一株格氏沙雷氏菌及其用途的制作方法

本发明涉及微生物领域，具体涉及一株格氏沙雷氏菌及其用途。

背景技术：

马铃薯疮痂病，是一种危害马铃薯块茎的植物病害，主要表现为块茎表面出现近圆形至不定形木栓化疮痂状淡褐色病斑或斑块，手摸质感粗糙。马铃薯疮痂病一般有网纹状病斑和裂口状病斑两种发病症状。通常情况下，网纹状病斑和裂口状病斑仅限于皮层，但被害薯块质量和产量仍可降低，不耐贮藏，且病薯外观不雅，商品品级大为下降，导致一定的经济损失。近些年来，在内蒙、河北、山东等地区的发病面积越来越大，引起的经济损失也非常可观。

目前，马铃薯疮痂病主要以化学药剂防治为主。然而长期使用化学药剂，一方面病原菌容易产生抗药性，从而防治效果大大下降；另一方面容易造成严重的环境污染，危及人畜健康。因此，迫切需要对马铃薯疮痂病进行有效生物防治。

现有研究表明，引起马铃薯疮痂病的病原菌主要为疮痂病链霉菌。疮痂病链霉菌属于条件致病菌，即在土壤环境偏碱性条件下容易生长和引起马铃薯病害，而在偏酸性土壤环境中则很少出现。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是如何防治马铃薯疮痂病。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一株细菌。

本发明所提供的细菌为格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)S-2，该菌株已于2016年09月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.13034。格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)S-2CGMCC No.13034简称为格氏沙雷氏菌S-2。

本发明还提供了一种菌剂，该菌剂的活性成分为格氏沙雷氏菌S-2。

所述菌剂的用途可为a1)或a2)或a3)或a4)或a5)或a6)：a1)抑制疮痂病链霉菌；a2)制备抑制疮痂病链霉菌的产品；a3)抑制微白黄链霉菌；a4)制备抑制微白黄链霉菌的产品；a5)抑制能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌；a6)制备抑制能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌的产品。

所述菌剂的制备方法，可包括如下步骤：将格氏沙雷氏菌S-2接种至细菌培养基并进行培养，获得的菌液即为菌剂。

所述细菌培养基可为牛肉汁液体培养基。所述牛肉汁液体培养基的制备方法具体可如下：将蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g和氯化钠5.0g溶于1L蒸馏水，调节pH值至7.0；然后121℃灭菌20min。

所述菌剂的制备方法中，所述培养的具体条件可为：30℃、200r/min振荡培养2d。

除了活性成分，所述菌剂还可以包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物。所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水。所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。

根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。

格氏沙雷氏菌S-2或上述任一所述菌剂在a1)或a2)或a3)或a4)或a5)或a6)中的应用也属于本发明的保护范围：a1)抑制疮痂病链霉菌；a2)制备抑制疮痂病链霉菌的产品；a3)抑制微白黄链霉菌；a4)制备抑制微白黄链霉菌的产品；a5)抑制能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌；a6)制备抑制能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌的产品。所述产品可为抑菌剂。

格氏沙雷氏菌S-2或上述任一所述菌剂在防治疮痂病链霉菌引起的病害中的应用也属于本发明的保护范围。

格氏沙雷氏菌S-2或上述任一所述菌剂在防治微白黄链霉菌引起的病害中的应用也属于本发明的保护范围。

格氏沙雷氏菌S-2或上述任一所述菌剂在防治能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌引起的病害中的应用也属于本发明的保护范围。

上述应用中，所述能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌具体可为疮痂病链霉菌或微白黄链霉菌。

格氏沙雷氏菌S-2或上述任一所述菌剂在防治马铃薯疮痂病中的应用也属于本发明的保护范围。

上述任一所述的应用中，所述疮痂病链霉菌具体可为疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.76和/或疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.1765。上述任一所述的应用中，所述微白黄链霉菌具体可为微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)CGMCC No.4.3598。

