本申请为“一种氨基丙基取代托烷胺类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途”发明专利申请的分案申请，母案的申请号为“201110427904.9”、申请日为2011年12月19日。
本发明属于药物化学领域，更具体而言，涉及8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物、其药物组合物及其制备方法和用途，该类化合物可作为ccr5拮抗剂。
背景技术：
趋化因子是一类引导淋巴细胞定向迁移的细胞因子，在炎症反应、白细胞外渗、组织浸润、肿瘤发生、胚胎发育中有重要的作用。趋化因子属于分泌型信号分子大家族，分子量大约8至14kda。目前这一家族大约有45个成员，它们的共同特征是：含有四个位置保守的半胱氨酸(cys)。根据其靠近n端的两个cys间是否含有其它氨基酸，这一家族被分为四类：cc、cxc、c-x3-c和c。其中，cc类(又称β-趋化因子)和cxc类(又称α-趋化因子)是最重要的两类。
体内趋化因子的功能是通过趋化因子受体介导的。目前趋化因子受体的标准命名是根据其特异结合的趋化因子的特征来决定的(例如，若其配基是cc类趋化因子亚家族，则它就被命名为ccr)。趋化因子的受体属于7次跨膜的g蛋白偶联受体家族(gpcr)，这类受体n端在细胞外，c端在细胞内，含有七个非常保守的由α螺旋构成的跨膜区域。它们在与激动剂结合时能偶联到g蛋白上，从而使细胞外的信号得以传递到细胞内。在激动剂的作用下，趋化因子受体能引起一系列的胞内信号及改变细胞的行为，如抑制腺苷酸环化酶(ac)，动员细胞内钙释放，激活一系列的蛋白激酶，引导细胞定向迁移(趋化)，影响细胞因子的释放等。
目前发现的趋化因子受体有19个，它们是ccr1-11，cxcr1-6，xcr1，cx3cr1。趋化因子受体被认为是炎症反应和自身免疫性疾病的重要介导者(gerardetal.,natimmunol,2,108-15(2001))，因此，趋化因子受体的调节剂(包括激动剂和拮抗剂)能够用于多种疾病，如炎症或过敏性疾病，过敏反应、自身免疫性疾病、炎症性肠道疾病、硬皮病、嗜酸细胞性肌炎、肿瘤发生和转移等。
作为趋化因子受体家族成员的ccr5，其内源性激动剂有rantes、mip-1α、mip-1β，它表达于外周血来源的树突状细胞、t淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞以及参与维持长期炎症反应的免疫细胞和炎症细胞。因此，调节ccr5的功能可能调节t细胞向炎症反应损伤处的募集，从而为治疗炎症反应和自身免疫性疾病提供了一个新的靶点，例如，ccr5缺失使得小鼠免于dss诱导的严重的炎症及黏膜的损伤(andresetal.,jimmunol.,164,6303-12(2000))；在小鼠上，ccr5的小分子拮抗剂tak-779抑制了胶原诱导的关节炎(yangetal.,eurjimmunol.,32,2124-32(2002))。所以，ccr5的拮抗剂可用于下述疾病的治疗：哮喘和局部紊乱(如局部性皮炎，局部过敏)，风湿性关节炎，动脉硬化，牛皮癣，肉状瘤症和其它纤维化疾病，自身免疫性疾病(如多发性硬化症，炎症性肠炎)。此外，由于cd8+t细胞与慢性梗阻性肺病(copd)有关(cosioetal.,chest,121,160s-165s,(2002))，因此，ccr5的拮抗剂还可能用于copd的治疗。
除了在炎症和免疫反应中的作用，趋化因子受体还可能是某些寄生虫和病毒入侵细胞的重要受体。例如，duffy受体是疟原虫进入红细胞的受体，缺少duffy受体的人群不容易患上疟疾。更为重要的是，有几个趋化因子受体参与了hiv的入侵，被称为hiv的共受体。
研究表明，th细胞上的cd4分子对于hiv的侵入必不可少，但仅cd4不足以介导hiv与细胞的融合。进一步的研究发现，另外的被称为hiv侵入共受体的分子是趋化因子受体中的ccr5、cxcr4、ccr2b、ccr3、ccr8及孤儿受体v28、strl-33、gpr1、gpr15和apj(domesetal.,virology,235,179-90,(1997))。在体内，ccr5与cxcr4是hiv进入的主要共受体，ccr3也可能参与了一部分hiv的进入。ccr5是巨噬细胞向性(m-向性)hiv-1的共受体而cxcr4是t细胞向性(t-向性)的hiv-1的共受体。因此，ccr5对hiv的传播起重要作用，调节ccr5的物质能影响m向性hiv-1在人群中的传播及把疾病控制在早期。在体外实验中发现能与ccr5结合的趋化因子rantes、mip-1α及mip-1β都能通过抑制m向性的hiv-1进入细胞从而抑制hiv感染。一些能与ccr5结合及拮抗ccr5功能的小分子化合物也在体外非常有效地抑制hiv侵入细胞。
综上所述，本领域迫切需要开发作为具有潜在药物用途的ccr5拮抗剂的化合物。
技术实现要素：
本发明人对具有ccr5拮抗活性的化合物经过广泛而深入的研究，设计和合成了通式(ⅰ)所示的化合物。测试结果表明，这些化合物是强效的ccr5拮抗剂，而且具有细胞内抗hiv-1病毒活性，可作为hiv病毒进入的抑制剂，并可发展为抗艾滋病药物，在此基础上完成了本发明。
因此，本发明的一个目的是提供一类作为ccr5拮抗剂的通式(ⅰ)所示的8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的另一目的是提供一种包含治疗有效量的一种或多种通式(ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
本发明的还一目的是提供该类化合物或其药学上可接受的盐作为ccr5拮抗剂，在制备治疗由ccr5介导的疾病的药物中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种通式(ⅰ)所示的8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
r1为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苄基、萘基，所述取代基选自c1-c4烷基、卤素和cf3；
r2为氢、c1-c6烷基、c2-c6烯基或者r2与所连接的n、y、r3和r4一起形成
y为
r3为直接键、nh或者c1-c6亚烷基；
r4为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、苄基、萘基、5-10元芳香性杂环基或4-7元饱和杂环基，所述的芳香性杂环基和饱和杂环基包括1-3个选自n和o中的杂原子，并且所述杂原子可选择地被氧化，所述的取代基选自下列原子或基团：c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤素、羟基、cf3、so2nr5r6，且nr5r6可共同组成4-7元饱和杂环基，所述杂环包括另外0-3个选自n、o和s中的杂原子；
r5为氢、羟基或者c1-c6烷基；
r6为氢或c1-c6烷基。
在本发明优选的实施方案中，本发明的化合物为如下通式(ⅱ)所示的化合物：
其中，
r7和r8各自独立地选自c1-c4烷基、卤素和cf3中；
r2为氢、c1-c6烷基、c2-c6烯基或者r2与所连接的n、y、r3和r4一起形成
y为
r3为直接键、nh或者c1-c6亚烷基；
r4为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、5-10元芳香性杂环基或4-7元饱和杂环基，所述的芳香性杂环基和饱和杂环基包括1-3个选自n和o中的杂原子，并且所述杂原子可选择地被氧化，所述的取代基选自下列原子或基团：c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤素、羟基、cf3、so2nr5r6，且nr5r6可共同组成4-7元饱和杂环基，所述杂环包括另外0-3个选自n、o和s中的杂原子；
r5为氢、羟基或者c1-c6烷基；
r6为氢或c1-c6烷基。
对于通式(ⅱ)所示的化合物，更优选的是：
r7和r8各自独立地选自c1-c4烷基和卤素；
r2为氢、c1-c6烷基、c2-c6烯基或者r2与所连接的n、y、r3和r4一起形成
y为
r3为直接键、nh或者c1-c6亚烷基；
r4为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、5-9元芳香性杂环基或5-6元饱和杂环基，所述的芳香性杂环基和饱和杂环基包括1-2个选自n和o中的杂原子，并且所述杂原子可选择地被氧化，所述的取代基选自下列原子或基团：c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤素、羟基、cf3、so2nr5r6，且nr5r6可共同组成5-6元饱和杂环基，所述杂环包括另外0-1个选自n、o和s中的杂原子；
r5为氢、羟基或者c1-c6烷基；
r6为氢或c1-c6烷基。
对于通式(ⅱ)所示的化合物，最优选的是：
r7和r8各自独立地选自c1-c4烷基、卤素；
r2为氢、乙基、丙烯基或者r2与所连接的n、y、r3和r4一起形成
y为
r3为直接键、nh或者亚甲基；
r4为未取代的或被1-3个取代基取代的下列基团：苯基、吗啉基、吡咯基、吲哚基、吡咯啉基、嘧啶基、吡啶基，所述的取代基选自下列原子或基团：c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、卤素、羟基、cf3、so2nr5r6，且nr5r6可共同组成哌啶基或吗啉基；或者r4为
r5为氢；
r6为甲基、叔丁基或正丁基。
在本发明中，特别优选的具体化合物本发明实施例制备的化合物：
本发明的8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物药学上可接受的盐，按照药学上常规成盐的方法，为本发明的化合物与盐酸、酒石酸、枸橼酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸或甲磺酸形成的盐。
本发明化合物的制备方法可用下列所示流程进行制备：
通用流程：
其中，y、r1、r2、r3和r4的定义如上所述；
p为叔丁氧羰基、苄氧羰基、苄基、9-芴甲氧羰基、ch3co和ch3oco其中之一的氨基保护基；
步骤a)：在碱存在下，r1nh2与1-溴-3-氯丙烷进行亲核取代反应，得到n-取代3-氯丙胺化合物i；
步骤b)：n-取代3-氯丙胺化合物i与4-乙酰基-4-哌啶甲酰氯发生偶联反应，得到n-三取代的3-氯丙胺化合物ii；
步骤c)：在碱存在下，仲胺化合物与n-三取代的3-氯丙胺化合物ii发生亲核取代反应，得到保护的8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物iii；
步骤d)：化合物iii根据氨基保护基采取酸水解或碱水解或氢解，脱氨基保护基得到化合物iv；
步骤e)：游离胺化合物iv与酸发生偶联反应、或与酰氯发生取代反应、或与异氰酸酯发生加成反应、或与卤代烃发生亲核取代反应，生成化合物v，即本发明的化合物8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物；或者，
