一种经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法与流程

文档序号:12411306阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,包括以下步骤:

1)取经血样本,加入样本保存液混匀,然后进行离心,收集沉淀物;

2)将步骤1)得到的沉淀物加入红细胞裂解液中,混匀后静置进行裂解,然后进行离心,收集沉淀物;

3)将步骤2)得到的沉淀物用细胞培养基重悬,然后进行细胞培养,收集培养获得的细胞,即为所述的经血源性子宫内膜干细胞。

2.根据权利要求1所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:所述的样本保存液为含有50~150U/mL青霉素、0.8~1.2mg/mL链霉素、0.05~0.1mg/mL两性霉素B和0.2~0.5mg/mL EDTA-Na2的PBS缓冲液。

3.根据权利要求1所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:所述的红细胞裂解液为含有120~180mmol/L NH4Cl、5~15mmol/LKHCO3和0.05~0.15mmol/L EDTA-Na2的水溶液。

4.根据权利要求3所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:所述的红细胞裂解液的pH值为7.2~7.4。

5.根据权利要求1所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:所述的细胞培养基为含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基。

6.根据权利要求1所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:在步骤1)中,经血样本与样本保存液的用量体积比为1:1~1:3;离心的转速为1200~1500rpm,离心的时间为5~10分钟。

7.根据权利要求1所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:在步骤2)中,红细胞裂解液与经血样本的用量体积比为1:2~1:3;裂解的时间为5~10分钟;离心的转速为1200~1500rpm,离心的时间为5~10分钟。

8.根据权利要求1所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:在步骤3)中,所述细胞培养的接种密度为5~10×104cells/cm2;所述的细胞培养是在37℃、5%CO2的细胞培养箱中进行培养。

9.根据权利要求8所述的经血源性子宫内膜干细胞的分离提取方法,其特征在于:在步骤3)中,所述的细胞培养是将步骤2)得到的沉淀物用细胞培养基重悬后,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养2天,用PBS缓冲液洗掉未贴壁的细胞,再加入细胞培养基继续培养,此后每隔3天更换一次细胞培养基,直至细胞融合至80%后进行传代。

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