本发明属于分子生物学领域，涉及一种采用分子生物学手段鉴定中药的方法，具体为一种用于鉴定南板蓝根的引物对及其应用。
背景技术：
南板蓝根来源于爵床科植物马蓝的干燥根茎及根，功能清热解毒，凉血消斑、丹毒等。长期以来，其作为抗病毒、消炎、防治流感等方面的高效中药材，在我国南方地区应用十分广泛，是著名的南药之一。当前，随着抗病毒有效成分腺苷、喹唑酮等化合物的相继发现，使得该药更是成为抗病毒的焦点南药，其在sars、h1n1等病毒性疾病的临床治疗方面发挥着重要作用。
然而，从目前南板蓝根市场的流通来看，南板蓝根药材来源主要为栽培品。由于先进的种植技术推广力度不足，人们对南板蓝根的种植不够重视，导致南板蓝根的种植成本增加，种植面积不断缩小致使南板蓝根药材资源短缺，产品供不应求，出现同科植物球花马蓝、疏花马蓝、少花马蓝以及广西马蓝等伪劣品不断充斥市场，南板蓝根临床用药的安全性和有效性常得不到保证。
技术实现要素：
本发明的目的是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种准确度高、客观性强的南板蓝根鉴定方法，本发明提供了一种用于鉴定南板蓝根的引物对及其应用。
技术方案：一种用于鉴定南板蓝根的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。
优选的，所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。
表1引物对及发卡结构序列
所述引物对在制备鉴定南板蓝根试剂盒中的应用。
优选的，所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。
优选的，所述试剂盒鉴定南板蓝根的步骤包括：
(1)提取南板蓝根样品的基因组dna；
(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释200～500倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；
(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释10～100倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；
(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
优选的，所述南板蓝根样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。
优选的，所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
有益效果：(1)本发明所述引物对具有特异性好，灵敏度高，稳定性强的优点；(2)本发明所述方法准确度高、客观性强。
附图说明
图1是实施例1～3pcr鉴定结果电泳图；
其中m为分子量为2000的maker；1为实施例1pcr产物鉴定结果；2为实施例2pcr产物鉴定结果；3为实施例3pcr产物鉴定结果。
具体实施方式
实施例1
一种用于鉴定南板蓝根的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。
所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。
所述引物对在制备鉴定南板蓝根试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。
所述试剂盒鉴定南板蓝根的步骤包括：
(1)提取南板蓝根样品的基因组dna；
(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释200倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；
(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释100倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；
(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述南板蓝根样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。
所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
实施例2
一种用于鉴定南板蓝根的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。
所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。
所述引物对在制备鉴定南板蓝根试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。
所述试剂盒鉴定南板蓝根的步骤包括：
(1)提取南板蓝根样品的基因组dna；
(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释500倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；
(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释10倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；
(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述南板蓝根样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。
所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
实施例3
一种用于鉴定南板蓝根的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。
所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。
所述引物对在制备鉴定南板蓝根试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。
所述试剂盒鉴定南板蓝根的步骤包括：
(1)提取南板蓝根样品的基因组dna；
(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释300倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；
(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释25倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；
(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述南板蓝根样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。
所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
如图1所示，将实施例1～3的扩增产物进行电泳检测，条带清晰可见，产物单一。
sequencelisting
<110>苏州市李良济健康产业有限公司
<120>一种用于鉴定南板蓝根的引物对及其应用
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