在甲醛固定的组织上进行免疫组织化学。用于免疫组织化学中的抗体是也在缀合物中使用的相同抗体。用于免疫组织化学中的抗体是优选地特异性地识别C4.4a靶蛋白的第二抗体。
根据本发明的化合物可单独使用，或者如果需要的话，与一种或多种其它药理学活性物质联用，只要该联用不会导致不希望的和不可接受的副作用即可。因此，本发明还提供了药物，该药物包括至少一种本发明化合物以及一种或多种其它药物，具体而言，本发明药物用于治疗和/或预防上述疾病。
例如，本发明化合物可与已知的用于治疗癌性疾病的抗过度增生性、抑制细胞生长的或细胞毒性的物质联用。作为示例，联用中可提及的合适的药物为选自下组的药物：阿地白介素、阿仑膦酸、干扰素、阿利维A酸、别嘌醇、别嘌醇钠、帕洛诺司琼(aloxi)、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、甲磺酸多拉司琼、阿法达贝泊汀(aranesp)、阿格拉宾、三氧化二砷、阿诺新、5-氮胞苷、硫唑嘌呤、卡介苗(BCG)或tice种卡介苗(tice-BCG)、苯丁抑制素、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿苷、硼替佐米、白消安、降钙素、阿仑单抗(campath)、卡培他滨、卡铂、康士得、赛孚松(cefesone)、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯屈膦酸、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、枸橼酸柔红霉素脂质体(DaunoXome)、地卡特隆、磷酸地塞米松(Decadron phosphate)、戊酸雌二醇、地尼白介素2、甲基泼尼松龙、地洛瑞林、右丙亚胺、己烯雌酚、大扶康、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、屈大麻酚、DW-166HC、醋酸亮丙瑞林、拉布立酶(elitek)、盐酸表柔比星、阿瑞吡坦(emend)、表柔比星、红细胞生成素-α、促红细胞生成素(epogen)、依他铂、左旋咪唑、雌二醇片(estrace)、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、阿密磷定、依替膦酸、凡毕复、依托泊苷、法倔唑、法斯通(farstone)、非格司亭、非那雄胺、fligrastim、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、5-氟脱氧尿苷单磷酸、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟甲睾酮、氟他胺、福美坦、fosteabine、福莫司汀、氟维司群、Gammagard、吉西他滨、吉姆单抗、格列卫、卡氮芥糯米纸胶囊剂(gliadel)、戈舍瑞林、盐酸格拉司琼、组氨瑞林和美新、氢化可的松、赤式-羟基壬基腺嘌呤、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素-α、干扰素-α-2、干扰素-α-2α、干扰素-α-2β、干扰素-α-n1、干扰素-α-n3、干扰素-β、干扰素-γ-1α、白介素-2、甘乐能、易瑞沙、伊立替康、凯特瑞、硫酸香菇多糖、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、左旋叶酸钙盐、左甲状腺素钠、左甲状腺素钠片、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、氮芥、甲钴胺、醋酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素(Menest)、6-巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、氨基乙酰丙酸甲酯(Metvix)、米替福新、米诺环素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、曲洛司坦、多柔比星脂质体(Myocet)、奈达铂、聚乙二醇非格司亭(Neulasta)、奥普瑞白介素(Neumega)、优保津、尼鲁米特、诺瓦得士、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽、盐酸昂丹司琼、泼尼松龙(Orapred)、奥沙利铂、紫杉醇、泼尼松磷酸钠制剂(Pediapred)、培门冬酶、派罗欣、喷司他丁、溶血性链球菌制剂、盐酸毛果芸香碱、吡柔比星、普卡霉素、卟吩姆钠、泼尼莫司汀、泼尼松龙、泼尼松、倍美力、丙卡巴肼、阿法依泊汀(Procrit)、雷替曲塞、利比、依替膦酸铼-186、利妥昔单抗、罗荛愫、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱片(Salagen)、善宁、沙格司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、甲强龙、链佐星、氯化锶-89、左甲状腺素钠(Synthroid)、他莫昔芬、坦洛新、他索那敏、tastolactone、泰索帝、替西白介素、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮胶囊剂(Testred)、硫鸟嘌呤、塞替派、促甲状腺素、替鲁膦酸、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、甲氨蝶呤(Trexall)、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙、醋酸曲普瑞林、双羟萘酸曲普瑞林、优福定(UFT)、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、维鲁利秦、右雷佐生、净司他丁斯酯、枢复宁；ABI-007、acolbifen、actimmune、affinitak、氨基蝶呤、阿佐昔芬、阿索立尼、阿他美坦、阿曲生坦、阿伐他汀、BAY 43-9006(索拉非尼)、CCI-779、CDC-501、西乐葆、西妥昔单抗、克立那托、醋酸环丙孕酮、地西他滨、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺、艾特咔林、依氟鸟氨酸、依沙替康、芬维A胺、二盐酸组胺、组氨瑞林水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸、干扰素-γ、干扰素-PEG、伊沙匹隆、钥孔戚血蓝素、L-651582、兰瑞肽、拉索昔芬、libra、氯那法尼、米泼昔芬、米诺膦酸盐、MS-209、脂质体MTP-PE、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲塞、奥利美生、onko-TCS、osidem、聚谷氨酸紫杉醇、帕米膦酸二钠、PN-401、QS-21、夸西泮、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶(ranpirnas)、13-顺式-维甲酸(13-cis-retic acid)、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、特罗凯、二十二碳六烯酸紫杉醇、胸腺素-a-1、噻唑羧胺核苷、替匹法尼、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、transMID-107R、伐司朴达、伐普肽、伐拉尼布、维替泊芬、长春氟宁、Z-100、唑来膦酸和这些的组合。
在一个优选实施方案中，本发明化合物可与抗过度增生剂联用，作为示例(而非限制性)，所述抗过度增生剂可为选自下组的试剂：
氨鲁米特、L-门冬酰胺酶、硫唑嘌呤、5-氮胞苷、博来霉素、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、门冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、己烯雌酚、2′，2′-二氟脱氧胞苷、多西他赛、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、埃博霉素及其衍生物、赤式-羟基壬基腺嘌呤、炔雌醇、依托泊苷、磷酸氟达拉滨、5-氟脱氧尿苷、5-氟脱氧尿苷单磷酸、5-氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、六甲蜜胺、羟基脲、己酸羟孕酮、伊达比星、异环磷酰胺、干扰素、伊立替康、亚叶酸、洛莫司汀、氮芥、醋酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、6-巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰基乙酰基L-天冬氨酸(PALA)、普卡霉素、泼尼松龙、泼尼松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、司莫司汀、链佐星、他莫昔芬、替尼泊苷、丙酸睾酮、硫鸟嘌呤、塞替派、托泊替康、三甲基三聚氰胺、尿苷、长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨。
本发明化合物还可以非常有前景的方式与生物治疗剂例如抗体(例如阿伐他汀、rituxan、爱必妥、赫赛汀)联用。本发明化合物还在与针对血管生成的治疗(例如，与阿伐他汀、阿昔替尼、recentin、瑞戈非尼、索拉非尼或舒尼替尼)联用中实现积极效果。由于其有利的副作用的概况，还特别适合与蛋白酶体抑制剂和mTOR抑制剂的联用以及与抗激素和甾体代谢酶抑制剂的联用。
通常，通过本发明化合物与具有抑制细胞生长的或细胞毒性作用的其它试剂联用可追求以下目的：
·与使用单一药物治疗相比，在降低肿瘤生长速率、减少其尺寸或甚至使其完全消除方面，具有改进的活性；
·与单一治疗相比，以较低的剂量进行化疗的可能性；
·与单独给药相比，具有少量副作用且可耐受性更高的治疗的可能性；
·治疗更广范围的肿瘤疾病的可能性；
·实现对治疗较高的响应率；
·与目前标准治疗相比，患者的存活时间更长。
另外，本发明化合物还可用于与放射疗法和/或外科手术联用。
本发明还提供了药物，该药物包括至少一种本发明化合物，并且通常与一种或多种惰性、无毒、药学上合适的赋形剂一起，本发明还提供了该药物用于上述目的的用途。
本发明化合物可全身和/或局部作用。为此目的，可以以合适的方式给药，例如口服地、胃肠外地、经肺地、鼻地、舌下地、经舌地、含服地、直肠地、真皮地、透皮地、结膜地、经耳地或作为植入物或支架。
本发明化合物可以这些途径的合适给药形式进行给药。
根据现有技术，发挥快速释放和/或以改良方式释放本发明化合物以及以晶体和/或非晶化(amorphized)和/或溶解的形式包含本发明化合物功能的给药形式适合于口服给药，例如片剂(非包衣或包衣片剂、例如具有包衣的片剂，所述包衣耐受胃液或以延迟的方式溶解或是不溶的并控制本发明化合物的释放)、膜剂/扁剂(oblates)或片剂(其在口腔中快速分解)、膜剂/冻干剂、胶囊剂(例如硬的或软的明胶胶囊)、薄膜包衣片、粒剂、团剂、粉剂、乳剂、混悬剂、气溶胶或溶液剂。
可以不经过吸收步骤(例如静脉内、动脉内、心内、脊柱内或腰内)或同时包括吸收(例如肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)来实施胃肠道外给药。适合于胃肠道外给药的给药形式包括以溶液剂、混悬剂、乳剂、冻干剂或无菌粉剂的形式的注射和输注制剂。
对于其它给药途径，例如吸入药物形式(包括粉末吸入器，喷雾器)、滴鼻剂、溶液剂或喷剂、片剂、膜剂/扁剂或舌、舌下或颊给药的胶囊、栓剂、耳或眼制剂、阴道胶囊剂，水性混悬剂(乳液、振荡混合物)、亲脂性混悬剂、软膏、乳膏、透皮治疗系统(例如贴片)、乳、糊剂、泡沫剂、洒粉剂、植入物或支架是合适的。
优选口服和胃肠道外给药，特别是口服和静脉内给药。
本发明的化合物可转化为所述给药形式。这可以通过已知的方式，通过与惰性、无毒、药学上合适的赋形剂进行混合来实施。这些赋形剂包括、但不限于载体物质(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧山梨醇油酸酯)、粘结剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，例如抗坏血酸)、着色剂(例如，无机颜料，例如氧化铁)和味道和/或气味矫正剂。
通常而言，已证实在胃肠道外给药的情况下为了实现有效的结果，给药量约为0.001-1mg/kg体重是有益的，优选约0.01-0.5mg/kg体重。在口服给药的情况下，所述剂量约为0.01-100mg/kg体重，优选约0.01-20mg/kg体重，非常特别优选0.1-10mg/kg体重。
但是，根据以下情况可能需要发生与所述量的偏差，具体而言取决于体重、给药途径、对活性化合物的个体表现、制剂的特性和进行给药的时间点或间隔。因此，在某些情况下可能低于上述最小量即可，而在其它情况下必须超过所述上限。在给药量较大的情况下，可建议在一天内将其分配成几个单独剂量。
下面的工作实施例说明了本发明。本发明不限于所述实施例。
除非另有说明，以下试验和实施例中的百分比数值是重量百分数，份数是重量份。在每种情况下，液体/液体溶液的溶剂比、稀释比和浓度数据与体积有关。
A.实施例
缩写和首字母简略词：
A431NS 人肿瘤细胞系
A549 人肿瘤细胞系
ABCB1 ATP-结合盒亚家族B成员1(同义词P-gp和MDR1)
abs. 绝对
ADC 抗体-药物-缀合物
Ac 乙酰基
aq. 水性的，水溶液
ATP 腺苷三磷酸
BCRP 乳腺癌抗性蛋白，一种流出转运蛋白
Boc 叔丁氧基羰基
br. 宽(在NMR中)
Ex. 实施例
ca. 约，大约
CAIX 碳酸酐酶IX
CI 化学电离(MS中)
d 双峰(在NMR中)
d 天
TLC 薄层色谱法
DCI 直接化学电离(MS中)
dd 双峰的双峰(在NMR中)
DMAP 4-N，N-二甲基氨基吡啶
DME 1，2-二甲氧基乙烷
DMEM Dulbecco氏改良的伊格尔培养基(用于细胞培养的标准化营养培养基)
DMF N，N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DPBS，D-PBS，PBS Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水溶液
PBS＝DPBS＝D-PBS，pH 7.4，得自Sigma，NO.D8537
组成：
0.2g KCl
0.2g KH2PO4(无水)
8.0g NaCl
1.15g Na2HPO4(无水)
用H2O补至1l
dt 三重峰的双峰(在NMR中)
DTT DL-二硫苏糖醇
EDC N′-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐
EGFR 表皮生长因子受体
EI 电子碰撞电离(MS中)
ELISA 酶联免疫吸附测定
eq. 当量
ESI 电喷射电离(MS中)
ESI-MicroTofq ESI-MicroTofq(质谱仪的名称，其中Tof＝飞行时间，q＝四极子)
FCS 胎牛血清
Fmoc (9H-芴-9-基甲氧基)羰基
sat. 饱和的
GTP 鸟苷5′-三磷酸
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCT-116 人肿瘤细胞系
HEPES 4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-乙磺酸
HOAc 乙酸
HOBt 1-羟基-1H-苯并三唑水合物
HOSu N-羟基琥珀酰亚胺
HPLC 高压、高效液相色谱法
HT29 人肿瘤细胞系
IC50 半数最大抑制浓度
i.m. 肌肉内的，施用进肌肉内
i.v. 静脉内的，施用进静脉内
conc. 浓缩的
LC-MS 液相色谱法-质谱法联用
LLC-PK1细胞 Lewis肺癌猪肾细胞系
L-MDR 人MDR1转染的LLC-PK1细胞
m 多重峰(在NMR中)
MDR1 多药抗性蛋白1
min 分钟
MS 质谱法
MTT 3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四氮唑溴化物
NCI-H292 人肿瘤细胞系
NCI-H520 人肿瘤细胞系
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR 核磁共振光谱测定法
NMRI 小鼠品系，源自Naval Medical Research Institute(NMRI)
裸鼠 实验动物
NSCLC 非小细胞肺癌(非小细胞性的支气管癌)
PBS 磷酸盐缓冲盐水溶液
Pd/C 活性炭载钯
P-gp P-糖蛋白，一种转运蛋白蛋白质
PNGaseF 用于糖消除的酶
quant. 定量(对于收率)
quart 重峰(在NMR中)
quint 五重峰(在NMR中)
Rf 保留指数(对于TLC)
RT 室温
Rt 保留时间(对于HPLC)
s 单峰(在NMR中)
s.c. 皮下的，施用于皮肤下
SCC-4 人肿瘤细胞系
SCC-9 人肿瘤细胞系
SCID小鼠 具有重症联合免疫缺陷的实验小鼠
t 三重峰(在NMR中)
tert 叔
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
UV 紫外光谱测定法
v/v (溶液的)体积/体积比
z 苄氧基羰基
HPLC和LC-MS方法：
方法1(LC-MS)：
仪器：Waters Acquity SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ50mm x 1mm；洗脱液A：1l水+0.25ml 99％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A；流速：0.40ml/min；恒温箱：50℃；紫外检测：210-400nm。
方法2(LC-MS)：
仪器：Micromass QuattroPremier with Waters UPLC Acquity；柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9μ50mm x 1mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→0.1min 90％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；流速：0.33ml/min；恒温箱：50℃；紫外检测：210nm。
方法3(LC-MS)：
仪器：Micromass Quattro Micro MS with HPLC Agilent Series 1100；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ20mm x 4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 100％A→3.0min 10％A→4.0min 10％A→4.01min 100％A(流速2.5ml/min)→5.00min 100％A；恒温箱：50℃；流速：2ml/min；紫外检测：210nm。
方法4(LC-MS)：
MS仪器：Micromass ZQ；HPLC仪器：HP 1100Series；UV DAD；柱：Phenomenex Gemini 3μ30mm x 3.00mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→2.5min 30％A→3.0min 5％A→4.5min 5％A；流速：0.0min 1ml/min→2.5min/3.0min/4.5min 2ml/min；恒温箱：50℃；紫外检测：210nm。
方法5(HPLC)：
仪器：HP 1090Series II；柱：Merek Chromolith SpeedROD RP-18e，50mm x 4.6mm；前置柱：Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e，5mm x 4.6mm；注射体积：5μl；洗脱液A：70％的HClO4水溶液(4ml/升)，洗脱液B：乙腈；梯度：0.00min 20％B→0.50min 20％B→3.00min 90％B→3.50min 90％B→3.51min 20％B→4.00min 20％B；流速：5ml/min；柱温度：40℃。
方法6(HPLC)：
仪器：带有DAD 996的Waters 2695；柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e，50mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51450.0001，前置柱：Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e，5mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51470.0001，洗脱液A：70％的HClO4水溶液(4ml/升)，洗脱液B：乙腈；梯度：0.00min 5％B→0.50min 5％B→3.00min 95％B→4.00min 95％B；流速：5ml/min。
方法7(LC-MS)：
MS仪器：Waters ZQ；HPLC仪器：Agilent 1100Series；UV DAD；柱：Thermo Hypersll GOLD 3μ20mm x 4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml 50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 100％A→3.0min 10％A→4.0min 10％A→4.1min 100％A(流速2.5ml/min)；恒温箱：55℃；流速：2ml/min；紫外检测：210nm。
方法8(LC-MS)：
MS仪器：Waters ZQ；HPLC仪器：Agilent 1100Series；UV DAD；柱：Thermo Hypersil GOLD 3μ20mm x 4mm；洗脱液A：1l水+0.5ml50％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.5ml 50％浓度的甲酸；梯度：0.0min 100％A→2.0min 60％A→2.3min 40％A→3.0min 20％A→4.0min 10％A→4.2min 100％A(流速2.5ml/min)；恒温箱：55℃；流速：2ml/min；紫外检测：210nm。
方法9(LC-MS)：
仪器：Waters Acquity SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ50mm x 1mm；洗脱液A：1l水+0.25ml 99％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 95％A→6.0min 5％A→7.5min 5％A；恒温箱：50℃；流速：0.35ml/min；紫外检测：210-400nm。
方法10(HPLC)：
仪器：Agilent 1200Series；柱：Agilent Eclipse XDB-C18 5μ4.6mm x 150mm；前置柱：Phenomenex KrudKatcher Disposable Pre-Colnmb；注射体积：5μl；洗脱液A：1l水+0.01％三氟乙酸；洗脱液B：1l乙腈+0.01％三氟乙酸；梯度：0.00min 10％B→1.00min 10％B→1.50min 90％B→5.5min 10％B；流速：2ml/min；柱温度：30℃。
对于以下未明确描述其制备的所有反应物或试剂，其均从通常可得的来源市售获得。对于以下同样未描述其制备的所有其它反应物或试剂，并且其不是市售可得的或其来源不是通常可得的，给出了描述其制备方法的公开文献。
方法11(LC-MS)：
仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ30x 2mm；洗脱液A：1l水+0.25ml 99％浓度的甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25ml 99％浓度的甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A；恒温箱：50℃；流速：0.60ml/min；紫外检测：208-400nm。
方法12(HPLC)：
仪器：带有柱恒温箱和DAD的Agilent 1200Series；柱：Merck Chromolith SpeedROD RP-18e，50mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51450.0001；前置柱：Merck Chromolith Guard Cartridge Kit RP-18e，5mm x 4.6mm；Ord.No.：1.51470.0001；洗脱液A：70％的HClO4水溶液(4ml/升)，洗脱液B：乙腈；梯度：0.00min 5％B→0.50min 5％B→3.00min 95％B→4.00min 95％B；流速：5ml/min；柱温度：30℃。
方法13(LC-MS)：
MS仪器：Waters(Micromass)Quattro Micro；仪器HPLC：Agilent 1100Series；柱：YMC-Triart C18 3μ50x 3mm；洗脱液A：1l水+0.01mol碳酸铵，洗脱液B：1l乙腈；梯度：0.0min 100％A→2.75min 5％A→4.5min 5％A；恒温箱：40℃；流速：1.25ml/min；紫外检测：210nm。
起始化合物和中间体：
起始化合物1
(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(Boc-多拉脯氨酸)
可以根据文献方法通过各种途径制备标题化合物；参见，例如，Pettit等人，Synthesis 1996，719；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Vidal等人，Tetrahedron 2004，60，9715；Poncet等人，Tetrahedron 1994，50，5345。将其制备为游离酸或与二环己胺的1∶1盐。
起始化合物2a
(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯盐酸盐
(多拉异亮氨酸-OtBu x HCl)
可以根据文献方法通过各种途径制备标题化合物；参见，例如，Pettit等人，J.Org.Chem.1994，59，1796；Koga等人，Tetrahedron Lett.1991，32，2395；Shioiri等人，Tetrahedron Lett.1991，32，931；Shioiri等人，Tetrahedron 1993，49，1913。
起始化合物2b
(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯
(多拉异亮氨酸-OtBu)
与起始化合物2a类似地制备所述化合物，但是在没有加入1N盐酸下进行氢化。
起始化合物3
Nα-(叔丁氧基羰基)-N-羟基-L-苯基丙氨酰胺
通过文献方法(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994，59，4602)，制备标题化合物。
收率：750mg(理论值的75％)
LC-MS(方法3)：Rt＝1.67min；MS(ESIpos)：m/z＝281(M+H)+。
起始化合物4
1，2-噁唑烷盐酸盐
标题化合物可以通过文献方法(参见，例如，H.King，J.Chem.Soc.1942，432)来制备；它也是商购可得的。
起始化合物5
1，2-噁嗪烷盐酸盐
标题化合物可以通过文献方法(参见，例如，H.King，J.Chem.Soc.1942，432)来制备。
起始化合物6
2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯
通过文献方法(参见，例如，C.Johnson等人，Tetrahedron Lett.1998，39，2059)，可以制备Boc保护形式的标题化合物；通过三氟乙酸处理和随后中和，以常规方式实现去保护。
收率：149mg(理论值的89％)
起始化合物7
(1S，2R)-1-(羟基氨甲酰基)-2-苯基环丙基氨基甲酸叔丁酯
通过文献方法(A.Ritter等人，J.Org.Chem.1994，59，4602)，从商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸开始，制备标题化合物(C.Cativiela等人，Chirality 1999，11，583)。
收率：339mg(理论值的59％)
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝293(M+H)+。
中间体1
(3R，4S，5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酰基}(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯
将10.65g(41.058mmol)(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基氨基)庚酸叔丁酯(起始化合物2b)溶解于250ml二氯甲烷中，并将溶液冷却至-10℃。然后，在搅拌下，加入10.317g(41.058mmol)N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酸、16.866g(61.586mmol)2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)和28.6ml N，N-二异丙基乙胺，随后将混合物在室温搅拌20h。然后用二氯甲烷稀释反应混合物，并与饱和氯化钠溶液一起摇动2次，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用4∶1石油醚/乙酸乙酯作为洗脱液。浓缩对应的级分，并在高真空下干燥残余物过夜。得到10.22g(理论值的51％)标题化合物，为微黄色油。
HPLC(方法5)：Rt＝2.3min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.59min；MS(ESIpos)：m/z＝493(M+H)+。
中间体2
(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯
将500mg(1mmol)(3R，4S，5S)-4-[{N-[(苄氧基)羰基]-L-缬氨酰基}(甲基)氨基]-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯(中间体1)溶解在50ml甲醇中，并在加入100mg 10％活性炭载钯以后，在标准氢压力下在室温氢化1h。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。得到370mg(定量)标题化合物，为基本上无色的油。
HPLC(方法5)：Rt＝1.59min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝359(M+H)+。
中间体3
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4.64g(13.13mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸溶解在20ml DMF中，并接连地与4.28g(11.94mmol)(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯(中间体2)、2.75g(14.33mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和2.2g(14.33mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物不经进一步纯化直接用于下一阶段。
收率：9.1g(定量，60％纯度)
HPLC(方法5)：Rt＝2.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.99min；MS(ESIpos)：m/z＝694(M+H)+。
中间体4
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将9.1g粗产物N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体3)溶解于56.6ml二氯甲烷中，加入56.6ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌2h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过快速色谱法纯化剩余的残余物，使用二氯甲烷、3∶1二氯甲烷/乙酸乙酯和15∶5∶0.5二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇作为洗脱液。在纯化对应的级分和浓度以后，得到5.8g(理论值的86％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.3min；MS(ESIpos)：m/z＝638(M+H)+。
中间体5
(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯
将500mg(1.9mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸溶解在10ml DMF中，并接连地与466mg(3.8mmol)1，2-噁嗪烷盐酸盐(起始化合物5)、433mg(2.3mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、382mg(2.8mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和731mg(5.7mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到620mg(理论值的98％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.62min；MS(ESIpos)：m/z＝235(M-C4H8-CO2+H)+。
中间体6
(2S)-2-氨基-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐
将620mg(1.85mmol)(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯(中间体5)溶解于5ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，将剩余的残余物从水/乙腈低压冻干。以此方式，得到779mg(理论值的91％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝0.45min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝235(M+H)+。
中间体7
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
将360mg(1.25mmol)(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)溶解于10ml DMF中，并接连地与579.2mg(1.25mmol)(2S)-2-氨基-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体6)、714.5mg(1.88mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和655μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌16h。然后浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过首先与5％柠檬酸水溶液一起摇动、然后与5％碳酸氢钠水溶液一起摇动、随后与饱和氯化钠溶液一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用16：4二氯甲烷/甲醇作为洗脱液。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到503.5mg(理论值的74％)Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝504(M+H)+。
将503mg(1mmol)该中间体溶解于20ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并与二氯甲烷一起再蒸馏。用正戊烷使剩余的残余物从乙酸乙酯中沉淀，并倾析出溶剂。将如此得到的残余物溶解在水中，并通过与乙酸乙酯一起摇动进行萃取，随后将水相低压冻干。以此方式，得到462mg(理论值的89％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝1.53min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.57min；MS(ESIpos)：m/z＝404(M+H)+。
中间体8
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将51mg(0.08mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解在10ml DMF中，并加入0.5ml哌啶。在室温搅拌10min以后，在减压下浓缩反应混合物，并将残余物与二乙基醚一起搅拌。将不溶性的组分滤出，并用二乙基醚重复洗涤。，然后，将滤渣溶解于5ml二噁烷/水中，并用1N氢氧化钠溶液将溶液调节至pH 11。在超声处理下，分成几份加入共349mg(1.6mmol)二碳酸二叔丁酯，在此过程中，使溶液的pH保持在11。反应已经结束后，蒸发出二噁烷，并用柠檬酸将水溶液调节至2-3的pH。每次用50ml乙酸乙酯，将混合物萃取2次。合并有机相，经硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。将残余物溶解于二乙基醚中，并用戊烷沉淀标题化合物。通过倾析，除去溶剂。将残余物用戊烷消化几次，最后在高真空下干燥。如此得到40mg(理论值的97％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.32min；MS(ESIpos)：m/z＝516(M+H)+。
中间体9
(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体5、6和7的合成类似地，经3个阶段制备标题化合物：使商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸与1，2-噁嗪烷盐酸盐(起始化合物5)偶联，随后用三氟乙酸去保护，并与起始化合物1偶联。通过制备型HPLC，纯化终产物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.12min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.25min；MS(ESIpos)：m/z＝516(M+H)+。
中间体10
N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将315mg(0.494mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解在12ml DMF中，并与104mg(0.543mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和83mg(0.543mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合，并将混合物在室温搅拌90min。随后，加入112μl N，N-二异丙基乙胺和149mg(0.494mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸三氟乙酸盐，后者已经预先借助于三氟乙酸消除Boc保护基而从起始化合物1制备。将混合物在室温搅拌2h，然后在高真空下浓缩。通过制备型HPLC，将剩余的残余物纯化2次。得到无色泡沫形式的140mg(理论值的35％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.40min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.38min；MS(ESIpos)：m/z＝807(M+H)+。
中间体11
N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，如下从237mg(0.887mmol)它的二环己胺盐中释放N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酸：将其溶解在乙酸乙酯中，并与5％硫酸水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于16ml DMF中，并接连地与365mg(1mmol)(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-[甲基(L-缬氨酰基)氨基]庚酸叔丁酯(中间体2)、185mg(0.967mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和148mg(0.967mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。将混合物在室温搅拌2h。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。如此得到283mg(理论值的53％)叔丁基酯中间体N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-叔丁氧基-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.17min。
将283mg(0.466mmol)该中间体溶解于5ml二氯甲烷中，加入5ml无水三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌2h。随后，将反应混合物在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。得到156mg(理论值的61％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.50min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝552(M+H)+。
中间体12
N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐
在第一步中，如下从600mg(1.28mmol)对应的二环己基铵盐中释放起始化合物1：将所述盐溶解于100ml乙酸乙酯中，并首先与50ml 0.5％硫酸一起，然后与饱和氯化钠溶液一起，进行萃取摇动。然后，有机相经硫酸镁干燥，过滤，浓缩，并立即与中间体7的合成类似地与L-苯基丙氨酸苄酯反应，然后去保护。
收率：650mg(94％，经2个阶段)
HPLC(方法6)：Rt＝1.76min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.68min；MS(ESIpos)：m/z＝425(M+H)+。
中间体13
(βS)-N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐
首先，如下从351mg(0.75mmol)二环己胺盐(起始化合物1)中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸氢钾水溶液一起进行萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml DMF中，并接连地与373mg(0.75mmol)(βS)-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐[通过EDC/DMAP介导的与苯甲醇的酯化，随后用三氟乙酸除去Boc保护基，从商购可得的(βS)-N-(叔丁氧基羰基)-β-甲基-L-苯丙氨酸制备]、428mg(1.125mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和392μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌20h。然后将反应混合物倒在半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物上。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，随后浓缩。借助于制备型HPLC纯化残余物。得到230mg(理论值的57％)Boc-保护的中间体(βS)-N-{(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酰基}-β-甲基-L-苯基丙氨酸苄酯。
HPLC(方法6)：Rt＝2.3min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.36min；MS(ESIpos)：m/z＝539(M+H)+。
将230mg(0.42mmol)该中间体溶解于5ml二氯甲烷中，加入5ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。剩余的残余物为在减压下进一步干燥的反应混合物，然后从乙腈/水低压冻干。以此方式，得到230mg(定量)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.6min。
中间体14
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将143mg(0.223mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于15ml DMF中，并接连地与141mg(0.22mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体7)、102mg(0.27mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和128μl(0.74mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌3h。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到275mg(定量)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.73min；
LC-MS(方法4)：Rt＝3.19min；MS(ESIpos)：m/z＝1023(M+H)+。
将46mg(0.045mmol)该中间体溶解在4ml DMF中。已经加入1ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物(洗脱液：乙腈+0.01％TFA/水+0.01％TFA)。得到22mg(理论值的54％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.68min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝801(M+H)+
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ＝8.8(m，2H)，8.7(m，1H)，8.42和8.15(2d，1H)，7.3-7.1(m，5H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.70和4.62(2m，1H)，4.62和4.50(2t，1H)，4.1-3.9(m，3H)，3.85(m，1H)，3.75-3.6(m，2H)，3.23，3.18，3.17，3.14，3.02和2.96(6s，9H)，3.1-2.9和2.75(2m，2H)，2.46(m，3H)，2.4-2.1(m，2H)，2.05(br.m，2H)，1.85-1.55(br.m，6H)，1.5-1.2(br.m，3H)，1.1-0.8(m，18H)，0.75(t，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体15
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将126mg(0.198mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于10ml DMF中，并接连地与105mg(0.198mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体17)、41.6mg(0.217mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、33mg(0.217mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物和79μl(0.454mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到220mg(定量)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.77min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.5min；MS(ESIpos)：m/z＝1037(M+H)+。
将220mg(0.212mmol)该中间体溶解在5ml DMF中。已经加入1ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物(洗脱液：乙腈+0.01％TFA/水+0.01％TFA)。得到91mg(理论值的46％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.71min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝815(M+H)+
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ＝8.87和8.80(2d，2H)，8.75(m，1H)，8.40和7.98(2d，1H)，7.3-7.1(m，5H)，5.45和5.2(2t，1H)，4.78和4.62(2m，1H)，4.73和4.58(2t，1H)，4.2-4.0(m，3H)，3.7-3.6(m，1H)，3.35，3.20，3.18，3.14，3.12和3.00(6s，9H)，3.1和2.95(2m，2H)，2.46(m，3H)，2.4-2.0(m，4H)，1.9-1.6(m，4H)，1.6-1.2(m，5H)，1.1-0.75(m，21H)，0.80(t，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体16
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将617mg(1.2mmol)(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(中间体24)溶解于44ml二氯甲烷中，加入4.4ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并将剩余的残余物从二噁烷/水低压冻干。得到702mg(定量)去保护的化合物(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐，为粗产物，其不经进一步纯化用于以后的阶段中。
将470mg(0.74mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于57ml DMF中，并接连地与390mg(大约0.74mmol)上面得到的(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐、336mg(0.88mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和423μl(2.4mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌2h。然后将反应混合物倒入半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的混合物中。取出有机相，接连地用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。得到453mg(理论值的59％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝2.58min；
LC-MS(方法1)：Rt＝3.10min；MS(ESIpos)：m/z＝1035(M+H)+。
将453mg(0.438mmol)该中间体溶解在24ml DMF中。已经加入2.4ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC(洗脱液：乙腈/0.1％的TFA水溶液)纯化残余物。得到260mg(理论值的64％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.64min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝813(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.8(m，2H)，8.65(m，2H)，7.3-7.1(m，5H)，4.8-4.05(m，2H)，4.0和3.82(2m，2H)，3.8-3.5(m，8H)，3.32，3.29，3.20，3.19，3.12和3.00(6s，9H)，2.65(t，1H)，2.5-2.45(m，3H)，2.4-1.3(m，15H)，1.15-0.85(m，18H)，0.8和0.75(2d，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体17
N-苄基-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺三氟乙酸盐
将1000mg(3.77mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸溶解在10ml DMF中，并与457mg(3.77mmol)N-甲基苄胺、2150mg(5.65mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和657μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌30min，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并通过与水一起摇动萃取3次。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用3∶1石油醚/乙酸乙酯作为洗脱液。浓缩产物级分，并在高真空下干燥残余物。得到1110mg(理论值的75％)Boc-保护的中间体N-苄基-Nα-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.14min；MS(ESIpos)：m/z＝369(M+H)+。
将1108mg(3，007mmol)该中间体溶解于30ml二氯甲烷中，加入10ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，将剩余的残余物与二氯甲烷一起搅拌，并蒸馏出溶剂。将残余物与戊烷一起搅拌另外2次，每次再次倾析出溶剂，最后在高真空下干燥标题化合物。如此得到1075mg(理论值的93％)作为树脂的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.6min；MS(ESIpos)：m/z＝269(M+H)+。
中间体18
N-苄基-Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺三氟乙酸盐
首先，如下从141mg(0.491mmol)它的二环己胺盐中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml DMF中，并加入187.6mg(0.49mmol)N-苄基-N-甲基-L-苯基丙氨酰胺三氟乙酸盐(中间体9)、190.3mg(1.47mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和256μl N，N-二异丙基乙胺。将混合物在室温搅拌1h。然后浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中，随后如下萃取溶液：接连地与饱和氯化铵溶液、饱和碳酸氢钠溶液和水一起摇动。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用30∶1乙腈/水作为洗脱液。浓缩产物级分，并在高真空下干燥残余物。得到168mg(理论值的64％)Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。
HPLC(方法6)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.22min；MS(ESIpos)：m/z＝538(M+H)+。
将168mg(0.312mmol)该中间体溶解于15ml二氯甲烷中，加入3ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。将剩余的残余物首先与二氯甲烷一起搅拌，然后与二乙基醚一起搅拌，每次重新蒸馏出溶剂。在高真空下干燥以后，得到作为树脂的170mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝438(M+H)+。
中间体19
N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸甲酯三氟乙酸盐
与中间体18的合成类似地，从(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)(其从二环己胺盐中释放出)和L-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐开始，制备标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝0.6min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.17min；MS(ESIpos)：m/z＝349(M+H)+。
中间体20
N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酸苄酯三氟乙酸盐
与中间体18的合成类似地，从(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)(其从二环己胺盐中释放出)和L-色氨酸苄酯开始，制备标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝464(M+H)+。
中间体21
(1S，2R)-1-({(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}氨基)-2-苯基环丙烷甲酸苄酯三氟乙酸盐
与中间体18的合成类似地，从(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)(其从二环己胺盐中释放出)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯开始，制备标题化合物。(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯已经预先通过标准方法如下制备：用苯甲醇酯化商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸，随后用三氟乙酸除去Boc。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法2)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝437(M+H)+。
中间体22
6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐
将100mg(473μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸溶解在71μl DMF中，然后与139mg(947μmol)1-甲基肼甲酸叔丁酯、182mg(947μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和145mg(947μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷/水低压冻干以后，得到129mg(理论值的80％)受保护的中间体，为无色泡沫。
随后，用2ml三氟乙酸在8ml二氯甲烷中的溶液将所述129mg(380μmol)去保护。在室温搅拌1h以后，在减压下浓缩反应混合物。从乙腈/水低压冻干残余物，得到125mg(理论值的83％)标题化合物，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.38min；MS(ESIpos)：m/z＝240(M+H)+
中间体23
N-(2-氨基乙基)-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁酰胺三氟乙酸盐
首先，在5ml DMF中混合35mg(164μmol)2-(甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐三氟乙酸盐、30mg(164μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸、75mg(197μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和57μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌过夜。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并且通过从二噁烷/水中低压冻干，得到35mg(理论值的63％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.71min；MS(ESIpos)：m/z＝340(M+H)+。
随后，用1ml三氟乙酸在5ml二氯甲烷中的溶液将全部量的受保护的中间体去保护，得到28mg(理论值的77％)标题化合物。
LC-MS(方法3)：Rt＝0.75min；MS(ESIpos)：m/z＝240(M+H)+。
中间体24
4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐
首先，在5ml DMF中混合35mg(164μmol)(2-氨基乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐三氟乙酸盐、30mg(164μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸、75mg(197μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和57μl N，N-二异丙基乙胺，并在室温搅拌30min。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并且通过从二噁烷/水中低压冻干，得到51mg(理论值的91％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝340(M+H)+。
随后，用1ml三氟乙酸在5ml二氯甲烷中的溶液将全部量去保护，得到45mg(理论值的69％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.19min；MS(ESIpos)：m/z＝240(M+H)+。
中间体25
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸苄酯三氟乙酸盐
首先，如下从1.82g(388mmol)它的二环己胺盐中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸：将它溶解于乙酸乙酯中，并与100ml 0.5％硫酸一起进行萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml二噁烷和10ml水中，加入1517mg(4.66mmol)碳酸铯，并将混合物在超声浴中处理5min，并在减压下浓缩，并与DMF一起再蒸馏1次。然后将残余物溶解于15ml二氯甲烷中，并加入1990mg(11.64mmol)苄基溴。将混合物在超声浴中处理15min，然后在减压下浓缩。将残余物在乙酸乙酯和水之间分配，取出有机相，并通过与饱和氯化钠溶液一起摇动进行萃取，然后浓缩。然后通过制备型HPLC纯化残余物。得到1170mg(理论值的80％)Boc-保护的中间体。
随后，立即用5ml三氟乙酸在15ml二氯甲烷中的溶液将这些1170mg去保护。在室温搅拌15min以后，在减压下浓缩反应混合物。将残余物从二噁烷低压冻干。在高真空下干燥以后，剩下1333mg(理论值的84％)标题化合物，为黄色油。
HPLC(方法6)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.59min；MS(ESIpos)：m/z＝278(M+H)+。
中间体26
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将1200mg(2.33mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体5)与910.8mg(2.33mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酸苄酯三氟乙酸盐(中间体14)、1327mg(3.49mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和2027μl N，N-二异丙基乙胺一起在50ml DMF中混合，并将混合物在室温搅拌5min。此后，在减压下除去溶剂。将剩余的残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过接连地与5％柠檬酸水溶液和饱和碳酸氢钠溶液一起摇动进行萃取。取出有机相，并浓缩。借助于制备型HPLC纯化残余物。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到1000mg(理论值的55％)作为树脂的苄基酯中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.56min；MS(ESIpos)：m/z＝775(M+H)+。
将全部量的得到的该中间体溶解于25ml甲醇和二氯甲烷(20∶1)的混合物中，并用10％活性炭载钯作为催化剂，通过在标准氢压力下氢化，除去苄基酯基。在室温搅拌30min后，滤出催化剂，并在减压下浓缩滤液。得到803mg(理论值的91％)标题化合物，为白色固体。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.24min；MS(ESIpos)：m/z＝685(M+H)+。
中间体27
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基-N-丙基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)存在下，将商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸与正丙胺偶联，随后用三氟乙酸除去Boc(收率：经2个阶段，理论值的85％)。
HPLC(方法6)：Rt＝1.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.52min；MS(ES1pos)：m/z＝219(M+H)+。
中间体28
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸乙酯三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：通过标准方法，通过用乙醇酯化商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸，随后用三氟乙酸除去Boc。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.50min；MS(ES1pos)：m/z＝206(M+H)+。
中间体29
4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酸
在0℃，向1.39g(8.95mmol)N-甲氧基羰基马来酰亚胺在44ml饱和碳酸氢钠溶液中的溶液中，加入1.5g(8.95mmol)4-氨基-2，2-二甲基丁酸，并将混合物搅拌40min。随后，除去冷却浴，并将反应混合物搅拌另外1h。然后在用冰冷却的同时，通过加入硫酸将反应混合物调节至pH 3，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。得到1.17g(79％纯度，理论值的49％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.64min；m/z＝212(M+H)+。
中间体30
2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼甲酸叔丁酯
在0℃，向50mg(237μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酸在2ml THF中的溶液中，首先加入26μl(237μmol)4-甲基吗啉，然后加入31μl(237μmol)氯甲酸异丁酯。除去冷却浴并在室温搅拌另外15min以后，加入31.3mg(237μmol)叔丁基氧基羰基酰肼。将反应混合物搅拌过夜，然后浓缩。通过制备型HPLC纯化残余物。得到50.8mg(理论值的66％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.71min；m/z＝324(M-H)-。
中间体31
4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐
将50mg(154mmol)2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼甲酸叔丁酯溶解在2ml二氯甲烷中，并加入0.4ml三氟乙酸。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。得到55.2mg(93％纯度，理论值的99％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.36min；m/z＝226(M+H)+。
中间体32
N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基甲酯
在室温，向500mg(1.89mmol)N-Boc-L-苯丙氨酸在25ml二氯甲烷中的溶液中，加入1192mg(6.2mmol)EDC、578μl(4.1mmol)三乙胺、345mg(2.8mmol)DMAP和345mg(2.1mmol)1-金刚烷基甲醇。将反应混合物搅拌过夜，然后用50ml二氯甲烷稀释，并接连地用10％柠檬酸水溶液、水和饱和氯化钠溶液洗涤。有机相经硫酸镁干燥，然后浓缩，并通过制备型HPLC纯化残余物。得到769mg(理论值的90％)标题化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝1.84min；m/z＝414(M+H)+。
中间体33
L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基甲酯盐酸盐
将769mg(1.86mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基甲酯(中间体13)溶解在25ml 4N的氯化氢在二噁烷中的溶液中，并在室温搅拌1h。随后，浓缩反应混合物，并在减压下干燥残余物。得到619mg(理论值的95％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；m/z＝314(M+H)+。
中间体34
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在室温，向20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入15.3μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺、6.7mg(44μmol)HOBt和6.7mg(35μmol)EDC，并将混合物搅拌30min。随后，加入10.1mg(32μmol)L-苯基丙氨酸金刚烷-1-基酯盐酸盐。搅拌过夜后，通过制备型HPLC将反应混合物直接地分离成它的组分。得到27.5mg(理论值的93％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.70min；m/z＝980(M+H)+。
中间体35
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将27.5mg(28μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1.8ml二氯甲烷中，并加入361μl TFA。将反应混合物搅拌30min，然后浓缩。将残余物溶解于水中，并低压冻干。得到22.7mg(理论值的81％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.14min；m/z＝880(M+H)+。
中间体36
(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯
在氩气氛下，将500mg(1.99mmol)N-Boc-L-苯基丙氨醇溶解在5ml DMF中，并冷却至0℃。随后，加入159mg(3.98mmol)60％的氢化钠在石蜡油中的混悬液。将反应混合物搅拌至气体产生结束，然后加入260μl(2.19mmol)苄基溴。除去冷却浴，并将反应混合物在室温搅拌2h。此后，浓缩反应混合物，将残余物溶解于冰水中，并用二氯甲烷萃取混合物。将有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，并浓缩。借助于制备型HPLC纯化残余物。得到226mg(理论值的33％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.28min；m/z＝342(M+H)+。
中间体37
(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-胺盐酸盐
将220mg(644μmol)(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯溶解在11ml 4N的氯化氢在二噁烷中的溶液中，并在室温搅拌1h。然后，浓缩反应混合物，并在减压下干燥残余物。得到138mg(理论值的77％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.65min；m/z＝242(M+H)+。
中间体38
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在室温，向20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入15.3μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺，6.7mg(44μmol)HOBt和6.7mg(35μmol)EDC，并将混合物搅拌30min。随后，加入7.8mg(32μmol)(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-胺盐酸盐。搅拌过夜后，通过制备型HPLC，将反应混合物直接地分离成它的组分。得到26mg(理论值的98％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.51min；m/z＝909(M+H)+。
中间体39
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将26mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1.8ml二氯甲烷中，并加入370μl TFA。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。将残余物溶解于水中，并低压冻干。得到26.4mg(定量)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；m/z＝809(M+H)+。
中间体40
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在10ml DMF中将50mg(70μmol)中间体26和11mg(70μmol)(1S，2R)-2-氨基-1-苯基丙烷-1-醇与42mg(0.11μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和25μl N，N-二异丙基乙胺混合，并将反应混合物在室温搅拌5min。这之后借助于制备型HPLC浓缩和纯化残余物。合并对应的级分、浓缩和在高真空下干燥以后，得到49mg(81％)受保护的中间体。随后，通过已知的条件，用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液除去Boc基团。浓缩之后，通过制备型HPLC纯化标题化合物，得到26mg(52％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.65min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝718(M+H)+。
中间体41
3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟乙酸盐
将150mg(541μmol)3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸叔丁酯溶解在3ml二氯甲烷中，并加入1.5ml三氟乙酸，将反应混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。
得到181mg(理论值的100％)标题化合物。
MS(EI)：m/z 222(M+H)+
中间体42
3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸
将186mg(555μmol)3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸三氟乙酸盐溶解在2.6ml饱和碳酸氢钠溶液中，并在0℃与86mg(555μmol)N-甲氧基羰基马来酰亚胺混合。将反应混合物在0℃搅拌40min和在室温搅拌1h，然后再次冷却至0℃，用硫酸调节至pH 3，并用25ml乙酸乙酯萃取3次。合并的有机相经硫酸镁干燥和浓缩。
得到126mg(理论值的75％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.53min；m/z＝302(M+H)+。
中间体43
15-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-4-氧代-7，10，13-三氧杂-2，3-二氮杂十五烷-1-酸叔丁酯
在0℃，将125mg(417μmol)3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酸溶解在2.1ml THF中，并与46μl(417mmol)4-甲基吗啉和54.5μl(417μmol)氯甲酸异丁酯混合。除去冰浴，并将反应混合物在室温搅拌30min。随后，在0℃，加入55mg(417μmol)叔丁基氧基羰基酰肼。将反应混合物温热至室温过夜，浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化。
得到60mg(理论值的33％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.66min；m/z＝416(M+H)+。
中间体44
3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷酰肼三氟乙酸盐
将60mg(145μmol)15-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-4-氧代-7，10，13-三氧杂-2，3-二氮杂十五烷-1-酸叔丁酯溶解在1ml二氯甲烷中，并加入0.2ml三氟乙酸。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。
得到62mg(理论值的100％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.35min；m/z＝316(M+H)+。
中间体45
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：通过标准方法，通过用苯甲醇酯化商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸，随后用三氟乙酸除去Boc。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.72min；MS(ESIpos)：m/z＝268(M+H)+。
中间体46
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
在15ml DMF中将383mg(0.743mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体8)与485mg(0.743mmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体12)、424mg(1.114mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和388μl N，N-二异丙基乙胺混合，并将混合物在室温搅拌10min。随后，在减压下除去溶剂。将剩余的残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过接连地与5％柠檬酸水溶液和饱和碳酸氢钠溶液一起摇动进行萃取。取出有机相并浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到335mg(理论值的48％)苄基酯中间体，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.49min；MS(ESIpos)：m/z＝922(M+H)+。
将100mg(0.11mmol)该中间体溶解于15ml甲醇中，并用10％活性炭载钯作为催化剂，通过在标准氢压力下氢化，除去苄基酯基。在室温搅拌1h后，滤出催化剂，并在减压下浓缩滤液。从二噁烷低压冻干以后，得到85mg(理论值的94％)标题化合物，为固体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.4min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.24min；MS(ESIpos)：m/z＝832(M+H)+。
中间体47
N-苄基-L-色氨酰胺三氟乙酸盐
将202mg(0.5mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯和45mg(0.42mmol)苄胺溶解在10ml DMF中，并加入110μl(630μmol)N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌3h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱液：20∶0.5∶0.05二氯甲烷/甲醇/17％水溶液氨)纯化残余物。合并对应的级分，并浓缩。用二乙基醚消化得到的残余物，然后在高真空下干燥。随后，将该残余物溶解于10ml二氯甲烷中，并加入3ml无水三氟乙酸。在室温搅拌45分钟以后，浓缩混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。在高真空下干燥以后，得到117mg(经2个阶段，理论值的57％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.66min；MS(ESIpos)：m/z＝294(M+H)+。
中间体48
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐
将50mg(180μmol)商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸溶解在5ml DMF中，加入94μl(541μmol)N，N-二异丙基乙胺、31mg(270μmol)N-羟基琥珀酰亚胺和41.5mg(216μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。然后浓缩反应混合物，将残余物溶解于二噁烷中，加入71mg(901μmol)碳酸氢铵，然后将反应混合物在室温静置3天。然后用乙酸乙酯和水的1∶1混合物稀释反应混合物。取出有机相，经硫酸镁干燥，并浓缩。随后将得到的残余物溶解于3ml二氯甲烷中，并加入3ml无水三氟乙酸。在室温搅拌1h，然后浓缩。将残余物与戊烷一起搅拌，抽滤出，并从二噁烷中低压冻干。以此方式，得到32mg(经2个阶段，理论值的62％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝0.38min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.20min；MS(ESIpos)：m/z＝177(M+H)+。
中间体49
Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体13的合成类似地，从起始化合物1和L-色氨酰胺盐酸盐，制备标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.4min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝473(M+H)+。
中间体50
2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯
将813mg(3.1mmol)三苯基膦溶解在25ml THF中，并在氩下冷却至-70℃。逐滴加入627mg(3.1mmol)偶氮二甲酸二异丙酯以后，将混合物搅拌5min。随后，将逐滴加入溶解在5ml THF中的500mg(3.1mmol)2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯，并将反应混合物在-70℃搅拌另外5min。然后，加入136.6mg(1.55mmol)2，2-二甲基-1-丙醇(溶解在1ml THF中)和301mg(3.1mmol)马来酰亚胺，将反应混合物在-70℃搅拌另外10min，然后将混合物温热至室温。在室温搅拌另外16h以后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到463mg(62％)受保护的中间体。
