本发明涉及生物制品制备技术领域，同时涉及水禽疾病预防与防控技术，具体涉及一种治疗I型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法。
背景技术：
鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis，DVH)是危害雏鸭的一种急性高度致死性传染病，其特点是发病急、病程短、传播快、病死率高等，主要侵害3周龄内的雏鸭，成年鸭可感染但不发病。雏鸭发病后，死亡急剧上升，5d后死亡即可停止；发病日龄越小，病死率越高，通常在30％以上，高者可达95％甚至100％。病死鸭多呈角弓反张样外观，其肝脏常有特征性出血性病变。
鸭肝炎的病原包括I型、II型III型行鸭肝炎病毒。其中在我国主要流行I型。近些年在我国及周边国家，I型出现了变异株，根据遗传进化分析国内有学者将I型鸭肝炎病毒不同毒株分为3个基因型即A型、B型和C型，A型对应原传统血清I型，B型对应台湾新型，C型对应韩国新型。我国目前流行DHV毒株主要以A型和C型为主，但2个血清型之间无交叉保护力，然而我国市场上的鸭肝炎疫苗主要是针对A型毒株的，推测可能是造成我国对鸭病毒性肝炎不能进行有效防控的原因之一。
“大舌病”，于2014年下半年在江苏开始出现，后又蔓延至山东、河南、河北、安徽、江西等全国多个养鸭地区。患鸭由于喙发育慢使得舌头突出在外，从而得名。病鸭最早可在6日龄出现舌头突出的症状，发病后期喙比正常鸭短10％～30％，且一旦发病很难恢复正常。剖检病鸭发现，除了肠道炎症外，无明显的病变。该病刚开始发生于商品代樱桃谷肉鸭，后来波及肉种鸭和番鸭。国内研究人员已证实该病是由细小病毒引起，并将其称为“鸭短喙长舌综合征”或“鸭短喙和侏儒综合征”。由于舌头突出，导致病鸭无法正常采食，因此病鸭常表现发育不良，腿、翅膀易断，很多屠宰场拒收此类残鸭，使得养殖户损失严重。目前，该病有愈演愈烈的趋势，需要引起足够的重视。
有报道称，鸭“大舌病”患病鸭分离的毒株与多种常见鸭病毒病特异引物PCR鉴定后，只有鹅细小病毒为阳性。通过病毒关键VP3基因测序及比对发现，“大舌病”病毒的VP3基因序列与“小鹅瘟”病毒即鹅细小病毒(GPV)同源性最近，达到93.1％～98.2％；与番鸭细小病毒(MDPV)同源性为81.5％～91.4％。绘制的VP3基因系统进化树也显示分离到的“大舌病”病毒与两株小鹅瘟台湾分离株的遗传关系最近，有文献暂称为鸭细小病毒(duck parvovirus,DPV)。
目前，与鸭肝炎有关的卵黄抗体专利主要集中在卵黄抗体的提取(“一种防治雏鸭病毒性肝炎的鸭卵黄抗体及制备方法”，专利申请号201110130086.6)，卵黄抗体的剂型(“鸭病毒性肝炎鸭瘟二联蛋黄抗体口服液及其制备方法”，专利申请号201410762718.4)等方面，对鸭“大舌病”的卵黄抗体专利目前尚未发现。
技术实现要素：
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种治疗I型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法，以解决现有技术中针对鸭大舌病的防疫方法效果不佳的技术问题。
本发明要解决的另一技术问题是现有技术中缺乏一种有效的鸭病毒性肝炎卵黄抗体。
