本发明涉及生化提取
技术领域：
，具体涉及柚皮苷的生化提取工艺及其提取物在治疗皮肤炎中的用途。
背景技术：
：柚皮苷是一种双氢黄酮类化合物。由于a环和b环之间完全没有共轭，所以在282nm有强烈的紫外吸收峰，使柚皮苷显示多种生物学活性和药理作用。具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、镇痛、降血压活性，能降血胆固醇、减少血栓的形成，改善局部微循环和营养供给，可用于生产防治心脑血管疾病。柚皮苷作为天然色素、风味改良剂和苦味剂用于食品、饮料的生产，又可作为合成高甜度、无毒、低能量的新型甜味剂二氢柚苷查耳酮和新柚皮苷二氢查耳酮的原料。柚皮苷还可在其它领域应用。柚皮苷主要存在于柚子、酸橙及其变种的果皮中，如柚子中一半以上的柚皮苷分布于果皮内。柚皮苷的提取方法主要有热水浸提法和碱提酸沉法。热水浸提法存在杂质较多，提取效率低下，严重浪费水资源等缺陷；碱提酸沉法拥有节约经济，工艺简单等优点，但其反应时间较长且容易污染环境，不适合工业化生产。周石磊，农业工程学报2006年，柚皮中柚皮苷乙醇提取工艺研究，采用醇提法，提取率可达到91%，但是存在纯度较低，耗费大量乙醇等缺陷。开发一种有效提取柚皮苷的方法尤为重要。技术实现要素：为了克服现有技术的缺陷，本发明提出了柚皮苷的生化提取工艺，采用多因子正交试验，优化了工艺参数，提高了产率和纯度。本发明还公开了柚皮苷提取物在治疗皮肤炎中的用途。本发明是通过如下技术方案来实现的：柚皮苷的生化提取工艺，其包括如下步骤：步骤1）烘干、粉碎，步骤2）蔗糖处理，步骤3）高温高压处理，步骤4）碱液和酶处理，步骤5）醇溶、温控以及水提。具体地，所述工艺包括如下步骤：步骤1）烘干、粉碎：取新鲜无霉变的柚皮，置于50℃烘干至水分含量低于3wt%，粉碎机中粉碎，过100目筛，收集柚皮粉；步骤2）蔗糖处理：往柚皮粉中添加到同等重量的30-40g/l的蔗糖水溶液中,300-500rpm搅拌8-10小时，再静置6h，50℃烘干；步骤3）高温高压处理：将步骤2）所得物料置于反应釜中，控制反应釜中压强为1.0-1.2mpa，温度为120-130℃，保温保压5min，待冷却至室温；步骤4）碱液和酶处理：往步骤3）所得物料中添加占步骤1）所得柚皮粉5倍重量的氢氧化钙水溶液以及占步骤1）所得柚皮粉0.05-0.07wt%的纤维素酶，300rpm搅拌6h，再静置30min；步骤5）醇溶、温控以及水提：离心收集沉淀，往沉淀中添加两倍质量的70%（v/v）的乙醇，60℃水浴加热，边加热边搅拌30min，静置10min，离心去除沉淀，将液体减压蒸发去除乙醇；再添加纯化水，300rpm搅拌10min，然后冷却至5-8℃，静置6h，收集沉淀物，将沉淀物置于50℃干燥，即得。优选地，所述氢氧化钙水溶液的浓度为0.4-0.6g/l。优选地，所述纤维素酶的酶活为20000u/g。本发明还公开了按照上述任其一所述的工艺提取的提取物。本发明还公开了上述提取物在治疗皮肤炎中的用途。本发明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下几个方面：1.蔗糖溶液渗透压的作用可以引起柚皮细胞快速膨胀，有助于细胞壁破裂，提高了产率；2.本发明采用较小的粒径能够提高细胞壁的破碎效率并且提高有效物质的浸出率；3.本发明通过提高温度和压强，可增加分子扩散的速度，使得细胞壁的受压膨胀变薄，加快细胞壁的破裂，加速有效成分的溶出速度，提高活性组分的提取效率；4.本发明配合氢氧化钙溶液以及纤维素酶，有效破碎了细胞壁，柚皮苷浸出率大大提高；5.本发明采用乙醇溶解，配合温度变化，有效去除了杂质，提高了柚皮苷的纯度；6.本发明采用多因子正交试验，优化了提取工艺，提高了产率和纯度，其制备的产品能够有效地治疗皮肤炎。具体实施方式为了使本
技术领域：