在标准条件下除去Boc保护基以后，得到652mg作为三氟乙酸盐的1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2，5-二酮。
将112.9mg(543μmol)氯甲酸硝基苯酯溶解在30ml THF中，并且在加入100mg(271.6μmol)1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐以后，将混合物在室温搅拌30min。过滤混合物，并将滤液浓缩至干燥，然后用二乙基醚制浆。抽滤和干燥以后，得到60mg(理论值的95％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝0.65min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝306(M+H)+。
中间体51
(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐
首先在0℃，将200mg(0.75mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯丙氨酸加入5.5ml二氯甲烷中，并加入128mg(0.79mmol)1，1′-羰基二咪唑。30min以后，加入103mg(0.75mmol)苯甲酰基酰肼。在0℃另外45min以后，最后加入500mg(1.5mmol)四溴化碳和395mg(1.5mmol)三苯基膦。将反应混合物首先在0℃搅拌2h，然后在室温搅拌过夜。随后在旋转蒸发器上浓缩混合物，并在高真空下干燥残余物。借助于制备型HPLC，纯化如此得到的粗产物。得到217mg(理论值的78％)Boc-保护的中间体(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS(方法12)：Rt＝1.15min；MS(ESIpos)：m/z＝366(M+H)+
将217mg(0.59mmol)该中间体溶解于3ml二氯甲烷中，并加入0.6ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。剩余的残余物为在减压下进一步干燥的反应混合物，然后从二噁烷低压冻干。以此方式，得到214mg(理论值的90％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.62min；MS(ESIpos)：m/z＝266(M+H)+
中间体52
(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐
首先在0℃将200mg(0.75mmol)N-(叔丁氧基羰基)-D-苯丙氨酸加入5.5ml二氯甲烷中，并加入128.3mg(0.79mmol)1，1′-羰基二咪唑。30min以后，加入103mg(0.75mmol)苯甲酰基酰肼。在0℃另外45min以后，最后加入500mg(1.5mmol)四溴化碳和395mg(1.5mmol)三苯基膦。将反应混合物首先在0℃搅拌2h，然后在室温搅拌过夜。随后在旋转蒸发器上浓缩混合物，并在高真空下干燥残余物。借助于制备型HPLC，纯化如此得到的粗产物。得到219mg(理论值的80％)Boc-保护的中间体(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基氨基甲酸叔丁酯。
LC-MS(方法2)：Rt＝1.36min；MS(ESIpos)：m/z＝366(M+H)+
将219mg(0.6mmol)该中间体溶解于3ml二氯甲烷中，加入0.6ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物。剩余的残余物为在减压下进一步干燥的反应混合物，然后从二噁烷低压冻干。以此方式，得到196mg(理论值的86％)标题化合物，为固体。
HPLC(方法10)：Rt＝2.41min
中间体53
(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-胺
首先将200mg(1.13mmol)(4S)-4-苄基-1，3-噁唑烷-2-酮加入3ml叔丁醇中，并加入280mg(2.26mmol)苄基硫醇。随后将混合物在回流下加热2天。此后，在旋转蒸发器上浓缩反应混合物，并将得到的(2S)-1-(苄基硫烷基)-3-苯基丙烷-2-胺中间体不经后处理直接进一步转化。
HPLC(方法10)：Rt＝2.63min
LC-MS(方法1)：Rt＝0.67min；MS(ESIpos)：m/z＝258(M+H)+
将上面得到的粗制中间体溶解在2ml 30％过氧化氢和5ml甲酸的溶液中，并将混合物在室温搅拌12h。然后，将反应混合物加入饱和硫酸钠溶液中，并用乙酸乙酯萃取3次。有机相经硫酸镁干燥，并在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化得到的粗产物。如此得到343mg(理论值的61％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.40min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.65min；MS(ESIpos)：m/z＝290(M+H)+
中间体54
(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-胺
将552.7mg(9.85mmol)氢氧化钾溶解在甲醇中，吸附在1.1g中性氧化铝上，然后在高真空下干燥。在5-10℃，向240mg(0.82mmol)(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-胺和1.56g如此制备的氧化铝负载的氢氧化钾在6.2ml正丁醇中的溶液中，逐滴加入307μl(3.3mmol)二溴二氟甲烷。将反应混合物在室温搅拌2h，然后穿过硅藻土(Celite)过滤，并用二氯甲烷彻底洗涤残余物。浓缩滤液，并在减压下干燥得到的残余物。借助于制备型HPLC，纯化如此得到的粗产物。得到98mg(理论值的35％)标题化合物，E/Z非对映异构体比例为4∶1。
HPLC(方法10)：Rt＝2.46min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.75min；MS(ESIpos)：m/z＝224(M+H)+
将上面得到的E/Z非对映异构体混合物溶解在2ml乙醇和0.2ml N，N-二异丙基乙胺中，并借助于在手性相上的HPLC[柱：Daicel Chiralpak AD-H，5μm 250mm x 20mm，洗脱液：己烷/(乙醇+0.2％二乙胺)50∶50v/v；紫外检测：220nm；温度：30℃]进行分离。在旋转蒸发器上浓缩适当的级分，并在减压下干燥残余物。得到45mg标题化合物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ[ppm]＝2.62-2.83(m，2H)3.52-3.71(m，1H)6.18-6.30(m，1H)6.34-6.46(m，1H)6.98-7.57(m，10H)[其它信号被隐藏在溶剂峰下]。
中间体55
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1ml DMF中，加入13.3mg(35μmol)HATU和15.3μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺，并将混合物在室温搅拌30min。随后，加入12.2mg(32μmol)(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后通过制备型HPLC进行分离。得到22mg(理论值的81％)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法12)：Rt＝1.45min；MS(ESIpos)：m/z＝933(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到22.4mg(理论值的98％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝833(M+H)+
中间体56
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体55的合成类似地，通过使20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与12.2mg(32μmol)(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙胺三氟乙酸盐反应，制备N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
收率：17mg(理论值的64％)
HPLC(方法10)：Rt＝3.74min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.45min；MS(ESIpos)：m/z＝933(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到17.1mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.55min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝833(M+H)+
中间体57
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体55的合成类似地，通过使20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与9.3mg(20μmol)(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-胺反应，制备N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
收率：19.2mg(理论值的68％)
HPLC(方法10)：Rt＝3.5min；
LC-MS(方法12)：Rt＝1.41min；MS(ESIpos)：m/z＝957(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到19.3mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.52min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝857(M+H)+
中间体58
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
与中间体55的合成类似地，通过使20mg(29μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与7.1mg(32μmol)(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-胺反应，制备N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
收率：15.1mg(理论值的58％)
HPLC(方法10)：Rt＝4.2min；
LC-MS(方法12)：Rt＝1.51min；MS(ESIpos)：m/z＝891(M+H)+
通过随后用三氟乙酸除去BOC保护基，然后得到15.7mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.62min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝791(M+H)+
中间体61
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将50mg(0.054mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)溶解在8ml二噁烷/水中，并加入70ml(0.108mmol)15％的4-氧代丁酸在水中的溶液。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入3.7mg(0.059mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入约300μl 0.1N盐酸，将混合物调节至pH 3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。冷却后，加入另外70ml(0.108mmol)15％4-氧代丁酸溶液，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。然后，加入另外3.7mg(0.059mmol)氰基硼氢化钠，并随后使用约300μl 0.1N盐酸将pH调回3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。在转化仍然不完全的情况下，重复该操作第三次。最后浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。以此方式，得到无色泡沫形式的32mg(理论值的65％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.64min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.76min；MS(ESIpos)：m/z＝899(M+H)+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝8.95和8.8(2m，1H)，8.88和8.65(2s，1H)，7.4-7.1(m，5H)，5.0，4.78，4.65和4.55(4m，2H)，4.1-3.7(m，5H)，3.32，3.29，3.20，3.12，3.1和3.0(6s，9H)，2.75(m，2H)，2.63(t，1H)，2.4-2.2(m，4H)，2.1-1.2(m，12H)，1.2-0.8(m，16H)，0.75(m，3H)[其它信号被隐藏在H2O和DMSO峰下]。
中间体62
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体61的合成类似地，通过使50mg N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体14)与4-氧代丁酸反应，制备标题化合物。
收率：34mg(理论值的70％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.64min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.77min；MS(ESIpos)：m/z＝887(M+H)+。
中间体63
N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体61的合成类似地，通过使15mg N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)与4-甲酰基苯甲酸反应，制备标题化合物。
收率：7.5mg(理论值的48％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.75min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝947(M+H)+。
中间体64
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(0.011mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)溶解在2ml二噁烷/水中，并加入2.8mg(0.022mmol)6-氧代己酸。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入0.75mg(0.012mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入0.1N盐酸，将混合物调节至pH 3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外1小时。冷却后，加入另外2.8mg(0.022mmol)6-氧代己酸，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。加入另外0.75mg(0.012mmol)氰基硼氢化钠，随后使用0.1N盐酸将pH调回3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外1h。然后将该操作重复第三次。最后浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化粗产物。得到6.4mg(理论值的64％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.68min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.86min；MS(ESIpos)：m/z＝927(M+H)+。
中间体65
N-(2-氨基乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺双三氟乙酸盐
如下制备标题化合物：使68mg N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体14)与2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯反应，随后用三氟乙酸除去Boc保护基。
收率：49mg(经2个阶段，理论值的62％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.58min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.05min；MS(ESIpos)：m/z＝844(M+H)+
1H NMR(600MHz，DMSO-d6)：δ＝8.25(m，1H)，8.45和8.15(2d，1H)，7.65-7.55(m，3H)，7.23-7.1(m，5H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.72和4.62(2m，1H)，4.6和4.52(2t，1H)，4.2-3.8(m，4H)，3.7(d，1H)，3.23，3.20，3.19，3.18，3.03和2.98(6s，9H)，3.0-2.7(m，6H)，2.4-1.2(m，15H)，1.05，1.0，0.88和0.82(4d，6H)，0.92(m，6H)，0.73(m，6H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体66
N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体65的合成类似地，通过使25mg(0.027mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)与3-氧代丙基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用10％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的乙醇中)，制备标题化合物。
收率：11mg(经2个阶段，理论值的41％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.53min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.72min；MS(ESIpos)：m/z＝870(M+H)+。
中间体67
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将26mg(26μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(金刚烷-1-基甲氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐和33.9μl 15％琥珀醛酸水溶液(53μmol)溶解在957μl 1∶1-二噁烷/水混合物中，并加热至100℃保持1h。短暂冷却后，加入1.81mg(29μmol)氰基硼氢化钠。通过加入0.1N盐酸，将反应混合物调节至pH 3，并将混合物加热至100℃保持另外2h。再次加入相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸以后，将混合物再次加热至100℃保持2h。然后借助于制备型HPLC，将反应混合物直接分离成它的组分。如此得到18.5mg(理论值的73％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.17min；m/z＝967(M+H)+。
中间体68
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将24mg(26μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐和33.7μl 15％琥珀醛酸水溶液(52μmol)溶解在953μl 1∶1-二噁烷/水混合物中，并加热至100℃保持1h。短暂冷却后，加入1.80mg(29μmol)氰基硼氢化钠。通过加入0.1N盐酸，将反应混合物调节至pH 3，并将混合物加热至100℃保持另外2h。再次加入相同量的琥珀醛酸溶液、氰基硼氢化钠和盐酸以后，将混合物再次加热至100℃保持2h。然后借助于制备型HPLC，将反应混合物直接分离成它的组分。如此得到15.2mg(理论值的65％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝895(M+H)+
中间体69
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将53mg(84μmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和45mg(84μmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体12)溶解于2ml DMF中，加入19μl N，N-二异丙基乙胺、14mg(92μmol)HOBt和17.6mg(92μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。随后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到59mg(理论值的68％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.55min；m/z＝1044(M+H)+。
在5ml DMF中，用1.2ml哌啶处理57mg(0.055mmol)该中间体，以除去Fmoc保护基。借助于制备型HPLC浓缩和纯化以后，得到39mg(理论值的76％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝822(M+H)+。
将37mg(0.045mmol)该中间体溶解在5ml二噁烷/水中，并与中间体66中的化合物的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。得到无色泡沫形式的16mg(理论值的39％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝908(M+H)+。
中间体70
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体14中描述的合成类似地，从中间体4和26开始，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
将30mg(0.032mmol)该化合物溶解在6ml二噁烷/水中，并加入41μl(0.063mmol)15％的4-氧代丁酸水溶液。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入2.2mg(0.035mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入约300μl 0.1N盐酸，将混合物调节至pH 3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。冷却后，加入另外41μl(0.063mmol)15％4-氧代丁酸溶液，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。然后，加入另外2.2mg(0.035mmol)氰基硼氢化钠，随后使用约300μl 0.1N盐酸将pH调回3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。在转化仍然不完全的情况下，将该操作重复第三次。最后浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化粗产物。得到24mg(理论值的82％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.15min；MS(ESIpos)：m/z＝922(M+H)+。
中间体71
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体14中描述的合成类似地，从中间体4和39开始，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。然后与中间体61的制备类似地，通过使7mg(0.009mmol)该化合物在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到2mg(理论值的22％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.06min；MS(ESIpos)：m/z＝832(M+H)+。
中间体72
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将212mg(411μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体8)和237mg(411μmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体20)溶解于30ml DMF中，并加入188mg(493μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和215μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌20h，然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到315mg(理论值的80％)Boc-保护的中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.45min；m/z＝961(M+H)+。
用1ml三氟乙酸在9ml二氯甲烷中的溶液处理50mg(52μmol)该中间体，以除去Boc保护基。借助于制备型HPLC浓缩和纯化以后，得到29mg(理论值的57％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；m/z＝861(M+H)+。
将29mg(0.03mmol)该中间体溶解在6ml二噁烷/水中，并加入39μl(0.059mmol)15％的4-氧代丁酸水溶液。随后将反应混合物在100℃搅拌1h。冷却至室温后，加入2mg(0.033mmol)氰基硼氢化钠，并通过加入约300μl 0.1N盐酸，将混合物调节至pH 3。然后将反应混合物在100℃搅拌另外2h。冷却后，加入另外39μl(0.059mmol)15％4-氧代丁酸溶液，并将反应混合物再次在100℃搅拌1h。然后，加入另外2mg(0.033mmol)氰基硼氢化钠，并随后使用约300μl 0.1N盐酸将pH调回3。然后将混合物在100℃搅拌另外2h。此后，将反应混合物倒在半饱和的氯化铵水溶液和乙酸乙酯的1∶1混合物上。取出有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩。从水/乙腈冷冻干燥残余物。得到27mg(理论值的94％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.04min；MS(ESIpos)：m/z＝947(M+H)+。
中间体73
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基1-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体14中描述的合成类似地，从中间体4和38开始，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。然后使用25mg(0.026mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到13mg(理论值的54％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.01min；MS(ESIpos)：m/z＝921(M+H)+。
中间体74
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(1S，2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将50mg(73μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和28mg(73μmol)(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸苄酯三氟乙酸盐(中间体45)溶解于5ml DMF中，并加入42mg(110μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和38μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌5h，然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并产物级分，并浓缩。从二噁烷/水低压冻干以后，得到35mg(理论值的51％)Boc-保护的中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(1S，2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.52min；m/z＝934(M+H)+。
用1ml三氟乙酸在5ml二氯甲烷中的溶液处理35mg该中间体，以除去Boc保护基。浓缩和从二噁烷/水低压冻干以后，得到34mg(理论值的97％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(1S，2R)-1-[(苄氧基)羰基]-2-苯基环丙基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；m/z＝834(M+H)+。
然后与中间体66的制备类似地，通过使11mg(0.011mmol)该中间体在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到2.5mg(理论值的24％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.1min；MS(ESIpos)：m/z＝920(M+H)+。
中间体75
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基-N-丙基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐(中间体27)偶联，随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用14mg(0.016mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到11.3mg(理论值的83％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.27min；MS(ESIpos)：m/z＝871(M+H)+。
中间体76
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使中间体46(N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺)与中间体48((1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸乙酯三氟乙酸盐)偶联和随后除去Boc，制备起始化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐。然后与中间体61类似地，通过使用70mg(0.079mmol)该起始原料与4-氧代丁酸反应，得到46mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.28min；MS(ESIpos)：m/z＝858(M+H)+
中间体77
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体75中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-苯基丙氨酰胺盐酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用47mg(0.049mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到39mg(理论值的96％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.44min；MS(ESIpos)：m/z＝817(M+H)+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝8.95和8.8(2m，1H)，8.25和8.0(2d，1H)，7.45，7.35和7.0(3s，宽峰，2H)，7.3-7.1(m，5H)，4.8-4.4(2m，3H)，3.95(m，1H)，3.82(m，1H)，3.72(d，1H)，3.22，3.18，3.15，3.05和3.00(5s，9H)，2.85-2.7(m，4H)，2.45-1.6(m，12H)，1.5-1.2(m，3H)，1.1-0.7(m，21H)[其它信号被隐藏在溶剂峰下]。
中间体78
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体66类似地，经2个阶段制备该化合物：从20mg(16μmol)得自中间体14和6-氧代己基氨基甲酸苄酯的化合物开始，在作为溶剂的甲醇中进行氢化。
收率：7.6mg(理论值的55％，经2个阶段)
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝901(M+H)+。
中间体79
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将36mg(43μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体46)和4.6mg(43μmol)苄胺溶解于5ml DMF中，加入7.5μl(88μmol)N，N-二异丙基乙胺、10mg(65μmol)HOBt和10mg(52μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。随后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到29mg(理论值的73％)Boc-保护的中间体N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.43min；m/z＝921(M+H)+。
用1ml三氟乙酸在6ml二氯甲烷中的溶液处理29mg该中间体，以除去Boc保护基。浓缩和从二噁烷/水低压冻干以后，得到30mg(定量)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；m/z＝821(M+H)+。
然后使用17mg(0.018mmol)该中间体，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到13mg(理论值的80％)无色泡沫形式的标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.97min；MS(ESIpos)：m/z＝907(M+H)+。
中间体80
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和N-苄基-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体47)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用10mg(0.01mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到2.5mg(理论值的26％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝946(M+H)+。
中间体81
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷羧酰胺三氟乙酸盐(中间体48)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用14mg(0.0163mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到8mg(理论值的57％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.64min；MS(ESIpos)：m/z＝829(M+H)+。
中间体82
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体69中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体49)偶联，并随后借助于哌啶除去Fmoc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用78mg(0.088mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到68mg(理论值的90％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.49min；MS(ESIpos)：m/z＝856(M+H)+。
中间体83
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体82中的化合物类似地，从20mg(26μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐开始，在有制备的氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，制备该化合物。
收率：5mg(理论值的25％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.72min；MS(ESIpos)：m/z＝884(M+H)+。
中间体84
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体79中描述的合成类似地，通过在有EDC和HOBT存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体46)和吗啉偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用30mg(0.033mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到22mg(理论值的76％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.58min；MS(ESIpos)：m/z＝887(M+H)+。
中间体85
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体79中描述的合成类似地，通过在有HATU存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体46)和N-苄基-L-苏氨酰胺三氟乙酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用21mg(0.024mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到20mg(理论值的97％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.54min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.49min；MS(ESIpos)：m/z＝861(M+H)+。
中间体86
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-苯基丙氨酸叔丁酯盐酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基得到叔丁基酯(与三氟乙酸一起在二氯甲烷中搅拌40分钟)，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用22mg(0.02mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到16mg(理论值的94％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.05min；MS(ESIpos)：m/z＝874(M+H)+。
中间体87
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体86中描述的合成类似地，从230mg(336μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-色氨酸叔丁酯盐酸盐开始，经3个阶段制备该化合物。
收率：95mg(理论值的31％，经3个阶段)
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.05min；MS(ESIpos)：m/z＝913(M+H)+。
中间体88
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体69中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体49)偶联，并随后借助于哌啶除去Fmoc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用30mg(0.03mmol)该化合物，与中间体61的化合物的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与6-氧代己基氨基甲酸苄酯(其已经预先通过氧化6-羟基己基氨基甲酸苄酯而得到)反应，得到17mg(理论值的45％)Z-保护的化合物。随后，在10％钯/活性炭上在甲醇中进行氢解，得到标题化合物。
收率：14mg(理论值的95％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝869(M+H)+。
中间体89
