本发明涉及具有生理活性的肽及其制备方法，具体涉及具有壮阳效果的γ-谷氨酰肽混合物及其制备方法。
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：勃起功能障碍(ed)又称阳痿。一般指在多数情况下阴茎不能勃起，或虽能勃起但不能维持勃起并进行性交，是临床上最常见的男子性功能障碍，其不仅发病率高，严重影响男性健康，而且有向年轻化发展的趋势。特别是在现代生活中，人们的生活节奏快，精神压力大，暴饮暴食，偏食酗酒等，都极易造成男性性功能障碍，出现阳痿症状。据统计40～70岁男子中有52％患有不同程度的ed。其治疗可分为非侵入性和侵入性治疗两类，非侵入性治疗系指心理治疗、药物治疗和真空负压勃起治疗。侵入性治疗包括尿道给药、海绵体活性药物注射、阴茎假体植入和血管性阳痿的手术治疗。侵入性治疗带有一定的创伤性，并发症多，患者不易接受；药物治疗目前主要是以西药为主，多为磷酸二酯酶-5(pde-5)抑制剂：如西地那非(伟哥，辉瑞公司)、伐地那非(艾力达，拜耳公司)等虽然疗效肯定，但价格昂贵，一般患者难以承受，并可引起如头痛、低血压、心血管不良反应等令人不能接受的副作用。广州善康生物科技有限公司公开了一种迅速、安全、持久壮阳的补肾壮阳药物(201510035437.3)。为了解决上述问题，该发明所提供的技术方案是：一种补肾壮阳的药物，所述药物的组分为鳄鱼鞭干粉、覆盆子牡蛎、枸杞子，所述各组分的重量百分比为：鳄鱼鞭干粉1％～50％、覆盆子1％～40％、牡蛎1％～30％、枸杞子1％～18％。发明人认为这一发明的有益效果在于：采用鳄鱼鞭粉为主要原料，配以覆盆子、牡蛎、枸杞子，可以实现迅速、安全、持久壮阳。山西金源酒业有限公司提供了一种治疗范围广、易吸收、无毒副作用的治疗阳痿、早泄、遗精、滑精等性功能衰退的壮阳药酒(201010573974.0)。其由下列原料制成:65°原浆酒、锁阳、冬虫夏草、人参、川穹、当归、红花、紫草,蜂蜜,将上述中药药材洗净晾干,用65°原浆酒浸泡,将酒滤出,加入蒸馏水调配成所需要的酒精度,然后加入蜂蜜调味制成。发明人认为这一发明活血化瘀、排毒利尿及滋补保健壮阳、健脾益气、涩精固脱、抗衰益寿的功能，总有效率达87％。青岛联合创新技术服务平台有限公司提供了一种滋阴壮阳的药酒(申请号201310265827.0)，由以下组分按照重量份数组成：鹿茸20-30份、肉苁蓉20-30份、山药20-30份、仙茅15-18份、熟地黄10-15份、白芍10-15份、当归10-15份、百合5-8份、桑葚5-8份、银耳5-8份、女贞子5-8份、黄精20-30份、饴糖60-80份，高粱酒2-4斤。发明人认为这一发明所提供药酒，组方配伍科学，具有滋阴壮阳，壮肾阳，益精血，有效防治男性阴亏阳虚、阳痿、早泄，女性月经不调，性冷淡等症状。黑龙江江恒医药科技有限公司公开了一种壮阳春胶囊及其制备方法(申请号201410731929.1)，其特征在于取甘松150g,肉苁蓉300g，锁阳200g，菟丝子300g，车前子300g，制何首乌200g,采用二氧化碳超临界萃取法提取，减压干燥，用高能纳米冲击磨粉碎成纳米干膏，加入功能性辅料，制成壮阳春胶囊，崩解时间显著缩短，疗效显著优于市售壮阳春胶囊，取得了积极效果。目前尚未见具有壮阳效果的肽类物质的报道。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术存在的上述不足，提供一种利用谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶合成具有壮阳效果的γ-谷氨酰肽的制备方法。本发明的目的通过以下技术方案实现。一种寡肽，其氨基酸序列为γ-glu-γ-glu-arg。