为解决上述技术问题，本发明还提供了产品。

本发明所提供的产品，具体可为产品甲，其含有格氏沙雷氏菌S-2；所述产品甲的功能可为a1)或a3)或a5)或b1)或b2)或b3)或b4)：

a1)抑制疮痂病链霉菌；

a3)抑制微白黄链霉菌；

a5)抑制能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌；

b1)防治疮痂病链霉菌引起的病害；

b2)防治微白黄链霉菌引起的病害；

b3)防治能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌引起的病害；

b4)防治马铃薯疮痂病。

本发明所提供的产品，具体可为产品乙，其含有权利要求2所述菌剂；所述产品乙的功能可为a1)或a3)或a5)或b1)或b2)或b3)或b4)：

a1)抑制疮痂病链霉菌；

a3)抑制微白黄链霉菌；

a5)抑制能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌；

b1)防治疮痂病链霉菌引起的病害；

b2)防治微白黄链霉菌引起的病害；

b3)防治能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌引起的病害；

b4)防治马铃薯疮痂病。

所述产品甲或所述产品乙可为抑菌剂。

上述产品甲或产品乙中，所述能够引起马铃薯疮痂病的链霉菌具体可为疮痂病链霉菌或微白黄链霉菌。

上述产品甲或产品乙中，所述疮痂病链霉菌具体可为疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.76和/或疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.1765。上述产品甲或产品乙中，所述微白黄链霉菌具体可为微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)CGMCC No.4.3598。

上文中，疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.76、疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.1765和微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)CGMCC No.4.3598均保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编：100101)，保藏编号依次为4.76、4.1765和4.3598，公众可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。

实验证明，本发明所提供的格氏沙雷氏菌S-2可抑制疮痂病链霉菌和/或微白黄链霉菌，对防治马铃薯疮痂病具有重要的应用价值。

附图说明

图1为实施例3步骤一的实验结果。

图2为实施例3步骤二的实验结果。

图3为实施例3步骤三的实验结果。

图4为实施例3步骤四的实验结果。

图5为实施例3步骤五的实验结果。

保藏说明

菌种名称：格氏沙雷氏菌

拉丁名：Serratia grimesii

菌株编号：S-2

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏机构简称：CGMCC

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期：2016年09月23日

保藏中心登记入册编号：CGMCC No.13034

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

牛肉汁液体培养基：将蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g和氯化钠5.0g溶于1L蒸馏水，调节pH值至7.0；然后121℃灭菌20min。

牛肉汁固体培养基：将蛋白胨10.0g、牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g和琼脂15.0g溶于1L蒸馏水，调节pH值至7.0；然后121℃灭菌20min。

牛肉汁固体平板：将20mL温度为55℃左右的牛肉汁固体培养基倒入培养皿，冷却后即为牛肉汁固体平板。

燕麦固体培养基：取燕麦20g，加入蒸馏水1L，煮沸30min；纱布过滤后收集滤液，向所述滤液中加入琼脂粉20g，并用蒸馏水定容至1L，调节pH值至7.2-7.4；然后121℃灭菌20min。

燕麦固体平板：将20mL温度为55℃左右的燕麦固体培养基倒入培养皿，冷却后即为燕麦固体平板。

马铃薯液体培养基的制备方法为：取去皮马铃薯200g，切成小块，加入1.0L蒸馏水，煮沸30min；纱布过滤后收集滤液，向所述滤液中加入葡萄糖20.0g，并用蒸馏水定容至1.0L，然后115℃灭菌15min。马铃薯液体培养基无需调节pH值，即pH值自然。

马铃薯液体培养基1的制备方法为：取去皮马铃薯200g，切成小块，加入1.0L蒸馏水，煮沸30min；纱布过滤后收集滤液，向所述滤液中加入葡萄糖20.0g，并用蒸馏水定容至1.0L，调节pH值至4.0；然后115℃灭菌15min。

马铃薯液体培养基2：将马铃薯液体培养基1的制备方法中的“调节pH值至4.0”替换为“调节pH值至5.0”，其它步骤均相同。

马铃薯液体培养基3：将马铃薯液体培养基1的制备方法中的“调节pH值至4.0”替换为“调节pH值至6.0”，其它步骤均相同。

马铃薯液体培养基4：将马铃薯液体培养基1的制备方法中的“调节pH值至4.0”替换为“调节pH值至7.0”，其它步骤均相同。

马铃薯液体培养基5：将马铃薯液体培养基1的制备方法中的“调节pH值至4.0”替换为“调节pH值至8.0”，其它步骤均相同。

马铃薯液体培养基6：将马铃薯液体培养基1的制备方法中的“调节pH值至4.0”替换为“调节pH值至9.0”，其它步骤均相同。

疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.76、疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.1765和微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)CGMCC No.4.3598均保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编：100101)，菌种目录编号依次为4.76、4.1765和4.3598，公众可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得。疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.76在下文中简称疮痂病链霉菌4.76。疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)CGMCC No.4.1765 在下文中简称疮痂病链霉菌4.1765。微白黄链霉菌(Streptomyces albidoflavus)CGMCC No.4.3598在下文中简称微白黄链霉菌4.3598。