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体86中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-色氨酸叔丁酯盐酸盐偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基得到叔丁基酯(与1∶10三氟乙酸/二氯甲烷一起搅拌30min)，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用71mg(0.075mmol)该化合物，与中间体61的化合物的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与6-氧代己基氨基甲酸苄酯(其已经预先通过氧化6-羟基己基氨基甲酸苄酯而得到)反应，得到35mg(理论值的44％)Z-保护的化合物。随后，在10％钯/活性炭上在甲醇中进行氢解，得到标题化合物。
收率：30mg(理论值的98％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝926(M+H)+。
中间体90
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和2-(1H-吲哚-3-基)乙胺偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用100mg(0.119mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到50mg(理论值的49％)标题化合物。在这里通过在硅胶上的快速色谱法纯化标题化合物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨作为洗脱液，在此过程中，将混合比从最初的15/2/02转换至15/4/0.5。
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝813(M+H)+。
中间体91
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-{(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基}吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基}-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体74中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和苯基乙胺偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-{(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基}吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基}-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。然后使用57mg(0.071mmol)该化合物，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到44mg(理论值的80％)标题化合物。在这里也通过在硅胶上的快速色谱法纯化标题化合物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨作为洗脱液(15/2/02-＞15/4/0.5)。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.64min；MS(ESIpos)：m/z＝774(M+H)+。
中间体92
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使用100mg(0.139mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体40)，与中间体61的制备类似地，通过在有氰基硼氢化钠存在下与4-氧代丁酸反应，得到94mg(理论值的84％)标题化合物。通过制备型HPLC纯化标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.46min；MS(ESIpos)：m/z＝804(M+H)+。
中间体93
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22.4mg(24μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.4ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到白色固体形式的8.2mg(理论值的38％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.54min
LC-MS(方法12)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝919(M+H)+
中间体94
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将17.1mg(18μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.1ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到白色固体形式的14.8mg(理论值的89％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.54min；
LC-MS(方法12)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝919(M+H)+
中间体95
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将19.3mg(20μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.2ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到固体形式的8.6mg(理论值的45％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝943(M+H)+
中间体96
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15.5mg(10μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐溶解在1.0ml二噁烷/水中，并且与中间体61的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与15％的4-氧代丁酸水溶液反应。从二噁烷低压冻干以后，得到白色固体形式的10.3mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法10)：Rt＝2.59min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝877(M+H)+
中间体97
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下制备标题化合物：与中间体66的合成类似地，使200mg(0.108mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体16)与6-氧代己基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用5％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的甲醇中)。
收率：69mg(理论值的65％，经2个阶段)
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝912(M+H)+。
中间体98
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体80中描述的合成类似地制备该化合物。通过制备型HPLC实现纯化。
收率：40mg(理论值的29％，经3个阶段)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝974(M+H)+。
中间体99
(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐
将324mg(0.81mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯溶解在20ml DMF中，并加入200mg(1.62mmol)1，2-噁嗪烷盐酸盐(起始化合物5)和850μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在50℃搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并用水萃取。有机相经硫酸镁干燥，并浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用4∶1二氯甲烷/乙酸乙酯作为洗脱液。浓缩产物级分，并在高真空下干燥残余物。得到147.5mg(理论值的48％)Boc-保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝374(M+H)+。
使用166mg(444.5μmol)该中间体，在标准条件下，用3ml三氟乙酸在20ml二氯甲烷中的溶液，除去Boc保护基，并且在HPLC纯化以后，得到155mg(理论值的86％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.43min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.56min；MS(ESIpos)：m/z＝274(M+H)+。
中间体100
N-(6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将177mg(260μmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和100mg(260μmol)(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体99)溶解于15ml DMF中，并加入118mg(310μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和140μl N，N-二异丙基乙胺。将反应混合物在室温搅拌30min，然后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并产物级分，并浓缩。从二噁烷低压冻干以后，得到170mg(理论值的68％)Boc-保护的中间体。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.36min；m/z＝940(M+H)+。
将170mg该中间体用3ml三氟乙酸在30ml二氯甲烷中的溶液处理30min，以除去Boc保护基。然后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物，得到155mg(理论值的86％)去保护的N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.85min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝840(M+H)+。
然后使用50mg(0.052mmol)该中间体，与中间体97的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与6-氧代己基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用5％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的甲醇中)，得到标题化合物。
收率：21mg(理论值的37％)
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.02min；MS(ESIpos)：m/z＝1073(M+H)+。
中间体101
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将26.7mg(24.87μmol)中间体100溶解在10ml甲醇中，并在标准氢压力下在钯/活性炭(5％)上氢化30min。滤出催化剂，并在减压下蒸发出溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到22.5mg(理论值的96％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝939(M+H)+。
中间体102
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(吗啉-4-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：8mg(理论值的71％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1094(M+H)+。
中间体103
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3R)-1-(苄基氨基)-3-羟基-1-氧代丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：3mg(理论值的22％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.78min；MS(ESIpos)：m/z＝1069(M+H)+。
中间体104
N-{4-[(反式-4-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}环己基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，如下从反式-4-氨基环己烷甲酸制备反式-4-氨基环己烷甲酸苄酯三氟乙酸盐：引入Boc保护基，然后引入苄基酯保护基，随后通过常规肽化学方法除去Boc保护基。
然后将15mg(18μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在5ml二甲基甲酰胺中，随后与13mg(35μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、9μl N，N-二异丙基乙胺和15mg(44μmol)反式-4-氨基环己烷甲酸苄酯三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。合并对应的级分，并在减压下蒸发出溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到14.7mg(理论值的78％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1072(M+H)+。
从该受保护的中间体，首先通过氢解方式除去苄基酯，并以定量收率得到游离羧基组分。将14mg(14μmol；1当量)去保护的化合物溶解于5ml DMF中，并在有4.1mg(21μmol；1.5当量)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、7.5μl(44μmol；3.1当量)N，N-二异丙基乙胺和0.9mg(7μmol；0.5当量)4-二甲基氨基吡啶存在下与3.3mg(29μmol；2.1当量)N-羟基琥珀酰亚胺混合，并将混合物在室温搅拌过夜。然后，加入另外10当量的N-羟基琥珀酰亚胺、5当量的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、5当量的N，N-二异丙基乙胺和0.5当量的4-二甲基氨基吡啶，并将反应混合物在超声浴中处理5h。随后，蒸发出溶剂，借助于制备型HPLC纯化残余物，合并对应的级分，并浓缩。从二噁烷低压冻干残余物以后，得到9.7mg(理论值的62％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝1078(M+H)+。
中间体105
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基](甲基)氨基}-3-甲基丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基](甲基)氨基}丁酸和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼开始，制备该化合物。以42％收率，得到酯中间体。在第二步中，用三氟乙酸叔丁基酯裂解6mg(6μmol)该中间体。HPLC纯化以后，得到3.4mg(理论值的48％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.66min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1025(M+H)+。
中间体106
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将14mg(16μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体88)溶解于750μl二噁烷中，并与1.5ml饱和碳酸氢钠溶液混合，然后与3.2mg(21μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到5.5mg(理论值的36％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝949(M+H)+。
中间体107
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将38mg(47μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在37ml DMF中，然后与71mg(187μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、33μl N，N-二异丙基乙胺和37mg(140μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌1h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到12.2mg(理论值的26％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1020(M+H)+。
中间体108
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-{(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-[(2S)-2-{(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-[(2-苯基乙基)氨基]丙基}吡咯烷-1-基]-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基}-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体107类似地制备所述化合物。
收率：2.5mg(理论值的30％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝981(M+H)+。
中间体109
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体107类似地，从中间体92的化合物制备所述化合物。
收率：35mg(理论值的65％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝1011(M+H)+。
中间体110
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体147类似地，从中间体83的化合物制备所述化合物。
收率：2.4mg(理论值的24％)
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝981(M+H)+。
中间体111
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-1-甲基肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体140类似地，从中间体82和中间体22制备所述化合物。
收率：6.5mg(理论值的51％)
HPLC(方法6)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝4.71min；MS(ESIpos)：m/z＝1077(M+H)+。
中间体112
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，从中间体81的化合物制备所述化合物。
收率：5.7mg(理论值的57％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体113
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将95mg(104μmol)4-{[(2S)-1-{[(2S)-1-{[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基](甲基)氨基}-3-甲基丁-2-基]氨基}-3-甲基-1-氧代丁-2-基](甲基)氨基}丁酸溶解在DMF中，然后与79.5mg(209μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、73μl N，N-二异丙基乙胺和68mg(261μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌2h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到104mg(理论值的89％)标题化合物的叔丁基酯，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1121(M+H)+。
将中间体溶解于33.4ml二氯甲烷中，加入17ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。
从而得到61mg(理论值的62％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1064(M+H)+。
中间体114
N-[6-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将5mg(5μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解于885μl DMF中，并与5.3mg(8μmol)2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯和2.8μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌2h，然后浓缩至干燥。借助于制备型HPLC纯化残余物。
收率：0.58mg(理论值的11％)无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.83min；MS(ESIpos)：m/z＝1035(M+H)+。
中间体115
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体147中的化合物类似地，从8mg(9μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺开始，制备该化合物。浓缩后，借助于制备型HPLC纯化活化的酯，并且，在减压下除去溶剂以后，立即与抗体反应。
收率：3mg(理论值的27％)(水解敏感的)
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝996(M+H)+。
中间体116
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体147中的化合物类似地，从5mg(6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺开始，制备该化合物。浓缩后，借助于制备型HPLC纯化活化的酯，并且，在减压下除去溶剂以后，立即与抗体反应。
收率：3.2mg(理论值的43％)(水解敏感的)
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝984(M+H)+。
中间体117
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，从中间体86的化合物制备所述化合物。
收率：7mg(理论值的42％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1081(M+H)+。
中间体118
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2R)-1-(苄氧基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，从7mg(7.8μmol)中间体68中的化合物制备目标化合物。收率：6.3mg(理论值的53％)
LC-MS(方法1)：Rt＝1.00min；MS(ESIpos)：m/z＝1102(M+H)+。
中间体119
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使7.4mg(8.1mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和6.3mg(24.2mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到1.6mg(理论值的13％)作为固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝1126(M+H)+
中间体120
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使12.8mg(13.9mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1R)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和10.9mg(41.8mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到10.8mg(理论值的59％)作为固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1126(M+H)+
中间体121
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使7.4mg(7.9mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基磺酰基)-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和6.2mg(23.5mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到6.9mg(理论值的74％)作为固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1150(M+H)+
中间体122
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体157类似地，使8mg(9.1mmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3E)-1，4-二苯基丁-3-烯-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和7.2mg(27.4mmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼盐酸盐偶联，并后处理。得到8.2mg(理论值的82％)作为白色固体的标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1083(M+H)+
中间体123
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将30mg(30μmol)中间体89溶解于2ml 1，4-二噁烷中，并与4ml饱和碳酸氢钠溶液混合，然后与7.5mg(50μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到24mg(理论值的74％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1006(M+H)+。
中间体124
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使22mg(20μmol)中间体123与4ml三氟乙酸在8ml二氯甲烷中在室温反应1h。此后，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到11mg(理论值的54％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝950(M+H)+。
中间体125
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22.5mg(20μmol)中间体101溶解于2ml 1∶1二噁烷/水中，然后与5.6mg(40μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯和与0.25ml饱和碳酸氢钠溶液混合。将反应混合物在室温搅拌30min。然后，加入另外0.25ml饱和碳酸氢钠溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外15min，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到12.8mg(理论值的50％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1019(M+H)+。
中间体126
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将64mg(70μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体97)溶解于3ml 1∶1二噁烷/水中，然后用4ml饱和碳酸氢钠溶液调节至pH 9，随后与16.3mg(110μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。然后，加入另外8mg(55μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯，并将反应混合物再次调至pH 9，并在室温搅拌另外1小时。这之后进行浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。最初得到31mg仍未环化的中间体。将27mg该中间体再次溶解于2ml 1∶1二噁烷/水中，然后与250μl饱和碳酸氢钠溶液混合。在室温搅拌2小时以后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。低压冻干以后，得到20mg(理论值的29％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.96min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝992(M+H)+。
中间体127
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将17mg(18μmol)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体98)溶解在2.8ml二氯甲烷中，并与20mg(174mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与10mg(52μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.21mg(0.17μmol)DMAP混合。在室温搅拌4h以后，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到8.2mg(理论值的43％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.98min；MS(ESIpos)：m/z＝1071(M+H)+。
中间体128
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在845μl DMF中，然后与3.2mg(17μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2.6mg(17μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、1.96μl N，N-二异丙基乙胺和5.9mg(22.5μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到2.2mg(理论值的36％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝1094(M+H)+。
中间体129
N-(6-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4mg(4.3μmol)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在646μl DMF中，然后与2.5mg(13μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2.0mg(13μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、2.25μl N，N-二异丙基乙胺和4.5mg(17μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌3h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到1.9mg(理论值的39％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1134(M+H)+。
中间体130
N-(4-{[(2R)-1-({5-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}氨基)丙烷-2-基]氧基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10.5mg(11.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3.7ml二氯甲烷中，然后与6.7mg(35μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.7mg(5.8μmol)4-二甲基氨基吡啶和8.2mg(47μmol)商购可得的(2R)-2-羟丙基氨基甲酸叔丁酯混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到7.5mg(理论值的61％)Boc-保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝1056(M+H)+。
随后，用三氟乙酸除去Boc保护基。然后将4.9mg(0.005mmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于1.8ml二氯甲烷中，并与3.7mg(0.011mmol)1，1′-[(1，5-二氧代戊烷-1，5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮、2.4μl(0.014mmol)N，N-二异丙基乙胺和0.6mg(5μmol)4-二甲基氨基吡啶混合。将混合物在室温搅拌2h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到0.77mg(理论值的15％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1167(M+H)+。
中间体131
N-{4-[(1-{5-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-5-氧代戊酰基}哌啶-4-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(11μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2ml二氯甲烷中，然后与4.3mg(22μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.88mg(6μmol)4-二甲基氨基吡啶和5.2mg(22μmol)商购可得的4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到5mg(理论值的40％)Z-保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1116(M+H)+。
随后，通过在钯/活性炭上在乙醇中的氢解方式，除去Z保护基。然后将4.6mg(0.005mmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于1.8ml二氯甲烷中，并与3.8mg(0.012mmol)1，1′-[(1，5-二氧代戊烷-1，5-二基)双(氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮、0.8μl(0.005mmol)N，N-二异丙基乙胺和0.6mg(5μmol)4-二甲基氨基吡啶混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到0.96mg(理论值的16％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1193(M+H)+。
中间体132
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15mg(16.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2500μl DMF中，然后与9.6mg(50μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、7.6mg(50μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、5.8μl N，N-二异丙基乙胺和17.4mg(67μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到11.2mg(理论值的52％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝1106(M+H)+。
中间体133
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将5.8mg(6.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在943μl DMF中，然后与3.6mg(19μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、2.9mg(19μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、2.2μl N，N-二异丙基乙胺和6.6mg(25μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到4.5mg(理论值的64％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；MS(ESIpos)：m/z＝1129(M+H)+。
中间体134
N-[3-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，在标准条件下，从商购可得的1-(2-氨基乙基)-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐和氯碳酸-4-硝基苯酯开始，制备2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯。
将5mg(6μmol)N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1000μl DMF中，然后与2μl N，N-二异丙基乙胺和2.2mg(9μmol)2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基氨基甲酸-4-硝基苯酯混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到1.6mg(理论值的23％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体135
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(11μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在4000μl DMF中，然后与6.3mg(33μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4.5mg(33μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、5.7μl N，N-二异丙基乙胺和11.5mg(44μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到2.6mg(理论值的14％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1115(M+H)+。
中间体136
N-(4-{4-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]哌嗪-1-基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，在标准条件下，从哌嗪-1-甲酸叔丁酯和4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸开始，经2个阶段制备1-[4-氧代-4-(哌嗪-1-基)丁基]-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐。
