1.一种出芽短梗霉聚酮合成酶基因,为如下(1)或(2)的DNA分子:
(1)序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA分子;
(2)在严格条件下与SEQ ID NO.1所示的DNA序列杂交且编码聚酮合成酶的DNA分子。
2.由权利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因编码的聚酮合成酶,是如下(a)或(b)的蛋白质:
(a)由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
(b)将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有聚酮合成酶活性的由序列1衍生的蛋白质。
3.含有权利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因的重组表达载体。
4.如权利要求3所述的重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体为将权利要求1的出芽短梗霉聚酮合成酶基因插入到pGAPZα-A表达载体的多克隆位点得到重组质粒。
5.含有权利要求1所述的出芽短梗霉聚酮合成酶基因的表达盒、转基因细胞系或重组菌。
6.如权利要求5所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌是将权利要求3或4所述的重组表达载体转化毕赤酵母SMD1168H得到的重组菌。
7.出芽短梗霉聚酮合成酶基因和/或聚酮合成酶在黑色素体外合成中的应用。
8.一种黑色素体外合成的方法,包括如下步骤:发酵培养所述重组菌,收集发酵上清液,沉淀上清液中的蛋白质,再对蛋白沉淀进行脱盐和浓缩,即得聚酮合成酶粗酶液;将聚酮合成酶粗酶液与出芽短梗霉粗酶液、丙二酰辅酶A混合,调节pH至8.0,38~40℃条件下反应,反应期间进行充分供氧,反应40~60分钟;反应结束后,调节pH至2.0~3.0,离心,收集沉淀,得到黑色素粗产物。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述出芽短梗霉粗酶液为出芽短梗霉新鲜菌体经液氮研磨破壁,用磷酸钠缓冲液重溶菌粉,离心,获得的上清液。
10.如权利要求8所述的方法,其特征在于,还包括:将黑色素粗产物进行纯化的步骤,具体如下:将黑色素粗产物溶于NaOH中,加入酸性甲醇(pH=2),静置,离心,收集沉淀,将沉淀用蒸馏水洗涤至中性,烘干,即得黑色素。