实施例1、格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)S-2CGMCC No.13034的分离、鉴定和保藏

一、分离

1、土壤样品的处理

(1)在90mL无菌水中加入10g土壤样品(采自宁夏回族自治区固原县种植马铃薯的土壤)和适量玻璃珠，振荡10min，静置30s，制成土壤原液(此时稀释度记为10^-1)。吸取1mL土壤原液的上清液加入盛有9mL无菌水的试管中充分混匀(此时稀释度为10^-2)，然后从此试管中吸取1mL加入到另一盛有9mL无菌水的试管中混合均匀，以此类推制成稀释液甲(稀释度为10^-3)和稀释液乙(稀释度为10^-4)。

2、取疮痂病链霉菌4.76，接种于燕麦固体平板，28℃静置培养10d；然后向所述燕麦固体平板上加入适量无菌水，用无菌接种铲刮取疮痂病链霉菌4.76的孢子，获得病原菌悬液1(疮痂病链霉菌4.76的浓度约为1.0×10⁸cfu/mL)。

3、完成步骤1和步骤2后，将50μL稀释液乙和50μL病原菌悬液1混合，然后均匀涂布在牛肉汁固体平板上，30℃静置培养2d。可以形成抑菌圈的菌落在牛肉汁固体平板上进行菌种纯化。

将筛选到的一株细菌命名为细菌S-2。

二、鉴定

1、形态学鉴定

将细菌S-2接种至牛肉汁固体培养基，30℃培养，2d后观察单菌落的形态。

结果表明，细菌S-2的菌落圆形，表面微凸起，边缘整齐，呈半透明，表面光滑，菌落直径为1－3mm。

细菌S-2经革兰氏染色后，鉴定为革兰氏阴性菌。

2、16S rDNA序列同源性分析

细菌S-2的16S rDNA如序列表中的序列1所示。

经过比对，细菌S-2与格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)的同源性最高，达到99.85％。

因此，细菌S-2鉴定为格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)。

三、保藏

步骤一分离的细菌S-2已于2016年09月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.13034。细菌S-2的全称为格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)S-2CGMCC No.13034，简称为格氏沙雷氏菌S-2。

实施例2、格氏沙雷氏菌S-2的扩繁

格氏沙雷氏菌S-2扩繁的具体步骤如下：

1、将格氏沙雷氏菌S-2在牛肉汁固体培养基上活化三次，然后挑取单菌落接种于装有50mL牛肉汁液体培养基的250mL锥形瓶中，30℃、200r/min的恒温摇床上培养2d，得到培养液。

2、完成步骤1后，取所述培养液，12000r/min离心1min，弃上清，收集沉淀。

3、完成步骤2后，取所述沉淀，用50mL无菌水重悬，得到菌悬液(格氏沙雷氏菌S-2的浓度约为1.0×10¹⁰cfu/mL)。

实施例3、格氏沙雷氏菌S-2的抑菌效果

一、格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76的抑制效果

实验重复三次，取平均值。每次实验的具体步骤如下：

1、取疮痂病链霉菌4.76，接种于燕麦固体平板，28℃静置培养10d。

2、完成步骤1后，取所述燕麦固体平板，加入适量无菌水，然后用无菌接种铲刮取所述燕麦固体平板表面的孢子，获得病原菌悬液1(疮痂病链霉菌4.76的浓度约为1.0×10⁸cfu/mL)。

3、完成步骤2后，取50μL病原菌悬液1，均匀涂布于牛肉汁固体平板。

4、完成步骤3后，取所述牛肉汁固体平板，先在其中心放置直径为5mm的无菌滤纸，然后在所述无菌滤纸上点接10μL实施例2中步骤3获得的菌悬液。30℃静置培养，培养2d后，观察抑菌效果。