将5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在1000μl DMF中，然后与2.1mg(11μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1.7mg(11μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、2μl N，N-二异丙基乙胺和3.5mg(5.6μmol)1-[4-氧代-4-(哌嗪-1-基)丁基]-1H-吡咯-2，5-二酮三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌过夜。然后，加入2.1mg(5.6μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐，并将反应混合物在室温搅拌另外3h。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并且，通过从水低压冻干，得到0.6mg(理论值的10％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1132(M+H)+。
中间体137
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-1-甲基肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，在标准条件下，从商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酸和1-甲基肼甲酸叔丁酯开始，经2个阶段制备6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐。
将6.9mg(8μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2540μl DMF中，然后与3.6mg(9μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、3μl N，N-二异丙基乙胺和4.1mg(12μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐混合。将混合物在室温搅拌过夜。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到3.9mg(理论值的45％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1108(M+H)+。
中间体138
N-{4-[(2-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基](甲基)氨基}乙基)(甲基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先从2-(甲基氨基)乙基氨基甲酸叔丁基甲酯和4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸开始，经2个阶段，制备4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐。
将6.6mg(7.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2000μl DMF中，然后与5.6mg(14.7μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、2.6μl N，N-二异丙基乙胺和4.1mg(9μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐混合。在室温搅拌3h以后，再次加入相同量的HATU和N，N-二异丙基乙胺，然后将反应混合物在室温搅拌过夜。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到4mg(理论值的44％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1134(M+H)+。
中间体139
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
将13mg(14.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在10ml二氯甲烷中，然后与8.4mg(44μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、5.4mg(44μmol)4-二甲基氨基吡啶和9mg(29.3μmol)商购可得的N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸苄酯混合。将混合物在室温搅拌5h。随后，通过与水和有机相一起摇动，将反应混合物萃取2次，经硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷/水低压冻干以后，得到14mg(理论值的81％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.3min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝1178(M+H)+。
随后，通过在10％钯/活性炭上在甲醇中的氢解方式，除去Z保护基。然后将9.5mg(0.0087mmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于5ml DMF中，并与5mg(26.2μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4mg(26.2μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、54.6μl N，N-二异丙基乙胺和9.1mg(34.9μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到9.5mg(理论值的84％)Boc-保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1295(M+H)+。
随后，用0.5ml三氟乙酸在2ml二氯甲烷中的溶液，将9.5mg(7.3μmol)Boc-保护的中间体去保护，从二噁烷低压冻干以后，得到9mg(理论值的82％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝1195(M+H)+。
中间体140
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]-1-甲基肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4.1mg(12μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N′-甲基己烷酰肼三氟乙酸盐(中间体22)与6.9mg(8μmol)得自中间体61的化合物一起溶解在2.5ml DMF中，然后与3.5mg(9μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和3μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到2.6mg(理论值的30％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90和0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1120(M+H)+。
中间体141
N-[4-({1-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]哌啶-4-基}氧基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将44mg(49μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在2ml二氯甲烷中，然后与18.8mg(98μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、3.8mg(24μmol)4-二甲基氨基吡啶和23mg(98μmol)商购可得的4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到22mg(理论值的40％)Z-保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.04min；MS(ESIpos)：m/z＝1116(M+H)+。
随后，通过在钯/活性炭上在乙醇中的氢解方式，除去Z保护基。
然后将19mg(19μmol)去保护的粗产物不经进一步纯化溶解于4ml DMF中，并与7mg(39μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸、11mg(29μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到7.5mg(理论值的34％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1147(M+H)+。
中间体142
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将9mg(9.5μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体72)溶解在1000μl DMF中，然后与10mg(38μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼、7.2mg(19μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和8μl N，N-二异丙基乙胺混合，并将反应混合物在室温搅拌1h。随后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并通过低压冻干法得到6.4mg(理论值的58％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1154(M+H)+。
中间体143
N-(4-{2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体142类似地，使6mg(6.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体61)与3mg(8.7μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐反应，得到2mg(理论值的27％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1106(M+H)+。
中间体144
N-(4-{2-[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入7.65mg(22.5μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐、3.2mg(16.9μmol)EDC、1.96μl(11.3μmol)二异丙基乙胺和2.6mg(16.9μmol)HOBT。将反应混合物在室温搅拌3h。随后，加入另外0.95mg(2.8μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-2，2-二甲基丁烷酰肼三氟乙酸盐。搅拌过夜后，浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC进行纯化。得到3.5mg(85％纯度，理论值的48％)标题化合物。
LC-MS(方法3)：Rt＝1.86min；m/z＝1094(M+H)+。
中间体145
N-[3-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将12mg(14μmol)N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体66)溶解于750μl二噁烷中，并与1.5ml饱和碳酸氢钠溶液混合，然后与3.2mg(21μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌1h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到4.2mg(理论值的32％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝950(M+H)+。
中间体146
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体133类似地，使9mg(9.8μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-({(2S)-1-[苄基(甲基)氨基]-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基}氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体73)与10mg(39μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼反应，得到1.8mg(理论值的15％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法9)：Rt＝5.11min；MS(ESIpos)：m/z＝1128(M+H)+。
中间体147
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将16mg(17μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S，3S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体70)溶解在2ml二氯甲烷中，并与2.6mg(23mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与4mg(21μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐混合。在室温搅拌2h以后，再次加入相同量的1-羟基吡咯烷-2，5-二酮和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。然后，在室温搅拌过夜，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到10mg(理论值的56％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
中间体148
N-{4-[(2-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基](甲基)氨基}乙基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将6mg(7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体61)与2.8mg(8μmol)N-(2-氨基乙基)-4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-甲基丁酰胺三氟乙酸盐、10.1mg(27μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺在2ml DMF中混合，并在室温搅拌过夜。然后，加入另外5mg(23.5μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和3μl N，N-二异丙基乙胺。在室温搅拌另外5h以后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并通过从二噁烷低压冻干，得到1.3mg(理论值的15％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.21min；MS(ESIpos)：m/z＝1120(M+H)+。
中间体149
N-{4-[(2-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]氨基}乙基)(甲基)氨基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将6mg(7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体61)与3.1mg(9μmol)4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-[2-(甲基氨基)乙基]丁酰胺三氟乙酸盐、10.1mg(27μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺在2ml DMF中混合，并将混合物在室温搅拌4h。然后，在减压下除去溶剂，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分，并通过从二噁烷低压冻干，得到1mg(理论值的13.4％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝1121(M+H)+。
中间体150
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将7.9mg(9μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S，2R)-2-苯基-1-(丙基氨甲酰基)环丙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3ml DMF中，然后与10.4mg(54μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、8.3mg(54μmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、9μl N，N-二异丙基乙胺和9.5mg(36μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到4.3mg(理论值的22％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.93min；MS(ESIpos)：m/z＝1078(M+H)+。
中间体151
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-氨甲酰基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体150类似地，从中间体81中的化合物开始，制备所述化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1036(M+H)+。
中间体152
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(12μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(乙氧基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3ml DMF中，然后与8.9mg(23μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、10μl N，N-二异丙基乙胺和12mg(47μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将混合物在室温搅拌1h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到5.8mg(理论值的37％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1066(M+H)+。
中间体153
N-[1-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12，15-二氧代-3，6，9-三氧杂-13，14-二氮杂十八烷-18-基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向5mg(5.6μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1ml DMF中的溶液中，加入9.7mg(22.5μm0l)3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷酰肼三氟乙酸盐、3.2mg(16.9μmol)EDC、1.96μl(11.3μmol)N，N-二异丙基乙胺和2.6mg(16.9μmol)HOBT。将反应混合物在室温搅拌3h。随后，加入另外1.2mg(2.8μmol)3-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙烷酰肼三氟乙酸盐。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后通过制备型HPLC进行纯化。
得到3.6mg(理论值的51％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；m/z＝1185(M+H)+。
中间体154
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
将15mg(17μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在10ml二氯甲烷中，然后与12.8mg(67μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、10mg(83μmol)4-二-甲基氨基吡啶和10.3mg(33μmol)商购可得的N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸苄酯混合。将混合物加热至回流保持4h。然后，再次加入相同量的偶联剂和4-二-甲基氨基吡啶，并将反应混合物在回流下加热过夜。随后，用二氯甲烷稀释反应混合物，并通过与水一起摇动1次进行萃取，取出有机相，并在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到7.7mg(理论值的37％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝1190(M+H)+。
随后，通过在标准氢压力下在10％钯/活性炭上在甲醇中氢化，除去苄基酯保护基，如在中间体151中所述，将如此得到酸与6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼偶联。在最后一步中，用三氟乙酸除去Boc保护基。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从而得到0.22mg(理论值的2.5％，经3个阶段)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝1207(M+H)+。
中间体155
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体152中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼制备该化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝1024(M+H)+。
中间体156
N-(3-{[(1-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}环丙基)羰基]氨基}丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体131的最后阶段中描述的合成类似地，从N-(3-氨基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和1，1′-[环丙烷-1，1-二基双(碳酰氧基)]二吡咯烷-2，5-二酮(其已经预先从对应的二羧酸得到)制备该化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1080(M+H)+。
中间体157
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15mg(18μmol)(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在3.8ml DMF中，然后与27mg(70μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、12μl N，N-二异丙基乙胺和14mg(53μmol)商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼混合。将反应混合物在室温搅拌1h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到6.2mg(理论值的33％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1063(M+H)+。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6，特征信号)：δ＝10.8(d，1H)，9.8-9.7(m，2H)，9.6和9.4(2m，1H)，8.9，8.88，8.78和8.75(4d，1H)，8.08和7.85(2d，1H)，7.6-6.9(m，9H)，4.7-4.4(m，3H)，3.4(t，2H)，3.23，3.2，3.18，3.0，和2.99(5s，9H)，2.8(m，3H)，2.1(t，2H)，1.06和1.01(2d，3H)，0.95-0.8(m，15H)，0.8-0.75(dd，3H)。
中间体158
N-[4-({(2R)-1-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基}氨基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将13mg(14.7μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在4ml二甲基甲酰胺中，然后与9.4mg(25μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、6μl N，N-二异丙基乙胺和7mg(31μmol)商购可得的D-亮氨酸叔丁酯盐酸盐混合。将混合物在室温搅拌5h，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷/水低压冻干以后，得到6.5mg(理论值的49％)受保护的中间体，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.21min；MS(ESIpos)：m/z＝1076(M+H)+。
首先使用三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液从该受保护的中间体除去Boc保护基，得到6.2mg(理论值的99％)去保护的化合物。将5.2mg(5μmol)该中间体溶解于1.5ml二氯甲烷中，并在有1.2mg(6μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.16mg(1μmol)4-二甲基氨基吡啶存在下与0.8mg(7μmol)N-羟基琥珀酰亚胺反应。在室温搅拌2h以后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC进行纯化。得到1.3mg标题化合物，将其中的一些水解为反应物。
中间体159
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：6mg(理论值的53％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1114(M+H)+。
中间体160
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从20mg(21μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：13mg(理论值的52％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1153(M+H)+。
中间体161
N-(6-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：0.8mg(理论值的16％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.78min；MS(ESIpos)：m/z＝1092(M+H)+。
中间体162
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将18mg(20μmol)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体64)溶解在3.2ml二氯甲烷中，并与22mg(190mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与11mg(60μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.24mg(0.17μmol)DMAP混合。在室温搅拌2h以后，加入另外22mg(190mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、11mg(60μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.24mg(0.17μmol)DMAP，并将反应混合物在室温搅拌另外1小时。这之后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到8.2mg(理论值的41％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1024(M+H)+。
中间体163
[(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙基](1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基)甲酮三氟乙酸盐
首先，与文献方法(参见H.King，J.Chem.Soc.1942，432)类似地，从265mg(0.82mmol)(1S，2R)-1-(羟基氨甲酰基)-2-苯基环丙基氨基甲酸叔丁酯(起始化合物7)开始，通过与1，2-双(溴甲基)苯反应，制备Boc-保护的(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基氨基甲酸叔丁酯中间体。
收率：108mg(理论值的34％)
LC-MS(方法2)：Rt＝1.3min；MS(ESIpos)：m/z＝395(M+H)+。
将108mg(0.27mmol)该中间体溶解于3.7ml二氯甲烷中，加入1.8ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌15min。这之后在减压下浓缩，并从二噁烷中低压冻干剩余的残余物。以定量收率得到112mg标题化合物，为无色泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝295(M+H)+。
中间体164
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将166mg(0.196mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体10)溶解于40ml DMF中，并接连地与80mg(0.196mmol)[(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙基](1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基)甲酮三氟乙酸盐(中间体163)、112mg(0.294mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和682μl(3.9mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。随后将混合物在室温搅拌过夜。然后在减压下浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中，并用饱和氯化钠水溶液洗涤溶液。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。最后通过制备型HPLC纯化残余物。以此方式，得到19mg(理论值的9％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法5)：Rt＝1.68min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.51min；MS(ESIpos)：m/z＝1083(M+H)+。
将19mg(0.015mmol)该中间体溶解在4ml DMF中。已经加入817μl哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌5min。这之后在减压下浓缩，并首先用二乙基醚消化残余物，然后借助于制备型HPLC(洗脱液：乙腈+0.1％TFA/0.1％水溶液TFA)进行纯化。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，然后将残余物从二噁烷/水低压冻干。得到12mg(理论值的92％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝861(M+H)+。
中间体165
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
使用20mg(0.021mmol)中间体164，与中间体97的制备类似地，在有氰基硼氢化钠存在下与6-氧代己基氨基甲酸苄酯反应，随后氢解除去Z保护基(用5％炭载钯作为催化剂，在作为溶剂的甲醇中)，以制备标题化合物。
收率：4.5mg(理论值的23％，经2个阶段)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝960(M+H)+。
中间体166
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-(1，4-二氢-3H-2，3-苯并噁嗪-3-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将4.4mg(4.5μmol)中间体165溶解于1ml 1∶1二噁烷/水中，然后与1mg(6.8μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯和50μl饱和碳酸氢钠水溶液混合。将反应混合物在室温搅拌30min。然后，加入另外50μl饱和碳酸氢钠水溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外15min，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。低压冻干以后，得到1mg(理论值的21％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.08min；MS(ESIpos)：m/z＝1040(M+H)+。
中间体167
3-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸苄酯
如下从6g(21.55mmol)商购可得的3-{2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酸制备标题化合物：首先在标准条件下，用苄基氯和碳酸铯进行酯化，随后用三氧化硫-吡啶复合物进行氧化。
收率：611mg(理论值的10％，经2个阶段)
LC-MS(方法2)：Rt＝1.69min；MS(ESIpos)：m/z＝311(M+H)+。
中间体168
N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体69中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和Nα-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-色氨酰胺三氟乙酸盐(中间体49)偶联，并随后借助于哌啶除去Fmoc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
将25mg(0.028mmol)该化合物和17.5mg(0.06mmol)中间体167在2ml甲醇中混合，并与12.6mg(0.14mmol)硼烷-吡啶复合物和2.5ml乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后，再次加入相同量的硼烷-吡啶复合物和乙酸，并将反应混合物在室温搅拌另外24h。这之后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分和从1：1二噁烷/水低压冻干以后，得到26.5mg(理论值的88％)Z-保护的标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.04min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1064(M+H)+。
将25mg(0.024mmol)该中间体溶解于10ml甲醇中，并在10％活性炭载钯上在标准氢压力下在室温氢化45min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。从二噁烷低压冻干以后，得到19.7mg(理论值的85％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.83min；MS(ESIpos)：m/z＝974(M+H)+。
中间体169
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体168溶解在3ml DMF中，并与3.5mg(30mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与2.4mg(10μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和5μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌20h以后，加入8mg(0.02mmol)HATU，并将反应混合物再次在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从二噁烷低压冻干以后，得到8.6mg(理论值的64％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝1071(M+H)+。
中间体170
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体101类似地，从26mg(0.028mmol)中间体15开始，经2个阶段制备所述化合物。
收率：16.7mg(理论值的63％，经2个阶段)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝914(M+H)+。
中间体171
N-(6-{[4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将6.7mg(7.3μmol)从中间体170形成的化合物和3mg(14.7μmol)商购可得的4-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)丁酸溶解于2ml DMF中，并与5.6mg(14.7μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和2μl N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌30min。浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，然后将残余物从二噁烷低压冻干。从而得到4.5mg(理论值的56％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝1079(M+H)+。
中间体172
2-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基氨基甲酸苄酯
如下从商购可得的2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙醇，制备标题化合物：首先在标准条件下引入Z保护基，然后用三氧化硫-吡啶复合物氧化。
HPLC(方法12)：Rt＝1.4min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.65min；MS(ESIpos)：m/z＝326(M+H)+。
中间体173
{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙基氨基甲酸苄酯
与中间体172类似地，如下从商购可得的2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙醇制备标题化合物：首先在标准条件下引入Z保护基，然后用三氧化硫-吡啶复合物氧化。
HPLC(方法12)：Rt＝1.3min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝282(M+H)+。
中间体174
N-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体167的制备类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用2-{2-[2-(2-氧代乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基氨基甲酸苄酯对47mg(0.05mmol)中间体16进行还原胺化。随后，用5％炭载钯作为催化剂和在作为溶剂的甲醇中，通过氢解方式除去Z保护基，并制备38mg(理论值的66％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝988(M+H)+。
中间体175
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体166类似地，从34mg(0.03mmol)中间体174开始，进行制备。
收率：8.3mg(理论值的23％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1068(M+H)+。
中间体176
N-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体174和175类似地，从用中间体173还原胺化中间体16开始，随后去保护和形成马来酰亚胺。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝981(M+H)+。
中间体177
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体174和175类似地，从用中间体172还原胺化中间体16开始，随后去保护和形成马来酰亚胺。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1025(M+H)+。
中间体178
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体162类似地，从6mg中间体82开始，进行制备。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝953(M+H)+。