步骤f)：在碱存在下，n-三取代的3-氯丙胺化合物ii与8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物发生亲核取代反应，生成化合物v，即本发明的化合物8-(3-氨基丙基)-3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物。
上述反应步骤c)的仲胺化合物(3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物)的制备流程如下：
其中，r2和p的定义如上所述；p1为氨基的常用保护基，例如boc、cbz、bn、fmoc、ch3co或ch3oco等；
保护的氨基化合物与3-羰基-1,5-戊二酸和2,5-二甲氧基四氢呋喃发生robinson-schopf反应得到保护的8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-酮vi，经形成肟的反应得到化合物vii后，通过还原得到保护的3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基化合物viii，通过引入不同的取代基r2和对仲胺保护得到化合物x，化合物x经过脱保护得到中间体3-外向-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-氨基酰胺类化合物xi。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种通式(ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐，并可进一步包含药学上可接受的载体，还可以包含蛋白酶抑制剂和/或逆转录酶抑制剂。
在本发明的第三方面，提供了一种本发明通式(ⅰ)化合物或药学上可接受的盐的用途，其作为ccr5的拮抗剂，在制备治疗由ccr5介导的疾病的药物中的应用。更具体而言，用于制备治疗hiv感染、哮喘、风湿性关节炎、自身免疫性疾病和慢性梗阻性肺病(copd)的药物。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围。
制备实施例
实施例1
化合物7a：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(苯磺酰氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：3-氯-n-(3-氯丙基)-4-甲基苯胺
在3-氯-4-甲基苯胺(14.16g,100mmol)的dmf(n,n-二甲基甲酰胺)(10ml)溶液中加入1-溴-3-氯丙烷(30.5ml,300mmol)，碘化钾(1.66g,10mmol)和三乙胺(60ml)。该混合物在室温下搅拌3天。然后蒸干低沸点溶剂，乙醚稀释，并用饱和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝25/1，v/v)，得到的产物1为淡棕色的油(18.64g，收率86％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:7.00(d,1h,j＝8.1hz),6.63(d,1h,j＝2.4hz),6.44(dd,1h,j＝2.4hz,5.7hz),3.64(t,2h,j＝6.3hz),3.29(t,2h,j＝6.6hz),2.45(s,3h),2.09-2.01(m,2h)。
步骤2：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-氯丙基)-4-哌啶甲酰胺
将上述制备的化合物1(2.18g,10mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)，并在冰冷却下依次向该溶液中加入三乙胺(5.53ml,40mmol)和1-乙酰基-4-哌啶甲酰氯(5.69g,30mmol)。在相同温度下搅拌该混合物1小时。在冰冷却下加入饱和碳酸氢钠水溶液(40ml)，并用二氯甲烷稀释(50ml)，分离有机相，硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1，v/v)，得到产物2为浅棕色的油(2.6g，收率70％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:7.31(d,1h,j＝8.1hz),7.18(d,1h,j＝2.1hz),6.98(dd,1h,j＝1.8hz,6.0hz),4.53-4.50(m,1h),3.77(t,2h,j＝7.2hz),3.53(t,2h,j＝6.3hz),2.85(br-s,1h),2.43(s,3h),2.41-2.34(m,2h),2.05(s,3h),2.00(m,3h),1.84-1.54(m,4h)。
步骤3：8-苄基-3-外向-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-氨基甲酸叔丁酯
向8-苄基-3-外向-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-胺(7.231g，33.2mmol)的二氯甲烷(100ml)的溶液中，加入二碳酸二叔丁酯(7.95g，36.5mmol)和三乙胺(5.5ml，39.8mmol)。将形成的混合物回流搅拌12小时，减压除去四氢呋喃，残余物用二氯甲烷(100ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，v/v)，得到产物3为白色固体(8.664g，收率82％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:7.37-7.23(m,5h),4.32(br,1h),3.81(br,1h),3.53(s,2h),3.21-3.19(m,2h),2.04-2.00(m,2h),1.84-1.77(m,2h),1.70-1.66(m,2h),1.52-1.48(m,2h),1.43(s,9h)。
步骤4：3-外向-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-氨基甲酸叔丁酯
向上述制备的化合物3(954mg，3mmol)的甲醇(10ml)的溶液中，加入10％钯碳(95mg)和甲酸铵(1323mg，21mmol)。将形成的混合物回流搅拌12小时，减压除去甲醇，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，用饱和食盐水(10ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到产物4为白色固体(667mg，收率92％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:4.64(br,1h),3.87-3.70(m,3h),2.06-1.95(m,4h),1.87-1.85(m,2h),1.77-1.68(m,2h),1.43(s,9h)。
步骤5：8-(3-(1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺)丙基)3-外向-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-氨基甲酸叔丁酯
将上述制备的化合物4(937mg，3.87mmol)溶解于乙腈(20ml)，并依次向该溶液中加入化合物2(1440mg，3.87mmol)、碘化钾(643mg,3.87mmol)和碳酸钾(1603mg，11.62mmol)。加热至回流，反应6小时后冷却至室温。减压除去乙腈，并用二氯甲烷(20ml)稀释，饱和食盐水(20ml)洗涤。分离有机相，硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝20/1，v/v)，得到产物5为白色的固体(960mg，收率43％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:7.38-7.35(m,1h),7.31-7.26(m,2h),5.13(br,1h),4.02-3.97(m,1h),3.85-3.74(m,4h),3.66-3.60(m,1h),2.94-2.81(m,3h),2.41(s,3h),2.24-2.16(m,3h),2.04(s,3h),1.79-1.63(m,14h),1.42(s,9h)。
步骤6：1-乙酰基-n-(3-(3-外向-氨基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
将上述制备的化合物5(57mg，0.1mmol)溶于二氯甲烷(2ml)溶液中，加入三氟醋酸(46ul，0.6mmol)，室温下搅拌8小时。倒入水中(4ml)，水相用氢氧化钠调节ph为12，用二氯甲烷(5ml)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(5ml)洗涤，硫酸钠干燥，浓缩，得到产物6为白色固体(33mg，产率69％)。
步骤7：化合物7a：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(苯磺酰氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
在上述实施例1制备的化合物6(103mg，0.22mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入碳酸氢钠(28mg，0.33mmol)，混合物冷却到0℃后滴加苯磺酰氯(48mg，0.27mmol)，在同样的温度继续搅拌1小时。反应物用二氯甲烷稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1至5/1，v/v)，得到产物7a为白色泡沫状固体(96mg，收率73％)。1hnmr(cd3od,300mhz):δ1.56-1.90(m,14h),2.05(s,3h),2.12-2.16(m,2h),2.41(s,3h),2.82-2.92(m,3h),3.52-3.60(m,1h),3.70-3.74(m,4h),3.82-3.87(m,1h),4.39-4.44(m,1h),7.22(dd,1h,j＝1.8hz,8.1hz),7.43-7.45(m,2h),7.54-7.64(m,3h),7.88-7.90(m,2h).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:177.8,171.9,143.5,142.1,138.8,136.9,134.3,134.0,130.9,130.0,128.4,127.4,62.4,48.5,47.2,45.8,42.3,41.2,38.0,30.4,29.8,26.3,25.4,21.7,20.3.ms(ei):m/z600(m)+.