将步骤4中的格氏沙雷氏菌S-2菌剂替换为无菌水，其它步骤均不变，作为阴性对照。

格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76的抑菌效果见图1。结果表明，点接格氏沙雷氏菌S-2培养后，有抑菌圈的出现(抑菌圈的直径约为10mm)；而点接无菌水培养后，无抑菌圈的出现。因此，格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76有一定的抑制效果。

二、格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.1765的抑制效果

按照步骤一的方法，将疮痂病链霉菌4.76替换为疮痂病链霉菌4.1765，其它步骤均不变，得到格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.1765的抑制效果。

格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.1765的抑菌效果见图2。结果表明，点接格氏沙雷氏菌S-2培养后，有抑菌圈的出现(抑菌圈的直径约为18mm)；而点接无菌水培养后，无抑菌圈的出现。因此，格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.1765有一定的抑制效果。

三、格氏沙雷氏菌S-2对微白黄链霉菌4.3598的抑制效果

按照步骤一的方法，将疮痂病链霉菌4.76替换为微白黄链霉菌4.3598，其它步骤均不变，得到格氏沙雷氏菌S-2对微白黄链霉菌4.3598的抑制效果。

格氏沙雷氏菌S-2对微白黄链霉菌4.3598的抑菌效果见图3。结果表明，点接格氏沙雷氏菌S-2培养后，有抑菌圈的出现(抑菌圈的直径约为7mm)；而点接无菌水培养后，无抑菌圈的出现。因此，格氏沙雷氏菌S-2对微白黄链霉菌4.3598有一定的抑制效果。

四、格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76、疮痂病链霉菌4.1765和微白黄链霉菌4.3598的混合抑制效果

实验重复三次，取平均值。每次实验的具体步骤如下：

1、取疮痂病链霉菌4.76，接种于燕麦固体平板，28℃静置培养10d；然后向所述燕麦固体平板上加入适量无菌水，用无菌接种铲刮取疮痂病链霉菌4.76的孢子，获得病原菌悬液1(疮痂病链霉菌4.76的浓度约为1.0×10⁸cfu/mL)。

2、取疮痂病链霉菌4.1765，接种于燕麦固体平板，28℃静置培养10d；然后向所述燕麦固体平板上加入适量无菌水，用无菌接种铲刮取疮痂病链霉菌4.1765的孢子，获得病原菌悬液2(疮痂病链霉菌4.1765的浓度约为1.0×10⁸cfu/mL)。

3、取微白黄链霉菌4.3598，接种于燕麦固体平板，28℃静置培养10d；然后向所述燕麦固体平板上加入适量无菌水，用无菌接种铲刮取微白黄链霉菌4.3598的孢子，获得病原菌悬液3(微白黄链霉菌4.3598的浓度约为1.0×10⁸cfu/mL)。

4、完成步骤1、步骤2和步骤3后，将病原菌悬液1、病原菌悬液2和病原菌悬液3等体积混合，得到混合菌悬液甲。

5、完成步骤4后，取150μL混合菌悬液甲，均匀涂布于牛肉汁固体平板。

6、完成步骤5后，取所述牛肉汁固体平板，先在其中心放置直径为5mm的无菌滤纸，然后在所述无菌滤纸上点接10μL实施例2中步骤3获得的菌悬液。30℃静置培养，培养2d后，观察抑菌效果。

将步骤6中的“实施例2中步骤3获得的菌悬液”替换为无菌水，其它步骤均不变，作为阴性对照。

格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76、疮痂病链霉菌4.1765和微白黄链霉菌4.3598的抑菌效果见图4。结果表明，点接格氏沙雷氏菌S-2培养后，有抑菌圈的出现(抑菌圈的直径约为7mm)；而点接无菌水培养后，无抑菌圈的出现。因此，格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76、疮痂病链霉菌4.1765和微白黄链霉菌4.3598组成的混合菌有一定的抑制效果。

五、共培养抑菌效果

1、同步骤四中1。

2、同步骤四中2。

3、同步骤四中3。

4、完成步骤1、步骤2和步骤3后，将50μL病原菌悬液1、50μL病原菌悬液2、50μL病原菌悬液3和10μL实施例2中步骤3获得的菌悬液混合，得到混合菌悬液乙。