中间体179
4-[(1E，3S)-3-氨基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸盐
将13.6mg(0.06mmol)乙酸钯(II)、469mg(1.46mmol)4-碘苯磺酸钾、300mg(1.21mmol)1-苯基丁-3-烯-2-基氨基甲酸-(S)-叔丁酯、16.5mg(0.12mmol)苯基脲和167.6mg(1.21mmol)碳酸钾在7.5ml DMF中的混合物在微波中加热至160℃保持15min。随后通过制备型HPLC直接纯化粗产物。得到312mg 31％的BOC-保护的化合物和69％的游离胺的混合物。
随后将该混合物溶解于30ml二氯甲烷中，与1ml三氟乙酸混合，并在室温搅拌20h。在减压下浓缩以后，将残余物与二乙基醚一起搅拌，并抽滤出形成的沉淀物，用二乙基醚洗涤。得到200mg(理论值的62％)标题化合物。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.44min；MS(ESIpos)：m/z＝304(M+H)+。
中间体180
4-[(3R)-3-氨基-4-苯基丁基]苯磺酸
将100mg(0.25mmol)4-[(1E，3S)-3-氨基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸盐悬浮于10ml乙酸以及几滴DMF和水中，与70mg(0.07mmol)炭载钯(10％)混合，并在2.2巴氢压力下氢化24h。过滤溶液，并通过制备型HPLC纯化滤液。
得到29mg(76％纯度，理论值的21％)产物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.46min；MS(ESIpos)：m/z＝306(M+H)+。
中间体181
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向90mg(0.13mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在4ml DMF中的溶液中，加入60mg(0.16mmol)HATU和69μl(0.39mmol)Hünig碱。将反应混合物在室温搅拌30min，然后与60mg(0.15mmol)60.3mg(0.13mmol)4-[(1E，3S)-3-氨基-4-苯基丁-1-烯-1-基]苯磺酸三氟乙酸盐混合。搅拌过夜后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。得到127mg标题化合物和已经去保护的胺的44∶56混合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.21min；MS(ESIpos)：m/z＝971(M+H)+；Rt＝0.84min；对于去保护的化合物，MS(ESIpos)：m/z＝871(M+H)+。
中间体182
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将90mg中间体180溶解在4.6ml二氯甲烷中，并加入0.92ml三氟乙酸。将反应混合物在室温搅拌30min，然后浓缩。通过制备型HPLC，纯化得到的粗产物。
得到91mg(理论值的98％)目标化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝871(M+H)+
中间体183
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先将16.7μl(0.03mmol)15％琥珀醛水溶液加入943μl甲醇中，并与17mg(0.02mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体181)和1.1μl(0.02mmol)乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌5min，然后加入2.9μl(0.02mmol)硼烷-吡啶复合物。1h以后，加入各自另外2当量的琥珀醛、乙酸和硼烷-吡啶复合物，并将混合物在室温搅拌20h。然后通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到20mg(83％纯度，理论值的80％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝957(M+H)+
中间体184
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将8mg(7.5μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺、2.8mg(8.2μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼三氟乙酸盐、3.4mg(9μmol)HATU和3.9μl Hünig碱在0.77ml DMF中在室温搅拌20h。随后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到3mg(理论值的31％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1164(M+H)+
中间体185
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向8mg(7.5μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2S，3E)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-3-烯-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在2ml DMF中的溶液中，加入8.6mg(74.8μmol)N-羟基琥珀酰亚胺、8.5mg(22.4μmol)EDCI和0.1mg(0.75μmol)DMAP。将反应混合物在室温搅拌20h。随后，加入1.3μl(7.5μmol)Hünig碱，并将混合物搅拌1h。然后通过制备型HPLC纯化反应混合物。得到2.6mg(72％纯度，理论值的21％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝1054(M+H)+
中间体186
N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向43mg(0.06mmol)N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在1.9ml DMF中的溶液中，加入29mg(0.07mmol)HATU和33μl(0.19mmol)Hünig碱。将反应混合物在室温搅拌30min，然后与29mg(0.07mmol)4-[(3R)-3-氨基-4-苯基丁基]苯磺酸三氟乙酸盐混合。搅拌过夜后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。得到58mg标题化合物和已经去保护的胺的45∶55混合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.09min；MS(ESIpos)：m/z＝973(M+H)+；Rt＝0.87min；对于去保护的化合物，MS(ESIpos)：m/z＝873(M+H)+。
中间体187
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将58mg中间体186溶解在4.1ml二氯甲烷中，加入0.41ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。在减压下浓缩以后，通过制备型HPLC纯化粗产物。
得到50mg(90％纯度，理论值的85％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝873(M+H)+
中间体188
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先将171μl(0.26mmol)15％琥珀醛水溶液加入2.5ml甲醇中，并与50mg(0.05mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐和11.6μl(0.2mmol)乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌5min，然后加入30μl(0.24mmol)硼烷-吡啶复合物。搅拌24小时以后，加入另外等量的硼烷-吡啶复合物，并将混合物搅拌另外2h。然后通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到40mg(90％纯度，理论值的66％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝959(M+H)+
中间体189
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(9.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺、3.5mg(10.3μmol)6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼三氟乙酸盐、4.3mg(11.2μmol)HATU和4.9μl(28μmol)Hünig碱在1ml DMF中在室温搅拌20h。随后，通过制备型HPLC纯化反应混合物。
得到4.2mg(92％纯度，理论值的33％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1166(M+H)+
中间体190
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
向10mg(9.3μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(2R)-1-苯基-4-(4-磺苯基)丁-2-基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺在2.5ml DMF中的溶液中，加入10.7mg(93μmol)N-羟基琥珀酰亚胺、10.6mg(28μmol)EDCI和0.12mg(0.9μmol)DMAP。将反应混合物在室温搅拌20h，然后通过制备型HPLC进行纯化。
得到3.8mg(72％纯度，理论值的25％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1055(M+H)+
中间体191
(2R，3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
与中间体7的合成类似地，从起始化合物1和(2S)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体99)开始，经2个阶段制备标题化合物。
2个阶段的收率：62mg(理论值的67％)
HPLC(方法6)：Rt＝1.65min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝443(M+H)+。
中间体192
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将1015mg(1.59mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于50ml DMF中，与654mg(2.39mmol)2-溴-1-乙基吡啶鎓四氟硼酸盐(BEP)和2.8ml N，N-二异丙基乙胺混合，并在室温搅拌10min。然后，加入1083mg(1.75mmol)(2R，3R)-N-[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体191)，然后将混合物在超声浴中在室温处理30min。然后将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物溶解于300ml乙酸乙酯中。将有机相接连地用5％柠檬酸水溶液和5％碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将如此得到的粗产物(1684mg不经进一步纯化溶解于20ml乙腈中，加入2ml哌啶，然后将反应混合物在室温搅拌10min。然后，将混合物在减压下浓缩，并将残余物与二乙基醚一起混合。通过再次蒸发来浓缩溶剂，并通过在硅胶上的快速色谱法(洗脱液：15∶1∶0.1-＞15∶2∶0.2二氯甲烷/甲醇/17％氨水溶液)纯化残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，并将残余物从乙腈/水低压冻干。从而得到895mg(67％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝840(M+H)+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝10.8(d，1H)，8.3和8.05(2d，1H)，8.0(d，1H)，7.5(m，1H)，7.3(m，1H)，7.15和7.08(2s，1H)7.05-6.9(m，2H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.65(m，1H)，4.55(m，1H)，4.1-3.8(m，4H)，3.75(d，1H)，3.23，3.18，3.17，3.12，2.95和2.88(6s，9H)，3.1-3.0和2.85(2m，2H)，2.65(d，1H)，2.4-2.2(m，3H)，2.15(m，3H)，1.95(br.m，2H)，1.85-0.8(br.m，11H)，1.08和1.04(2d，3H)，0.9-0.75(m，15H)，0.75-0.65(dd，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体193
N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将50mg(0.052mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体192)和204μl 15％的4-氧代丁酸水溶液在2ml甲醇中混合，并与23.4mg(0.252mmol)硼烷-吡啶复合物和6μl乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分以后，得到38mg(理论值的78％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法9)：Rt＝4.7min；MS(ESIpos)：m/z＝926(M+H)+。
中间体194
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与在中间体157中描述的合成类似地，从10mg(11μmol)N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺和商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼，制备该化合物。
收率：4.4mg(理论值的35％)
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1133(M+H)+。
中间体195
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体166类似地，从9mg(0.010mmol)中间体170开始，制备所述化合物。
收率：1.1mg(理论值的10％)
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝994(M+H)+。
中间体196
(2S)-2-氨基-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐
将41mg(0.37mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-苯基丙氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯溶解于10ml DMF中，并与149mg(0.41mmol)2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯(起始化合物6)和72μl(0.41mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h。在减压下除去溶剂，将残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过与5％柠檬酸水溶液一起摇动，然后与5％碳酸氢钠水溶液一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并使用10∶1甲苯/乙醇作为洗脱液，通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，如此得到69mg(理论值的47％)Boc-保护的中间体(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯，为非对映异构体混合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.1min；MS(ESIpos)：m/z＝359(M+H)+。
将64mg(0.18mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入1ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌30min。这之后在减压下浓缩，并将剩余的残余物从水/二噁烷中低压冻干。以此方式，得到66mg(定量)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.45min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝259(M+H)+。
中间体197
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐
首先，如下从83mg(0.18mmol)它的二环己胺盐中释放出(2R，3R)-3-[(2S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基]-3-甲氧基-2-甲基丙酸(起始化合物1)：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸氢钾溶液水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将残余物溶解于10ml DMF中，并接连地与66mg(0.18mmol)(2S)-2-氨基-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-3-苯基丙烷-1-酮三氟乙酸盐(中间体196)、101mg(0.266mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和93μl(0.53mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌30min。然后浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。得到52mg(理论值的56％)Boc-保护的中间体(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯。
HPLC(方法6)：Rt＝2.13min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝528(M+H)+。
将52mg(0.1mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入1ml三氟乙酸，并将混合物在室温搅拌20min。这之后在减压下浓缩，并与20ml二乙基醚一起搅拌剩余的残余物。10min以后，过滤混合物，并在高真空下干燥滤渣。以此方式，得到39mg(理论值的72％)标题化合物。
HPLC(方法6)：Rt＝1.62min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝428(M+H)+。
中间体198
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将44.5mg(0.071mmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)溶解于10ml DMF中，并接连地与38.6mg(0.071mmol)(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-N-[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰胺三氟乙酸盐(中间体197)、32.5mg(0.086mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和41μl(0.235mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h。然后在减压下浓缩反应混合物，将残余物溶解于乙酸乙酯中。将有机相接连地用5％柠檬酸水溶液和5％碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。得到73mg(理论值的98％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
HPLC(方法6)：Rt＝2.78min；
LC-MS(方法3)：Rt＝2.96min；MS(ESIpos)：m/z＝1047(M+H)+。
将73mg(0.071mmol)该中间体溶解在5ml DMF中。已经加入0.5ml哌啶以后，将反应混合物在室温搅拌10min。这之后在减压下浓缩，并用二乙基醚重复消化残余物。已经倾析出二乙基醚以后，通过制备型HPLC(洗脱液：乙腈/0.1％水溶液TFA)纯化残余物。得到16mg(理论值的26％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法6)：Rt＝1.94min；
LC-MS(方法3)：Rt＝1.71min；MS(ESIpos)：m/z＝825(M+H)+
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ＝8.9-8.6(m，3H)，8.4，8.3，8.1和8.0(4d，1H)，7.3-7.1(m，5H)，6.7-6.5(m，2H)，5.2-4.8(m，3H)，4.75-4.55(m，3H)，4.05-3.95(m，1H)，3.7-3.4(m，4H)，3.22，3.17，3.15，3.05，3.02和2.95(6s，9H)，3.0和2.7(2br.m，2H)，2.46(m，3H)，2.4-1.2(br.m，13H)，1.1-0.85(m，18H)，0.75(m，3H)[其它信号被隐藏在H2O峰下]。
中间体199
N-(4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体193和194类似地，从23mg(24μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S)-1-(2-氧杂-3-氮杂双环[2.2.2]辛-5-烯-3-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体198)开始，制备标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法2)：Rt＝2.1min；MS(ESIpos)：m/z＝1118(M+H)+。
中间体200
N-[2-(2-{2-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体174和175类似地，从用中间体172将中间体192还原烷基化开始，随后去保护和形成马来酰亚胺。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1025(M+H)+。
中间体201
N-{6-[(溴乙酰基)氨基]己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将22mg(0.023mmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体101)溶解在9.5ml THF中，并与4.2μl三乙胺在0℃混合。逐滴加入溴乙酰氯在THF中的溶液，并将反应混合物在0℃搅拌30min。浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。从而得到6.9mg(理论值的26％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1059和1061(M+H)+。
中间体202
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：最初与中间体168类似地，从用中间体167将中间体192还原烷基化开始，随后对N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺的苄基酯进行氢解裂解。
将13mg(10μmol)该中间体溶解在5ml DMF中，并与2.1mg(20mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、6.5μl N，N-二异丙基乙胺和7.1mg(0.02mmol)HATU混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到9.2mg(理论值的62％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法2)：Rt＝2.1min；MS(ESIpos)：m/z＝1141(M+H)+。
中间体203
6-肼基-6-氧代己基氨基甲酸叔丁酯
如下制备该化合物：通过标准肽化学方法，在有EDCI和HOBT存在下，使6-[(叔丁氧基羰基)氨基]己酸与肼甲酸苄酯偶联，随后氢解除去苄氧基羰基保护基。
LC-MS(方法11)：Rt＝0.59min；MS(ESIpos)：m/z＝246(M+H)+。
中间体204
N-{4-[2-(6-氨基己酰基)肼基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将146mg(50μmol)(N-(3-羧基丙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺溶解在5ml DMF中，然后与30.6mg(80μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐、19μl N，N-二异丙基乙胺和22.4mg(60μmol)6-肼基-6-氧代己基氨基甲酸叔丁酯混合。将反应混合物在室温搅拌1.5h。这之后，在高真空下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化剩余的残余物。从而得到43mg(理论值的68％)受保护的中间体，然后将其溶解于10ml二氯甲烷中，并用1ml三氟乙酸去保护。浓缩反应混合物，将残余物与二氯甲烷一起搅拌，并再次在减压下除去溶剂。从而得到45mg(理论值的68％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.66min；MS(ESIpos)：m/z＝983(M+H)+。
中间体205
N-(4-{2-[6-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体114类似地，从中间体50和204开始，制备所述化合物。
收率：4mg(理论值的78％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝1149(M+H)+。
中间体206
N-(6-{[3-({3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙基}二硫烷基)丙酰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将8mg(10μmol)中间体101溶解在2ml DMF中，并与8.6mg(20μmol)1，1′-{二硫烷二基双[(1-氧代丙烷-3，1-二基)氧基]}二吡咯烷-2，5-二酮和3.7μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌2h，然后在减压下蒸发出溶剂，并通过制备型HPLC纯化残余物。得到7.2mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝615[1/2(M+2H+]
中间体207
(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸三氟乙酸盐
通过用三氟乙酸将210mg(0.76mmol)商购可得的(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-苯基环丙烷甲酸去保护，以定量收率得到标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.23min；MS(ESIpos)：m/z＝178(M+H)+。
中间体208
6-氧代己基氨基甲酸-9H-芴-9-基甲酯
通过在标准条件下用三氧化硫-吡啶复合物氧化，从1g(2.95mmol)商购可得的6-羟基己基氨基甲酸-9H-芴-9-基甲酯制备标题化合物。得到840mg(理论值的85％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.1min；MS(ESIpos)：m/z＝338(M+H)+。
中间体209
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羧基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体75中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和(1S，2R)-1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸三氟乙酸盐(中间体207)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，制备胺化合物N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羧基-2-苯基环丙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
然后，向22mg(0.026mmol)该化合物在10ml甲醇中的溶液中，加入17mg(0.05mmol)6-氧代己基氨基甲酸-9H-芴-9-基甲酯(中间体208)和2.3mg乙酸以及11.4mg(0.12mmol)硼烷-吡啶复合物。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后，再次加入相同量的硼烷-吡啶复合物和乙酸以及8mg6-氧代己基氨基甲酸芴-9-基甲酯，并将反应混合物在室温搅拌另外24h。这之后在减压下浓缩，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分以后，将产物立即用于下一阶段。
将33mg仍然被污染的中间体溶解于5ml DMF中，并加入1ml哌啶。在室温搅拌15min以后，浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化得到的残余物。从而得到11mg(理论值的55％，经2个阶段)氨基羧酸中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.7min；MS(ESIpos)：m/z＝843(M+H)+。
将6mg(7.12μmol)该中间体溶解于1ml二噁烷中，然后与6.6mg(42.7μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯和5μl饱和碳酸氢钠水溶液混合。将反应混合物在室温搅拌1h。然后，加入另外3部分各自为50μl的饱和碳酸氢钠水溶液，并将反应混合物在室温搅拌另外30min。然后，用三氟乙酸将反应混合物酸化至pH 2，并随后在减压下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到4mg(理论值的60％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝923(M+H)+。
中间体210
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，通过文献方法(J.Org.Chem.58，1993，2196-2200)，制备6-氧代己酸。
在9ml甲醇中混合80mg(0.08mmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体192)和65.4mg(0.5mmol)6-氧代己酸，并与10μl乙酸和37.4mg(0.4mmol)硼烷-吡啶复合物混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并将残余物溶解于1∶1乙腈/水中，并用三氟乙酸调节至pH 2。再次浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分以后，得到70mg(理论值的86％)N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝955(M+H)+。
1H NMR(500MHz，DMSO-d6，特征信号)：δ＝12.0(br.M，1H)，10.8(s，1H)，9.4(m，1H)，8.9和8.8(2d，1H)，8.3和8.02(2d，1H)，7.5(m，1H)，7.3(m，1H)，7.15和7.1(2s，1H)7.05-6.9(m，2H)，5.12和4.95(2m，1H)，4.7-4.5(m，2H)，4.1-3.8(m，4H)，3.75(d，1H)，3.25，3.2，3.18，3.13，2.98和2.88(6s，9H)，2.8(m，3H)，1.08和1.04(2d，3H)，0.95-0.8(m，15H)，0.8-0.65(dd，3H)。
将22mg(23μmol)该中间体溶解在1.8ml二氯甲烷中，并与13.2mg(70μmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、26.5mg(230μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮和0.28mg(2μmol)二甲基氨基吡啶混合，并将反应混合物在室温搅拌2h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到21.3mg(理论值的88％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝1052(M+H)+。
中间体211
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，用6-氧代己酸将15mg(20μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐(中间体15)还原烷基化。
收率：9.2mg(理论值的61％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝929(M+H)+。
将9mg(10μmol)该中间体溶解在3ml DMF中，并与5.6mg(48μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、5μl N，N-二异丙基乙胺和5.5mg(0.015mmol)HATU混合，并将反应混合物在超声浴中处理6h。在此过程中，每小时加入5.5mg HATU。随后，在减压下浓缩反应混合物，并将残余物溶解于乙腈/水中，并用三氟乙酸调节至pH 2。在减压下再次浓缩以后，借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到5.8mg(理论值的57％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝1027(M+H)+。
中间体212
N-{2-[2-(2-{3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：最初与中间体168类似地，从用中间体167将中间体15还原烷基化开始，随后进行N-(2-{2-[2-(2-羧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(2S，3S)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代-3-苯基丁-2-基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺的苄基酯的氢解裂解。
将8.4mg(8μmol)该中间体溶解在3ml DMF中，并与9.5mg(80μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮、10μl N，N-二异丙基乙胺和9.4mg(25μmol)HATU混合，并将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。随后，在减压下浓缩反应混合物，并将残余物溶解于乙腈/水中，用三氟乙酸调节至pH 2。在减压下再次浓缩以后，借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从乙腈/水低压冻干以后，得到4mg(理论值的32％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.96min；MS(ESIpos)：m/z＝1117(M+H)+。
中间体213
N-{6-[(反式-4-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}环己基)氨基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体104类似地，从N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(其合成描述在中间体210下)开始，制备所述化合物。得到9.3mg标题化合物(理论值的37％，经3个阶段)。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.9min；MS(ESIpos)：m/z＝1177(M+H)+。
中间体214
N-{4-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-4-氧代丁基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，通过将中间体92转化成活性酯，制备所述化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝901(M+H)+。
中间体215
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与中间体183类似地，将中间体40与硼烷-吡啶复合物一起用于制备N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S，2R)-1-羟基-1-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。与中间体210类似地，然后从该化合物制备活性酯。得到34mg(理论值的36％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝930(M+H)+。
中间体216
N-(4-{[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}苄基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与中间体183的制备类似地，使中间体192与4-甲酰基苯甲酸和硼烷-吡啶复合物反应，得到N-(4-羧基苄基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。然后与中间体210类似地，使用该化合物制备11mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝1072(M+H)+。
中间体217
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将53mg(84μmol)N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(2R，3S，4S)-1-羧基-2-甲氧基-4-甲基己烷-3-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体4)和45mg(84μmol)N-{(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-[(2S)-吡咯烷-2-基]丙酰基}-L-苯基丙氨酸苄酯三氟乙酸盐(中间体12)溶解于2ml DMF中，加入19μl N，N-二异丙基乙胺、14mg(92μmol)HOBt和17.6mg(92μmol)EDC，然后将混合物在室温搅拌过夜。随后，浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。得到59mg(理论值的68％)Fmoc-保护的中间体N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.55min；m/z＝1044(M+H)+。
在5ml DMF中用1.2ml哌啶处理57mg(0.055mmol)该中间体，以除去Fmoc保护基。借助于制备型HPLC浓缩和纯化以后，得到39mg(理论值的76％)游离胺中间体N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺，为三氟乙酸盐。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝822(M+H)+。
与中间体210类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，使60mg(0.06mmol)该中间体与6-氧代己酸反应。得到45mg(理论值的75％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝9936(M+H)+。
中间体218
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄氧基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
通过将42mg(0.05mmol)中间体217转化成活性酯，制备该化合物。
收率：26mg(54％)
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1034(M+H)+。
中间体219
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-苯基乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将20mg(0.02mol)得自中间体218的化合物溶解于2.4ml甲醇中，并在5％活性炭载钯上在标准氢压力下在室温氢化30min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。从1∶1乙腈/水低压冻干残余物。得到14mg(理论值的92％)标题化合物，为无色泡沫。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝944(M+H)+。