以下实施例2-4的反应条件与实施例1的相似，最后一个步骤用对氟苯磺酰氯、3,4-二氯苯磺酰氯或对甲氧基苯磺酰氯来代替苯磺酰氯。
实施例2
化合物7b：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(4-氟苯磺酰氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用4-氟苯磺酰氯代替实施例1步骤7中的苯磺酰氯。
白色固物(87mg,收率82％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.54-1.71(m,12h),1.94-1.98(m,2h),2.02(s,3h),2.31-2.35(m,1h),2.38(s,3h),2.42-2.52(m,3h),2.79-2.89(m,1h),3.32-3.43(m,3h),3.64-3.69(m,2h),3.80-3.85(m,1h),4.37-4.42(m,1h),7.15(dd,1h,j＝1.5hz,7.8hz),7.27(t,2h,j＝8.4hz),7.39-7.42(m,2h),7.86-7.91(m,2h).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:177.1,171.9,166.8(d,1jcf＝251.0hz),142.5,140.2,138.5,136.7,133.9,131.2(d,3jcf＝9.1hz),130.1,128.4,117.8(d,2jcf＝22.3hz),61.0,52.2,47.2,46.8,42.4,41.3,38.6,30.4,29.8,27.2,27.0,21.6,20.3.ms(ei):m/z618(m)+.
实施例3
化合物7c：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(3,4-二氯苯磺酰氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用3,4-二氯苯磺酰氯代替实施例1步骤7中的苯磺酰氯。
白色固物(89mg,收率82％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.55-1.73(m,4h),1.84-1.97(m,9h),2.05(s,3h),2.20-2.24(m,2h),2.42(s,3h),2.48-2.54(m,1h),2.85-3.01(m,3h),3.62-3.90(m,6h),4.40-4.45(m,1h),7.23(dd,1h,j＝1.8hz,8.1hz),7.44-7.47(m,2h),7.74-7.83(m,2h),8.05(d,1h,j＝1.8hz).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:178.0,172.0,144.0,142.0,138.9,138.5,136.9,135.0,134.1,133.2,130.3,130.0,128.4,128.0,62.8,52.3,52.2,48.4,47.2,45.8,42.3,41.2,38.0,30.4,29.8,26.1,25.1,21.6,20.3.ms(esi):m/z671.8(m+1)+.
实施例4
化合物7d：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(4-甲氧基苯磺酰氨基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用4-甲氧基苯磺酰氯代替实施例1步骤7中的苯磺酰氯。
白色固物(92mg,收率76％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.53-1.83(m,14h),2.00-2.02(m,1h),2.04(s,3h),2.41(s,3h),2.45-2.52(m,2h),2.58-2.63(m,2h),2.82-2.92(m,1h),3.39-3.46(m,3h),3.67-3.72(m,2h),3.87(s,3h),4.39-4.45(m,1h),.7.07(d,2h,j＝9.0hz),7.17-7.20(m,1h),7.42-7.44(m,2h),7.79(d,2h,j＝9.0hz).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:177.3,171.9,164.9,142.4,138.6,136.8,135.1,133.9,130.5,130.1,128.4,115.9,61.4,56.7,52.2,49.0,47.2,46.4,42.3,41.3,38.4,30.4,29.8,27.0,26.6,21.6,20.3.ms(ei):m/z630(m)+.
实施例5
化合物8a：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(3-(4-氟苯基)酰脲基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤7：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(3-(4-氟苯基)酰脲基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
在上述实施例1制备的化合物6(60mg，0.13mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中加入对氟苯基异氰酸酯(19mg，0.13mmol)，在同样的温度继续搅拌4小时。反应物用二氯甲烷稀释，食盐水洗，有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到产物为白色泡沫状固体(58mg，收率79％)1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.55-1.90(m,14h),2.05(s,3h),2.34-2.39(m,1h),2.42(s,3h),2.52-2.58(m,3h),2.83-2.93(m,1h),3.41-3.46(m,2h),3.70-3.75(m,2h),3.83-3.89(m,1h),3.94-4.02(m,1h),4.40-4.45(m,1h),6.97(t,2h,j＝8.7hz),7.19-7.22(m,1h),7.28-7.33(m,2h),7.44-7.56(m,2h).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:177.0,171.9,160.3(d,1jcf＝238.8hz),158.1,142.5,138.5,137.5,136.8,133.9,130.2,128.5,122.4(d,3jcf＝7.8hz),116.6(d,2jcf＝22.6hz),61.2,47.2,42.7,42.4,41.3,38.6,30.4,29.8,27.3,21.6,20.3.ms(esi):m/z598.8(m+1)+.
实施例6
化合物8b：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(3-(3,4-二氯苯基)酰脲基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用3,4-二氯苯基异氰酸酯替代实施例1步骤7中的苯磺酰氯。
白色固物(42mg,收率36％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.54-1.90(m,14h),2.04(s,3h),2.34-2.38(m,1h),2.42(s,3h),2.50-2.61(m,3h),2.83-2.91(m,1h),3.45(br,2h),3.71-3.76(m,2h),3.83-3.88(m,1h),3.94-4.00(m,1h),4.40-4.45(m,1h),7.16-7.22(m,2h),7.34(d,1h,j＝8.7hz),7.45(br,2h),7.70(s,1h).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:177.0,171.9,157.3,142.5,141.6,138.5,136.8,133.9,133.7,131.9,130.2,128.4,126.1,121.5,119.7,61.3,47.2,42.7,42.4,41.3,38.4,30.4,29.8,27.2,21.6,20.3.ms(esi):m/z648.8(m+1)+.
实施例7
化合物10a：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(2-吗啡啉乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(2-氯乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
在上述制备的化合物6(820mg,1.78mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入氯乙酰氯(0.21ml,2.67mmol)和n,n-二异丙基乙基胺(0.62ml,3.57mmol)。该混合物在室温下搅拌过夜。然后倒入冰水中，二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到的产物为棕色泡沫状固体(666mg,收率70％)。
步骤2：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(2-吗啡啉乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
在上述制备的化合物9(108mg,0.2mmol)的乙腈(20ml)溶液中加入碳酸钾(56mg,0.4mmol)和吗啡啉(27mg,0.3mmol)。该混合物在室温下搅拌过夜。有机相用饱和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到的产物为淡黄色胶状固体(42mg,收率36％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.58-1.89(m,12h),2.05(s,3h),2.10-2.13(m,2h),2.35-2.39(m,1h),2.42(s,3h),2.47-2.50(m,5h),2.70-2.75(m,2h),2.84-2.93(m,1h),3.00(s,2h),3.60(br,2h),3.69-3.77(m,6h),3.84-3.89(m,1h),4.12-4.22(m,1h),4.41-4.46(m,1h),7.26(dd,1h,j＝1.5hz,8.1hz),7.44-7.47(m,2h).
实施例8
化合物10b：n-(3-(3-(2-(1h-吡咯-1-基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用吡咯替代实施例7步骤2中的吗啡啉。
淡黄色胶状固物(125mg,收率74％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.54-1.78(m,4h),1.83-1.96(m,8h),2.05(s,3h),2.15-2.19(m,2h),2.35-2.39(m,1h),2.42(s,3h),2.46-2.54(m,2h),2.83-2.91(m,3h),3.73-3.88(m,5h),4.40-4.45(m,1h),4.55(s,2h),6.07-6.08(m,2h),6.67-6.68(m,2h),7.25(dd,1h,j＝1.5hz,8.1hz),7.44-7.47(m,2h).
