本发明涉及生物发酵的
技术领域：
，特别涉及一种诱变菌株红曲红曲菌、采用诱变菌株红曲红曲菌液态发酵制取红曲多糖的方法，以及采用该方法制得的红曲菌丝体提取物及红曲多糖。
背景技术：
：我国红曲菌种资源丰富，无论作为食用还是药用，红曲都起着重要的作用。红曲的潜在价值很大，为了更好的服务于人类，我们应积极利用红曲的药理研发新产品，尤其是洛伐他汀类在降低胆固醇方面的应用，减少动脉粥样硬化发生，防治冠心病等心血管病。但是，洛伐他汀是处方药物，毒副作用很严重，无法保证红曲的安全问题。红曲菌分泌的红曲多糖属于真菌多糖（mycopolysaccharide），无毒副作用，可使用于食品和保健食品原辅料，在国际学术界公认真菌多糖为生物反应调节物（biologicalresponsemodifier，brm），即免疫调节剂（immuno-modulator）。目前，功能性红曲主要由中国提供，而大部分厂家基本上均采用三角瓶或浅盘培养生产，生产方式落后，并且这种生产方式仍属于传统的固态培养，不仅培养周期长，而且易污染而导致生产失败。不仅如此，固态发酵培养中的谷类淀粉只能少数被红曲菌利用，难以像液态发酵一样发酵完全、彻底，进而生产出富含红曲多糖的红曲菌丝体。固态发酵生产功能性红曲除了以上存在的不足以外，其还存在的问题就是，工艺复杂，其主要采用手工操作为主，操作步骤繁琐，劳动强度大，周期长，并且质量稳定性不高，不适宜规模化生产，难以实现自动化，标准化，而且生物量检测难以进行，产品中红曲多糖含量较低。申请人于2013-09-29申请了《液态发酵制取功能性红曲菌丝体和发酵液的方法及制品》发明专利，其申请号为201310455410.0，授权公告号为cn103602590b。所述液态发酵制取功能性红曲菌丝体和发酵液的方法是采用诱变菌株丛毛红曲菌(monascuspilosuszhengyz101)，经液态发酵制成。其中，诱变菌株丛毛红曲菌(monascuspilosuszhengyz101)的生物保藏编号为：cgmcc8167。但是，采用上述菌种制得的红曲菌丝体低含红曲多糖。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于，提供一种优良红曲菌，其有效防止杂菌污染、霉菌毒素和处方药物产生，高产红曲多糖。本发明所要解决的技术问题还在于，提供一种利用该菌种制备红曲多糖的方法，有效防止杂菌污染、霉菌毒素和处方药物产生，并高效进行液态发酵生产、红曲菌丝体提取及纯化。本发明所要解决的技术问题还在于，提供一种由上述方法制得的红曲菌丝体提取物，其红曲多糖含量高达95~99%。本发明所要解决的技术问题还在于，提供一种由上述方法制得的红曲多糖。为达到上述技术效果，本发明提供了一种诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)，所述红曲红曲菌于2016年12月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：gdmcc60124。相应的，本发明还提供一种采用诱变菌株红曲红曲菌液态发酵制取红曲多糖的方法，包括以下步骤：（1）制备菌种发酵培养基：将谷类淀粉原料配制成菌种发酵培养基；（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉8～20%、硝酸钠0.1～0.3%、酵母膏0.2～0.5%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的60～80%，调节ph值为3.0～5.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。作为上述方案的改进，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入0.5-1%的纤维素酶，在40-60℃保温搅拌1-3小时，然后升温至80-100℃搅拌浸提1-3小时；将混合液降温至40-50℃，调节ph至7.5-8.5，加入0.05-0.1%的蛋白酶进行水解2-3小时，然后缓慢加入1-2%三氯乙酸，搅拌20-30min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入80-90%乙醇至醇浓度为60-70%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。作为上述方案的改进，所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为1-2mpa，温度为20-40℃，转子的转速为200-800r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。作为上述方案的改进，所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁10～20be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按40～70%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养6～8天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉8～15%，硝酸钠0.1～0.3％，琼脂2～3%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比40～70%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉8～15%、硝酸钠0.1～0.3%、酵母膏0.1～0.5%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为3.0～5.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量40～70%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。作为上述方案的改进，步骤（4）发酵处理中：所述的高温灭菌时间为20～30min，温度为121～125℃，压力为0.1～0.15mpa；液态发酵培养条件为：温度为25～35℃，通风比为1：0.3～1.5；发酵罐内压力为0.03～0.08mpa，时间为75～120h。作为上述方案的改进，所步骤（1）中的谷类淀粉原料，为大米、大麦、小麦、燕麦、荞麦、玉米中的一种或几种混合物制得的淀粉。相应的，本发明还公开一种红曲菌丝体提取物，其由诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为菌种，经液态发酵制得。作为上述方案的改进，所述红曲菌丝体提取物中的红曲多糖含量为95~99%。相应的，本发明还公开一种红曲多糖，其由诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为菌种，先经液态发酵培养得到红曲菌丝体，再经提取红曲菌丝体制得红曲菌丝体提取物，最后经纯化红曲菌丝体提取物而得。实施本发明具有如下有益效果：本发明提供一种优良红曲菌，已于2016年12月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：gdmcc60124，能较好的适应谷类原料的液态发酵工艺，其生命力强、繁殖速度快、生产效率高，且可以有效防止杂菌污染、霉菌毒素和处方药物产生，高产红曲多糖。本发明提供的制备方法，采用发酵罐进行液态发酵，不产生污染，其生产工艺先进，取代传统的手工操作模式，操作步骤简单，劳动强度小，周期短，质量稳定性高，适宜规模化生产，而且生物量可定量检测，产品中红曲多糖含量较高。