本发明涉及中药领域，具体而言，本发明涉及中草药葫芦巴的提取物及其制备方法以及这种提取物作为药物的用途。
背景技术：
胡芦巴，英文名：commonfenugreekseed，拉丁名：trigonellafoenum-graecuml.。为豆科植物胡芦巴的干燥成熟种子。一年生草本，高30-80厘米。主根深达土中80厘米，根系发达。茎直立，圆柱形，多分枝，微被柔毛。羽状三出复叶；托叶全缘，膜质，基部与叶柄相连，先端渐尖，被毛；叶柄平展，长6-12毫米；小叶长倒卵形、卵形至长圆状披针形，近等大，长15-40毫米，宽4-15毫米，先端钝，基部楔形，边缘上半部具三角形尖齿，上面无毛，下面疏被柔毛，或秃净，侧脉5-6对，不明显；顶生小叶具较长的小叶柄。花无梗，1-2朵着生叶腋，长13-18毫米；萼筒状，长7-8毫米，被长柔毛，萼齿披针形，锥尖，与萼等长；花冠黄白色或淡黄色，基部稍呈堇青色，旗瓣长倒卵形，先端深凹，明显地比冀瓣和龙骨瓣长；子房线形，微被柔毛，花柱短，柱头头状，胚珠多数。荚果圆筒状，长7-12厘米，径4-5毫米，直或稍弯曲，无毛或微被柔毛，先端具细长喙，喙长约2厘米(包括子房上部不育部分)，背缝增厚，表面有明显的纵长网纹，有种子10-20粒。种子长圆状卵形，长3-5毫米，宽2-3毫米，棕褐色，表面凹凸不平。花期4-7月，果期7-9月。
我国中医古籍也多有记载，如《纲目》：胡芦巴，右肾命门药也，元阳不足，冷气潜伏，不能归元者宜之。张子和《儒门事亲》云，有人
病目不睹，思食苦豆，即胡芦巴，频频不缺，不周岁而目中微痛，如虫行入眦，渐明而愈。按此亦因其益命门之功，所谓益火之原，以消阴翳是也。《本草求真》：葫芦巴，苦温纯阳，亦能入肾补命门，......。功与仙茅、附子、硫黄恍惚相似，然其力则终逊于附子、硫黄，故补火仍须兼以附、硫、茴香、吴茱萸等药同投，方能有效。《本草正义》：胡芦巴，乃温养下焦，疏泄寒气之药，后人以治疝瘕、脚气等证，必系真阳式微，水寒气滞者为宜，苟挟温邪，即为大忌。
糖尿病是一种因体内胰岛素绝对或者相对不足所导致的一系列临床综合症，与遗传基因有着非常密切的关联。糖尿病的主要临床表现为“三多一少”，即多饮、多尿、多食和体重下降，以及血糖高、尿液中含有葡萄糖等。
糖尿病分为1型糖尿病、2型糖尿病、续发糖尿病和妊娠期糖尿病，虽然每种类型的糖尿病的症状都是相似甚至相同的，但是发病的原因却各自不同。不同类型的糖尿病都会导致胰腺中的β细胞不能产生足量的胰岛素以降低血糖的浓度，导致高血糖症的发生，1型糖尿病一般是由于遗传因素致使自体破坏产生胰岛素的β细胞导致的；2型糖尿病是由于组织细胞的胰岛素抵抗，细胞不再同胰岛素结合，使得进入细胞内部参与生成热量的葡萄糖减少，留在血液中的葡萄糖增多，β细胞功能衰退或其他多种原因引起的；续发型糖尿病是由于其他疾病或原因造成的糖尿病，例如胰脏疾病或是避孕药物引起的糖尿病；妊娠期糖尿病则与2型糖尿病相似，也是源于细胞的胰岛素抵抗，不过其胰岛素抵抗是由于妊娠期妇女分泌的激素所导致的。
世界卫生组织2011年的的报告指出全世界有3.5亿人患有糖尿病，超过80％的糖尿病死亡发尘在低收入和中等收入国家。目前1、2型糖尿病尚不能完全治愈，糖尿病可以引起多种并发症。如果糖尿病没有得到足够的控制，可以引起一些急性并发症，如低血糖症、酮症酸中毒、非酮高渗性昏迷。严重的长期并发症包括：心血管疾病、慢性肾衰竭等疾病。对于目前使用的治疗手段主要是胰岛素，但是胰岛素随进食给药，给药量受限，有依赖性等特点，迫使人们继续探索新的治疗药物。
本发明人意外地发现从葫芦巴中提取的一种化合物在制备治疗糖尿病的药物上有意想不到的效果，目前对于这一类化合物治疗糖尿病尚无报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供了一种葫芦巴鲜品或干品的提取物；
本发明的另一发明目的是提供了一种制备胡芦巴提取物的方法；
本发明的另一发明目的是提供了胡芦巴提取物用于制备糖尿病药物的用途；
本发明的另一发明目的是提供了含有本发明式i化合物的药物组合物。
本发明的目的是通过下述方法实现的。
本发明人分别对胡芦巴的不同药用部位进行了研究，对胡芦巴全草、胡芦巴地上部分、叶、种子、茎和根部分别进行了提取和活性研究，本发明人发现，胡芦巴的叶、种子、茎和根部分的药学活性是有差别的，活性以叶提取物为最佳；活性的强弱顺序是种子＞叶＞茎＞根。本发明人从这一发现中得到启示，用胡芦巴的地上部分代替传统使用的胡芦巴全草进行提取，这样既保持和提高了提取浸膏的药学活性，又避免使用胡芦巴的根部。由于胡芦巴是本草植物，不使用其根部，可以避免在采集胡芦巴时将其根部拔起，这样，胡芦巴可以再生，既保护了植物资源，有保护了土地植被，这对保护资源和环境都有重要意义。
