本发明涉及一种分离纯化的方法，特别是一种以含有芪三酚的粗品作原料，利用氢氧化铝柱层析分离纯化制备高纯度无污染芪三酚分离纯化的方法。
背景技术：
因芪三酚具有多种药理作用，能抗肿瘤、抗衰老、降低胆固醇、抑制血小板聚集等，它主要存在于葡萄、虎杖、藜芦等植物中，其中以虎杖中芪三酚含量最高。芪三酚主要用于抗癌和心血管疾病等方面的治疗，为此有关的研究报导和专利文献很多，且各种方法都有不同的特色。
专利号cn00121100.5″芪三酚和芪三酚甙分离方法及其应用″，其方法涉及初提取进行乙酸乙酯萃取进而采用氯仿-甲醇或乙酸乙酯-乙醇作为层析洗脱液进行硅胶柱层析，再以甲醇-氯仿为结晶溶剂进行重结晶得到芪三酚苷并通过二次层析以及重结晶得到芪三酚。因采用硅胶柱层析作为必需分离手段，硅胶柱存在样品分离量小、产量小、填料用量大的缺点，而且填料硅胶难以再生利用，因此工业生产成本高，因使用卤代烃类溶液，不仅溶液使用成本较高，还对环境有严重危害，最终产品不可避免会涉及有害溶剂残留问题，同时所得成品含量较低，需反复重结晶处理、操作程序麻烦。
专利号cn200310112538.3″虎杖苷和芪三酚的新制备方法″，用聚酰胺层析法分离制备虎杖苷和芪三酚，但在实际操作中发现，经聚酰胺柱层析后白藜芦醇收率很低，芪三酚纯度不高，还需进行二次层析或用活性炭脱色才能提高纯度弥补其的不足，且活性炭易造成有效成分死吸附，因此程序多、操作麻烦、有效成分损失大。
专利申请号cn200610161949.5″一种从中药虎杖中分离纯化芪三酚苷和芪三酚的方法″，采用高速逆流色谱来分离纯化芪三酚，此方法一次性设备投入大，而产能少，很难满足工业生产要求，另外采用的是大孔树脂层析其产品纯度低，还需再用活性炭脱色和反复结晶处理，因此操作也麻烦。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：提供一种高纯度无污染芪三酚分离纯化的方法，具有工艺简便，设备投入少，操作简单，而产品具有高收率、高纯度，制备无污染的特点，并易于实现规模化工业生产、实用性强。
本发明解决上述问题所采用的技术方案为：高含量芪三酚分离纯化的方法，步骤：1、选料：以市售的芪三酚粗品为原料，其芪三酚含量按干燥品计达到15％～90％，原料为浸膏状或粉末、颗粒状；
2、上样溶液制备：以粗品的重量比为1，用浓度为60％～80％的乙酸乙酯溶解粗品，作为上样溶液，乙酸乙酯用量(l)∶粗品(kg)＝15～25∶1；
3、装柱：采用常规的工艺，氢氧化铝用湿法或干法装柱；
4、上样洗脱：将含有芪三酚的乙酸乙酯溶液上氢氧化铝柱层析，流速控制在0.1％～1.0％×柱体积/分钟，收集流份，上样结束后再用同浓度的相当一个柱体积容量的乙酸乙酯冲洗氢氧化铝柱一次，同时收集流份，将两次流份合并；
5、流份处理：将收集的流份减压浓缩至原体积的1/3～1/10，再加10～20℃的饮用水，加水量为浓缩体积的1～6倍，再经2～14小时地放置析晶，再过滤并在50～60℃经真空干燥6～8小时得到的晶体为目标产物芪三酚结晶粉末。
与现有技术相比，本发明的优点在于：采用氢氧化铝柱层析技术并用到白藜芦醇的分离纯化，通过氢氧化铝对粗品中非目标产物的吸附，充分发挥了该技术在制备高含量芪三酚的特有优势；氢氧化铝层析柱在整个上柱解析过程中所用的都为乙醇-水系统，此溶剂使用安全，同时在层析过程中没有废液产生，流出成分均为目标产物，对生产人员及环境影响少，大批量工业化生产条件容易控制；而所用设备简单，同时氢氧化铝柱层析过程目标产物收得率高，下柱流份纯度高，不需多次反复层析、结晶，操作程序简便，所以生产成本低。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作进一步描述。
步骤：
1、选料：以市售的芪三酚粗品为原料，其芪三酚含量按干燥品达到15％～90％，为浸膏状或粉末、颗粒状；或选用虎杖药材经过发酵后通过醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取物；虎杖经醇提取后通过发酵使虎杖苷转换成白藜芦醇，再用乙酸乙酯萃取处理的萃取物；也包括上述乙酸乙酯萃取物再经碱水除杂后的粗品；
2、上样溶液制备：以粗品的重量比为1，用浓度为60％～80％的乙酸乙酯溶解粗品，作为上样溶液，乙酸乙酯用量(l)∶粗品(kg)＝18～22∶1；
3、选用氢氧化铝层析柱：采用常规的工艺湿法或干法装柱；
氢氧化铝层析可用中性氢氧化铝或碱性氢氧化铝，其为60～250目的白色颗粒；
4、上样洗脱：将含有芪三酚的乙酸乙酯溶液上氢氧化铝柱层析，流速控制在0.1％～1.0％×柱体积/分钟，收集流份，上样结束后再用同浓度的相当一个柱体积容量的乙酸乙酯冲洗氢氧化铝柱一次，同时收集流份，将两次流份合并；5、流份处理将收集的流份减压浓缩(真空度控制在：-0.05～-0.09mpa)至原体积的1/3～1/10，再加10～20℃的饮用水，加水量为浓缩体积的1～6倍，并上面覆盖尼龙膜密封静置2～14小时后，过滤或离心，在温度50～60℃再经真空干燥(真空度控制在：-0.08～-0.1mpa)6～8小时得到目标产物白色结晶性粉末。
实例1
40g粗品(虎杖药材经过发酵后通过醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取物的干燥粉末，经hplc检测含芪三酚18.6％)用800ml的70％乙醇搅拌溶解，上样至备用碱性氢氧化铝柱上(柱体积约为350ml，碱性氢氧化铝规格：100～200目，采用湿法装柱)，收集流份，上样结束再用350ml的70％乙醇洗脱，收集流份，合并两部分流份约1140ml，减压浓缩至200ml，加饮用水200ml，密封放置12小时析晶，过滤，晶体真空干燥7小时(60℃，-0.09～-0.1mpa)，最终产物7.1g。经hplc检测含芪三酚为99.3％。
实例2
40g粗品(虎杖药材经过发酵后通过醇提取，再用乙酸乙酯萃取所得的萃取物的干燥粉末，经hplc检测含芪三酚18.6％)用1000ml的70％乙醇搅拌溶解，上样于备用的中性氢氧化铝柱上(柱体积为350ml，中性氢氧化铝规格：100～200目，采用湿法装柱)，收集流份，上样结束再用350ml的70％乙醇洗脱，收集流份，合并两部分流份约1340ml，减压浓缩至300ml，加饮用水600ml，密封放置4小时析晶，过滤，晶体真空干燥7小时(60℃，-0.09～-0.1mpa)，最终产物7.3g。经hplc检测含芪三酚为99.1％。