本发明以液态发酵谷类原料所生产的红曲菌丝体提取物作为最终产物，其中红曲多糖含量高达95~99%，红曲多糖是一种具有免疫调节、保肝解毒功效的活性物质，可调控细胞分裂和分化，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等药理作用。本发明采用特定菌种，通过特定的液态发酵方法，制得高含红曲多糖的红曲菌丝体提取物，其在保健食品和功能性食品的应用十分广泛，市场价值极大。具体实施方式为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明作进一步地详细描述。本发明提供了一种诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)，所述红曲红曲菌于2016年12月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，该保藏中心的地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，生物保藏编号为：gdmcc60124，分类学名称为红曲红曲菌(monascusanka)，可以有效防止杂菌污染、霉菌毒素和处方药物产生，高产红曲多糖。相应的，本发明还提供一种采用诱变菌株红曲红曲菌液态发酵制取红曲多糖的方法，包括以下步骤：（1）制备菌种发酵培养基：将谷类淀粉原料配制成菌种发酵培养基；所述谷类淀粉原料，为大米、大麦、小麦、燕麦、荞麦、玉米中的一种或几种混合物制得的淀粉。优选的，所述谷类淀粉原料为大米。（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；具体的，所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁10～20be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按40～70%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养6～8天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉8～15%，硝酸钠0.1～0.3％，琼脂2～3%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比40～70%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉8～15%、硝酸钠0.1～0.3%、酵母膏0.1～0.5%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为3.0～5.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量40～70%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉8～20%、硝酸钠0.1～0.3%、酵母膏0.2～0.5%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的60～80%，调节ph值为3.0～5.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；所述的高温灭菌时间为20～30min，温度为121～125℃，压力为0.1～0.15mpa；液态发酵培养条件为：温度为25～35℃，通风比为1：0.3～1.5；发酵罐内压力为0.03～0.08mpa，时间为75～120h。（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。优选的，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入0.5-1%的纤维素酶，在40-60℃保温搅拌1-3小时，然后升温至80-100℃搅拌浸提1-3小时；将混合液降温至40-50℃，调节ph至7.5-8.5，加入0.05-0.1%的蛋白酶进行水解2-3小时，然后缓慢加入1-2%三氯乙酸，搅拌20-30min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入80-90%乙醇至醇浓度为60-70%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。采用上述提取方法，红曲多糖的含量高达95~99%，蛋白脱除率达90%以上，产率可达5%以上，且最大限度保护了红曲多糖的原本结构，保证其具有良好的活性。此外，此提取方法高效、简便、经济，不含有害物质，满足环保要求，适合大规模推广使用。优选的，所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为1-2mpa，温度为20-40℃，转子的转速为200-800r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。采用上述纯化方法，红曲多糖的纯度高，且最大限度保护了红曲多糖的原本结构，保证其具有良好的活性。此外，此纯化方法操作过程简单，满足环保要求，适合大规模推广使用。需要说明的是，提取方法和纯化方法中，加入物质的%是指重量百分比。本发明提供的制备方法，采用发酵罐进行液态发酵，不产生污染，其生产工艺先进，取代传统的手工操作模式，操作步骤简单，劳动强度小，周期短，质量稳定性高，适宜规模化生产，而且生物量可定量检测，产品中红曲多糖含量较高。相应的，本发明公开一种红曲菌丝体提取物，其由诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为菌种，经液态发酵制得。所述红曲菌丝体提取物中的红曲多糖含量高达95~99%。相应的，本发明公开一种红曲多糖，其由诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为菌种，先经液态发酵培养得到红曲菌丝体，再经提取红曲菌丝体制得红曲菌丝体提取物，最后经纯化红曲菌丝体提取物而得。红曲多糖是一种具有免疫调节、保肝解毒功效的活性物质，可调控细胞分裂和分化，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等药理作用，用来治疗免疫性缺陷疾病和临床治疗引起的免疫功能下降等疾病。本发明采用特定菌种，通过特定的液态发酵方法，制得高含红曲多糖的红曲菌丝体提取物，其在保健食品和功能性食品的应用十分广泛，市场价值极大。将本发明与其他技术作对比，结果如下：一、本发明：采用红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)，生物保藏编号为：gdmcc60124，通过液态发酵制取；对比例1：采用红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)，生物保藏编号为：gdmcc60124，通过固态发酵制取；对比例2，采用丛毛红曲菌(monascuspilosuszhengyz101)，其生物保藏编号为：cgmcc8167，通过液态发酵制取。