本发明提供了一种从葫芦巴提取的治疗糖尿病的化合物：
式i化合物以下述提取方法得到：
(1)将葫芦巴全草的鲜品或干品，与水按重量比为1∶5～1∶15混合，调节ph至9～11，分2次煎煮，回流提取2次，每次1～2h，合并两次提取液，离心过滤，调节滤液的ph为3～5，静置5～6h，收集上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液使用孔径为0.1～0.5μm的微滤膜进行过滤，透过液再经2000～10000dalton超滤膜处理后，超滤膜透过液待用；
(3)将步骤(2)的透过液减压浓缩，得到淡黄色浓缩物，将所述浓缩物用硅胶柱层析，以体积比7∶2∶1～6.5∶3.5∶1的氯仿+甲醇+水混合溶剂洗脱，tlc检测，收集含式i化合物流份，减压浓缩得到浓缩物；
(4)将步骤(3)得到的浓缩物用v乙醇∶v水＝9∶1反复重结晶，得到淡黄色的针状晶体，即为式i化合物，经hplc检测纯度为96.8％。
本发明还提供了式i化合物的制备方法，包括下述步骤：
(1)将葫芦巴全草的鲜品或干品，与水按重量比为1∶5～1∶15混合，调节ph至9～11，分2次煎煮，回流提取2次，每次1～2h，合并两次提取液，离心过滤，调节滤液的ph为3～5，静置5～6h，收集上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液使用孔径为0.1～0.5μm的微滤膜进行过滤，透过液再经2000～10000dalton超滤膜处理后，超滤膜透过液待用；
(3)将步骤(2)的透过液减压浓缩，得到淡黄色浓缩物，将所述浓缩物用硅胶柱层析，以体积比7∶2∶1～6.5∶3.5∶1的氯仿+甲醇+水混合溶剂洗脱，tlc检测，收集含式i化合物流份，减压浓缩得到浓缩物；
(4)将步骤(3)得到的浓缩物用v乙醇∶v水＝9∶1反复重结晶，得到淡黄色的针状晶体，即为式i化合物，经hplc检测纯度为96.8％。
优选地，选用葫芦巴的地上部分提取；更有选的，地上部分是叶、花、种子或茎；最优选，种子。
本发明还提供了一种药物组合物，其含有式i化合物以及药学上可用的助剂。
所述药物组合物，其剂型选自素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、汤剂、合剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、注射液、口服溶液或口服混悬液。
所述式i化合物可用于制备治疗糖尿病药物。
实施例
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均为普通商购分析纯产品。
实施例：式i化合物的提取
(1)取胡芦巴地上部分200克，与水按重量比为1∶10混合，调节ph至10，分2次煎煮，回流提取2次，每次2h，合并两次提取液，离心过滤，调节滤液的ph为5，静置6h，收集上清液；
(2)将步骤(1)中的上清液使用孔径为0.1μm的微滤膜进行过滤，透过液再经5000dalton超滤膜处理后，超滤膜透过液待用；
(3)将步骤(2)的透过液减压浓缩，得到淡黄色浓缩物，将所述浓缩物用硅胶柱层析，以体积比7∶2∶1的氯仿+甲醇+水混合溶剂洗脱，tlc检测，收集含式i化合物流份，减压浓缩得到浓缩物；
(4)将步骤(3)得到的浓缩物用v乙醇∶v水＝9∶1反复重结晶，得到淡黄色的针状晶体，即为式i化合物，经hplc检测纯度为96.8％，收率15％。
1hnmr(300mhz，dmso)，δ：16.77(s，1h，oh)；12.04(s，1h，oh)；11.66(s，1h，nh)；9.48(s，1h，oh)；8.37(s，1h，ch)；8.12(d，1h，ch)；7.39(m，1h，ch)；7.35(m，1h，ch)；7.32(m，1h，ch)；7.29(m，1h，ch)；6.62(s，1h，ch)；6.56(d，1h，h)；5.87(t，1h，h)；4.9(d，1h，ch)；4.47(s，1h，oh)；4.2(d，1h，h)；4.00(t，1h，ch)；2.82(s，4h，2ch2)；2.35～2.6(d，2h，ch2)；1.46(s，6h，2ch3)；1.14(s，6h，2ch3).