所述一种寡肽在制备食品或药品中的应用，具体是在食品或药品中添加占食品或药品的总重量60mg/kg以上的所述寡肽。所述一种寡肽在制备食品或药品中的应用，具体是在在食品或药品中添加占食品或药品的总重量500mg/kg以上的所述寡肽。制备所述一种寡肽的方法，具体是：l-谷氨酰胺与精氨酸，摩尔比为1-2:1，溶于水中得溶液，调节反应ph为7.0-10.0，添加谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶0.02-1％(w/w)，在25-50℃反应3-12小时，后用4mol/l盐酸回调ph至7～8之间，90℃灭酶10min，对酶促反应产物进行浓缩，冷冻干燥，得到寡肽含γ-glu-γ-glu-arg反应液。采用xselecthsst35μm4.6x250mm分析柱，流动相a液为0.1％(v/v)甲酸-水溶液；流动相b液为0.1％(v/v)甲酸-乙腈溶液，柱温为40℃，流速为1ml/min，反应液的进样量10μl，对反应液进行梯度洗脱，第3个峰即为寡肽γ-glu-γ-glu-arg。上述制备方法中，所述溶液中l-谷氨酰胺和l-精氨酸的浓度为400-1200mmol/l。本发明与现有技术相比，具有如下优点：1)本发明首次公开了寡肽γ-glu-γ-glu-arg对勃起困难、早泄具有较好的改善作用。2)首次公开了利用谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺转肽酶催化制备寡肽γ-glu-γ-glu-arg。附图说明图1为γ-glu-γ-glu-arg的二级质谱图。具体实施方式以下结合附图和实例对本发明的具体是实施作进一步举例，但本发明的实施和保护不限于此。实施例1将解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)swjs22(中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmccno.8425)以1％的接种量接种于发酵培养基(发酵培养基的组成为：4％豆粕、2％麸皮、2％玉米粉，92％水)中，37～39℃发酵培养30h。将发酵液于4℃，10000r/min条件下高速离心10min，过滤得上清液，即谷氨酰胺酶粗酶液。将400mm谷氨酰胺与400mm精氨酸溶于100g水中，调节溶液的ph值至10.0，加入1g谷氨酰胺酶粗酶液，在25℃分别反应12h，后用4mol/l盐酸回调ph至7.0后，90℃灭酶10min，对酶促反应产物进行浓缩，冷冻干燥，得到含寡肽γ-glu-γ-glu-arg反应液。采用xselecthsst35μm4.6x250mm分析柱，流动相a液为0.1％(v/v)甲酸-水溶液；流动相b液为0.1％(v/v)甲酸-乙腈溶液，柱温为40℃，流速为1ml/min，反应液的进样量10μl，对反应液进行梯度洗脱，第3个峰即为寡肽γ-glu-γ-glu-arg。uplc-ms/ms对反应产物进行定性分析：包括：anagilent1290seriesuplcsystem(agilenttechnologies)用于分离各γ-glu-peptides,带有anelec-trosprayionization(esi)的质谱系统(q-tofms/ms，brukerdaltonics)进行定性分析。色谱柱为：agilentzorbaxrrhdsb-c18(2.1x50mm,1.8μm)。进样量为5μl。液相条件为：溶液a为0.1％甲酸-水溶液，和溶液b为0.1％甲酸-乙腈溶液，梯度洗脱程序为：0–10％b,0-5.0min；10-15％b,5.0-10.0min；然后100％b,10.0-12.0min。