二、对比结果：项目红曲菌发酵产物多糖红曲来源（原料）红曲多糖含量本发明液态发酵制取的红曲菌丝体红曲菌丝体提取物95~99%对比例1固态发酵制取的红曲米红曲米粉末2~3%对比例2液态发酵制取的红曲菌丝体红曲菌丝体粉末5~6%下面以具体实施例进一步阐述本发明实施例1（1）制备菌种发酵培养基：将大米配制成菌种发酵培养基；（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种，生物保藏编号为：gdmcc60124；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁10be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按40%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养6天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉8%，硝酸钠0.1％，琼脂2%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比40%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉8%、硝酸钠0.1%、酵母膏0.1%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为3.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量40%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉8%、硝酸钠0.1%、酵母膏0.2%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的60%，调节ph值为3.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；所述的高温灭菌时间为20min，温度为121℃，压力为0.1mpa；液态发酵培养条件为：温度为25℃，通风比为1：0.3；发酵罐内压力为0.03mpa，时间为75h。（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分。（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。其中，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入0.5%的纤维素酶，在40℃保温搅拌1小时，然后升温至80℃搅拌浸提1小时；将混合液降温至40℃，调节ph至7.5，加入0.05%的蛋白酶进行水解2小时，然后缓慢加入1%三氯乙酸，搅拌20min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入80%乙醇至醇浓度为60%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为1mpa，温度为20℃，转子的转速为200r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。实施例2（1）制备菌种发酵培养基：将大麦配制成菌种发酵培养基；（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种，生物保藏编号为：gdmcc60124；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁15be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按50%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养7天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉10%，硝酸钠0.2％，琼脂3%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比50%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉12%、硝酸钠0.5%、酵母膏0.5%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为4.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量50%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉15%、硝酸钠0.2%、酵母膏0.3%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的70%，调节ph值为4.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；所述的高温灭菌时间为25min，温度为122℃，压力为0.12mpa；液态发酵培养条件为：温度为28℃，通风比为1：0.8；发酵罐内压力为0.05mpa，时间为90h。（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。其中，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入0.6%的纤维素酶，在45℃保温搅拌2小时，然后升温至85℃搅拌浸提1.5小时；将混合液降温至45℃，调节ph至8，加入0.07%的蛋白酶进行水解2小时，然后缓慢加入1%三氯乙酸，搅拌25min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入82%乙醇至醇浓度为65%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为2mpa，温度为30℃，转子的转速为300r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。实施例3（1）制备菌种发酵培养基：将玉米配制成菌种发酵培养基；（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种，生物保藏编号为：gdmcc60124；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁18be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按60%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养7天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉12%，硝酸钠0.3％，琼脂2.5%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比60%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉12%、硝酸钠0.3%、酵母膏0.4%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为4.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量65%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉15%、硝酸钠0.3%、酵母膏0.4%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的70%，调节ph值为5.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；所述的高温灭菌时间为28min，温度为124℃，压力为0.14mpa；液态发酵培养条件为：温度为32℃，通风比为1：1.2；发酵罐内压力为0.06mpa，时间为110h。（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。