实施例9
化合物10c：n-(3-(3-(2-(1h-吲哚-1-基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用吲哚替代实施例7步骤2中的吗啡啉。
白色固物(51mg,收率28％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.52-1.76(m,4h),1.90-2.01(m,8h),2.04(s,3h),2.18-2.21(m,2h),2.33-2.38(m,1h),2.42(s,3h),2.48-2.52(m,1h),2.80-2.88(m,1h),2.98-3.03(m,2h),3.72-3.92(m,5h),4.13-4.25(m,1h),4.39-4.44(m,1h),4.82(s,2h),6.47(d,1h,j＝2.4hz),7.01-7.06(m,1h),7.13(dt,1h,j＝1.2hz,7.8hz),7.20(d,1h,j＝3.0hz),7.25-7.32(m,2h),7.43(d,1h,j＝7.8hz),7.50(d,1h,j＝2.1hz),7.54(d,1h,j＝7.5hz).
实施例10
化合物10d：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-外向-(2-(吡咯啉-1-基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用四氢吡咯替代实施例7步骤2中的吗啡啉。
无色胶状固物(110mg,收率50％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.54-1.79(m,17h),1.97-2.00(m,2h),2.03(s,3h),2.32-2.37(m,1h),2.40(s,3h),2.44-2.63(m,7h),2.81-2.91(m,1h),3.11(s,2h),3.31(br,1h),3.68-3.73(m,2h),3.82-3.87(m,1h),4.03-4.14(m,1h),4.39-4.43(m,1h),7.18-7.21(m,1h),7.42-7.44(m,2h).
实施例11
化合物15a：n-(3-(3-(3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：8-苄基-n-(3-硝基吡啶-2-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-胺
向8-苄基-3-外向-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-胺(436mg,2mmol)的四氢呋喃(10ml)的溶液中，加入2-氯-3-硝基吡啶(333mg,2.1mmol)和n,n-二异丙基乙基胺(0.38ml,2.2mmol)。将形成的混合物回流搅拌12小时，减压除去四氢呋喃，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝40/1，v/v)，得到产物11为黄色固体(396mg,收率59％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.71-1.80(m,2h),1.87-1.92(m,2h),2.00-2.06(m,2h),2.19-2.24(m,2h),3.39-3.45(m,3h),3.71(s,2h),6.69-6.73(m,1h),7.28-7.45(m,5h),8.40-8.46(m,2h).
步骤2：n2-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)吡啶-2,3-二胺
向上述合成的化合物11(503mg,1.49mmol)的四氢呋喃(10ml)的溶液中，加入二氯化锡(1414mg,7.44mmol)和浓盐酸(0.62ml)。将形成的混合物室温搅拌12小时，减压除去四氢呋喃，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到产物12a为黄色油状液体(347mg,收率60％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ2.05-2.13(m,2h),2.20-2.27(m,2h),2.32-2.45(m,4h),3.94(br,2h),4.29(br,2h),4.40-4.52(m,1h),6.51(dd,1h,j＝7.2hz,5.4hz),6.91(dd,1h,j＝7.2hz,1.5hz),7.43(dd,1h,j＝5.1hz,1.5hz),7.47-7.49(m,3h),7.65-6.68(m,2h).
步骤3：3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶
向上述合成的化合物12a(312mg,1mmol)中，加入原甲酸甲酯(0.9ml,8mmol)和对甲苯磺酸(19mg,0.1mmol)。将形成的混合物回流搅拌12小时，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到产物13a为黄色油状液体(220mg,收率70％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.94-2.01(m,4h),2.23-2.28(m,2h),2.39-2.47(m,2h),3.46(br,2h),3.80(s,2h),5.02-5.14(m,1h),7.27-7.38(m,4h),7.46-7.48(m,2h),8.06(dd,1h,j＝1.5hz,7.8hz),8.41(dd,1h,j＝1.5hz,4.8hz),8.50(s,1h).
步骤4：3-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶
向上述合成的化合物13a(220mg,0.7mmol)的甲醇(5ml)溶液中，加入10％钯碳(22mg)和甲酸氨(309mg,4.9mmol)。将形成的混合物回流搅拌12小时，减压除去甲醇，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到产物14a为黄色油状液体(83mg,收率49％)。
步骤5：n-(3-(3-(3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤5中采用化合物14a替代实施例1步骤5中的化合物4。
无色胶状固物(17mg,收率36％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.57-1.75(m,5h),1.96-2.02(m,2h),2.05(s,3h),2.21-2.36(m,6h),2.43(s,3h),2.74-2.90(m,4h),3.08-3.19(m,2h),3.82-3.88(m,3h),4.02(br,2h),4.41-4.47(m,1h),5.12-5.23(m,1h),7.27(dd,1h,j＝1.8hz,8.1hz),7.37(dd,1h,j＝4.8hz,8.1hz),7.46-7.52(m,2h),8.11(dd,1h,j＝1.8hz,8.1hz),8.42(dd,1h,j＝1.5hz,4.8hz),8.47(s,1h).ei-ms:m/z562(m)+.
实施例12
化合物15b：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-甲基-3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶
向上述合成的化合物12a(310mg,1mmol)中，加入乙酸酐(1ml,10mmol)。将形成的混合物回流搅拌12小时，减压除去乙酸酐，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，v/v)，得到产物13b为黄色油状液体(230mg,收率69％)。
步骤2：3-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶
步骤2中采用化合物13b替代实施例11步骤4中的化合物13a。
淡黄色油状液物(97mg,收率76％)。
步骤3：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-甲基-3-氢-咪唑[4,5-并]吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物14b替代实施例1步骤5中的化合物4。
白色固物(150mg,收率33％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.56-1.75(m,4h),1.98-2.08(m,5h),2.05(s,3h),2.24-2.37(m,5h),2.43(s,3h),2.50-2.57(m,1h),2.73(s,3h),2.85-2.95(m,1h),3.14-3.23(m,2h),3.39-3.44(m,2h),3.84-3.90(m,3h),4.07(br,2h),4.40-4.45(m,1h),7.26-7.32(m,2h),7.47(d,1h,j＝7.8hz),7.54(d,1h,j＝1.5hz),7.95(dd,1h,j＝1.5hz,7.8hz),8.32(dd,1h,j＝1.5hz,4.8hz).
实施例13
化合物15c：n-(3-(3-(3-氢-[1,2,3]三氮唑[4,5-并]吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-3-氢-[1,2,3]三氮唑[4,5-并]吡啶
向上述合成的化合物12a(165mg,0.5mmol)的水(1ml)溶液中，加入亚硝酸钠(36mg,1.1mmol)、浓盐酸(16μl)和乙酸(0.3ml)。将形成的混合物回流搅拌12小时，减压除去乙酸，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到产物13c为黄色油状液体(77mg,收率48％)。
步骤2：3-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-3-氢-[1,2,3]三氮唑[4,5-并]吡啶
步骤2中采用化合物13c替代实施例11步骤4中的化合物13a。
淡黄色油状液物(48mg,收率86％)。
步骤3：n-(3-(3-(3-氢-[1,2,3]三氮唑[4,5-并]吡啶-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物14c替代实施例1步骤5中的化合物4。
白色固物(21mg,收率45％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.59-1.75(m,4h),1.81-1.89(m,2h),2.00-2.09(m,4h),2.05(s,3h),2.17-2.21(m,2h),2.35-2.37(m,1h),2.41(s,3h),2.48-2.56(m,1h),2.61-2.70(m,2h),2.76-2.81(m,2h),2.85-2.94(m,1h),3.61(br,2h),3.79-3.89(m,3h),4.41-4.46(m,1h),5.39-5.50(m,1h),7.25(dd,1h,j＝1.8hz,7.8hz),7.43-7.52(m,3h),8.45(dd,1h,j＝1.5hz,8.4hz),8.73(dd,1h,j＝1.5hz,4.5hz).