5、完成步骤4后，取混合菌悬液乙，均匀涂布于牛肉汁固体平板。30℃静置培养，培养2d后，观察抑菌效果。

共培养抑菌效果见图5。结果表明，共培养的过程中，仅有格氏沙雷氏菌S-2生长，而疮痂病链霉菌4.76、疮痂病链霉菌4.1765和微白黄链霉菌4.3598没有生长的迹象。因此，格氏沙雷氏菌S-2对疮痂病链霉菌4.76、疮痂病链霉菌4.1765和微白黄链霉菌4.3598均有抑制效果。

实施例4、格氏沙雷氏菌S-2的pH值生长范围

1、将格氏沙雷氏菌S-2在牛肉汁固体培养基上活化三次，然后挑取单菌落接种于5mL马铃薯液体培养基中，30℃、200r/min的恒温摇床上培养1d，得到初始菌液。将初始菌液接种(接种量为2％(体积百分比))至装有50mL马铃薯液体培养基1的250mL锥形瓶中，30℃、200r/min的恒温摇床上培养2d，得到培养液。

2、完成步骤1后，取所述培养液，检测其在600nm波长处的吸光值。

结果表明，所述培养液在600nm波长处的吸光值为2.80。可见，格氏沙雷氏菌S-2在马铃薯液体培养基1中的生长情况良好。

按照上述步骤，将马铃薯液体培养基1分别替换为马铃薯液体培养基2、马铃薯液体培养基3、马铃薯液体培养基4、马铃薯液体培养基5和马铃薯液体培养基6，得到的培养液在600nm波长处的吸光值依次为2.42、2.52、2.60、2.36和2.40。可见，格氏沙雷氏菌S-2在马铃薯液体培养基2、马铃薯液体培养基3、马铃薯液体培养基4、马铃薯液体培养基5和马铃薯液体培养基6中的生长情况良好且基本一致。

上述结果表明，格氏沙雷氏菌S-2的pH值生长范围为4.0-9.0。

<110> 中国科学院微生物研究所

<120> 一株格氏沙雷氏菌及其用途

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1348

<212> DNA

<213> 格氏沙雷菌（Serratia grimesii）

<400> 1

ttgcacccac tcccatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg 60

tagcattctg atctacgatt actagcgatt ccgacttcac ggagtcgagt tgcagactcc 120

gatccggact acgacgtact ttatgaggtc cgctggctct cgcgagttcg cttctctttg 180

tatacgccat tgtagcacgt gtgtagccct actcgtaagg gccatgatga cttgacgtca 240

tccccacctt cctccggttt atcaccggca gtctcctttg agttcccgcc attacgcgct 300

ggcaacaaag gataagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacattt cacaacacga 360

gctgacgaca gccatgcagc acctgtctca gagttcccga aggcactaag ctatctctag 420

cgaattctct ggatgtcaag agtaggtaag gttcttcgcg ttgcatcgaa ttaaaccaca 480

tgctccaccg cttgtgcggg cccccgtcaa ttcatttgag ttttaacctt gcggccgtac 540

tccccaggcg gtcgacttaa cgcgttagct ccggaagcca cgcctcaagg gcacaacctc 600

caagtcgaca tcgtttacag cgtggactac cagggtatct aatcctgttt gctccccacg 660

ctttcgcacc tgagcgtcag tctttgtcca gggggccgcc ttcgccaccg gtattcctcc 720

agatctctac gcatttcacc gctacacctg gaattctacc cccctctaca agactctagc 780

ttgccagttt caaatgcagt tcccacgtta agcgcgggga tttcacatct gacttaacaa 840

accgcctgcg tgcgctttac gcccagtaat tccgattaac gcttgcaccc tccgtattac 900

cgcggctgct ggcacggagt tagccggtgc ttcttctgcg agtaacgtca atgcacagtg 960

ctattaacac tgaacccttc ctcctcgctg aaagtgcttt acaacccgaa ggccttcttc 1020

acacacgcgg catggctgca tcaggcttgc gcccattgtg caatattccc cactgctgcc 1080

tcccgtagga gtctggaccg tgtctcagtt ccagtgtggc tggtcatcct ctcagaccag 1140

ctagggatcg tcgcctaggt gagccattac cccacctact agctaatccc atctgggcac 1200

atctgatggc gtgaggcccg aaggtccccc actttggtcc gaagacgtta tgcggtatta 1260

gctaccgttt ccagtagtta tccccctcca tcaggcagtt tcccagacat tactcacccg 1320

tccgccgctc gtcacccaga gagcaagc 1348