其中，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入0.7%的纤维素酶，在50℃保温搅拌2小时，然后升温至90℃搅拌浸提2小时；将混合液降温至48℃，调节ph至8，加入0.08%的蛋白酶进行水解3小时，然后缓慢加入1.5%三氯乙酸，搅拌20min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入85%乙醇至醇浓度为65%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为1.7mpa，温度为30℃，转子的转速为500r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。实施例4（1）制备菌种发酵培养基：将大米配制成菌种发酵培养基；（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种，生物保藏编号为：gdmcc60124；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁20be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按70%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养8天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉15%，硝酸钠0.3％，琼脂3%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比70%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉15%、硝酸钠0.3%、酵母膏0.5%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为5.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量70%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉20%、硝酸钠0.3%、酵母膏0.5%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的80%，调节ph值为5.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；所述的高温灭菌时间为30min，温度为125℃，压力为0.15mpa；液态发酵培养条件为：温度为35℃，通风比为1：1.5；发酵罐内压力为0.08mpa，时间为120h。（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。其中，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入0.8%的纤维素酶，在55℃保温搅拌2.5小时，然后升温至95℃搅拌浸提2.5小时；将混合液降温至48℃，调节ph至8.2，加入0.09%的蛋白酶进行水解2小时，然后缓慢加入2%三氯乙酸，搅拌30min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入88%乙醇至醇浓度为68%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为2mpa，温度为35℃，转子的转速为600r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。实施例5（1）制备菌种发酵培养基：将大米和小麦配制成菌种发酵培养基，其中，大米：小麦=1:1；（2）制取菌种：制取诱变菌株红曲红曲菌(monascusankayangyz2001)作为发酵菌种，生物保藏编号为：gdmcc60124；（3）生产种培养基的制备：将步骤（2）所选取的菌株分别用下列培养基培养：斜面培养基、斜面特制培养基、液态摇瓶培养基；所述斜面培养基的制备方法为：取麦芽汁20be作为通用培养基，煮沸，按重量比分别按60%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却,与步骤（1）中选取的菌株接种，并进行斜面培养基的培养7天；所述斜面特制培养基的制备方法为：取按照重量百分比计算的可溶性淀粉或米粉10%，硝酸钠0.3％，琼脂2.5%与剩余量的水进行混合，煮沸，与步骤（1）中培养的斜面培养基,分别按重量比55%的量装入试管或茄子瓶，灭菌，冷却，接种并进行斜面特制培养基的培养；所述液态摇瓶培养基的制备方法为：选取淀粉或米粉13%、硝酸钠0.2%、酵母膏0.4%、与剩余量的水进行混合、搅拌均匀，再用乳酸或醋酸调节ph值为5.0，煮沸，形成液态摇瓶培养基，分别按重量55%的量装入三角瓶，灭菌，冷却、接种并进行液态摇瓶培养。（4）发酵处理：将步骤（1）的菌种发酵培养基按照重量百分比计算的谷类淀粉18%、硝酸钠0.2%、酵母膏0.3%与剩余量的水进行混合，搅拌均匀后泵入生产发酵罐，加入自来水至罐体有效体积的72%，调节ph值为5.0，高温灭菌后冷却至常温，将步骤3中生产的液态摇瓶种接入此发酵液培养基，进行液态发酵培养，使菌株生长出红曲菌丝体；所述的高温灭菌时间为25min，温度为123℃，压力为0.13mpa；液态发酵培养条件为：温度为30℃，通风比为1：1；发酵罐内压力为0.06mpa，时间为110h。（5）发酵后处理：将步骤（4）中已培养好的红曲菌丝体，经过压榨、膜过滤后，分离出固体部分；（6）提取红曲多糖：将分离出的固体部分，经提取、纯化、干燥，得到红曲多糖。其中，所述红曲多糖的提取方法如下：将分离出的固体部分粉碎，按1:1加入纯净水，得到混合液；在混合液中加入1%的纤维素酶，在60℃保温搅拌3小时，然后升温至100℃搅拌浸提3小时；将混合液降温至50℃，调节ph至8.5，加入0.1%的蛋白酶进行水解3小时，然后缓慢加入2%三氯乙酸，搅拌30min，离心除去蛋白质沉淀；搅拌下缓慢加入90%乙醇至醇浓度为70%，离心收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇洗涤，经真空冷冻干燥，得到红曲多糖。所述红曲多糖的纯化方法如下：采用超滤技术对提取得到的红曲多糖进一步纯化，纯化过程中截留的分子量范围为100000-500000d，工作压力为2mpa，温度为40℃，转子的转速为800r/min；收集截留浓缩液，并用蒸馏水清洗，合并洗液与浓缩液，干燥，得到红曲多糖。将实施例1-5做技术检测，结果如下：项目实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5红曲多糖含量99.0%98.5%98.7%98.2%97.4%洛伐他汀0.0005%0.0007%0.0008%0.0004%0.0006%桔霉素1ppb1ppb1ppb1ppb2ppb综上所述，本发明采用特定菌种，通过特定的液态发酵方法，获得高含红曲多糖的红曲菌丝体提取物，具体的，所述红曲多糖含量为95~99%。红曲多糖是一种具有免疫调节、保肝解毒功效的活性物质，可调控细胞分裂和分化，具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等药理作用，用来治疗免疫性缺陷疾病和临床治疗引起的免疫功能下降等疾病。高含红曲多糖的红曲菌丝体提取物在保健食品和功能性食品的应用十分广泛，市场价值极大。以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。当前第1页12