ms条件：ionization(离子化)：正离子模式；dryinggas(干燥气体)：350℃下10l/min；nebulizer(喷雾器压力)：25psig；fragmentor(毛细管电压)：30v。对第3个峰进行uplc-ms/ms测定，其检测结果如图1。由图1可鉴定出寡肽γ-glu-γ-glu-arg。实施例2一、毒性实验本实验采用健康sd大鼠，口服给药实施例1制备的寡肽γ-glu-γ-glu-arg剂量梯度为10mg/kg以及30mg/kg，连续给药30天，经观察大鼠给药期间及停药后1周之内动物生长状态、活动饮食、血液学、血液生化学、脏器组织结构以及尿常规等均无明显影响，表明临床用药安全可靠。二、小鼠交尾试验小鼠交尾试验。取昆明小鼠每组25只，其中雄性5只，雌鼠20只。每组分5个鼠笼饲养。每只雄鼠与4只雌鼠同笼饲养。随即分为空白组(蒸馏水)、寡肽γ-glu-γ-glu-arg(10mg/kg，按占小鼠体重计)和精氨酸组。每组灌胃给药雄鼠，每日早上、下午分别给药一次，连续10日。每天上午检查雌鼠有无阴栓出现。如下表1所示。表1组别雌鼠数发现阴栓数阴栓出现率γ‐谷氨酰肽201785％精氨酸201155％空白20840％从上表中可以看出，寡肽γ-glu-γ-glu-arg组能明显促进雄性小鼠交尾。三、小鼠血浆睾酮实验：取icr系清洁级昆明雄性小鼠45只，随机分为空白组(蒸馏水)、本发明寡肽γ-glu-γ-glu-arg，每组15只，每组灌胃给药，每日分别上午、下午给药一次，连续10天后，将小鼠摘眼球取血，检测血浆睾酮含量，如下表2所示：表2组别雄鼠数睾酮(ng/l)γ-glu-γ-glu-arg159.86±2.67精氨酸157.49±4.75空白156.15±3.41从上表中可以看出，本发明寡肽γ-glu-γ-glu-arg可明显增加雄性小鼠血浆睾酮的含量，促进雄性小鼠交尾，提高雄性小鼠性功能。实施例3选用门诊病人77例ed患者采用随机分组，其中治疗组38例，对照组39例；两组患者年龄、病程、勃起功能积分和病情轻重等方面比较均无显著差异，具有可比性。诊断标准参照国际ed诊断原则，即男子在性刺激下，不断持续的达到或维持足够硬度的阴茎勃起以完成满意性交，且病程在3个月以上，国际勃起功能评分问卷(iief-5)≤21分，诊断为ed。排除标准(1)合并糖尿病者；(2)合并有严重的心、肝、肾、造血系统等疾病者；(3)前列腺明显增生者或前列特异性抗原(psa)＞4ug/ml者；(4)精神病患者；(5)近期服用过其它相关药物者；(6)未按规定用药或资料不全，不能坚持正常治疗者。治疗方法：治疗组服用实施例1制备的寡肽γ-glu-γ-glu-arg，口服每次1g，均一日两次，分二次服用。对照组1服用六味地黄丸，8粒/次，1日3次；对照组2服用精氨酸，口服每次1g，均一日两次，分二次服用。三组均治疗8周。治疗前、治疗4周、治疗8周分别观察勃起功能国际问卷(iief-5)积分改变，包括阴茎勃起信心、成功插入次数，勃起硬度、维持勃起能力和性交满意度5个问题。疗效标准临床控制：治疗后性交机会达75％以上成功，或勃起功能积分≥21分；显效：治疗后性交机会达50％以上成功，或勃起功能积分较前增加7-14分；有效：治疗后性交机会达25％以上成功，或勃起功能积分较前增加≤7分；无效：治疗后性交机会成功率无变化，或勃起功能积分无增加。治疗结果两组均治疗8周后统计疗效。两组疗效比较见表3。表3组别例数显效有效无效总有效率γ-glu-γ-glu-arg523116590.38％精氨酸5214142453.8％六味地黄丸5222141669.2％由表3可见，γ-谷氨酰肽与精氨酸和六味地黄丸相比，总有效率明显优于精氨酸和六味地黄丸。当前第1页12