一种制备具有肠道益生功能的茯砖茶茶多糖的方法与流程

本发明涉及生物活性多糖提取的技术领域，具体涉及一种制备具有肠道益生功能的茯砖茶茶多糖的方法。

背景技术：

茯砖茶是我国六大类基本茶中紧压黑茶的一种，中国特有的传统茶类有着悠久的历史。茯砖茶因通过蒸汽、机压、烘房调控温湿度等独特的“发花”工艺，促使微生物代谢等作用，使茶叶发生深度的良性生理生化反应，形成了茯砖茶内部金花繁茂，菌香浓郁的特殊品质，属于后发酵茶，其产区广阔。茯砖茶主要销往我国西藏、内蒙古、新疆、四川、青海、宁夏、甘肃等省的少数名族居住区，当地居民主要膳食是肉类和奶类，茯砖茶不但能补充膳食中较为缺乏的维生素、茶多酚、有机酸等生物活性物质，又具备消食去腻、减肥消脂、生津止渴、养胃健胃、利尿等功效。因此与奶、肉并列，成为边区各族人民的生活必需品，被誉为“中国古丝绸之路上神秘之茶、西北少数名族生命之茶”，时至今日，在西北地区仍有“宁可三日无粮，不可一日无茶”之说。在过去，茯砖茶作为边销茶并不太受内地消费者的关注。目前在日本、韩国对茯砖茶的瘦身降脂功效进行实验研究，结果显示茯砖茶可以明显降脂减肥，所以茯砖茶又被誉为“美容茶”、“瘦身茶”。近年来，随着人民物质生活水平的极大提高，各种富贵病如高血压、高血脂、糖尿病等发病率逐年上升，茯砖茶的保健价值开始得到人们的重视。以同属黑茶的普洱茶为主导的一股黑茶消费热潮开始兴起，在普洱茶市场快速扩大之后，获砖茶接替成为了茶叶市场中的新亮点，越来越多的人始关注获砖茶的保健功效与文化价值，品茶谈茶、收藏上年份的的获砖茶成了不少喜茶人士的爱好。但目前对于茯砖茶中提取具有肠道益生活性多糖报道尚未发现。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种高效制备具有肠道益生功能的茯砖茶茶多糖的方法，实现本发明的具体方案如下：

(1)将茯砖茶粉碎过60目筛后，用80％酒精去除色素及多酚数次去除茯砖茶中色素后晾干；

(2)以料液比为5-30mL/g在60-100℃水中提取三次，离心后合并提取液，浓缩，加入三倍体积无水乙醇进行醇沉，在4℃条件下醇沉过夜，过滤，收集沉淀；

(3)取步骤(2)中的沉淀溶解去离子水中，采用Sevage法去除样品中蛋白后冷冻干燥，得茯砖茶茶多糖粗品；

(4)取步骤(3)中的粗多糖溶解去离子水中离心后上样于DEAE Sepharose Fast Flow柱进行脱色，用1M的NaCl进行洗脱，流速为2mL/min，利用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖含量，收集多糖组分，经透析、旋转蒸发浓缩后冷冻干燥得到茯砖茶茶多糖；

(5)将步骤(4)所得茶多糖进行体外厌氧发酵，测定其体外厌氧发酵过程pH变化、短链脂肪酸生成量及肠道菌群变化进而评价茯砖茶茶多糖的肠道益生功能。

与现有的茶多糖提取相比，本发明中茶多糖的提取优点如下：

1)首次以后发酵茶-茯砖茶为原料提取其中活性多糖。

2)黑茶中普遍色素较多，本提取工艺采取了DEAE Sepharose Fast Flow柱子对茯砖茶茶多糖进行处理，脱色效果较好，并且纯化后蛋白含量小于2％和多酚含量小于5mg GAE/100mg均较低，多糖纯度在90％以上。

3)提取的茯砖茶茶多糖具有显著的肠道益生功能，促进肠道乙酸、乳酸、丙酸和丁酸的生成，并且增加肠道中双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属-乳酸球菌属(Lactobacillus-Enterococcus)及菌群总数，可以作为保健品或者功能食品添加剂。

附图说明

图1茶多糖体外发酵过程中体系pH随时间的变化

图2茶多糖体外发酵过程中短链脂肪酸(a)乳酸、(b)乙酸、(c)丙酸、(d)丁酸随时间的变化

图3茶多糖体外发酵过程中菌群(a)双歧杆菌属、(b)乳杆菌属-乳酸球菌属、(c)菌群总数随时间的变化

具体实施方式

下面通过实施例，对本发明作进一步描述。

实施例1：

(1)将茯砖茶粉碎过60目筛后，用80％酒精去除色素及多酚数次去除茯砖茶中色素后晾干；

(2)以料液比为10mL/g在70℃水中提取三次，离心后合并提取液，浓缩，加入三倍体积无水乙醇进行醇沉，在4℃条件下醇沉过夜，过滤，收集沉淀；

(3)取步骤(2)中的沉淀溶解去离子水中，采用Sevage法去除样品中蛋白后冷冻干燥，得茯砖茶茶多糖粗品；

(4)取步骤(3)中的粗多糖溶解去离子水中离心后上样于DEAE Sepharose Fast Flow柱进行脱色，用1M的NaCl进行洗脱，流速为2mL/min，利用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖含量，收集多糖组分，经透析、旋转蒸发浓缩后冷冻干燥得到茯砖茶茶多糖；

该条件下制得茯砖茶茶多糖得率为3.5％，多糖蛋白含量为1.2％，多酚含量为1.8mg GAE/100mg。

实施例2：

(1)将茯砖茶粉碎过60目筛后，用80％酒精去除色素及多酚数次去除茯砖茶中色素后晾干；

(2)以料液比为20mL/g在90℃水中提取三次，离心后合并提取液，浓缩，加入三倍体积无水乙醇进行醇沉，在4℃条件下醇沉过夜，过滤，收集沉淀；

(3)取步骤(2)中的沉淀溶解去离子水中，采用Sevage法去除样品中蛋白后冷冻干燥，得茯砖茶茶多糖粗品；

(4)取步骤(3)中的粗多糖溶解去离子水中离心后上样于DEAE Sepharose Fast Flow柱进行脱色，用1M的NaCl进行洗脱，流速为2mL/min，利用苯酚-硫酸法检测洗脱液中多糖含量，收集多糖组分，经透析、旋转蒸发浓缩后冷冻干燥得到茯砖茶茶多糖；

该条件下制得茯砖茶茶多糖得率为4.9％，多糖蛋白含量为1.6％，多酚含量为2.4mg GAE/100mg。