本发明要解决的再一技术问题是现有技术中基于卵黄抗体的免疫方法难以对鸭病毒性肝炎和鸭大舌病同时实现预防效果。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种治疗I型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法，包括以下步骤：
1)取母鸡，分别利用鸭肝炎I型灭活疫苗、鸭肝炎新型灭活疫苗、鸭大舌病灭活疫苗免疫注射；
2)当所述母鸡血清中鸭肝炎I型抗体中和效价≥1:2048、鸭肝炎新型抗体中和效价≥1:2048、鸭大舌病抗体琼扩效价≥1:64时，收集高免蛋；
3)取步骤2)所得的高免蛋提取卵黄抗体。
作为优选，步骤1)中免疫注射的方法为：鸭肝炎I型灭活疫苗和新型灭活苗二者同时各基础免疫注射一次、而后各强化免疫注射两次，每次间隔三周，每次每种疫苗免疫1ml/只；上述基础免疫注射后一周，利用鸭大舌病灭活疫苗执行免疫注射，三周后利用鸭大舌病灭活疫苗执行二次免疫注射，三周后利用鸭大舌病灭活疫苗执行三次免疫注射，每次注射的疫苗剂量为1ml/只。
作为优选，所述鸭大舌病灭活疫苗是利用鸭大舌病病毒DPV-HB株制备的。
作为优选，步骤3)所述提取卵黄抗体，包括以下操作：
A)将高免蛋浸入1％的新洁尔灭溶液中浸泡消毒10～15min，晾干备用；
B)收集卵黄；
C)用胶体磨打散卵黄制成卵黄液，并1:4加入醋酸盐缓冲液，搅拌60min，用板框过滤器粗滤；
D)过滤清液加入2～4％的辛酸，搅拌60min，板框过滤至澄清；
E)用0.22μm微孔过滤除菌即得卵黄抗体。
作为优选，步骤B)所述收集卵黄是采取机械打蛋，分离并收集卵黄，并去除卵黄系带。
作为优选，步骤C)所述醋酸盐缓冲液的pH值为5.2。
作为优选，当步骤2)中任一种抗体效价降低一个滴度时，取该抗体所对应的疫苗进行第四次免疫。
以上所制备的卵黄抗体可用于防治鸭肝炎，同时还能对鸭大舌病进行预防和治疗，具体应用方法如下。
(1)治疗用量：≤21日龄，胸肌注射2ml/只；≥21日龄，胸肌注射3ml/只。重症时可重复注射2～3次。
(2)紧急预防用量：≤21日龄，胸肌注射1ml/只；≥21日龄，胸肌注射2ml/只。大流行时可加倍。
本发明提供了一种治疗I型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法，该技术方案以鸭肝炎I型灭活疫苗、鸭肝炎新型灭活疫苗、鸭大舌病灭活疫苗作为免疫原接种蛋鸡，创新性的设计了免疫接种的方法和接种剂量，使得各抗体均达到了较高的效价水平。在此基础上，本发明以不同抗体的特定效价指标为条件确定了卵黄抗体的提取时机，有效保证了所得卵黄抗体的治疗效果。与此同时，本发明进一步设计了针对性的卵黄抗体提取工艺，所得的三联卵黄抗体不仅具有较高的效价，同时对鸭肝炎、鸭大舌病具有确切的预防和治疗效果，该方法的建立填补了卵黄抗体领域对鸭大舌病治疗的技术空白，同时实现了上述两种疾病的同时防治，极具推广前景。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
1、三联卵黄抗体的制备
(1)高免蛋的获得：选取市售鸭肝炎I型灭活苗，对开产前母鸡进行三次免疫，每次间隔两周，每次免疫1ml/只。当鸭肝炎I型抗体中和效价≥1:2048时，开始收集高免蛋。