中间体220
N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将0.5g(1.01mmol)中间体1在10ml二氯甲烷中的溶液与1ml三氟乙酸混合。在超声浴中处理30min以后，浓缩混合物，首先与DCM一起再蒸馏，然后与二乙基醚一起再蒸馏，并在高真空下干燥。将油状残余物不经进一步纯化用于下一阶段。
将500mg该中间体溶解在20ml DMF中，并与466mg(3.8mmol)中间体191、382mg(1.01mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和440μl(2.5mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并通过首先与5％柠檬酸水溶液一起摇动、然后与饱和碳酸氢钠水溶液一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用95∶5二氯甲烷/甲醇作为洗脱液。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到562mg(65％理论值的，经2个阶段)z-保护的中间体。
将562mg(0.57mmol)该中间体溶解于50ml甲醇中，并用155mg10％活性炭载钯在标准氢压力下在室温氢化20min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，在减压下蒸发出溶剂，并将残余物从二噁烷低压冻干。得到361mg(理论值的87％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法5)：具有Rt＝1.75和1.86min的双峰；
LC-MS(方法1)：在Rt＝0.84min和0.91min的双峰，具有相同质量；MS(ESIpos)：m/z＝944(M+H)+。
中间体221
N4(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-缬氨酸
在22ml甲醇中混合100mg(0.76mmol)商购可得的N-甲基-L-缬氨酸和285mg(1.14mmol)商购可得的(2S)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基氨基甲酸叔丁酯，并与340mg(3.66mmol)硼烷-吡啶复合物和70μl乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨水溶液作为洗脱液。浓缩对应的级分和从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到259mg(理论值的93％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝365(M+H)+。
中间体222
N-[(2S)-2-氨基-3-苯基丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将40mg(0.11mmol)N-{(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯基丙基}-N-甲基-L-缬氨酸(中间体221)溶解在5ml DMF中，并与80mg(0.11mmol)N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体220)、50mg(0.13mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和57μl(2.5mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌1h，然后浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯中，并首先用5％柠檬酸水溶液洗涤，然后用水洗涤。浓缩有机相，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。从二噁烷低压冻干以后，得到60mg(理论值的50％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.2min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.17min；MS(ESIpos)：m/z＝1073(M+H)+。
将60mg(0.05mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入2ml三氟乙酸，并将反应混合物在室温搅拌1.5h。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，并将残余物从二噁烷/水低压冻干。以此方式，得到25mg(理论值的42％)标题化合物，为泡沫。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝974(M+H)+。
中间体223
N-[(2S)-2-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)-3-苯基丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体134类似地，从5mg(4.6μmol)中间体222开始，进行制备。得到3.4mg(理论值的65％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1140(M+H)+。
中间体224
N-[(2S)-2-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)丙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体223的合成类似地进行制备。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1064(M+H)+。
中间体225
N-(2-氨基乙基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
在20ml甲醇中混合100mg(0.76mmol)商购可得的N-甲基-L-缬氨酸和182mg(1.14mmol)商购可得的2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯，并与340mg(3.66mmol)硼烷-吡啶复合物和65μl乙酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。这之后在减压下浓缩，并通过在硅胶上的快速色谱法纯化残余物，使用二氯甲烷/甲醇/17％氨水溶液(15/4/0.5)作为洗脱液。浓缩对应的级分和从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到190mg 39％纯度(理论值的35％)的中间体，将其不经进一步纯化进行转化。
将50mg(0.07mmol)该中间体溶解在10ml DMF中，并与52mg(0.07mmol)N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体220)、32mg(0.09mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和37μl(0.2mmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将混合物在室温搅拌过夜，然后浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯中，并通过首先与5％柠檬酸水溶液一起摇动、然后与水一起摇动，进行萃取。浓缩有机相，并借助于制备型HPLC纯化残余物。合并对应的级分，并在减压下除去溶剂。从二噁烷低压冻干以后，得到53mg(理论值的76％)受保护的中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.02min；MS(ESIpos)：m/z＝984(M+H)+。
将53mg(0.05mmol)该中间体溶解于10ml二氯甲烷中，加入2ml三氟乙酸，并将反应混合物在室温搅拌30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。合并对应的级分，在减压下除去溶剂，并将残余物从二噁烷/水低压冻干。以此方式，以65％纯度得到21mg(理论值的40％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝884(M+H)+。
中间体226
N-[2-({[2-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙基]氨甲酰基}氨基)乙基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体134的合成类似地，从中间体225进行制备。得到11.6mg(理论值的59％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝1050(M+H)+。
中间体227
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S-1-(苄氧基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体218类似地，通过转化成活性酯，制备所述化合物。
收率：18mg(理论值的51％)
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.98min；MS(ESIpos)：m/z＝1073(M+H)+。
中间体228
(2R，3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸酯
通过使在中间体154的合成中得到的Boc-保护的中间体与商购可得的6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己烷酰肼偶联，制备标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝1308(M+H)+。
中间体229
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-7，10-二异丙基-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-乙酰氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
通过在有0.4μl N，N-二异丙基乙胺存在下，用2.3μl乙酸酐在1ml DMF中的溶液乙酰化，从7.5mg(2.5μmol)中间体154制备标题化合物。
收率：1.4mg(理论值的40％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1250(M+H)+。
中间体230
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-7，10-二异丙基-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
与中间体228类似地，从中间体193开始，制备所述化合物。得到16mg(理论值的30％，经3个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝2.0min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.02min；MS(ESIpos)：m/z＝1335(M+H)+。
中间体231
(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-7，10-二异丙基-5，11-二甲基-6，9-二氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-酸-(2R，3S)-3-乙酰氨基-4-{2-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁-2-基酯
如下从8mg(6μmol)中间体230制备该化合物：首先用三氟乙酸去保护，随后在有N，N-二异丙基乙胺存在下在DMF中用乙酸酐乙酰化。得到2mg(理论值的37％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝1277(M+H)+。
中间体232
N-[(4-硝基苯氧基)羰基]-β-丙氨酸苄酯
将200mg(0.57mmol)商购可得的β-丙氨酸-4-甲基苯磺酸-苄酯和229mg(1.14mmol)氯碳酸-4-硝基苯酯溶解于15ml四氢呋喃中，然后将反应混合物加热至回流保持30min。随后，在减压下浓缩反应混合物，并借助于制备型HPLC纯化残余物。浓缩对应的级分和在高真空下干燥残余物以后，得到86mg(理论值的44％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.07min；MS(ESIpos)：m/z＝345(M+H)+。
中间体233
N-{2-[({3-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙基}氨甲酰基)氨基]乙基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将13mg(10μmol)中间体225和6.7mg(20μmol)中间体232溶解在3ml DMF中，然后加入7μl N，N-二异丙基乙胺。将混合物在室温搅拌过夜，然后在高真空下浓缩。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。浓缩对应的级分和在高真空下干燥残余物以后，得到5.4mg(理论值的38％)受保护的中间体。
HPLC(方法5)：Rt＝2.1min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.6in；MS(ESIpos)：m/z＝1089(M+H)+。
将5.4mg(5μmol)该中间体溶解在5ml甲醇中，并在加入2mg 10％活性炭载钯以后，在标准氢压力下在室温氢化20min。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。在已经在高真空下干燥残余物以后，得到5mg(定量)酸中间体。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.84min；MS(ESIpos)：m/z＝999(M+H)+。
将5mg(10μmol)该中间体溶解在1ml DMF中，并与5.8mg(50mmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与2.6μl N，N-二异丙基乙胺和3.8mg(10μmol)HATU混合。在室温搅拌20h以后，在减压下浓缩反应混合物。借助于制备型HPLC，纯化剩余的残余物。从1∶1二噁烷/水低压冻干以后，得到1.1mg(理论值的20％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1096(M+H)+。
中间体234
N-(6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将25mg(30μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体55)和45mg(180μmol)6-氧代己基氨基甲酸苄酯溶解于3ml甲醇中，并用乙酸酸化。随后在室温加入15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后将混合物在室温搅拌24h，并在8h以后再次加入乙酸和15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后用TFA将反应混合物调节至pH 2，并借助于制备型HPLC进行纯化。将产物级分合并和浓缩，并在高真空下干燥残余物。得到15mg(理论值的46％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.03min；m/z＝1066(M+H)+。
中间体235
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将15mg(14μmol)N-(6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体234)溶解于3ml甲醇中，并加入1.8mg炭载钯(5％)。随后将反应混合物在标准氢压力下在室温氢化2h。然后滤出催化剂，并在减压下除去溶剂。从1∶1乙腈/水低压冻干残余物。得到11mg(理论值的86％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.81min；m/z＝932(M+H)+。
中间体236
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将11mg(12μmol)N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体235)溶解于500μl 1∶1二噁烷/水中，并与253μl 1M碳酸氢钠水溶液混合，然后与2.8mg(18μmol)2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸甲酯混合。将反应混合物在室温搅拌30min，然后用三氟乙酸酸化。借助于制备型HPLC纯化反应混合物。低压冻干以后，得到0.8mg(理论值的7％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；m/z＝1012(M+H)+。
中间体237
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将25mg(30μmol)N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体55)和23mg(180μmol)6-氧代己酸溶解于3ml甲醇中，并用乙酸酸化。随后在室温加入15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后将反应混合物在室温搅拌20h，并在8h以后再次加入乙酸和15μl(144μmol；9.4M)硼烷-吡啶复合物。随后用三氟乙酸将反应混合物调节至pH 2，并借助于制备型HPLC进行纯化。将产物级分合并和浓缩，并将残余物低压冻干。如此得到21mg(理论值的74％)标题化合物，为泡沫。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.91min；m/z＝947(M+H)+。
中间体238
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代-3-{[(1S)-2-苯基-1-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)乙基]氨基}丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将21mg(22μmol)中间体237溶解在1ml DMF中，并与38mg(333μmol)1-羟基吡咯烷-2，5-二酮混合，然后与2.4mg(10μmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)和19μl N，N-二异丙基乙胺混合。在室温搅拌2h以后，借助于制备型HPLC，纯化反应混合物。从二噁烷低压冻干以后，得到22mg(理论值的96％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.95min；m/z＝1044(M+H)+。
中间体239
N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
首先，如下从237mg(0.887mmol)它的二环己胺盐中释放出N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酸：将它溶解于乙酸乙酯中，并与5％硫酸水溶液一起萃取摇动。有机相经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将14.7mg(0.055mmol)N-[(苄氧基)羰基]-N-甲基-L-苏氨酸溶解于3ml DMF中，并接连地与40mg(0.055mmol)中间体220、12.7mg(0.066mmol)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和10mg(0.066mmol)1-羟基-1H-苯并三唑水合物混合。随后将混合物在室温搅拌2h。然后在减压下除去溶剂，并通过制备型HPLC纯化残余物。如此得到29mg(理论值的54％)Z-保护的中间体。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.15min；MS(ESIpos)：m/z＝976(M+H)+。
将29mg(0.003mmol)该中间体溶解在5ml甲醇中，并在5mg 5％钯/炭上在室温和标准压力下氢化1h。随后滤出催化剂，并蒸发出溶剂。通过制备型HPLC纯化剩余的残余物。得到17mg(理论值的54％)标题化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝842(M+H)+。
中间体240
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，从15.6mg(0.016mmol)中间体239，制备所述化合物。得到10.8mg(理论值的67％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1053(M+H)+。
中间体241
N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
首先，与中间体5类似地，制备三氟乙酸-(2S)-2-氨基-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)丙烷-1-酮(1∶1)。然后使用该试剂，与在中间体75中描述的合成类似地，在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下，与N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基，以制备标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝817(M+H)+。
中间体242
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体210类似地，在有硼烷-吡啶复合物存在下，使50mg(0.05mmol)中间体241与6-氧代己酸反应。随后，将22.5mg(0.02mmol)得到的酸转化成活化的酯。得到13.5mg(理论值的36％，经2个阶段)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1028(M+H)+。
中间体243
N-(6-氨基己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
如下进行制备：与中间体78类似地，用6-氧代己基氨基甲酸苄酯和硼烷-吡啶复合物将中间体241还原烷基化，和随后在作为溶剂的甲醇中氢化。
收率：17.5mg(理论值的34％，经2个阶段)
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.63min；MS(ESIpos)：m/z＝916(M+H)+。
中间体244
N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
与中间体166类似地，从中间体243开始，进行制备。
收率：1.3mg(理论值的12％)
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝996(M+H)+。
中间体245
O-[(3R，4S，7S，10S)-4-[(2S)-丁-2-基]-3-(2-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-2-氧代乙基)-7，10-二异丙基-5，11-二甲基-6，9，15-三氧代-2-氧杂-5，8，11-三氮杂十五烷-15-基]-N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酰基-β-丙氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯
首先，如关于中间体154所述，使中间体193与N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸苄酯反应，然后，通过氢解除去苄基酯。然后在有HATU存在下使如此得到的30mg(0.027mmol)N-[4-({(1S，2R)-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-羧基丙烷-2-基}氧基)-4-氧代丁基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺与β-丙氨酸-4-甲基苯磺酸-苄酯偶联，并再次通过氢解除去苄基酯(收率：24mg(理论值的71％，经2个阶段))。最后，将10mg(0.008mmol)得到的酸转化成活化的酯。HPLC纯化以后，得到2.7mg(理论值的23％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1295(M+H)+
中间体246a
(2S)-2-氨基-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐(非对映异构体1)
将1.6g(3.982mmol)N-(叔丁氧基羰基)-L-色氨酸-2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯溶解在15ml DMF中，并与500mg(3.982mmol)1，2-噁唑烷-4-醇和100μl N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜。然后，加入另外100μl N，N-二异丙基乙胺，并将混合物首先在超声浴中处理5h，然后在室温搅拌过夜，随后在减压下浓缩。将剩余的残余物溶解于乙酸乙酯中，并首先用5％柠檬酸水溶液萃取2次，然后用饱和碳酸氢钠水溶液萃取，最后用水萃取。浓缩有机相，并通过在硅胶上的快速色谱法，使用95∶5二氯甲烷/甲醇作为洗脱液，将残余物分离成非对映异构体。合并两种非对映异构体的对应级分，并在减压下除去溶剂。已经在高真空下干燥残余物以后，得到272mg(理论值的18％)非对映异构体1(Rf＝0.18(95∶5二氯甲烷/甲醇)和236mg(理论值的16％)非对映异构体2(Rf＝0.13(95∶5二氯甲烷/甲醇)，以及333mg(理论值的22％)Boc-保护的中间体的混合级分。
在标准条件下，使用5ml三氟乙酸在20ml二氯甲烷中的溶液从272mg(725μmol)该中间体的非对映异构体1除去Boc保护基，并在从二噁烷/水低压冻干以后，以75％纯度得到290mg(定量)标题化合物，并不经进一步纯化用于下一阶段。
HPLC(方法12)：Rt＝1.1min；
LC-MS(方法13)：Rt＝1.80min；MS(ESIpos)：m/z＝276(M+H)+
中间体246b
(2S)-2-氨基-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)丙烷-1-酮三氟乙酸盐(非对映异构体2)
在标准条件下，使用5ml三氟乙酸在20ml二氯甲烷中的溶液从236mg(630μmol)在246a中描述的中间体的非对映异构体2除去Boc保护基，浓缩、与二乙基醚一起搅拌和在高真空下干燥残余物以后，得到214mg(76％)标题化合物。
LC-MS(方法13)：Rt＝1.84min；MS(ESIpos)：m/z＝276(M+H)+
中间体247a
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(非对映异构体1)
为了合成该化合物，首先如关于中间体74所述，使中间体26和246a偶联，然后除去Boc保护基。随后，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用6-氧代己酸烷基化，随后如关于中间体210所述，将所述酸转化成活性酯。通过制备型HPLC纯化标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1053(M+H)+
中间体247b
N-{6-[(2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-6-氧代己基}-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(4-羟基-1，2-噁唑烷-2-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(非对映异构体2)
为了合成该化合物，首先如关于中间体74所述，使中间体26和246b偶联，然后除去Boc保护基。随后，在有硼烷-吡啶复合物存在下，用6-氧代己酸烷基化，随后如关于中间体210所述，将所述酸转化成活性酯。通过制备型HPLC纯化标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1053(M+H)+
中间体248
N-(5-羧基戊基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-叔丁氧基-3-(4-羟基苯基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
首先，与在中间体86中描述的合成类似地，通过在有O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐存在下使N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-2-羧基-1-甲氧基丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺(中间体26)和L-酪氨酸叔丁酯偶联，并随后借助于三氟乙酸除去Boc保护基得到叔丁基酯(与三氟乙酸一起在二氯甲烷中搅拌40min)，制备胺化合物N-[(2R，3R)-3-甲氧基-3-{(2S)-1-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-5-甲基-4-(甲基{(2S)-3-甲基-2-[(N-甲基-L-缬氨酰基)氨基]丁基}氨基)庚酰基]吡咯烷-2-基}-2-甲基丙酰基]-L-酪氨酸叔丁酯，为三氟乙酸盐。然后使用38mg(0.04mmol)该化合物，与中间体210的制备类似地，通过在有硼烷-吡啶复合物存在下与6-氧代己酸反应，得到31mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.88min；MS(ESIpos)：m/z＝918(M+H)+。
B：抗体-药物缀合物(ADC)的制备
B-1.用于制备抗-C4.4a抗体的一般方法
通过针对重组人C4.4a SEQ ID NO：1和鼠C4.4a SEQ ID NO：2和针对表达C4.4a的细胞来筛选噬菌体展示文库，制备由表1和表2的序列描述的抗-C4.4a抗体。将以此方式得到的抗体重新格式化为人IgG1格式，并用于本文中描述的工作实施例。
B-2.用于在哺乳动物细胞中表达抗-C4.4a抗体的一般方法
在哺乳动物细胞培养物中生产抗体，例如M31-B01(轻链SEQ ID NO：346和重链SEQ ID NO：347)或表2的其它抗体。为此目的，用合适的基于CMV启动子的表达质粒，瞬时转染HEK2936E细胞。将抗体的重链和轻链一起克隆进单载体系统中，或分别地克隆进双载体系统中。将细胞培养物放大至1.5L(在摇瓶中)或10L(在“波袋”中)。在F17培养基(Invitrogen)中在37℃表达5-6天，所述F17培养基补充了含有1％“FCS超低IgG”(Invitrogen)和0.5mM丙戊酸的胰蛋白胨TN1(Organotechnie)。表达产率在100-600mg/l之间。
B-3.从细胞上清液纯化抗体的一般方法
从细胞培养物上清液得到抗体，例如M31-B01(轻链SEQ ID NO：346和重链SEQ ID NO：347)或表2的其它抗体。通过离心，澄清细胞上清液以除去细胞。随后，通过在MabSelect Sure(GE Healthcare)色谱柱上的亲和色谱法，纯化细胞上清液。为此目的，在DPBS(pH 7.4)(Sigma/Aldrich)中平衡柱，应用细胞上清液，并用约10柱体积的DPBS(pH 7.4)+500mM氯化钠洗涤柱。在50mM醋酸钠pH 3.5+500mM氯化钠中洗脱抗体，随后通过在Superdex 200柱(GE Healthcare)上的凝胶过滤色谱法在DPBS(pH 7.4)中进一步纯化。
B-4.用于偶联半胱氨酸侧链的一般方法
在偶联反应中使用的抗体如下：
抗-C4.4a M31-B01
抗-C4.4a B01-3
抗-C4.4a B01-10
抗-C4.4a B01-7
抗-C4.4a D02-4
抗-C4.4a D02-6
抗-C4.4a D02-7
向对应的抗体在PBS缓冲液中的溶液(在1mg/ml至15mg/ml的浓度范围内)中，加入3当量的三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP)在PBS缓冲液中的溶液，并将混合物在室温搅拌1小时。随后，根据期望的负载，加入2-10当量的用于偶联的马来酰亚胺前体化合物或卤化物前体化合物(中间体102、103、105-109、111-114、117-126、128、129、132-146、148-155、157、159-161、166、171、175-177、184、189、194-195、199-201、205、209、223-224、226、228-231、236和244)在DMSO中的溶液。这里的DMSO的量不应超过总体积的10％。将该批料在室温搅拌60-120分钟，然后应用于经PBS平衡过的PD 10柱(G-25，GE Healthcare)，并用PBS缓冲液洗脱。任选地，另外借助于超速离心，进行浓缩操作。如果必要的话，为了更有效地除去低分子量组分，在用PBS缓冲液再稀释以后，重复超滤浓缩。
通常，除非另有说明，使用5mg对应抗体在PBS缓冲液中的溶液进行还原和随后的偶联。在经由PD10柱纯化以后，在每种情况下得到对应的ADC在3.5ml PBS缓冲液中的溶液。然后确定这些溶液中的指定的特定蛋白浓度。此外，根据下面描述的方法，确定抗体的负载(药物/mAb比率)。
使用该方法来制备在实施例1-3、5-30、32-36、38-59、61-66、68-70、80、82-85、87、88、92-95、97、98、107、109-114、119和122中代表的免疫缀合物。
在解释的结构式中，AK1A-AK1G的定义如下：
AK1A＝抗-C4.4a抗体M31-B01(经部分地还原)-S§1
AK1B＝抗-C4.4a抗体B01-3(经部分地还原)-S§1
AK1C＝抗-C4.4a抗体B01-10(经部分地还原)-S§1
AK1D＝抗-C4.4a抗体B01-7(经部分地还原)-S§1
AK1E＝抗-C4.4a抗体D02-4(经部分地还原)-S§1
AK1F＝抗-C4.4a抗体D02-6(经部分地还原)-S§1
AK1G＝抗-C4.4a抗体D02-7(经部分地还原)-S§1
其中
§1表示与琥珀酰亚胺基团的连接，
且
S代表经部分地还原的抗体的半胱氨酸残基的硫原子。
B-5.用于偶联赖氨酸侧链的一般方法
在偶联反应中使用的抗体如下：
抗-C4.4a抗体M31-B01
抗-C4.4a抗体B01-3
根据期望的负载，向对应的抗体在PBS缓冲液中的溶液(在1mg/ml至15mg/ml的浓度范围内)中，加入2-5当量的用于偶联的前体化合物(中间体104、110、115、116、127、130、131、147、156、158、162、169、178、185、190、202、206、210-216、218、219、227、233、238、240、242、245、247a和247b)在DMSO中的溶液。在室温搅拌30分钟以后，再次加入相同量的前体化合物在DMSO中的溶液。可替换地，可能一次性加入4-10当量的用于偶联的前体化合物。这里的DMSO的量不应超过总体积的10％。在室温搅拌另外30分钟以后，将该批料应用于经PBS平衡过的PD 10柱(G-25，GE Healthcare)，并用PBS缓冲液洗脱。任选地，另外借助于超速离心，进行浓缩操作。如果必要的话，为了更有效地除去低分子量组分，在用PBS缓冲液再稀释以后，重复超滤浓缩。
通常，除非另有说明，使用5mg对应抗体在PBS缓冲液中的溶液进行偶联。在经由PD10柱纯化以后，在每种情况下得到对应的ADC在3.5ml PBS缓冲液中的溶液。然后确定这些溶液中的指定的特定蛋白浓度，并根据下面描述的方法，确定抗体的负载(药物/mAb比率)。
使用该方法来制备在实施例s 4、31、37、60、67、81、86、89-91、96、99-106、108、118、120、121和123-125中代表的免疫缀合物。
在解释的结构式中，AK2A和A2B的定义如下：
AK2A＝抗-C4.4a抗体M31-B01-NH§2
AK2B＝抗-C4.4a抗体B01-3-NH§2
其中
§2表示与羰基的连接，
且
NH代表抗体的赖氨酸残基的侧链氨基。
B-6.用于制备半胱氨酸加合物的一般方法：
将10μmol上述的马来酰亚胺前体化合物溶解于3ml DMF中，并与2.1mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。
在解释的结构式中，Cys的定义如下
其中
§3表示与接头-毒性基团单元的连接。
本发明的缀合物的进一步纯化和表征
已经进行反应后，在某些情况下，通过例如超滤来浓缩反应混合物，然后借助于色谱法脱盐和纯化，例如使用G-25。用例如磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行洗脱。随后对溶液进行无菌过滤，并冷冻。一种替代选择是低压冻干缀合物。
B-7.毒性基团负载的确定
如下确定在工作实施例中描述的缀合物在PBS缓冲液中形成的溶液的毒性基团负载：
通过各种缀合物物质的分子量的质谱测定，确定赖氨酸-连接的ADC的毒性基团负载。在该情况下，为了开始，借助于PNGaseF将抗体缀合物去糖基化，并将样品酸化，在HPLC分离以后，使用ESI-MicroTofQ(Bruker Daltonik)通过质谱法进行分析。通过TIC(总离子色谱图)中的信号，累加所有波谱，并基于MaxEnt Deconvolution，计算不同缀合物物质的分子量。在不同物质的信号积分以后，然后计算DAR(药物/抗体比)。
对于蛋白鉴别而言，除了分子量测定以外，在去糖基化和/或变性以后进行胰蛋白酶消化，并且在变性、还原和衍生化以后，该消化基于检测到的胰蛋白酶肽而证实了蛋白的身份。
经由还原的和变性的ADC的反相色谱法，确定半胱氨酸-连接的缀合物的毒性基团负载。将ADC溶液(1mg/mL，50μL)与盐酸胍(GuHCl)(28.6mg)混合，并与DL-二硫苏糖醇(DTT)的溶液(500mM，3μL)混合。将混合物在55℃温育1小时，并通过HPLC进行分析。
在Agilent 1260HPLC系统上进行HPLC分析，在220nm检测。使用的柱是Polymer Laboratories PLRP-S Polymeric Reversed Phase柱(目录号PL1912-3802)(2.1×150mm，8μm粒度，)，流速为1mL/min，使用下述梯度：0min，25％B；3min，25％B；28min，50％B。洗脱液A由0.05％的三氟乙酸(TFA)在水中的溶液组成，洗脱液B由0.05％的三氟乙酸在乙腈中的溶液组成。
通过与未缀合的抗体的轻链(L0)和重链(H0)的保留时间对比，指定检测到的峰。将仅在缀合的样品中检测到的峰指定给具有1个毒性基团的轻链(L1)和具有1、2和3个毒性基团的重链(H1、H2、H3)。
如下计算具有毒性基团的抗体的平均负载：首先，从属于轻链的峰L0和L1的峰面积(通过积分确定)计算轻链负载，其为：L0和L1的毒性基团数量加权积分结果的总和除以L0和L1的单独加权积分结果的总和。以相同的方式，从属于重链的峰H0、H1、H2和H3的峰面积(通过积分确定)计算重链负载，其为：H0、H1、H2和H3的毒性基团数量加权积分结果的总和除以H0、H1、H2和H3的单独加权积分结果的总和。DAR由轻链负载和重链负载给出，其为轻链负载和重链负载的总和的2倍。因子2考虑到下述事实：抗体由2个轻链和2个重链组成。在某些个别情况下，由于某些峰的共洗脱，不可能精确地确定毒性基团负载。
B-8. ADC的抗原结合试验
在已经进行偶联以后，试验了结合剂与靶分子的结合能力。技术人员知晓多种用于实现该目的的方法：例如，借助于ELISA技术或表面等离子体共振分析(BIAcoreTM测量)，可以试验缀合物的亲和力。技术人员使用普通方法可以测量缀合物浓度：例如，对于抗体缀合物而言，借助于蛋白测定(也参见Doronina等人.；Nature Biotechnol.2003；21：778-784和Polson等人，Blood 2007；1102：616-623)。
工作实施例-免疫缀合物
实施例1
在该情况下，使用70mg抗-C4.4a M31-B01在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：12.2mg/ml
药物/mAb比率：1.5
实施例2
蛋白浓度：0.87mg/ml
药物/mAb比率：5.8
实施例3
蛋白浓度：1.16mg/ml
药物/mAb比率：3.1
实施例4
蛋白浓度：1.24mg/ml
药物/mAb比率：1.6
实施例5
蛋白浓度：0.88mg/ml
药物/mAb比率：6.9
实施例6
蛋白浓度：1.2mg/ml
药物/mAb比率：2.8
实施例7
蛋白浓度：0.9mg/ml
药物/mAb比率：3.9
实施例8
蛋白浓度：0.52mg/ml
药物/mAb比率：1.6
实施例9
蛋白浓度：0.47mg/ml
药物/mAb比率：6.6
实施例10
蛋白浓度：0.77mg/ml
药物/mAb比率：6.9
实施例11
蛋白浓度：0.47mg/ml
药物/mAb比率：4.0
实施例12
蛋白浓度：1.46mg/ml
药物/mAb比率：2.5
实施例13
蛋白浓度：0.45mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例14
蛋白浓度：0.98mg/ml
药物/mAb比率：3.6
实施例15
这里使用70mg抗-C4.4a M31-B01在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：9.42mg/ml
药物/mAb比率：4.1
实施例16
蛋白浓度：0.65mg/ml
药物/mAb比率：1.8
实施例17
蛋白浓度：1.07mg/ml
药物/mAb比率：不可确定
实施例18
蛋白浓度：0.47mg/ml
药物/mAb比率：4.4
实施例19
蛋白浓度：0.43mg/ml
药物/mAb比率：4.8
实施例20
蛋白浓度：1.01mg/ml
药物/mAb比率：2.6
实施例21
蛋白浓度：0.53mg/ml
药物/mAb比率：0.6
实施例22
蛋白浓度：0.55mg/ml
药物/mAb比率：1.3
实施例23
蛋白浓度：0.65mg/ml
药物/mAb比率：1.1
实施例24
蛋白浓度：1.04
药物/mAb比率：3.5
实施例25
蛋白浓度：0.62mg/ml
药物/mAb比率：2.4
实施例26
这里使用90mg抗-C4.4a M31-B01在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：11.2mg/ml
药物/mAb比率：2.3
实施例27
蛋白浓度：1.11mg/ml
药物/mAb比率：2.4
实施例28