的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请具体实施例，对本发明进行更加清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。实施例1柚皮苷的生化提取工艺，其包括如下步骤：取新鲜无霉变的柚皮，置于50℃烘干至水分含量低于3wt%，粉碎机中粉碎，过100目筛，收集柚皮粉，然后添加到同等重量的30g/l的蔗糖水溶液中,300rpm搅拌10小时，再静置6h，50℃烘干，置于反应釜中，控制反应釜中压强为1.2mpa，温度为120℃，保温保压5min，待冷却至室温后，再添加占柚皮粉5倍重量的浓度为0.4g/l的氢氧化钙水溶液以及占柚皮粉0.07wt%的纤维素酶（20000u/g），300rpm搅拌6h，再静置30min；离心收集沉淀，往沉淀中添加两倍质量的70%（v/v）的乙醇，60℃水浴加热，边加热边搅拌30min，静置10min，离心去除沉淀，将液体减压蒸发去除乙醇，再添加两倍体积的纯化水，300rpm搅拌10min，然后冷却至5℃，静置6h，收集沉淀物，将沉淀物置于50℃干燥，即得。实施例2柚皮苷的生化提取工艺，其包括如下步骤：取新鲜无霉变的柚皮，置于50℃烘干至水分含量低于3wt%，粉碎机中粉碎，过100目筛，收集柚皮粉，然后添加到同等重量的40g/l的蔗糖水溶液中,500rpm搅拌8小时，再静置6h，50℃烘干，置于反应釜中，控制反应釜中压强为1.0mpa，温度为130℃，保温保压5min，待冷却至室温后，再添加占柚皮粉5倍重量的浓度为0.6g/l的氢氧化钙水溶液以及占柚皮粉0.05wt%的纤维素酶（20000u/g），300rpm搅拌6h，再静置30min；离心收集沉淀，往沉淀中添加两倍质量的70%（v/v）的乙醇，60℃水浴加热，边加热边搅拌30min，静置10min，离心去除沉淀，将液体减压蒸发去除乙醇，再添加两倍体积的纯化水，搅拌溶解，然后冷却至8℃，静置6h，收集沉淀物，将沉淀物置于50℃干燥，即得。实施例3本发明实施例1-2提取方法获得产品纯度和得率检测：以安江柚为例，hplc法测定产品中柚皮苷的纯度以及柚皮苷的收率；柚皮苷的得率的计算：柚皮苷的得率＝（(柚皮苷产品的质量×纯度)/柚皮粉质量）×100％；具体结果见表1：表1指标实施例1实施例2收率%7.196.82纯度%96.697.1实施例4正交试验检测多因子因素对收率的影响：以实施例1为例。一）粒径因素：对照组1采用30目，对照组2采用10目，其余同实施例1；具体结果见表2：表2指标对照组1对照组2收率%5.675.39二）压强温度因素：对照组1采用常压，对照组2采用室温，其余同实施例1；具体结果见表3：表3指标对照组1对照组2收率%6.036.35三）纤维素酶和碱液因素：对照组1不采用纤维素酶处理，对照组2采用氢氧化钠溶液，对照组3采用碳酸钠溶液，使用的碱液中溶质的质量相同其余同实施例1，其余步骤同实施例1，具体结果见表4：表4指标对照组1对照组2对照组3收率%5.446.716.46实施例4动物学试验试验流程：icr雌性小鼠腹腔注射含有氢氧化铝凝胶1mg与dnp-ova10mg的生理盐水溶液0.2ml，诱导过敏，1周后，在小鼠耳朵内外两面涂布0.1%dnfb乙醇溶液10ul，24h后选择耳充分肿胀的小鼠（浮肿率在10%以上）。选定的小鼠再次重复诱导过敏实验，1周后，引起过敏反应。动物分为实验组和对照组，每组10只。实验组给予实施例1制备的柚皮苷，剂量为100mg/kg,对照组给予同等质量的生理盐水，给药时间从过敏实验结束后1h开始，每天两次，连续一周。试验发现，与对照组相比，实验组能明显抑制小鼠耳缘浮肿，抑制率可达到50%，其可作为皮肤炎的潜力药物。上述数据对本发明的具体实施方式进行了详尽描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。当前第1页12