(2)精制鸭肝炎I型卵黄抗体的制备：将高免蛋浸入1％的新洁尔灭溶液中浸泡消毒15min，晾干备用；采取机械打蛋，分离并收集卵黄；用胶体磨乳化后，1:4加入醋酸盐缓冲液(pH5.2)，搅拌60min，用板框过滤器过滤；过滤清液加入2％的辛酸，剧烈搅拌60min，板框过滤；过滤清液用0.22μm微孔过滤除菌即得。
(3)应用方法：2000只7日龄樱桃谷鸭发生鸭肝炎疫情，使用上述方法制备的抗鸭肝炎I型卵黄抗体，胸肌注射，2ml/只。疫情得到控制，治愈率为70％，经分离鉴定发现，鸭群发病时部分感染的是鸭肝炎新型病毒。本鸭群14周龄时又发生鸭“大舌病”，使用鸭“大舌病”卵黄抗体等常规药物进行治疗，病情得到缓解，治愈率为90％，出栏时体重较其他鸭群平均低0.4kg左右。
2、三联卵黄抗体的应用及疗效评价
2000只7日龄樱桃谷鸭发生鸭肝炎疫情(有I型、新型混合感染情况，并伴有鸭“大舌病”)，使用抗鸭肝炎I型-鸭肝炎新型-鸭“大舌病”三联卵黄抗体，胸肌注射，2ml/只。疫情得到有效控制，治愈率达到93％。
在鸭肝炎发生的鸭场选取2群暂未发病的鸭群(共4000只，7日龄)进行紧急预防，胸肌注射，2ml/只。鸭场疫情得到控制后，此4000只肉鸭并未发生鸭肝炎及鸭“大舌病”的单独感染或是混合感染，预防保护率达到了100％。
实施例2
一种治疗I型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法，包括以下步骤：
1)取母鸡，分别利用鸭肝炎I型灭活疫苗、鸭肝炎新型灭活疫苗、鸭大舌病灭活疫苗免疫注射；
2)当所述母鸡血清中鸭肝炎I型抗体中和效价≥1:2048、鸭肝炎新型抗体中和效价≥1:2048、鸭大舌病抗体琼扩效价≥1:64时，收集高免蛋；
3)取步骤2)所得的高免蛋提取卵黄抗体。
在以上技术方案的基础上，满足以下条件：
步骤1)中免疫注射的方法为：鸭肝炎I型灭活疫苗和新型灭活苗二者同时各基础免疫注射一次、而后各强化免疫注射两次，每次间隔三周，每次每种疫苗免疫1ml/只；上述基础免疫注射后一周，利用鸭大舌病灭活疫苗执行免疫注射，三周后利用鸭大舌病灭活疫苗执行二次免疫注射，三周后利用鸭大舌病灭活疫苗执行三次免疫注射，每次注射的疫苗剂量为1ml/只。
所述鸭大舌病灭活疫苗是利用鸭大舌病病毒DPV-HB株制备的。
步骤3)所述提取卵黄抗体，包括以下操作：
A)将高免蛋浸入1％的新洁尔灭溶液中浸泡消毒10～15min，晾干备用；
B)收集卵黄；
C)用胶体磨打散卵黄制成卵黄液，并1:4加入醋酸盐缓冲液，搅拌60min，用板框过滤器粗滤；
D)过滤清液加入2～4％的辛酸，搅拌60min，板框过滤至澄清；
E)用0.22μm微孔过滤除菌即得卵黄抗体。
步骤B)所述收集卵黄是采取机械打蛋，分离并收集卵黄，并去除卵黄系带。
步骤C)所述醋酸盐缓冲液的pH值为5.2。
当步骤2)中任一种抗体效价降低一个滴度时，取该抗体所对应的疫苗进行第四次免疫。
实施例3
一种治疗I型、新型鸭肝炎及鸭大舌病的卵黄抗体制备方法，包括以下步骤：
1)取母鸡，分别利用鸭肝炎I型灭活疫苗、鸭肝炎新型灭活疫苗、鸭大舌病灭活疫苗免疫注射；
2)当所述母鸡血清中鸭肝炎I型抗体中和效价≥1:2048、鸭肝炎新型抗体中和效价≥1:2048、鸭大舌病抗体琼扩效价≥1:64时，收集高免蛋；
3)取步骤2)所得的高免蛋提取卵黄抗体。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。