实施例14
化合物15d：n-(3-(3-(1-氢-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：n1-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-1,2-苯二胺
向8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-酮(218mg,1mmol)的1,2-二氯乙烷(5ml)溶液中，加入邻苯二胺(216mg,2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(339mg,1.6mmol)。将形成的混合物室温搅拌12小时，减压除去1,2-二氯乙烷，残余物用二氯甲烷(10ml)稀释，依次用5％碳酸氢钠溶液(100ml)、饱和食盐水(100ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，v/v)，得到产物12b为黄色油状液体(100mg,收率33％)。
步骤2：1-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-1-氢-苯并咪唑
步骤2中采用化合物12b替代实施例11步骤3中的化合物12a。
淡黄色油状液物(376mg,收率70％)。
步骤3：1-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-1-氢-苯并咪唑
步骤3中采用化合物13d替代实施例11步骤4中的化合物13a。
淡黄色油状液物(211mg,收率78％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.73-1.80(m,2h),1.90-2.04(m,4h),2.53-2.62(m,2h),3.67(br,2h),4.69-4.79(m,1h),7.24-7.33(m,2h),7.53(d,1h,j＝7.2hz),7.66(d,1h,j＝7.2hz),8.34(s,1h).
步骤4：n-(3-(3-(1-氢-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤4中采用化合物14d替代实施例1步骤5中的化合物4。
淡黄色胶状固物(25mg,收率38％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.57-1.86(m,9h),2.05(s,3h),2.13-2.17(m,4h),2.39(s,3h),2.49-2.76(m,6h),2.84-2.94(m,1h),3.53-3.64(m,2h),3.81-3.89(m,3h),4.42-4.47(m,1h),7.23-7.36(m,3h),7.44-7.54(m,3h),7.71(d,1h,j＝8.1hz),8.42(s,1h).ei-ms:m/z561(m)+.
实施例15
化合物15e：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-甲基-1-氢-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-1-氢-苯并咪唑
步骤1中采用化合物12b替代实施例12步骤1中的化合物12a。
白色固物(285mg,收率67％)。1hnmr(300mhz,cdcl3):δ1.78-1.85(m,2h),1.97-2.05(m,2h),2.31-2.36(m,2h),2.42-2.53(m,2h),2.64(s,3h),3.43-3.47(m,2h),3.51(s,2h),4.82-4.95(m,1h),7.16-7.22(m,2h),7.26-7.44(m,6h),7.67-7.70(m,1h).
步骤2：1-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-2-甲基-1-氢-苯并咪唑
步骤2中采用化合物13e替代实施例11步骤4中的化合物13a。
无色油状液物(67mg,收率62％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ2.28-2.41(m,6h),2.65(s,3h),2.69-2.77(m,2h),4.22-4.25(m,2h),5.01-5.08(m,1h),7.23-7.33(m,2h),7.56-7.61(m,2h).
步骤3：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-甲基-1-氢-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物14e替代实施例1步骤5中的化合物4。
淡黄色胶状固物(24mg,收率38％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.56-1.80(m,10h),1.93-2.01(m,3h),2.05(s,3h),2.19-2.24(m,2h),2.32-2.38(m,3h),2.41(s,3h),2.53(s,3h),2.83-2.93(m,1h),3.41-3.45(m,2h),3.81-3.88(m,3h),4.42-4.46(m,1h),4.70-4.81(m,1h),7.15-7.25(m,3h),7.42-7.46(m,3h),7.51-7.55(m,1h).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:176.8,171.9,144.0,143.1,138.4,136.7,134.9,133.9,130.1,128.5,123.6,123.5,120.0,112.9,59.1,51.3,47.8,47.2,42.4,41.4,37.5,31.0,30.5,29.9,28.4,21.7,20.3,14.6.ms(ei):m/z575(m)+.
实施例16
化合物15f：n-(3-(3-(1-氢-苯并[1,2,3]三氮唑-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：1-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-1-氢-苯并[1,2,3]三氮唑
步骤1中采用化合物12b替代实施例13步骤1中的化合物12a。
白色固物(216mg,收率62％)。
步骤2：1-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-1-氢-苯并[1,2,3]三氮唑
步骤2中采用化合物13f替代实施例11步骤4中的化合物13a。
无色油状液物(114mg,收率81％)。
步骤3：n-(3-(3-(1-氢-苯并[1,2,3]三氮唑-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物14f替代实施例1步骤5中的化合物4。
淡黄色胶状固物(40mg,收率42％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.70-1.76(m,3h),1.96-2.01(m,2h),2.06(s,3h),2.16(br,4h),2.43(s,3h),2.49-2.57(m,2h),2.76-3.02(m,8h),3.80-3.98(m,5h),4.42-4.47(m,1h),5.23-5.28(m,1h),7.25-7.29(m,1h),7.46-7.51(m,3h),7.58-7.63(m,1h),7.77(d,1h,j＝8.1hz),8.03(d,1h,j＝8.4hz).13cnmr(cd3od,100mhz)δ:177.7,171.9,147.7,142.3,138.7,136.9,134.5,134.0,130.1,129.5,128.5,126.6,120.8,112.4,61.4,50.3,48.6,47.2,42.3,41.3,34.5,30.4,29.8,25.6,21.7,20.3.ms(ei):m/z562(m)+.
实施例17
化合物19：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(4-氧代喹唑啉-3-(4-氢)-基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：2-氨基-n-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)苯甲酰胺
将8-苄基-3-外向-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-胺(436mg,2mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，依次加入邻氨基苯甲酸(274mg,2mmol)、edci(1-乙基-3-(3-二甲基丙胺)碳二亚胺盐酸盐)(573mg,3mmol)、hobt(1-羟基苯并三唑)(405mg,3mmol)和三乙胺(0.56ml，4mmol)，室温搅拌12小时。减压除去二氯甲烷残余物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝30/1，v/v)，得到产物为白色泡沫状固体16(463mg，收率69％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ2.04-2.11(m,8h),2.34-2.36(m,2h),3.30-3.34(m,1h),3.78(br,2h),4.14(s,2h),6.58-6.63(m,1h),6.72-6.75(m,1h),7.14-7.19(m,1h),7.43-7.47(m,4h),7.59-7.61(m,2h).
步骤2：3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)喹唑啉-4-(3-氢)-酮
步骤2中采用化合物16替代实施例11步骤3中的化合物12a。
淡黄色油状液物(264mg,收率47％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.75-1.82(m,2h),1.85-1.92(m,2h),2.22-2.31(m,4h),3.48(br,2h),3.74(s,2h),5.13-5.25(m,1h),7.28-7.37(m,3h),7.43-7.45(m,2h),7.49-7.55(m,1h),7.63-7.66(m,1h),7.76-7.82(m,1h),8.21(dd,1h,j＝1.2hz,7.8hz),8.40(s,1h).
步骤3：3-(8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)喹唑啉-4-(3-氢)-酮
步骤3中采用化合物17替代实施例11步骤4中的化合物13a。
无色油状液物(57mg,收率61％)。
步骤4：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(4-氧代喹唑啉-3-(4-氢)-基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤4中采用化合物18替代实施例1步骤5中的化合物4。
白色固物(27mg,收率38％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.57-1.97(m,10h),2.05(s,3h),2.10-2.36(m,4h),2.42(s,3h),2.54-2.65(m,3h),2.87-3.07(m,3h),3.82-3.88(m,5h),4.42-4.47(m,1h),7.29(dd,1h,j＝8.1hz,2.1hz),7.46(d,1h,j＝8.1hz),7.55-7.60(m,2h),7.70(d,1h,j＝8.1hz),7.82-7.87(m,1h),8.24(d,1h,j＝7.8hz),8.38(s,1h).ei-ms:m/z589(m)+.
实施例18
化合物21a：1-乙酰基-n-(3-(3-(n-烯丙基-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：1-乙酰基-n-(3-(3-(烯丙基胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
在上述合成的化合物6(92mg,0.2mmol)的dmf(n,n-二甲基甲酰胺)(1ml)溶液中加入烯丙基溴(18μl,0.2mmol)和碳酸钾(31mg,0.22mmol)。该混合物在室温下搅拌3天。然后蒸干低沸点溶剂，乙醚稀释，并用饱和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(石油醚/乙酸乙酯＝25/1，v/v)，得到的产物为淡棕色的油(18.64g，收率86％)。
步骤2：1-乙酰基-n-(3-(3-(n-烯丙基-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
将上述制备的化合物20a(49mg,0.1mmol)溶于二氯甲烷(3ml)，依次加入对三氟甲基苯乙酸(24mg,0.12mmol)、edci(28mg,0.15mmol)、hobt(20mg,0.15mmol)和三乙胺(28ul,0.2mmol)，室温搅拌12小时。减压除去二氯甲烷残余物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到产物为白色泡沫状固体21a(38mg，收率57％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.53-1.99(m,10h),2.04(s,3h),2.10-2.20(m,3h),2.33-2.38(m,1h),2.41(s,3h),2.46-2.62(m,2h),2.82-2.90(m,2h),3.72-4.05(m,8h),4.39-4.44(m,1h),4.68-4.79(m,1h),5.05-5.16(m,1h),5.23-5.30(m,1h),5.78-6.00(m,1h),7.19-7.26(m,1h),7.39-7.50(m,4h),7.59-7.68(m,2h).
