一种糖基化终末产物的简易制备方法与流程

文档序号:12399377阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于包括如下步骤:

1)配制磷酸盐缓冲液,将动物血清蛋白加入到所配制的磷酸盐缓冲液中至浓度为50-70g/L,获得动物血清蛋白溶液;

2)向所获得的动物血清蛋白溶液里加入丙酮醛,获得丙酮醛-动物血清蛋白反应液;丙酮醛-动物血清蛋白反应液中丙酮醛的浓度为0.6-10mM;

3)将丙酮醛-动物血清蛋白反应液装入容器中,放置在37℃环境中,每12h打开容器使丙酮醛-动物血清蛋白反应液接触空气,并搅拌混匀一次,反应时间为3-7天;反应后,对丙酮醛-动物血清蛋白反应液进行纯化,获得糖基化终末产物。

2.根据权利要求1所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于,步骤3)所述对丙酮醛-动物血清蛋白反应液进行纯化具体为采用透析袋对丙酮醛-动物血清蛋白反应液进行透析,去除游离的丙酮醛。

3.根据权利要求1所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于,还包括步骤4),具体为对透析后的糖基化终末产物溶液进行含量测定。

4.根据权利要求3所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于,步骤4)所述含量测定的方法为对比糖基化终末产物溶液与动物血清蛋白溶液的颜色差异;若与动物血清蛋白溶液相比,糖基化终末产物溶液颜色变为棕色则表明生成了糖基化终末产物,颜色越深则表明糖基化终末产物含量越高。

5.根据权利要求3所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于,步骤4)所述含量测定的方法为:对糖基化终末产物溶液与动物血清蛋白溶液的颜色分别进行灰度分析,利用假设检验获得P值,当P值小于0.05表明已生成糖基化终末产物。

6.根据权利要求3所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于,步骤4)所述含量测定的方法为:采用荧光酶标仪对糖基化终末产物溶液进行含量检测,检测所用激发波长340nm,发射波长465nm。

7.根据权利要求1所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于:步骤1)所述配制磷酸盐缓冲液具体为:分别称取KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 3.61g、KH2PO4 0.2g和NaCl 8.0g,加DI-H2O 800mL,待其完全溶解,定容至1000mL,调节pH至7.4,过滤除菌获得磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求1所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于:步骤1)所述的动物血清蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白中的一种。

9.根据权利要求1所述的糖基化终末产物的简易制备方法,其特征在于包括如下步骤:

1)配制磷酸盐缓冲液,将动物血清蛋白加入到所配制的磷酸盐缓冲液中至浓度为50-70g/L,获得动物血清蛋白溶液;所述动物血清蛋白为牛血清白蛋白;

2)向所获得的动物血清蛋白溶液里加入丙酮醛,获得丙酮醛-动物血清蛋白反应液;丙酮醛-动物血清蛋白反应液中丙酮醛的浓度为10mM;

3)将丙酮醛-动物血清蛋白反应液装入容器中,放置在37℃环境中,每12h打开容器使丙酮醛-动物血清蛋白反应液接触空气,并搅拌混匀一次,反应时间为3天;反应后,对丙酮醛-动物血清蛋白反应液进行透析除去游离的丙酮醛,获得糖基化终末产物;

4)采用荧光酶标仪对糖基化终末产物溶液进行含量检测,检测所用激发波长340nm,发射波长465nm。

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