这里使用70mg抗-C4.4a M31-B01在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：10.7mg/ml
药物/mAb比率：2.2
实施例29
蛋白浓度：0.87mg/ml
药物/mAb比率：1.8
实施例30
蛋白浓度：1.3mg/ml
药物/mAb比率：2.1
实施例31
蛋白浓度：1.3mg/ml
药物/mAb比率：0.3
实施例32
这里使用70mg抗-C4.4a M31-B01在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：12.0mg/ml
药物/mAb比率：3.2
实施例33
这里使用90mg抗-C4.4a M31-B01在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：10.2mg/ml
药物/mAb比率：4.3
实施例34
蛋白浓度：1.37mg/ml
药物/mAb比率：2.6
实施例35
蛋白浓度：1.14mg/ml
药物/mAb比率：2.0
实施例36
蛋白浓度：1.07mg/ml
药物/mAb比率：3.5
实施例37
蛋白浓度：1.14mg/ml
药物/mAb比率：1.9
实施例38
蛋白浓度：1.22mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例39
蛋白浓度：1.3mg/ml
药物/mAb比率：3.2
实施例40
蛋白浓度：1.23mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例41
蛋白浓度：1.64mg/ml
药物/mAb比率：1.8
实施例42
蛋白浓度：1.07mg/ml
药物/mAb比率：3.1
实施例43
蛋白浓度：1.14mg/ml
药物/mAb比率：2.3
实施例44
蛋白浓度：1.23mg/ml
药物/mAb比率：3.4
实施例45
蛋白浓度：1.22mg/ml
药物/mAb比率：2.5
实施例46
蛋白浓度：1.22mg/ml
药物/mAb比率：2.4
实施例47
蛋白浓度：1.32mg/ml
药物/mAb比率：不可确定
实施例48
蛋白浓度：1.44mg/ml
药物/mAb比率：2.3
实施例49
这里使用250mg抗-C4.4a B01-10在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：12.8mg/ml
药物/mAb比率：5.2
实施例50
蛋白浓度：0.9mg/ml
药物/mAb比率：2
实施例51
这里使用250mg抗-C4.4a B01-3在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：8.0mg/ml
药物/mAb比率：4.5
实施例52
这里使用250mg抗-C4.4a B01-10在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：12.3mg/ml
药物/mAb比率：5.2
实施例53
这里使用250mg抗-C4.4a B01-10在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：10.2mg/ml
药物/mAb比率：4.4
实施例54
这里使用50mg抗-C4.4a B01-3在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：11.5mg/ml
药物/mAb比率：5.2
实施例55
这里使用250mg抗-C4.4a D02-6在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：13mg/ml
药物/mAb比率：5.2
实施例56
这里使用250mg抗-C4.4a B01-3在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：10.3mg/ml
药物/mAb比率：4.9
实施例57
蛋白浓度：0.88mg/ml
药物/mAb比率：3.2
实施例58
蛋白浓度：1.18mg/ml
药物/mAb比率：3.4
实施例59
蛋白浓度：1.23mg/ml
药物/mAb比率：3.0
实施例60
蛋白浓度：1.3mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例61
蛋白浓度：1.11mg/ml
药物/mAb比率：不可确定
实施例62
蛋白浓度：1.25mg/ml
药物/mAb比率：2.4
实施例63
蛋白浓度：0.88mg/ml
药物/mAb比率：5.0
实施例64
蛋白浓度：1.23mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例65
蛋白浓度：0.93mg/ml
药物/mAb比率：1.8
实施例66
蛋白浓度：0.85mg/ml
药物/mAb比率：5.3
实施例67
蛋白浓度：1.51mg/ml
药物/mAb比率：1.4
实施例68
这里使用150mg抗-C4.4a B01-3在DPBS(pH 7.4)中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，通过超速离心浓缩该批料。
蛋白浓度：11.0mg/ml
药物/mAb比率：4.5
实施例69
蛋白浓度：1.2mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例70
蛋白浓度：1.25mg/ml
药物/mAb比率：3.1
实施例71
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体157溶解于5.2ml DMF中，并与2.28mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到5.8mg(理论值的48％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.45min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝1184(M+H)+。
实施例72
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体113溶解于5.2ml DMF中，并与2.28mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到6mg(理论值的54％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.77min；MS(ESIpos)：m/z＝1185(M+H)+。
实施例73
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将9mg(8.3μmol)中间体132溶解于4ml DMF中，并与3mg(24.4μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到6.8mg(理论值的68％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.78min；MS(ESIpos)：m/z＝1227(M+H)+。
实施例74
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体106溶解于5.8ml DMF中，并与2.5mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到5.2mg(理论值的46％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法11)：Rt＝0.71min；MS(ESIpos)：m/z＝1070(M+H)+。
实施例75
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体124溶解于4ml DMF中，并与2.5mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到7.2mg(理论值的64％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝1071(M+H)+。
实施例76
N-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体125溶解于4ml DMF中，并与2.4mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到7.7mg(理论值的69％)标题化合物。
HPLC(万法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法2)：Rt＝1.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1140(M+H)+。
实施例77
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将10mg(10μmol)中间体160溶解于3ml DMF中，并与2.1mg(20μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到8.1mg(理论值的73％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝1274(M+H)+。
实施例78
N-(4-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-4-氧代丁基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-1-(苄基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将3.5mg(3μmol)中间体159溶解于1ml DMF中，并与0.76mg(6μmol)L-半胱氨酸v。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到2.6mg(理论值的65％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.75min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝1235(M+H)+。
实施例79
N-(6-{2-[6-(3-{[(2R)-2-氨基-2-羧基乙基]硫烷基}-2，5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰基]肼基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-3-甲氧基-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-{[(1S，2R)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基羰基)-2-苯基环丙基]氨基}-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将3.6mg(3μmol)中间体129溶解于1ml DMF中，并与0.77mg(6μmol)L-半胱氨酸混合。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到1.55mg(理论值的39％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.6min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝1255(M+H)+。
实施例80
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：0.83mg/ml
药物/mAb比率：1.6
实施例81
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.59mg/ml
药物/mAb比率：3.1
药物/mAb比率：2.9
实施例82
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.25mg/ml
药物/mAb比率：4.0
实施例83
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.27mg/ml
药物/mAb比率：3.6
实施例84
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.54mg/ml
药物/mAb比率：4.7
实施例85
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.73mg/ml
药物/mAb比率：4.7
实施例86
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.66mg/ml
药物/mAb比率：1.3
实施例87
蛋白浓度：2.11mg/ml
药物/mAb比率：5.5
实施例88
蛋白浓度：1.53mg/ml
药物/mAb比率：3.4
实施例89
蛋白浓度：1.5mg/ml
药物/mAb比率：0.2
实施例90
蛋白浓度：1.32mg/ml
药物/mAb比率：0.1
实施例91
这里使用80mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩，用PBS再稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：10.3mg/ml
药物/mAb比率：3.1
实施例92
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.09mg/ml
药物/mAb比率：1.8
实施例93
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.52mg/ml
药物/mAb比率：4.2
实施例94
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.1mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例95
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.43mg/ml
药物/mAb比率：4.8
实施例96
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩，用PBS再稀释，并再次浓缩。
蛋白浓度：1.36mg/ml
药物/mAb比率：4.6
实施例97
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.33mg/ml
药物/mAb比率：4.0
实施例98
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.33mg/ml
药物/mAb比率：4.6
实施例99
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.47mg/ml
药物/mAb比率：1.6
实施例100
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.49mg/ml
药物/mAb比率：4.5
实施例101
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.29mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例102
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.74mg/ml
药物/mAb比率：3.5
实施例103
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.09mg/ml
药物/mAb比率：3.2
实施例104
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.63mg/ml
药物/mAb比率：0.2
实施例105
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.41mg/ml
药物/mAb比率：7.6
实施例106
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：2.0mg/ml
药物/mAb比率：1.6
实施例107
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.67mg/ml
药物/mAb比率：2.8
实施例108
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.91mg/ml
药物/mAb比率：5.3
实施例109
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.82mg/ml
药物/mAb比率：4.6
实施例110
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.9mg/ml
药物/mAb比率：4.2
实施例111
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.89mg/ml
药物/mAb比率：2.7
实施例112
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.73mg/ml
药物/mAb比率：2.3
实施例113
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.71mg/ml
药物/mAb比率：3.3
实施例114
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.47mg/ml
药物/mAb比率：3.9
实施例115
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将15.5mg(15μmol)中间体210溶解于5ml DMF中，并与4.4mg(18μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及7.7μL(44μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。随后通过制备型HPLC纯化残余物。得到14mg(理论值的81％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于1ml二氯甲烷中，并用1ml三氟乙酸去保护。浓缩该批料，并在从乙腈/水(1∶1)低压冻干残余物以后，得到15mg(理论值的97％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.8min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.79min；MS(ESIpos)：m/z＝1083(M+H)+。
实施例116
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺
将40mg(40μmol)中间体227溶解于5ml DMF中，并与11.5mg(40μmol)N2-[(苄氧基)羰基]-L-赖氨酸以及13μL(80μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩，随后通过制备型HPLC纯化。得到32.5mg(理论值的70％)标题化合物的受保护的中间体。
将32.5mg该中间体溶解在10ml甲醇中，并在加入2mg 10％活性炭载钯以后，在标准氢压力下在室温氢化30分钟。然后通过过滤除去催化剂，并在减压下除去溶剂。从二噁烷/水(1∶1)低压冻干残余物，得到26mg(理论值的99％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.76min；MS(ESIpos)：m/z＝1014(M+H)+。
实施例117
N-[(18S)-18-氨基-18-羧基-12-氧代-3，6，9-三氧杂-13-氮杂十八-1-基]-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将3.5mg(3μmol)中间体202溶解于2ml DMF中，并与0.8mg(3μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及1.6μL(10μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将残余物溶解于乙腈/水：(1∶1)中，用三氟乙酸调节至pH 2，然后通过制备型HPLC进行纯化。得到1mg(理论值的25％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于500μl二氯甲烷中，并用500μl三氟乙酸去保护。浓缩该批料，并在从乙腈/水(1∶1)低压冻干残余物以后，得到1mg(理论值的89％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.9min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝1173(M+H)+。
实施例118
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：0.89mg/ml
药物/mAb比率：1.8
实施例119
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：0.57mg/ml
药物/mAb比率：1.5
实施例120
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3进行偶联，并在Sephadex纯化后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，并用PBS再稀释。
蛋白浓度：1.39mg/ml
药物/mAb比率：7.1
实施例121
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3进行偶联，并在Sephadex纯化后，将反应混合物通过超速离心进行浓缩，并用PBS再稀释。
蛋白浓度：1.54mg/ml
药物/mAb比率：2.4
实施例122
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.48mg/ml
药物/mAb比率：2.4
实施例123
这里使用5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和再稀释。
蛋白浓度：1.43mg/ml
药物/mAb比率：3.6
实施例124非对映异构体1
这里使用中间体247a和5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和用PBS再稀释。
蛋白浓度：1.45mg/ml
药物/mAb比率：3.8
实施例125非对映异构体2
这里使用中间体247a和5mg抗-C4.4a B01-3在PBS中的溶液进行偶联，并在Sephadex纯化以后，将该批料通过超速离心进行浓缩和用PBS再稀释。
蛋白浓度：1.42mg/ml
药物/mAb比率：4.0
实施例126
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-苏氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(1H-吲哚-3-基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将8.6mg(8μmol)中间体240溶解于5ml DMF中，并与4.0mg(16μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及2μL(16μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌4小时，然后再与相同量的N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和N，N-二异丙基乙胺混合，并在室温搅拌过夜。随后将反应混合物在减压下浓缩。然后通过制备型HPLC纯化残余物。得到7mg(理论值的72％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于1ml二氯甲烷中，并用0.5ml三氟乙酸去保护。浓缩反应混合物，并通过制备型HPLC纯化残余物。在高真空下干燥，得到3.3mg(理论值的47％)标题化合物。
HPLC(方法5)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.8min；MS(ESIpos)：m/z＝1084(M+H)+。
实施例127
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(2S)-3-(4-羟基苯基)-1-(1，2-噁嗪烷-2-基)-1-氧代丙烷-2-基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
将8mg(8μmol)中间体242溶解于3ml DMF中，并与2.9mg(12μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸以及2.7μL(16μmol)N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后再与相同量的N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和N，N-二异丙基乙胺混合，并在室温搅拌另外4小时。随后将反应混合物在减压下浓缩。然后通过制备型HPLC纯化残余物。从乙腈/水低压冻干，得到6.5mg(理论值的72％)标题化合物的受保护的中间体，随后将其溶解于5ml二氯甲烷中，并用0.75ml三氟乙酸去保护。浓缩该批料，并从二噁烷/水低压冻干残余物，得到5mg(理论值的76％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.7min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.69min；MS(ESIpos)：m/z＝1059(M+H)+。
实施例128
N-(6-{[(5S)-5-氨基-5-羧基戊基]氨基}-6-氧代己基)-N-甲基-L-缬氨酰基-N-[(3R，4S，5S)-1-{(2S)-2-[(1R，2R)-3-{[(1S)-1-羧基-2-(4-羟基苯基)乙基]氨基}-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基]吡咯烷-1-基}-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚烷-4-基]-N-甲基-L-缬氨酰胺三氟乙酸盐
首先38mg(41μmol)中间体248将转化成N-羟基琥珀酰亚胺酯。将72mg得到的粗产物溶解于5ml DMF中，并与24mg(100μmol)N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和23μL N，N-二异丙基乙胺混合。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后再与16mg N2-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸和12μL N，N-二异丙基乙胺混合，随后在超声浴中处理另外2小时。然后在减压下浓缩该批料，并通过制备型HPLC纯化残余物。从乙腈/水低压冻干，得到20mg(理论值的50％)标题化合物的受保护的中间体。
随后将15mg(12μmol)该中间体溶解于3ml二氯甲烷中，并与1ml三氟乙酸混合。在室温搅拌40分钟以后，加入另外1.5ml三氟乙酸，并将该批料在超声浴中处理1小时。此后，浓缩反应混合物，并从二噁烷/水低压冻干残余物，得到13mg(理论值的90％)标题化合物。
HPLC(方法12)：Rt＝1.5min；
LC-MS(方法1)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝990(M+H)+。
C：生物活性的评价：
在下述的测定中，证实了本发明的化合物的生物学效应。
C-1.针对C4.4a的ADC的细胞毒性效应分析
在不同的细胞系中，分析了抗-C4.4a ADC的细胞毒性效应：
-A549(CCL-185，ATCC)，用完整C4.4a受体的序列转染，
-A549，假转染
-A549野生型(DSMZ，批次11)
-NCI-H292，内源性地表达C4.4a的肺癌细胞系(CRL-1848，ATCC)
-SCC-4，内源性地表达C4.4a的鳞状上皮癌细胞系(CRL-1624，ATCC)
-SCC-9，内源性地表达C4.4a的鳞状上皮癌细胞系(CRL-1629，ATCC)
-HCT-116，内源性地表达C4.4a的结肠癌细胞系(CCL-247，ATCC)
-HCT-116/VM46，用VM46转染的HCT-116
-A431NS(CRL-2592，ATCC)
通过美国典型组织保藏中心(American Tissue Type Collection，ATCC)关于各个细胞系所指定的标准方法，培养细胞。关于操作，使用胰蛋白酶(0.05％)和EDTA(0.02％)在PBS中的溶液(Biochrom AG#L2143)使细胞分开，丸粒化，再悬浮于培养基中，计数，并接种进96-孔白底培养板(Costar#3610)(在100μl中的2500个细胞/孔)，在培养箱中在37℃和5％二氧化碳下温育。24小时后，以10-7M至10-11M(一式两份值)的浓度，将100μl培养基中的抗体-药物缀合物施加给细胞，并在培养箱中在37℃和5％二氧化碳下温育。72小时后，使用Cell Titer Glow Luminescent Cell Viability Assay(Promega#G7573和#G7571)，确定细胞生存力。为此目的，每个细胞批次加入100μl底物，随后用铝箔覆盖平板，在平板振荡器中在180rpm振荡2分钟，在实验台上静置8分钟，然后使用Victor X2(Perkin Elmer)测量。底物会检测活细胞的ATP含量，从而产生发光信号，所述信号的强度与细胞的活力直接成比例。使用Graph Pad Prism Laboratory软件，使用测量的数据计算IC50。
表3列出了得自该测定的代表性工作实施例的IC50值1)：
表3
1)报道的活性数据与在实验部分中描述的工作实施例相关，指示了药物/mAB比率。所述值可能偏离不同的药物/mAB比率。
C-2.对微管蛋白聚合的作用的确定
癌细胞是变性细胞，其经常导致肿瘤的形成，这也是细胞分裂增加的结果。微管形成纺锤体的纺锤丝，并且是细胞周期的必需组成部分。微管有规律的构建和分解使得染色体在子细胞中精确分裂，并构成连续的动态过程。该动态过程的破坏将导致不正确的细胞分裂，并最终导致细胞死亡。但是，癌细胞细胞分裂的增加也会使其对纺锤丝毒剂特别敏感，该纺锤丝毒药构成化疗的固定组分。纺锤丝毒剂(例如紫杉醇或大环内酯)会造成微管的聚合速率急剧升高，而长春花生物碱或单甲基耳他汀E(MMAE)会造成微管的聚合速率急剧降低。在这两种情况下，细胞周期的必要活力被严重破坏。在本发明范围内研究的化合物导致微管的聚合速率降低。
使用来自Cytoskeleton的“基于荧光的微管聚合测定试剂盒”(Denver，Colorado，USA；订单号：BK011)，对微管蛋白聚合进行研究。在该测定中，向未聚合的微管蛋白添加GTP，使得聚合自发地进行。该测定基于荧光团4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)与微管蛋白的结合。游离的DAPI和结合的DAPI可基于不同的发射光谱进行区分。由于与非聚合的微管蛋白相比，DAPI对聚合的微管蛋白具有显著的高亲和性，因此通过结合的DAPI荧光团的荧光增加可跟踪微管蛋白聚合。
为了实施该测定，用水将本发明化合物(在DMSO溶液中)从其10mM的初始浓度稀释至1μM。除了缓冲液对照以外，还使用紫杉醇(具有聚合增加作用)和长春碱(具有聚合抑制作用)作为测定对照。使用具有半底部区域的96孔板进行测定。在37℃在荧光计中监测微管蛋白聚合的动力学1小时。激发波长为355nm，并且在460nm监测发射。对于前10分钟内的线性增加区域，对每分钟的荧光变化(ΔF/min)进行计算，该变化表示微管的聚合速率。基于其各自的聚合速率的降低来定量试验物的效力。
将在1μM浓度时的MMAF抑制值设定为100％。
表4给出了代表性工作实施例对微管蛋白聚合的抑制的数据。
表4.
MMAF毒性基团和工作实施例随着它们的浓度而变化地抑制微管蛋白聚合。在100μM MMAF，微管蛋白聚合被完全抑制。工作实施例115在1μM时将微管蛋白聚合速率抑制至关于1μM MMAF测得的值的45％。
C-3.用于确定细胞渗透性的体外试验
使用Caco-2细胞，在流量测定(flux assay)中通过体外试验，可以研究物质的细胞渗透性[M.D.Troutman和D.R.Thakker，Pharm.Res.20(8)，1210-1224(2003)]。为此目的，将所述细胞在24-孔滤板上培养15-16天。为了确定渗透，在HEPES缓冲液中将各工作实施例从顶端(A)或基部(B)施加给细胞，并温育2小时。0小时和2小时后，将样品从顺式和反式隔室中取出。使用反相柱通过HPLC(Agilent 1200，德国)分离样品。该HPLC系统通过涡轮增压离子喷雾接口(Turbo Ion Spray Interface)连接至三重四极杆质谱仪API4000(Triple Quadropol mass spectrometer API4000)(Applied Biosystems Applera，Darmstadt，德国)。基于Papp值来评价渗透性，该Papp值使用由Schwab等人公开的公式进行计算[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]。
对于在细胞内释放的毒性基团而言，至关重要的是，从B至A的渗透性[Papp(B-A)]：该渗透性越低，工作实施例在细胞内释放以后在细胞中的停留时间越长，并且因此可用于与生化靶标(在该情况下：微管蛋白)相互作用的时间越长。
下面表5阐述了得自该测定的代表性工作实施例的渗透性数据：
表5
所述工作实施例表现出较低的从B至A的渗透性[Papp(B-A)]，并因此在CaCo-2细胞中具有长停留时间。与此相比，单甲基耳他汀E(MMAE)和单甲基耳他汀F(MMAF)在该试验中表现出73nm/s的Papp(B-A)值，并因此在Caco-2细胞中具有显著更短的停留时间。
C-4.用于确定P-糖蛋白(P-gp)的底物性质的体外试验
许多肿瘤细胞表达药物的转运蛋白等蛋白，并且这经常伴随对细胞抑制剂的抗性的发展。例如，不是此类转运蛋白等蛋白(诸如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP)的底物的物质因此表现出提高的活性谱。
使用过表达P-gp的LLC-PK1细胞(L-MDR1细胞)，通过流量测定，确定物质作为P-gp(ABCB1)的底物的性质[A.H.Schinkel等人，J.Clin.Invest.96，1698-1705(1995)]。为此目的，将LLC-PK1细胞或L-MDR1细胞在96-孔滤板上培养3-4天。为了确定渗透，在HEPES缓冲液中将各试验物(单独或在有抑制剂(诸如伊维菌素或维拉帕米)存在下)从顶端(A)或基部(B)施加给所述细胞，并温育2小时。0小时和2小时后，将样品从顺式和反式隔室中取出。使用反相柱通过HPLC分离样品。该HPLC系统通过涡轮增压离子喷雾接口连接至三重四极杆质谱仪API 3000(Applied Biosystems Applera，Darmstadt，德国)。基于Papp值来评价渗透性，该Papp值使用由Schwab等人公开的公式进行计算[D.Schwab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]。
对于在细胞内释放的毒性基团而言，至关重要的是，从B至A的渗透性[Papp(B-A)]：该渗透性越低，工作实施例在细胞内释放以后在细胞中的停留时间越长，并且因此可用于与生化靶标(在该情况下：微管蛋白)相互作用的时间越长。
下面表6列出了得自该测定的代表性工作实施例的渗透性数据，所述测定在L-MDR1细胞中进行：
表6
所述工作实施例表现出较低的从B至A的渗透性[Papp(B-A)]，并因此在L-MDR1细胞中具有长停留时间。
C-5.体内活性试验
通过例如异种移植物模型，在体内试验了本发明的缀合物的活性。技术人员知晓在现有技术中用于试验本发明的缀合物的活性的方法(参见，例如，WO 2005/081711；Poison等人，Cancer Res.2009年3月15；69(6)：2358-64)。为此目的，例如，给啮齿类动物(例如小鼠)植入表达结合剂的靶分子的肿瘤细胞系。随后给这些荷瘤啮齿类动物施用本发明的缀合物或对照抗体缀合物或等渗盐溶液。施用进行一次或多次。每周借助于滑动测径器确定肿瘤生长2次。肿瘤生长数周后，将缀合物治疗的动物的肿瘤大小与对照组的肿瘤大小进行对比。缀合物治疗的动物表现出显著更小的肿瘤大小。
C-5a.在小鼠内的实验肿瘤中试验ADC
与免疫毒素治疗的情况下的临床情形相比，小鼠异种移植物肿瘤模型的预测能力经常受限于：一方面，治疗性抗体与鼠物种的缺陷性交叉反应性，另一方面，在施用鼠或嵌合抗体以后，抗-药物抗体(ADA)在人体中的产生。为了利用特异性的C4.4a表达对于免疫缀合物方案的癌症治疗的完全潜力，例如，需要优选地根据本发明使用的种类的人抗体：其具有高亲和力，具有选择性，且表现出物种交叉反应性。利用这样的抗体，小鼠异种移植物肿瘤模型会产生与临床情形有关的有意义的发现。
将表达C4.4a的人肿瘤细胞皮下地接种进免疫抑制的小鼠(诸如裸鼠或SCID小鼠)的胁腹。从细胞培养物取出100-1000万细胞，离心，并用100μl培养基或50％培养基/50％Matrigel再悬浮。将细胞混悬液注射到小鼠皮肤下面。
在几天内，肿瘤生长。在确定25mm2的肿瘤大小的肿瘤之前，不开始治疗。
通过静脉内途径，将ADC治疗剂施用进小鼠的尾静脉。将ADC溶解于PBS中，并以10ml/kg的体积施用。
治疗方案取决于抗体的药代动力学。作为标准，在每个第四天以后，进行治疗3次。但是，治疗也可以进一步继续，或者可以在更靠后的时间点之后进行第二个3天治疗的循环。
作为标准基础，每个治疗组使用8只动物。如果预见到治疗以后肿瘤生长有特别强的波动，该数字可以更高。象接受活性物质的组一样，作为对照组的一个组根据相同的方案仅用缓冲液治疗。
在实验过程中，使用滑动测径器，在2个维度(长度/宽度)定期测量肿瘤的面积。
在实验结束时，取出肿瘤，并称重。将治疗组(T)与对照组(C)的平均肿瘤重量比率表达为T/C。当在不同时间结束对照组和治疗组时，基于所有治疗组和对照组的最后一个连接点测量的肿瘤面积，计算T/C值。
将100万SCC-4细胞皮下地接种进雌性NMRI裸鼠的胁腹中。
在30-35mm2的平均肿瘤大小，开始ADC的静脉内治疗。当对照组已经达到最大允许尺寸时，结束实验，取出肿瘤，并称重。所有试验的靶向C4.4a的ADC以剂量依赖性的方式抑制肿瘤生长。在30mg/kg的剂量，实施例54、实施例49、实施例51和实施例53各自达到＜0.1的T/C。对于实施例49、52、53、54和56而言，在低至15mg/kg的剂量，实现了与对照相比显著的抗肿瘤活性，从而实现了≤0.29的T/C值。
将100万NCI-H292细胞皮下地接种进雌性NMRI裸鼠的胁腹中。
在30-35mm2的平均肿瘤大小，开始ADC的静脉内治疗。当达到最大可允许的肿瘤大小时，分别结束对照组和治疗组。以此方式，在治疗结束后肿瘤的进一步生长的差异可以促进ADC的进一步表征。结果，采用在测量时间的最后一个连接点处的肿瘤面积，确定与对照相比的抗肿瘤活性(T/C)。在使用的NCI-H292小鼠模型中，证实了与对照相比所有试验的ADC都剂量依赖性地减少肿瘤生长。实施例54在低至1.9mg/kg的剂量，和实施例49在低至3.75mg/kg的剂量，得到了显著的抗肿瘤作用。在该模型中得到的最小T/C值是：实施例54在30mg/kg时的T/C为0.16，实施例49在30mg/kg时的T/C为0.17，实施例53在30mg/kg时的T/C为0.16，实施例51在15mg/kg时的T/C为0.17，和实施例70在3.75mg/kg时的T/C为0.19。在使用7.5mg/kg恒定剂量的ADC的对比施用中，可能实现0.20的T/C(对于实施例49和54中的每一个)，0.27的T/C(对于实施例51)，0.22的T/C(对于实施例52)，0.23的T/C(对于实施例53)，0.24的T/C(对于实施例55)，0.21的T/C(对于实施例56)，和0.17的T/C(对于实施例70)。
C-6.使用C4.4a-转染的和非转染的A549细胞的在A549肿瘤模型中的药代动力学
在静脉内施用7-30mg/kg的不同ADC以后，测量ADC以及潜在代谢物的血浆浓度和肿瘤浓度，并计算药代动力学参数诸如清除率(CL)、曲线下面积(AUC)和半衰期(t1/2)。
用于定量潜在代谢物的分析
借助于与串联质谱仪(MS)联用的高压液相色谱法(HPLC)，在用甲醇沉淀蛋白以后，测量血浆和肿瘤中的化合物。
对于100μL血浆的加工，将它与400μL甲醇和10μL内部标准品(ISTD，50ng/mL的在甲醇中的溶液)混合，并摇动10秒。在16 000g离心5分钟以后，将250μL上清液转移至自动采样瓶，补加250μL乙酸铵缓冲液(AAC，10mM，pH 6.8)，并再次摇动。
对于肿瘤的加工，将它与4倍量的甲醇混合。在Tissuelyser II(Quiagen)中，以每分钟30次撞击，将样品粉碎6分钟，然后在16 000g离心5分钟。将50μl上清液转移至自动采样瓶，并补加50μL乙酸铵缓冲液(10mM，pH 6.8)和5μL ISTD。再次摇动后，肿瘤样品准备好用于测量。
最后，在得自SCIEX的API4000仪器上，借助于涡轮增压离子喷雾接口(TISP)，在HPLC偶联的大气压电离/串联质谱仪上进行两种基质样品的测量。
在带有Gemini柱(5μm C18 110A，50×3mm，Phenomenex)的HP1100泵(Agilent)上，运行HPLC/LC-MSMS(TISP)分析。
对于校准，以0.5-2000μg/L的浓度混合血浆样品。检测限(LOQ)为约2μg/L。线性范围为2-1000μg/L。
对于肿瘤样品的校准，以0.5-200μg/L的浓度混合未治疗的肿瘤的上清液。检测限为5μg/L。线性范围为5-200μg/L。
用于有效性试验的质量对照含有5和50μg/L，另外具有在血浆中的500μg/L。在这些样品中发现的浓度从预期值偏离了至多20％(未附数据)。
D.药物组合物的工作实施例
可以如下将本发明的化合物转化成药物制剂：
静脉内溶液：
在生理学上耐受的溶剂(例如，等渗盐水溶液，D-PBS，或加入了聚山梨酯80的甘氨酸和氯化钠在柠檬酸盐缓冲液中的制剂)中，以低于饱和溶解度的浓度，溶解本发明的化合物。对溶液进行无菌过滤，并分配进无菌的且无热原的注射容器中。
静脉内溶液：
可以将本发明的化合物转化成引用的施用形式。这可以通过已知的方式如下实现：与惰性的、无毒的、药学上合适的赋形剂(例如缓冲物质、稳定剂、增溶剂、防腐剂)“混合”或“溶解在”所述赋形剂中。例如，下述物质可能存在：氨基酸(甘氨酸、组氨酸、蛋氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸和其它氨基酸)，糖类和有关的化合物(葡萄糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、山梨醇)，甘油，钠盐、钾盐、铵盐和钙盐(例如氯化钠、氯化钾或磷酸氢二钠和许多其它盐)，乙酸盐/乙酸缓冲液系统，磷酸盐缓冲液系统，柠檬酸和柠檬酸盐缓冲液系统，氨丁三醇(TRIS和TRIS盐)，聚山梨酯(例如聚山梨酯80和聚山梨酯20)，泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188和泊洛沙姆171)，聚乙二醇类(PEG衍生物，例如3350)，Triton X-100，EDTA盐，谷胱甘肽，白蛋白(例如人白蛋白)，脲，苯甲醇，苯酚，氯甲酚，间甲酚，苯扎氯铵和许多其它物质。
用于以后转化成静脉内、皮下或肌肉内溶液的冻干粉剂：
可替换地，可以将本发明的化合物转化成稳定的冻干粉剂(可能借助于上述的赋形剂)，并且，在施用之前，用合适的溶剂(例如注射级水、等渗盐水溶液)重构，并施用。