实施例19
化合物21b：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(n-乙基-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-乙氨基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用碘乙烷替代实施例18步骤1中的烯丙基溴。
棕色油状液物(66mg,收率34％)。
步骤2：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(n-乙基-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤2中采用化合物20b替代实施例18步骤2中的化合物20a。
淡黄色油状液物(63mg,收率67％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.11-1.25(m,3h),1.48-2.00(m,10h),2.04(s,3h),2.09-2.13(m,3h),2.21-2.24(m,1h),2.34-2.38(m,2h),2.41(s,3h),2.47-2.53(m,2h),2.69-2.89(m,1h),3.06-3.10(m,1h),3.43-3.50(m,1h),3.66-3.96(m,8h),4.39-4.44(m,1h),7.23-7.30(m,1h),7.42-7.47(m,3h),7.50-7.52(m,1h),7.60-7.69(m,2h).
实施例20
化合物22a：n-(8-(3-(1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺)丙基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-4,6-二甲基嘧啶-5-甲酰胺
步骤1中采用4,6-二甲基嘧啶甲酸替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
无色胶状固体(33mg,收率47％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.65-1.79(m,4h),1.97-2.02(m,2h),2.05(s,3h),2.10-2.35(m,10h),2.42(s,3h),2.48(s,6h),2.85-2.93(m,1h),3.05-3.10(m,2h),3.77-3.81(m,2h),3.84-3.88(m,1h),4.05-4.07(m,2h),4.40-4.51(m,2h),7.29(dd,1h,j＝2.1hz,7.8hz),7.47(d,1h,j＝7.8hz),7.51(d,1h,j＝2.1hz),8.89(s,1h).ms(ei):m/z594(m)+.
实施例21
化合物22b：3-(n-(8-(3-(1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺)丙基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-3-基)-2,4-二甲基吡啶-1-氧化物
步骤1中采用2,4-二甲基吡啶-1-氧化物-3-甲酸替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
无色胶状固体(28mg,收率49％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.54-1.73(m,5h),1.91-2.01(m,4h),2.04(s,3h),2.15-2.29(m,7h),2.34(s,3h),2.43(s,3h),2.46(s,3h),2.85-2.94(m,1h),3.00-3.06(m,2h),3.76-4.01(m,5h),4.41-4.45(m,2h),7.24-7.27(m,1h),7.32(d,1h,j＝6.6hz),7.45-7.49(m,2h),8.28(d,1h,j＝6.6hz).ms(esi):m/z610.8(m+1)+.
实施例22
化合物22c：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2,3-二羟基苯甲酰基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用2,3-二羟基苯甲酸替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色胶状固体(25mg,收率46％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.56-1.75(m,4h),1.97-2.02(m,1h),2.05(s,3h),2.17-2.36(m,10h),2.43(s,3h),2.49-2.56(m,1h),2.85-2.95(m,1h),3.11-3.19(m,2h),3.79-3.89(m,3h),4.10(br,2h),4.41-4.55(m,2h),6.72(t,1h,j＝7.8hz),6.94(d,1h,j＝7.8hz),7.26-7.31(m,2h),7.46-7.53(m,2h).ms(ei):m/z596(m)+,598(m+2)+.
实施例23
化合物22d：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2,3-二甲氧基苯甲酰基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1中采用2,3-二甲氧基苯甲酸替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色固体(41mg,收率49％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.55-1.79(m,4h),1.94-2.01(m,2h),2.05(s,3h),2.12-2.36(m,9h),2.43(s,3h),2.49-2.57(m,1h),2.85-2.94(m,1h),3.05-3.10(m,2h),3.78-3.82(m,2h),3.86(s,3h),3.88(s,3h),3.90-3.94(m,1h),4.03(br,2h),4.41-4.47(m,2h),7.11-7.19(m,2h),7.24-7.29(m,2h),7.46-7.51(m,2h).ms(esi):m/z625.8(m+1)+.
实施例24
化合物23：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基苯甲酰基-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
在上述制备的化合物22d(442mg,0.71mmol)的dmf(10ml)溶液中加入氯化锂(0.18mg,4.24mmol)。该混合物在110℃下搅拌过夜。冷却至室温然后倒入水中，二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到的产物为白色泡沫状固体(260mg,收率60％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.51-1.80(m,4h),1.99-2.01(m,2h),2.05(s,3h),2.18-2.20(m,7h),2.31-2.36(m,2h),2.42(s,3h),2.49-2.56(m,1h),2.84-2.94(m,1h),3.12-3.16(m,2h),3.78-3.83(m,3h),3.86(s,3h),4.09(br,2h),4.41-4.53(m,2h),6.85(t,1h,j＝8.1hz),7.10(d,1h,j＝7.8hz),7.29(dd,1h,j＝1.8hz,7.8hz),7.42(d,1h,j＝8.1hz),7.47(d,1h,j＝8.1hz),7.52(d,1h,j＝1.8hz).ms(esi):m/z611.7(m+1)+.
实施例25
化合物27a：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基-5-(n-甲基磺酰基)苯甲酰基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：5-(氯磺酰基)-2,3-二甲氧基苯甲酸
2，3-二甲氧基苯甲酸(546mg,3mmol)于冰浴下缓慢加入氯磺酸(2ml,30mmol)。该混合物缓慢升至室温，搅拌过夜。小心倒入冰水中，过滤得到的产物为粉红色固体(458mg,收率54％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:4.04(s,3h),4.19(s,3h),7.68(d,1h,j＝2.4hz),8.37(d,1h,j＝2.4hz).
步骤2：2,3-二甲氧基-5-(n-甲基磺酰基)苯甲酸
在上述制备的化合物24(842mg,3mmol)的dcm(10ml)溶液中加入三乙胺(0.84ml,6mmol)和甲胺醇溶液(0.7ml)。该混合物在室温下搅拌过夜。加入水，二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗，分离的有机相用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。浓缩物经柱层析色谱分离(二氯甲烷/甲醇＝10/1，v/v)，得到的产物为黄色油状液体(601mg,收率73％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:2.52(s,3h),3.91(s,3h),3.92(s,3h),7.43(d,1h,j＝2.1hz),7.68(d,1h,j＝2.1hz).
步骤3：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2，3-二甲氧基-5-(n-甲基磺酰基)苯甲酰基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物25a替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色固体(276mg,收率39％)。1hnmr(300mhz,cd3od):δ1.55-1.75(m,4h),1.94-1.99(m,2h),2.05(s,3h),2.08-2.37(m,10h),2.42(s,3h),2.53(s,3h),2.85-2.94(m,1h),3.05-3.10(m,2h),3.78-3.88(m,3h),3.94(s,3h),3.96(s,3h),4.00(br,2h),4.40-4.45(m,2h),7.27(dd,1h,j＝8.1hz,2.4hz),7.46(d,1h,j＝8.1hz),7.51(d,1h,j＝2.4hz),7.53(d,1h,j＝2.4hz),7.68(d,1h,j＝2.4hz).ms(esi):m/z719.0(m+1)+.
步骤4：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基-5-(n-甲基磺酰基)苯甲酰基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤4中采用化合物26a替代实施例24步骤1中的化合物22d。
白色固体(91mg,收率43％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.55-1.75(m,5h),1.98-2.03(m,2h),2.05(s,3h),2.16-2.36(m,9h),2.43(s,3h),2.51(s,3h),2.86-2.95(m,1h),3.07-3.19(m,2h),3.79-3.89(m,3h),3.93(s,3h),4.10(br,2h),4.41-4.53(m,2h),7.26(d,1h,j＝8.1hz),7.41-7.51(m,3h),7.97(s,3h).ms(esi):m/z704.9(m+1)+.