式i化合物的毒性实验：
选用健康昆明种小鼠，由江苏大学实验动物中心提供。雌雄各半，体重为18-22g，每组10只，分5组。小鼠饲养于无毒塑料盒内，每盒5只，雌、雄分笼，每天换1次垫料，自由摄食和饮水，室温保持18-20℃，自然光照。药物以0.9％氯化钠水溶液溶解，受试物剂量以mg/kg表示。按以下剂量腹腔注射给药，给药容积为0.1ml/10g，采用多剂量一次给药。式i化合物：96、137、196、280、400mg/kg。给药后每天观察记录动物的外观、精神、饮食、睡眠、活动情况以及逐日死亡分布，连续观察10天，按bliss法计算ld50。高浓度组给药后，小鼠精神萎靡，死前粪便不成形，消瘦，竖毛，抱团萎缩不动。
式i化合物式i化合物对实验性2型糖尿病小鼠的影响
(1)实验方法：
动物分组：取健康雄性小鼠40只(由上海斯莱克实验动物有限公司提供)，随机分为正常对照组、高脂对照组、模型对照组和式i化合物组，每组10只小鼠，其中，模型对照组和式i化合物剂量组的小鼠事先用stz诱导糖尿病，构建实验性2型糖尿病小鼠模型。各组的饲料均为高脂饲料(由上海斯莱克实验动物有限公司提供)。
实验性2型糖尿病小鼠模型的构建方法为：用高脂饲料连续饲养5周后，动物禁食不禁水12h，按40mg/kg体重的剂量腹腔注射stz(链脲佐菌素，streptozocin)溶液(临用前配制)，连续注射三天，每天一次，共注射三次；高脂对照组注射0.1mol/lph为7.0的柠檬酸缓冲液，注射体积为100μl，注射次数为每天一次，连续注射三天，共注射三次。。
处理方法：造模后第四天开始连续给药处理50天。
正常对照组：给与普通饲料，同时灌胃花生油；剂量为100μl，每天一次；
高脂对照组：给与高脂饲料，灌胃花生油，剂量为100μl，每天1次；
模型对照组：给与高脂饲料，灌胃花生油，剂量为100μl，每天1次；
式化合物组：给与高脂饲料，按照10mg/kg的剂量灌胃，每天一次，式i化合物可先用100μl花生油溶解。
每日测定各组小鼠的日摄食量和日饮水量，每隔一周禁食12h，尾部取血，测定各组小鼠的血糖变化值。末次给药后，小鼠禁食不禁水12h，取血检测血清中血糖、甘油三酯、胆固醇、肌酐、ast、alt等指标，并取心、肝、胰、脾、肾、脂肪等组织称重。
(2)实验结果
表1式i化合物对实验性2型糖尿病小鼠血清指标的影响
注：＊p＜0.05vs模型对照组，＊＊p＜0.01vs模型对照组，#p＜0.05vs高脂对照组，##p＜0.01vs高脂对照组，n＝10。
与模型对照组相比，在造模后第11、18、25、32、38和53天，式i化合物组的空腹血糖值均显著性降低，血糖降低率可达59.28％。如表2所示，与模型对照组相比，末次给药后，式i化合物组血清中的血糖值显著性降低。
在给药处理的一到七周，式i化合物组比模型对照组的摄食量和饮水量均显著的降低，说明通过式i化合物的给药处理，能明显减轻了实验性2型糖尿病小鼠临床表现中多饮多食的症状。
以上结果表明，式i化合物能够降低实验性2型糖尿病小鼠的血糖，并显著减轻了2型糖尿病小鼠临床表现中多饮多食的症状，改善因糖尿病导致的消瘦。