实施例26
化合物27b：1-乙酰基-n-(3-(3-(5-(n-叔丁磺酰基)-2-羟基-3-甲氧基苯甲酰胺-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：5-(n-叔丁磺酰基)-2,3-二甲氧基苯甲酸
步骤1中采用叔丁胺替代实施例25步骤2中的甲胺。
黄色油状液体(261mg,收率23％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.19(s,9h),3.91(s,3h),3.93(s,3h),7.58(d,1h,j＝2.1hz),7.75(d,1h,j＝2.1hz).
步骤2：1-乙酰基-n-(3-(3-(5-(n-叔丁磺酰基)-2,3-二甲氧基苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤2中采用化合物25b替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色固体(382mg,收率51％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.19(s,9h),1.60-1.74(m,4h),1.93-2.01(m,3h),2.05(s,3h),2.10-2.36(m,8h),2.42(s,3h),2.50-2.56(m,1h),2.86-2.94(m,1h),3.04-3.09(m,2h),3.78-3.88(m,3h),3.94(s,3h),3.95(s,3h),3.97-4.01(m,2h),4.40-4.45(m,2h),7.26(dd,1h,j＝1.8hz,7.8hz),7.47(d,1h,j＝7.8hz),7.51(d,1h,j＝1.8hz),7.60(d,1h,j＝2.1hz),7.74(d,1h,j＝2.1hz).ms(esi):m/z760.9(m+1)+.
步骤3：1-乙酰基-n-(3-(3-(5-(n-叔丁磺酰基)-2-羟基-3-甲氧基苯甲酰胺-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物26b替代实施例24步骤1中的化合物22d。
白色固体(303mg,收率93％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.19(s,9h),1.60-1.74(m,4h),1.93-2.01(m,3h),2.05(s,3h),2.10-2.36(m,8h),2.42(s,3h),2.50-2.56(m,1h),2.86-2.94(m,1h),3.04-3.09(m,2h),3.78-3.88(m,3h),3.94(s,3h),3.95(s,3h),3.97-4.01(m,2h),4.40-4.45(m,2h),7.26(dd,1h,j＝1.8hz,7.8hz),7.47(d,1h,j＝7.8hz),7.51(d,1h,j＝1.8hz),7.60(d,1h,j＝2.1hz),7.74(d,1h,j＝2.1hz).ms(esi):m/z760.9(m+1)+.
实施例27
化合物27c：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基-5-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：2,3-二甲氧基-5-(哌啶-1-磺酰基)-苯甲酸
步骤1中采用哌啶替代实施例25步骤2中的甲胺。
黄色油状液体(487mg,收率50％)。1hnmr(cdcl3,300mhz)δ:1.41-1.43(m,2h),1.61-1.63(m,4h),2.99-3.02(m,4h),3.94(s,3h),4.07(s,3h),7.39(s,1h),7.90(s,1h).
步骤2：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2,3-二甲氧基-5-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤2中采用化合物25c替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色固体(479mg,收率62％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.43-1.74(m,12h),1.94-1.98(m,2h),2.05(s,3h),2.11-2.31(m,8h),2.42(s,3h),2.49-2.56(m,1h),2.86-3.07(m,8h),3.78-3.82(m,2h),3.88-3.91(m,1h),3.96(s,6h),4.40-4.45(m,2h),7.27(dd,1h,j＝8.1hz,2.1hz),7.41(d,1h,j＝2.1hz),7.46(d,1h,j＝8.1hz),7.50(d,1h,j＝1.8hz),7.57(d,1h,j＝1.8hz).ms(esi):m/z772.9(m+1)+.
步骤3：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基-5-(哌啶-1-磺酰基)苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物26c替代实施例24步骤1中的化合物22d。
白色固体(315mg,收率76％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.41-1.46(m,2h),1.60-1.74(m,9h),1.94-2.02(m,2h),2.05(s,3h),2.13-2.35(m,9h),2.42(s,3h),2.89-2.99(m,6h),3.07-3.14(m,2h),3.76-3.81(m,2h),3.89(s,3h),4.08(br,2h),4.40-4.46(m,2h),7.19-7.23(m,2h),7.43-7.48(m,2h),7.90(s,1h).ms(esi):m/z758.9(m+1)+.
实施例28
化合物27d：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基-5-(吗啡啉磺酰基)苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：2,3-二甲氧基-5-(吗啡啉磺酰基)-苯甲酸
步骤1中采用吗啡啉替代实施例25步骤2中的甲胺。
黄色油状液体(1043mg,收率100％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:2.90(t,4h,j＝4.8hz),3.70(t,4h,j＝4.8hz),3.94(s,3h),3.95(s,3h),7.40(d,1h,j＝1.8hz),7.61(d,1h,j＝1.8hz).
步骤2：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2,3-二甲氧基-5-(吗啡啉磺酰基)苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤2中采用化合物25d替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色固体(249mg,收率33％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.55-1.80(m,4h),1.95-2.00(m,2h),2.05(s,3h),2.10-2.37(m,9h),2.42(s,3h),2.49-2.56(m,1h),2.86-2.95(m,1h),2.99(t,4h,j＝4.5hz),3.10(br,2h),3.71(t,4h,j＝4.5hz),3.78-3.89(m,3h),3.96(s,3h),3.97(s,3h),4.04(br,2h),4.40-4.46(m,2h),7.27(dd,1h,j＝1.8hz,8.1hz),7.42(d,1h,j＝2.1hz),7.47(d,1h,j＝8.1hz),7.51(d,1h,j＝1.8hz),7.58(d,1h,j＝2.1hz).ms(esi):m/z774.9(m+1)+.
步骤3：1-乙酰基-n-(3-氯-4-甲基苯基)-n-(3-(3-(2-羟基-3-甲氧基-5-(吗啡啉磺酰基)苯甲酰胺)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-4-哌啶甲酰胺
步骤3中采用化合物26d替代实施例24步骤1中的化合物22d。
白色固体(222mg,收率100％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:1.33-1.74(m,4h),1.98-2.02(m,2h),2.05(s,3h),2.17-2.36(m,9h),2.42(s,3h),2.48-2.53(m,1h),2.84-2.89(m,1h),2.96(br,4h),3.07-3.16(m,2h),3.70(br,4h),3.77-3.88(m,3h),3.92(s,3h),4.10(br,2h),4.40-4.53(m,2h),7.25-7.27(m,2h),7.45(d,1h,j＝6.9hz),7.51(s,1h),7.92(s,1h).ms(esi):m/z760.9(m+1)+.
实施例29
化合物26e：1-乙酰基-n-(3-(3-(5-(n-正丁基磺酰基)-2,3-甲氧基苯甲酰胺-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤1：5-(n-正丁基磺酰基)-2,3-二甲氧基苯甲酸
步骤1中采用正丁胺替代实施例25步骤2中的甲胺。
黄色油状液体(982mg,收率100％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:0.87(t,3h,j＝7.2hz),1.28-1.42(m,4h),2.84(t,2h,j＝6.9hz),3.91(s,3h),3.93(s,3h),7.48(d,1h,j＝1.8hz),7.64(d,1h,j＝1.8hz).
步骤2：1-乙酰基-n-(3-(3-(5-(n-正丁基磺酰基)-2,3-甲氧基苯甲酰胺-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基)丙基)-n-(3-氯-4-甲基苯基)-4-哌啶甲酰胺
步骤2中采用化合物25e替代实施例18步骤2中的对三氟甲基苯乙酸，用化合物6替代实施例18步骤2中的化合物20a。
白色固体(28mg,收率13％)。1hnmr(cd3od,300mhz)δ:0.87(t,3h,j＝7.2hz),1.28-1.35(m,4h),1.41-1.45(m,3h),1.66-1.80(m,3h),1.92-2.00(m,2h),2.05(s,3h),2.16-2.18(m,4h),2.30-2.36(m,2h),2.42(s,3h),2.48-2.56(m,1h),2.81-2.86(m,2h),2.89-2.93(m,1h),3.07-3.12(m,2h),3.17-3.24(m,1h),3.78-3.88(m,3h),3.94(s,3h),3.95(s,3h),4.04(br,2h),4.41-4.44(m,2h),7.30(dd,1h,j＝1.5hz,7.8hz),7.46(d,1h,j＝7.8hz),7.53(d,1h,j＝1.5hz),7.55(d,1h,j＝2.1hz),7.70(d,1h,j＝2.1hz).ms(esi):m/z760.2(m+1)+.
生物学活性的试验实施例
ccr5属于g-蛋白偶联受体(gpcr)家族。针对gpcr的药物开发技术发展较为完善，其中受体配体结合法、gtpγs结合法和ca2+流检测法等实验技术广泛应用于趋化因子受体相关的药物筛选。本发明中的化合物采用了抽滤式[35s]gtpγs结合实验、spa-wga法[35s]gtpγs结合实验和钙内流检测实验三种方法测试本发明化合物的ccr5抑制活性。
a.[35s]gtpγs结合实验
ccr5与激动剂结合后，发生构象变化，从而使得ccr5与g蛋白发生相互作用，激活了g蛋白。g蛋白由α，β和γ三种亚基组成，这种异源三聚体以gαβγ表示。ccr5的活化引起gdp分子交换为gtp，异源三聚体gαβγ蛋白从受体上解离成gα和gβγ蛋白。由于α亚基与gtp结合的能力取决于ccr5与激动剂的作用，测定α亚基结合的gtp量就能反映激动剂对ccr5的激活能力。在gtpγs结合实验中，为了排除由于gtp酶水解gtp造成与g蛋白结合的gtp量不能准确反映ccr5的激活，同时也为了检测方便，采用35s标记的gtp的结构类似物gtpγs替代gtp，gtpγs可与被活化的α亚基结合但不能被水解。这样，在ccr5未被激活时，α亚基结合gdp；ccr5激活后，α亚基结合gtpγs，gtpγs不可逆地结合在α亚基上。因此，测定α亚基结合[35s]-gtpγs的数量就能反映出ccr5被激动剂激活的程度。当加入拮抗剂时，将使得激动剂激活ccr5的能力下降。
这类实验中游离的g蛋白结合的[35s]-gtpγs可以使用薄膜抽滤的方法分离出来，称之为抽滤式gtpγs实验。
或者利用spa(scintillationproximityassay)技术来检测同g蛋白结合的[35s]-gtpγs，就称为spa-wga法[35s]gtpγs结合实验。spa技术的原理是：放射性原子的衰变过程释放出的亚原子粒子，例如β射线(电子)在足够近的距离下可以激发微球发光而被测光仪器检测到。水相溶液中这类射线的能量大部分被溶剂吸收，传播距离十分有限。因此，如果通过麦胚凝集素(wga)将发光微球连接到细胞膜上，则只有同g蛋白结合的[35s]-gtpγs才具有足够短的距离激发微球发光，从而反映受体的激活。
ccr5对g蛋白的激活按以下实验进行测定。
表达ccr5的cho(中国仓鼠卵巢细胞)永久细胞系(cho-ccr5)用裂解缓冲液(5mmtris-hcl,ph7.5,5mmedta和5mmegta)裂解，以15,000×g离心10min。细胞膜用反应缓冲液(5mmtris-hcl,ph7.5,5mmmgcl2,1mmegta,100mmnacl)重悬后，用bio-rad的bioford法定蛋白。然后，在反应缓冲液中进行gtpγs结合实验，其中，反应体系为100μl，含10μg膜蛋白，40μmgdp，0.5nm[35s]-gtpγs(1200ci/mmol)，加入待测的化合物后，振荡混匀后，将反应的试管于30℃孵育1小时。反应结束后，将试管置于冰上，用pbs稀释以中止反应，并马上用gf/c滤膜真空抽滤。结合的放射性活性加入闪烁液后用液体闪烁计数仪测定，这就是抽滤式gtpγs实验方法。spa-wga测定方法的前面步骤同gtpγs实验方法，只是在反应结束加入pbs终止反应后，在反应体系中加入spa-wga微球，再加入待测的化合物，体系混匀后于30℃孵育1小时，然后放冰上部分终止反应。室温离心，1000rpm，15min。随后使用液体闪烁计数仪测定。
结合的放射性活性用液体闪烁计数仪测定。基础结合(basal)在无激动剂的情况下测定，非特异性结合(non-specific)在有10μm非同位素的gtpγs存在的情况下测定。[35s]-gtpγs结合百分比100×[c.pm.样品-c.p.m.非特异性结合]/[c.p.m.基础结合-c.p.m.非特异性结合]来计算。ic50是抑制10nm的rantes(一种对单核-巨噬细胞有强烈趋化作用的细胞因子)引起的[35s]-gtpγs结合50％时的化合物浓度，从化合物的浓度曲线上得到。
研究化合物的浓度-抑制曲线时，以激动剂rantes作用下的最高cpm值或rfu值为100％，本底cpm值或rfu值为0％，再通过统计软件sigmaplot拟合，并得到拮抗剂的ic50值。当化合物浓度为1μm，其拮抗检测的ccr5能力未超过90％时，为了作图方便需要虚拟一个浓度，在本次研究中虚拟点为：当化合物为1mm时，其拮抗ccr5能力为100％。
b.钙内流检测实验
g蛋白被激活后可以通过几种不同的机制调节胞质内实验ca2+浓度的变化，从而反映gpcr被激活的水平。invitrogen公司的fluo-4calciumdye(荧光-4钙离子染料)是一类常用的ca2+检测的荧光染料，而信号的检测通常可以使用分子器件的flexstation或者flipr来完成。本发明通过在cho-ccr5稳定细胞系中过度表达gq家族蛋白-g16的方式，实现了gi/o蛋白偶联的ccr5受体对gq信号通路的激活。
实验开始前4小时用无血清培养液培养细胞，用0.04％edta-pbs消化细胞，并用hbss(hank's平衡盐溶液)缓冲液清洗一次。用含有2.5mmprobenecid(羟苯磺丙胺)的hbss重悬浮细胞，将预先准备好的fluo-4am(一种荧光染料)和cremophorel(聚氧乙烯蓖麻油)混合液加入到细胞悬液中，混合均匀后，37℃温箱中反应40min，然后800rpm离心3min，弃上清，5mlhbss洗细胞2次。用11mlhbss悬浮细胞铺96孔板(100μl/孔)，96孔板1000rpm离心3min，室温避光孵10min，加入50μl的药物溶液，设置仪器flexstation，加入激动剂溶液(25μl/孔)，测定数据。
c.分子水平活性测试结果
[35s]gtpγs结合实验和钙内流检测实验表明，本发明的一系列化合物是ccr5的拮抗剂，它们抑制10nm的rantes激活ccr5而引起的gtpγs的结合，其抑制情况及ic50列于下表1。
d.细胞水平活性测试结果
pbmc体系病毒复制模型：(p3实验室条件下操作)
从来自两个人的血液中分离得到pbmc细胞；
使用pha刺激pbmc细胞3天；
用含有待测化合物和hiv-1ba-l病毒的培养液重悬浮已刺激好的pbmc；
孵育培养6天；
使用商业化的检测试剂盒测定培养液中的p24抗原含量，来检测病毒复制情况
pbmc体系病毒复制模型实验表明，本发明的化合物是ccr5的拮抗剂，它们抑制细胞模型中病毒的复制，其抑制情况及ec50列于下表1。
表1
表1中列出的活性数据充分显示，本发明的化合物都是趋化因子受体ccr5的拮抗剂，其中10个化合物(具体为：7a、7b、7c、7d、8b、15a、15e、21a、21b和26c)对ccr5受体的抑制活性ic50达到nm级别，7个化合物(具体为：8a、10c、15b、15d、15f、26b和26e)的ic50达到10nm级别，7个化合物(具体为：10b、15c、19、22c、22d、26a和26d)对ccr5受体的抑制活性ic50达到100nm级别。我们选择代表性结构的6个化合物进行了细胞水平抑制hiv-1病毒复制的测试，结果显示这些化合物均有效抑制hiv-1病毒的复制，其中两个化合物(具体为21a，21b)的抗病毒活性ec50低于1nm，4个化合物(具体为7c，8a，8b和26e)的抗病毒活性ec50在200到600nm之间。
因此，本发明化合物为有效ccr5拮抗剂，可作为ccr5介导的疾病的治疗药物，如治疗hiv-1病毒入侵、自身免疫性疾病、哮喘、类风湿关节炎、慢性梗阻性肺病等的药物。